2020/175957 1»（：1/10公020/002897 명세서

발명의명칭 :피라졸아마이드유도체화합물및이의용도 기술분야

[1] 본발명은피라졸아마이드유도체화합물및이의 용도에관한것이다.

구체적으로,본발명은 MG53저해활성을보이는피라졸아마이드유도체 화합물및이의용도에관한것이다.

배경기술

[2] 당뇨병은인슐린의결핍또는인슐린작용의저항 성에따라제 1형

당뇨병（인슐린의존형）과제 2형당뇨병（인슐린비의존형）및영양실조성 당뇨병으로 1985년세계보건기구（\¥ 3）에서분류하였다.

[3] 기존당뇨치료제로는크게인슐린제제 ,설폰우레아계열약물, ^ZD계열

저해제 ,미글리티나이드계 , 1110161111 분할수있다.당뇨진단후운동,식이요법을 이용한치료에실패할경우당뇨의치료는일반적 으로미국당뇨병학회의 가이드라인을참고하여항당뇨치료제의단독또 는병용투여요법이사용되고 있는데 1차로선택되는약제는비구아니드계의메트포� �민이고, 2, 3차약제는 설폰우레아계,글라이 저해제등이며,이후（31 -1 ^ ^ 1 주사제또는인슐린주사제가사용된다.현재임� �에서사용되고있는기존 경구용당뇨치료제의경우지속적인혈당의정상 화유지라는긍정적인측면이 있으나,장기복용시저혈당유발,설사,복부팽만 감,체중증가,젖산혈중,심장 독성,간독성과같은다양한부작용을일으킬뿐� �아니라결국에는인슐린 분비기능을하는췌장의베타세포가비가역적으 로손상/파괴되고인슐린 저항성이생기기때문에결국약효가떨어져인슐 린을주사해야되는상태가 된다.또한,당뇨병치료제로가장많이사용되고� ��는인슐린의경우도매일 2,

3회피하주사를해야하기때문에주사에대한� �편함및거부감이크며이또한 저혈당유발가능성이매우큰문제점을지니고있 다.이에위와같은부작용을 가지지않는새로운당뇨병치료제의개발이요구 되고있다.

[4] 한편,인슐린신호전달을조절하는단백질 ^«}53이인슐린신호전달과정의 핵심단백질인 11« （인슐린수용체기질）을분해시킨다는연구결 과가나왔으며, 이에따라 MG53저해제가새로운당뇨병치료제개발의타겟� �되고있다.

발명의상세한설명

기술적과제

[5] 본발명이해결하고자하는과제는, ^«}53저해제로서피라졸아마이드유도체 화합물,이의광학이성질체또는이의약학적으� �허용가능한염,및이의 제조방법을제공하는것이다.

[6] 또한,본발명이해결하고자하는과제는상기피� �졸아마이드유도체화합물, 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897 이의광학이성질체또는이의약학적으로허용가 능염의용도를제공하는 것이다.

과제해결수단

[7] 본발명자들은 나타내는피라졸아마이드유도체화합물, 이의광학이성질체또는이의약학적으로허용가 능한염을발견하고본발명을 완성하였다.

[8] 화학식 1의화함물

[9] 본발명은전술한기술적과제를해결하기위해,� �기화학식 1의피라졸

아마이드유도체화합물,이의광학이성질체또� �이의약학적으로허용가능한 염을제공한다:

[1이 [화학식 1]

상기아릴또는헤테로아릴의하나 이상의수소는하이드록시,할로,（：1 4알킬,（：1 4알콕시, 0^4

알킬에스테르, 01-04할로알킬또는페녹시로치환될수있음｝,

[15] 독립적으로 ¾하이드록시,할로, 01-04알킬, 01-04

알콕시,（그1 4알킬에스테르또는（：1 4할로알킬이고,

[16] 및 11 ₂ 는각각독립적으로 또는 0-04알킬이다.

[17] 본발명의일구체예에따르면,

[18] X는 - ₂ -또는 -（：（=0） -이고,

[19] \는아릴또는헤테로아릴이고｛여기서,아릴또� ��상기헤테로아릴의하나 이상의수소는할로,（：1 4알콕시,（：1 4알킬에스테르또는페녹시로치환될 수있고,상기페녹시의하나이상의수소는하이� �록시 ,할로또는 01-04알킬로 치환될수있음｝,

[2이 II _! 은 이고,

[21] 요 ₂ 는 또는（：1 4알킬이고,

[22] å _! 내지 å ₅ 는각각독립적으로 ¾할로또는 01-04알콕시이다.

[23] 본발명의일구체예에따르면, \는아릴일수있다.구체적으로,상기아릴은 페닐,또는페닐에 5내지 6원의비방향족고리가융합된고리일수있다.또� ��, 상기융합고리는 1또는 2개의산소원자를함유하는것일수있다. 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897

[24] 또한,본발명의 일구체예에 따르면, V는헤테로아릴일수있다.구체적으로, 상기 헤테로아릴은 5내지 6원의 헤테로아릴일수있다.또한，상기

헤테로아릴은 1내지 3개의 N를포함하는것일수있다.더나아가,상기 헤테로아릴은피리디닐,피리다지닐,피리미디� ��,피라지닐또는

1,3, 5 -트리아지닐일수있다.

[25] 또한,본발명의구체예에따르면, X가아릴인경우상기 화학식 1의 화합물은 하기 화합물들로이루어진군으로부터선택된어느하 나일수있다.

[26]

[27] [28]

2020/175957 1»（：1/10公020/002897

[29] 또한,본발명의구체예에따르면, 가헤테로아릴인경우상기화학식 1의 화합물은하기화합물들로이루어진군으로부터 선택된어느하나일수있다.

[3이

2020/175957 1»（：1^모2020/002897

[31] 본발명의 화학식 1로표시되는화합물은 1개 이상의 비대칭탄소를함유할수 있으며,이에 따라라세미체,라세믹혼합물,단일의 에난티오머,

부분입체이성체혼합물및각각의부분입체이성 체로서존재할수있다.이러한 이성질체는종래기술,예를들어 화학식 1로표시된화합물은관

크로마토그래피또는 1保1乂：등의분할에 의해분리가가능하다.또는,화학식 1 로표시되는화합물각각의 입체 이성질체는공지된배열의광학적으로순수한 출발물질및/또는시약을사용하여 입체특이적으로합성할수있다.

[32] 본발명에서 ,약학적으로허용가능한염은의약업계에서통� �적으로사용되는 염을의미하며,예를들어 칼슘,포타슘,소듐및마그네슘등으로제조된 무기이온염 ;염산,질산,인산,브롬산,요오드산,과염소산및 황산등으로 제조된무기산염 ;아세트산,트라이플루오로아세트산,시트르산 ,말레인산, 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897 숙신산,옥살산,벤조산,타르타르산,푸마르산,� ��데르산,프로피온산,젖산, 글리콜산,글루콘산,갈락투론산,글루탐산,글� �타르산,글루쿠론산, 아스파르트산,아스코르브산,카본산,바닐릭산 ,하이드로아이오딕산등으로 제조된유기산염 ;메탄설폰산,에탄설폰산,벤젠설폰산, I)-톨루엔설폰산및 나프탈렌설폰산등으로제조된설폰산염 ;글리신,아르기닌,라이신등으로 제조된아미노산염 ;및트리메틸아민,트라이에틸아민,암모니아,� �리딘, 피콜린등으로제조된아민염등이 있으나,열거된이들염에의해본발명에서 의미하는염의종류가한정되는것은아니다.

[33] 화학식 1의화함물의제조방범

[34] 본발명의 화학식 1의 화합물의제조는하기반응식 1의반응경로를통해 순차적또는수렴적 합성경로로수행될수있다.

[38] 본발명의 일구체예에 따르면,상기화학식 1의피라졸아마이드유도체

화합물의 합성경로는상기 반응식에기재된순서에따라제조될수있으나,� �에 제시되는방법또는유사한방법에 의해제조될수있으며,하기 반응식의 순서로제한되지 않는다.출발물질은시판되거나,하기 제시되는방법과유사한 방법으로제조되는것일수있다.

[39] 상기방법으로제조된피라졸아마이드유도체화 합물또는중간체의단리 및 정제는,제약업계에서사용되는적합한분리또� �정제절차,예를들어 여과, 추출,결정화,칼럼크로마토그래피,박막크로마 토그래피,후막

크로마토그래피，분취용저압또는고압액체크 로마토그래피또는이들절차의 조합으로달성될수있다.

[4이 화학식 1의화함물의용도

[41] 본발명은하기화학식 1로표시되는피라졸아마이드유도체화합물,이� �� 광학이성질체또는이의 약학적으로허용가능한염의용도를제공한다.

[42] [화학식 1]

[43] 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897

[44] 상기화학식 1은위에서 정의한바와같다.

[45] 본발명은상기화학식 1의피라졸아마이드유도체화합물,이의광학이� ��질체 또는그의 약학적으로허용가능한염을유효성분으로포함 하는당뇨병의치료 또는예방용약학조성물을제공한다.

[46] 본발명의 일구체예에 따르면,상기 당뇨병은제 2형 당뇨병일수있다.

[47] 본발명의 일구체예에 따르면,상기화학식 1의피라졸아마이드유도체

화합물,이의 광학이성질체또는그의 약학적으로허용가능한염은 MG53을 저해할수있다.이에 따라,상기화학식 1의피라졸아마이드유도체화합물, 이의 광학이성질체또는이의 약학적으로허용가능한염은인슐린의분비를 증가시킬수있을뿐만아니라,장기복용해도췌� �베타세포보호기능을 가지면서 저혈당유발이 없이 혈당수치를매우효과적으로낮춤과동시에 ,체중 증가및인슐린저항성을획기적으로해결할수있 는작용효과를나타낸다.

[48] 본발명의 약학조성물은투여를위해서상기화학식 1의피라졸아마이드 유도체화합물,이의광학이성질체또는이의 약제학적으로허용가능한염 외에 추가로약제학적으로허용가능한담체를 1종이상더포함할수있다.

약제학적으로허용가능한담체는식염수,멸균� �,링거액 ,완충식염수, 덱스트로즈용액,말토덱스트린용액,글리세롤, 에탄올및 이들성분중 1성분 이상을혼합하여사용할수있으며,필요에 따라항산화제,완충액,정균제등 다른통상의 첨가제를첨가할수있다.또한희석제,분산제 ,계면활성제 ,결합제 및윤활제를부가적으로첨가하여수용액,현탁� �,유탁액등과같은주사용 제형 ,환약,캡슐,과립또는정제로제제화할수있다.� �라서，본발명의 약학 조성물은패치제,액제,환약,캡슐,과립,정제,좌 제등일수있다.이들제제는 당분야에서제제화에사용되는통상의 방법또는 Remington's Pharmaceutical Science（최근판）, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는방법으로 제조될수있으며 각질환에 따라또는성분에따라다양한제제로제제화될수 있다.

[49] 본발명의 약학조성물은목적하는방법에 따라경구투여하거나비경구투여 （예를들어,정맥내,피하,복강내또는국소에 적용）할수있으며,투여량은 환자의 체중,연령,성별,건강상태，식이,투여시간,투� ��방법，배설율및질환의 중증도등에따라그범위가다양하다.본발명의 화학식 1의 화합물의 일일 투여량은약 1내지 1000 mg/kg이고,바람직하게는 5내지 100 mg/kg이며 ,하루 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897 일회 내지수회에 나누어투여할수있다.

[5이 본발명의 약학조성물은상기화학식 1의피라졸아마이드유도체화합물, 이의 광학이성질체또는이의 약학적으로허용가능한염외에동일또는유사한 약효를나타내는유효성분을 1종이상더포함할수있다.

[51] 본발명은상기화학식의 피라졸아마이드유도체화합물,이의 광학이성질체 또는이의 약제학적으로허용가능한염의치료학적으로유 효한양을인간을 포함하는포유류에투여하는단계를포함하는,� �뇨병을치료또는예방하는 방법을제공한다.

[52] 본발명에서사용되는”치료학적으로유효한양 ”이라는용어는당뇨병의

치료에유효한상기 화학식 1의 피라졸아마이드유도체화합물의 양을 나타낸다.

[53] 본발명의치료방법은상기 화학식 1의 화합물을투여함으로써 ,징후의 발현 전에 질병그자체를다룰뿐만아니라,이의 징후를저해하거나피하는것을 또한포함한다.질환의관리에 있어서,특정활성성분의 예방적또는치료학적 용량은질병또는상태의본성 ( 加티과심각도,그리고활성성분이투여되는 경로에 따라다양할것이다.용량및용량의빈도는개별� �자의 연령,체중및 반응에 따라다양할것이다.적합한용량용법은이러한� �자를당연히고려하는 이분야의통상의지식을가진자에의해 쉽게선택될수있다.또한,본발명의 치료방법은상기화학식 1의화합물과함께질환치료에도움이 되는추가적인 활성 제제의치료학적으로유효한양의투여를더포함 할수있으며,추가적인 활성제제는상기화학식 1의화합물과함께시너지 효과또는보조적효과를 나타낼수있다.

[54] 또한,본발명은상기화학식 1의피라졸아마이드유도체화합물,이의

광학이성질체또는이의 약제학적으로허용가능한염의용도를제공한다 .

[55] 또한,본발명은당뇨병의치료용약제의제조를� �한상기 화학식 1의 피라졸 아마이드유도체화합물,이의 광학이성질체또는이의 약제학적으로

허용가능한염의용도를제공한다.약제의제조� �위한상기 화학식 1의 화합물은허용되는보조제,희석제,담체등을혼� ��할수있으며,기타

활성제제와함께복합제제로제조되어 활성성분들의상승작용을가질수 있다.

[56] 본발명의조성물,용도,치료방법에서 언급된사항은서로모순되지 않는한 동일하게 적용된다.

발명의효과

[57] 본발명에 따른피라졸아마이드유도체화합물,이의광학� �성질체또는이의 약학적으로허용가능한염은 MG53(mitsugumin53)을억제할수있다.이에따라, 본발명에따른피라졸아마이드유도체화합물,� �의 광학이성질체또는이의 약학적으로허용가능한염은인슐린의분비를증 가시킬수있을뿐만아니라, 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897 장기복용해도췌장베타세포보호기능을가지면 서 저혈당유발이 없이 혈당 수치를매우효과적으로낮줌과동시에 ,체중증가및 인슐린저항성을 획기적으로해결할수있는작용효과를나타낸다 .

도면의간단한설명

[58] 도 1은실시예 13화합물에 대한 02（：12세포（골격근세포）의 ^- 1, MG53 발현분석 결과를나타낸것이다.

[59] 도 2는실시예 30화합물에 대한 02（：12세포（골격근세포）의 ^- 1, MG53 발현분석 결과를나타낸것이다.

[6이 도 3은실시예 38화합물에 대한 02（：12세포（골격근세포）의 ^- 1, MG53 발현분석 결과를나타낸것이다.

[61] 도 4는실시예 40화합물에 대한 02（：12세포（골격근세포）의 ^- 1, MG53 발현분석 결과를나타낸것이다.

[62] 도 5는실시예 41화합물에 대한 02（：12세포（골격근세포）의 ^- 1, MG53 발현분석 결과를나타낸것이다.

발명의실시를위한최선의형태

[63] 이하,본발명이속하는기술분야에서통상의지� �을가진자가용이하게 실시할수있도록본발명의실시예에 대하여상세히설명한다.그러나본 발명은여러가지상위한형태로구현될수있으며 여기에서 설명하는실시예에 한정되지 않는다.

[64] 심시예 1 :：니 4 -메톡시베짐 ^' ）- -페님- 111-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[65] 「다계 11에팀 5-（4 -메톡시페님 ^' ）- 2.4 -다이옥소페타노에이트의제조

[66]

[67] 톨루엔 50 중에 4 -메톡시페닐아세톤（5.06 30.8 11111101）이교반된용액에 ᅡ：8110 （37.0 1111, 37.0 11111101, 1.0 M 111 11正）를 0。（:에서첨가하였다.동일한 온도에서 30분동안교반한이후,상기반응혼합물에다이에 틸옥살레이트 （4.60 1111, 33.9 11111101）를첨가하였다.상기반응혼합물을 12시간동안상온에서 교반하고, NH ₄ 01포화수용액으로뒌칭시켰다.상기반응혼 합물을 ¾0쇼0를 이용해추출하고,결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서 농축시켰다.잔류물을실리카겔상에서플래시� �럼크로마토그래피 （¾0쇼 11-핵산 = 1:7）로정제하여표제화합물 5.73은（70 %）을짙은오렌지색 오일로수득하였다.

[68] ¾ NMR（000 ₃ , 400 8.3 6.88 8.8

6.35知, 1¾, 4.31여, 211, / = 7.1 3.79知, 3¾, 3.70知, 211）, 1.34比 311, / = 7.2 ¾）.

[69] 「다계 21에팀 3-（4 -메톡시베짐 '）- 1산 -피라좀- 5 -카복심레이트의제조 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897 이

1]

5-（4 -메톡시페닐）- 2, 4 -다이옥소펜타노에이트（3.47용， 13.1 _ ₀ 1）가교반된 용액에하이드라진모노하이드레이트（ 1.27 1111, 26.2 11111101）를상온에서 첨가하였다. 12시간동안교반한후,상기 반응혼합물을 NaHCO ₃ 포화 수용액으로뒌칭하고, ¾0쇼（:를이용하여추출하였다.상기결합된유� ��층을 4로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.잔류� ��을실리카겔상에서 플래시 칼럼크로마토그래피（¾0쇼（ 1-핵산 = 1 :3）로정제하여표제화합물 3.10 ¾（91 %）을오렌지색오일로수득하였다.

2] ¾ NMR（0003, 400 MHz）: 6 7.11 / = 8.3 6.82（山 / = 8.7

6.53知 7.1 7.1

¾）.

3] 『단계 31 3-（4 -메톡시벤질 ^' ） - 1산-피라좀- 5 -카르복실산의제조

4]

5] 11또（30 1111）중에단계 2에서제조된에틸

3-（4 -메톡시벤질）-내-파리졸- 5 -카르복실레이트（2.28은, 8.76 11111101）가교반된 용액에 00比11 ₂ 0（1.10은, 26.3 11111101） ₂ 0（20 ）를상온에서 첨가하였다. 50 ᄋ（：에서 6시간동안교반한후,반응혼합물을 2N 11（그로산성화시킨다음,

0쇼（:로추출하였다.상기결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공 하에서농축시켰다.잔류물을실리카겔상에서� �래시 칼럼크로마토그래피 （¾0 :11-핵산 = 1 :2 MeOH:EtOAc = 1 : 10）로정제하여표제화합물 1.45은（71 %）을백색고체로수득하였다.

2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

건조시킨다음진공하에서농축시켰다.잔류물� �실리카겔상에서플래시칼럼 크로마토그래피 (¾0쇼 11-핵산 = 1:2)로정제하여표제화합물 58.3

백색고체로수득하였다.

[8이 ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.25知, 1¾, 9.96知, 1¾, 7.80 ( 7.9 6.89 (山

211, / = 8.2 6.48知, 1¾, 3.95( 211), 3.72( 3¾,

[81] 심시예 2:八^ -(4 -플루오로페님) -3-(4 -메톡시벤짐)- 1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[82]

[83] 고체로

수득하였다.

[84] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.26知, 1¾, 10.10知, 1¾, 7.83 ( 1¾, 7.19 ((1, 211, / = 8.4 7.15 (III, 211), 6.88 (山 211, / = 8.2 6.48知, 1¾, 3.95知, 211),

3.72知, 3¾,

[85] 심시예 3: /V -(3 -폴루오로페님 ^' )-：니 4 -메톡시베짐 ^' )- 1 11

-피라졸- 5 -카복사마이드의 제조

[86]

[87] 실시예 1과유사한방법으로표제화합물 30.0 고체로

수득하였다.

[88] 400 MHz): 6 13.30 7.77 12.1 8 1¾), 7.33 ( 1¾, ¾), 6.88

6.9 6.85 (111, 1¾, 6.49知, 1¾, 3.95知,

[89] 심시예 4: /V 444터트-부팀녜님 44 -

-피라졸- 5 -카복사마이드의 제조 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897

[9이

[91] 담황색오일로

수득하였다.

[92] ¾ NMR（000 ₃ , 400 8.6 7.34（山 /

= 8.6 7.12（（1, 211, /= 8.5 6.84（山 211, /= 8.5 6.68知, 1¾, 3.97知, 2¾,

3.77知, 3¾, 1.30知, 9¾,

[93] 심시예 5: 3-（4 -메톡시벤짐）-八^ -（4-（트리플루오로메팀）페님）- 1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[94]

[95] 담황색고체로

수득하였다.

[96] ¾ NMR（DMSO-d ₆ , 400 MHz）: 613.31知, 1¾, 10.36知, 1¾, 8.04（山 2¾ / = 6.2 6.52 知, 1¾, 3.96知, 2¾, 3.72知, 3¾

[97] 실시예 6: 3-（4 -메톡시벤질）- -（4 -페녹시페닐）- 1표 -피라졸- 5 -카복사마이드의 제조

[98]

[99] 고체로

수득하였다.

[100] ¾ NMR（DMSO-d ₆ , 400 8.0

7.36（ᄂ / = 7.2 7.19 / = 7.6 7.09 , / = 7.1 6.99（山

211, /= 9.5 6.97（山 211, /= 8.3 6.88（山 211, / = 7.2 6.47知, 1¾, 3.95 知, 2¾, 3.72知, 3¾,

[101] 실시예 7:메틸 4-（3-（4 -메톡시벤질）- 1표-피라졸- 5 -카복사마이도）벤조에이트의 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897 제조

[102]

[103] 담황색고체로서 수득하였다.

[104] ¾ NMR ₆ , 400 MHz): 6 13.32知, 1¾, 10.34知, 1¾, 7.97 8.8

7.91 ( 8.6 7.19 (山 /= 8.6 6.89 (山 / = 8.6 6.51 知, 1¾, 3.9 3.82知, 3¾, 3.72知, 3¾

[105] 심시예 8 시베짐 ^' )- / V 44 -메톡시베짐 VI -피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

8.8 ¾),

7.11 9.0 8.6 Hz), 6.66知,

1¾, 3.96知, 2¾, 3.78知, 3¾, 3.77知, 3¾,

[109] 심시예 9: 3-(4 -메톡시벤짐 V八^ -(3 -메톡시페님 V： [표-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[11이

[111] 실시예 1과유사한방법으로표제화합물 59.3 (58 %)을담황색고체로서 수득하였다.

[112] ¾ NMR (000 ₃ , 400 MHz): 6 8.76知, 1¾, 7.43知, 1¾, 7.21 , / = 8.1

7.09 (111, 3¾, 6.82 (山 211, / = 7.8 6.66 (111, 1¾, 6.65知, 1¾, 3.95知, 2¾, 3.77知,

3¾, 3.75知, 3¾,

[113] 심시예 10: 3-(4 -메톡시벤짐 V八^ -(2 -메톡시페님 V： [표-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

수득하였다.

[124] ¾ NMR ( 00\ ₃ , 400 MHz): 8 9.04知, 1¾, 8.36 9.5 7.10 (山 /

= 8.5 6.82 ((1, 211, /= 8.6 6.65知, 1¾, 6.49 (111, 1¾, 6.48 (111, 1¾, 3.97知,

2¾, 3.83知, 3¾, 3.79知, 3¾, 3.77知, 3¾,

[125] 실시예 13:八^2.5 -다이메톡시페닐 ^' )- 3-(4 -메톡시벤질 ^' ) -1표

-피라졸- 5 -카복사마이드의 제조

[126] 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

[127] 실시예 1과유사한방법으로표제화합물 9.00 오일로

수득하였다.

[128] ¾ NMR (000 ₃ , 400 MHz): 6 9.27知, 1¾, 8.26 3.0 7.14 (

= 8.4도¾), 6.87 ((1, 2H，/ = 8.6 Hz), 6.81 ((1, 1H，/ = 8.8 Hz), 6.69知, 1¾, 6.59 ((¾ 내, / = 8.8, 3.1 ¾), 4.01知, 2¾, 3.86知, 3¾, 3.81知, 3¾, 3.80知, 3¾,

[129] 심시예 14:八 벤조 / 1『1.31다이옥송- 5 -임)- 3-(4 -메톡시벤짐)- 1표

-피라졸- 5 -카복사마이드의제조

[13이

[131] 고체로서

수득하였다.

[132] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.21知, 1¾, 9.90知, 1¾, 7.46知, 1¾, 7.26 (山 111, / = 7.4 7.18 ((1, 211, / = 8.5 6.88 (山 211, / = 8.6 6.86 (111, 1¾, 6.45 知, 1¾, 5.98知, 2¾, 3.94知, 211), 3.72知, 3¾,

[133] 심시예 15: 3-(4 -플루오로벤짐 )-八 페님- 1표-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[134] 『단계 11에틸 5-(4 -플루오로페닐)- 2.4 -다이옥소펜타노에이트의제조

[135]

[136] 톨루엔 20 중에 4 -플루오로페닐아세톤 (1.19 7.82 11111101)이교반된용액에 I -：8110 (9.38센, 9.38 11111101, 1.0 M 1¾印를 0ᄋ(：에서 첨가하였다.동일한 온도에서 30분동안교반한이후,상기반응혼합물에다이에 틸옥살레이트 (1.17 1111, 8.60 11111101)를첨가하였다.상기 반응혼합물을 12시간동안상온에서 교반하고, NH ₄ C1포화수용액을이용해 뒌칭시켰다.상기반응혼합물을

0쇼0를이용해추출하고,결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공 하에서농축시켰다.잔류물을실리카겔상에서� �래시 칼럼크로마토그래피 (¾0쇼 -핵산 = 1 :7)로정제하여표제화합물 1.38 % (67 %)을오렌지색오일로 수득하였다. 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897

[137] ¾ NMR（000 ₃ , 400 MHz） 6 7.20（ 2¾, 7.04（ 2¾, 6.35知, 1¾, 4.33（小 / = 7.1 3.75知, 211）, 1.35（ᄂ 311, /= 7.2

[138] 『단계 21에틸 3-（4 -플루오로벤질 ^' ） -1산-피라좀- 5 -카복실레이트의제조

[139]

[14이 조된에틸

5-(4 -플루오로페닐)- 2, 4 -다이옥소펜타노에이트 (2.25은, 8.92 _ ₀ 1)가교반된 용액에하이드라진모노하이드레이트 (0.865 1111, 17.8 11111101)를상온에서 첨가하였다. 12시간동안교반한후,상기반응혼합물을 NaHCO ₃ 포화 수용액으로뒌칭하고, ¾0쇼(:를이용하여추출하였다.상기결합된유기 층을

4로건조시킨다음진공에서농축시켰다.잔류물� ��실리카겔상에서 플래시칼럼크로마토그래피 (¾0쇼 -핵산 = 1:3)로정제하여표제화합물 1.48 ¾ (67 %)을노란색오일로수득하였다.

[141] ¾ NMR (0)0 ₃ , 400 MHz) 6 7.71 (III, 2¾, 6.98 (III, 2¾, 6.55知, 1¾, 4.34여, 211,

= 7.1 4.02知, 211), 1.34 (ᄂ 311, /= 7.1

[142] 「다계 31 344 -플루오로베짐') -1 피라좀- 5 -카복심산의제조

[143]

[144] 11또 (15 1111)중에단계 2에서제조된에틸 3-(4 -플루오로벤질)- 1好

교반한후,반응혼합물을 2N 11(：1로산성화시킨다음 ¾0쇼0로추출하였다.상기 결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.� �류물을 실리카겔상에서플래시칼럼크로마토그래피 ( 0쇼0 -핵산 = 1:2에서

MeOH:EtOAc = 1:10)로정제하여표제화합물 766 11¾ (87 %)을백색고체로 수득하였다.

[145] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz) 6 7.28 6.1 7.12 ( 8.1

6.40知, 1¾, 3.94知, 2¾,

[146] 「다계 41 3-(4 -플루오로베짐 ^' )- -페님- 1산-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[147] 2020/175957 1 ^» (：1^1{2020/002897

[148] 01 ₂ 01 ₂ (5 1111)중에단계 3에서제조된 3-(4 -플루오로벤질)- 1好

0.243 11111101)이 0.0486 11111101)를 상온에서첨가하였다. 2시간동안교반한후상기반응혼합물을 ₂ 0로 추출하였다.상기결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음 진공하에서농축시켰다.잔류물을실리카겔상� �서플래시칼럼

크로마토그래피 (¾0쇼£:11-핵산 = 2:3에서 3:1)로정제하여표제화합물 40.1 11¾ (56 %)을백색고체로수득하였다.

[149] ¾ NMR (DMSO -(1 ₆ , 400 , 9. .8 Hz), 7.33 (111, 2¾, 7. 29 ( 8.7

6.53知, 1¾, 4.03知, 2¾,

[15이 심시예 16: 3-(4 -플루오로벤짐 )-八^ -(4 -플루오로페님 ) -1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[151]

[152] 실시예 15와유사한방법으로표제화합물 37.7 고체로

수득하였다.

[153] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.29知, 1¾, 10.10知, 1¾, 7.83 ( 2¾, 7.32 (111, 2¾, 7.17 (111, 2¾, 7.14 ( 2¾, 6.52知, 1¾, 4.03知, 2¾,

[154] 심시예 17:

3-(4 -플루오로벤질)-＞ 3 -플루오로페닐)- 111-피라졸- 5 -카복사마이드의제조

[155]

[156] 실시예 15와유사한방법으로표제화합물 34.2 고체로

수득하였다.

[157] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.32知, 1¾, 10.23知, 1¾, 7.77 ( 1¾, 7.64

8.2 7.35凡내, /= 8.2 7.31 (!!!, 2¾, 7.15比 2比 /= 8.8 Hz), 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

6.87（111, 1¾, 6.53知, 1¾, 4.03知, 2¾,

[158] 심시예 18:八 4-（터트-부팀）페님）- 3-（4 -플루오로벤짐）- 1표

[159]

[160] 실시예 15와유사한방법으로표제화합물 78.8 고체로

수득하였다.

[161] ¾ NMR (000 ₃ , 400 MHz): 6 11.60知, 1¾, 8.80知, 1¾, 7.54 8.6

7.33 ((1, 211, / = 8.6 7.09 (111, 211), 6.91 (ᄂ 211, /= 8.6 6.62知, 1¾, 3.94知,

2¾, 1.30知, 9¾,

[162] 심시예 19:

3-(4 -폴루오로베짐 )-＞ 44트리폴루오로메팀、페님니11 -피라좀- 5 -카복사마이드 의 제조

[163]

[164]

수득하였다.

[165] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.35知, 1¾, 10.37知, 1¾, 8.05 6.4

6.56知, 1¾, 4.03知, 2¾

[166] 심시예 20: 3-(4 -플루오로벤짐 )-八^ -(4 -페녹시페님) -1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[167]

[168] 실시예 15와유사한방법으로표제화합물 24.5 고체로

수득하였다.

[169] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.30知, 1¾, 10.08知, 1¾, 7.84 ( 8.8

7.12比 111, / = 7.1 , 4.05知, 2¾, 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

[17이 심시예 21:메팀 4-(3-(4 -플루오로벤짐 ) -1표

-피라좀 _ ₅ _카복사마이도)벤조에이트의제조

[171]

[172] 실시예 15와유사한방법으로표제화합물 44.2 (40 %)을담황색고체로서 수득하였다.

[173] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 1¾, 10.36知, 1¾, 7.98 8.7 / = 8.4 1¾), 7.31 8.4, 5.7 1¾), 7.15 8.8 1¾),

6.55知, 1¾, 4.03知, 2¾, 3.82知, 3

[174] 실시예 22: 3-(4 -플루오로벤질)- 시페닐)- 1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[175]

[176] 고체로

수득하였다.

[177] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.25知, 1¾, 9.88知, 1¾, 7.69 ( 2¾, 7.31 知1, 2¾, 7.15 (111, 2¾, 6.88 ( 2¾, 6.49知, 1¾, 4.01 知, 2¾, 3.71 知, 3¾,

[178] 심시예 23: 3-(4 -플루오로벤짐 )-＞ 3 -메톡시페님 )-111 -피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[179]

[18이 실시예 15와유사한방법으로표제화합물 39.9 오일로서 수득하였다.

[181] 111 NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 6 13.27知, 1¾, 9.92知, 1¾, 7.50知, 1¾, 7.41 (山 I = 8.9 Hz), 6.63

((¾ I = 8.2, 2.1도¾), 6.51知, 1¾, 4.02知, 2¾, 3.73知, 3¾,

[182] 심시예 24: 3-(4 -플루오로벤짐 )-八^ -(2 -메톡시페님) -1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

[183]

[184] 실시예 15와유사한방법으로표제화합물 61.7 (53 %)을담황색고체로서 수득하였다.

[185] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.31知, 1¾, 9.32知, 1¾, 8.30 (山 1¾ / = 7.6 7.08 (III, 1¾, 7.06 (III, 1¾, 6.95 (III, 1¾,

6.53知, 1¾, 4.03知, 2¾, 3.89知, 3¾,

[186] 심시예 25: /V 423 -다이메톡시페님ᅡ344 -폴루오로베짐 ^' )- 111

-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[187]

[188] 실시예 15와유사한방법으로표제화합물 58.4 (52 %)을담황색고체로서 수득하였다.

[189] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): , 1¾, 9.40知, 1¾, 7.94 ( 8.2

7.31比 /= 6.1 7.15 8.8 7.06 (ᄂ / = 8.3 6.81 (山 내, / = 8.4 ¾), 6.54知, 1¾, 4.03 82知, 3¾, 3.81知, 3¾.

[190] 심시예 26: /V 42.4 -다이메톡시 -폴루오로베짐 ^' )- 1ᄍ

-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[191]

[192]

오일로서수득하였다.

[193] ¾ NMR ( 00\ ₃ , 400 MHz): 6 10.90知, 1¾, 9.04知, 1¾, 8.34 (山내, / = 7.6 ¾), 7.14 (111, 2¾, 6.97 ( 2¾, 6.64知, 1¾, 6.50 ( 1¾, 6.48 ( 1¾, 4.00知, 2¾, 3.85 知, 3¾, 3.80知, 3¾,

[194] 심시예 27:八^ -(2.5 -다이메톡시페님) -3-(4 -플루오로벤짐)- 1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[195] 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

[196] 실시예 15와유사한방법으로표제화합물 11.0 오일로서

수득하였다.

[197] ¾ NMR (000 ₃ , 400 MHz): 6 9.25知, 1¾, 8.24 (山 / = 2.7 7.17 ( 2¾,

7.00 (ᄂ / = 8.2 1¾), 6.81凡내, / = 8.8 1¾), 6.67知, 1¾, 6.59 8.8,

2.4 ¾), 4.03知, 2¾, 3.86知, 3¾, 3.80知, 3¾,

[198] 심시예 28: /V - (베조『 ¥131다이옥송- 5 -임 니4 -폴루오로베짐니 11

-피라졸- 5 -카복사마이드의제조

[199]

[200] 고체로서 수득하였다.

[201] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.25知, 1¾, 9.91知, 1¾, 7.46知, 1¾, 7.30 , 211, / = 6.4 7.26 (山 111, / = 8.6 7.15 (ᄂ 211, / = 8.7 6.85 (山 111, / = 8.4

6.49知, 1¾, 5.98知, 2¾, 4.01知, 211).

[202] 심시예 29: 3-(4 -큼로로베짐ᅡ -페님- 1ᄍ-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[203] 「다계 1 1에팀 5-（4 -큼로로페님 ^' ） -2.4 -다이옥소페타노에이트의제조

[204]

[205] 톨루엔（120 ）중에 4 -클로로페닐아세톤（12.1은，기.7 11111101）이교반된용액에 ᅡ：8110 （86.1 1111, 86.1 11111101, 1.0 M노 11正）를 0。（:에서첨가하였다.동일한 온도에서 30분동안교반한후,상기반응혼합물에다이에틸 옥살레이트（10.7 1111, 78.9 11111101）를첨가하였다.상기반응혼합물을 12시간동안상온에서 교반하고, NH ₄ C1포화수용액을이용해뒌칭시켰다.상기반 응혼합물을

0쇼0를이용해추출하고,결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공 하에서농축시켰다.잔류물을실리카겔상에서� �래시칼럼크로마토그래피 （¾0쇼 -핵산 = 1 :7 10 1 :2）로정제하여표제화합물 18.6은（97 %）을짙은적색 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897 오일로서수득하였다.

[209] 아세트산 (40 1111)중에 단계 1에서 제조된에틸

5-(4 -클로로페닐)- 2, 4 -다이옥소펜타노에이트 (2.47 ^ 9.20 _ ₀ 1)가교반된 용액에하이드라진모노하이드레이트 (0.893 1111, 18.4 11111101)를상온에서 첨가하였다. 12시간동안교반한후,상기 반응혼합물을 NaHCO ₃ 포화 수용액으로뒌칭하고, ¾0쇼(:를이용하여추출하였다.상기결합된유기 층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.� �류물을실리카겔상에서 플래시 칼럼크로마토그래피 (¾0쇼 -핵산 = 1 :3)로정제하여표제화합물 2.26 은 (93 %)을짙은적색오일로서수득하였다.

[21이 ¾ NMR (000 ₃ , 400 MHz) 6 7.27 8.5 7.15 8.2

6.56知, 1¾, 4.35 (다, 211, / = 7.2 11 ₂ ), 4.01 (8, 2¾, 1.36 (ᄂ 311, / = 7.1 11 ₂ ).

[211] 『단계 31 3-(4 -클로로벤질 ^' ) - 1표-피라좀- 5 -카복실산의제조

[212]

[213] 11또 (90 1111)중에단계 2에서제조된에틸 3-(4 -클로로벤질)- 1好

-피라졸- 5 -카복실레이트 (10.3은, 39.0 11111101)가교반된용액에 00比11 ₂ 0 (3.27 ^ 78.0 11111101) 111 ₂ 0 (70 :신)를상온에서 첨가하였다. 50ᄋ(：에서 6시간동안교반한 후,반응혼합물을 2N 11(그로산성화시킨다음 ¾0쇼(:로추출하였다.상기결합된 유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.� �류물을실리카겔 상에서플래시칼럼크로마토그래피田於쇼。 -핵산 = 1 :2에서 MeOH:EtOAc = 1 : 10)로정제하여표제화합물 8.24은 (89 %)을담황색고체로수득하였다.

[214] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 7.34 7.6 7.26 7.5

6.30知, 1¾, 3.92知, 2¾,

[215] 『단계 41 3-(4 -클로로벤질)- -페닐- 1산-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[216] 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897

2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

Hz), 7.64 ( 8.1 8.3 Hz), 7.34 ( 1¾, 7.30 (

8.2 ¾), 6.88 (ᄂ내, /= 8.2 ¾), 6.54知, 1¾, 4.04知, 2¾.

[227] 심시예 32:八^ -(4-(터트-부팀)페님)- 3-(4 -큼로로벤짐) -1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[228]

[229] 실시예 29와유사한방법으로표제화합물 20.3 (27 %)을담황색고체로서 수득하였다.

[23이 ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.24知, 1¾, 9.86知, 1¾, 7.67 8.8 Hz), 7.37 ( 1, / = 8.0 1¾), 7.30凡 /= 7.8 1¾), 7.28 / = 8.2 1¾), 6.50 知, 1¾, 4.01知, 2¾, 1.24知, 9¾

[231] 실시예 33: 3-(4 -클로로벤질)- - (4-(트리플루오로메틸)페닐)- 1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[232]

[233] 실시예 29와유사한방법으로표제화합물 17.1 (18 %)을담황색고체로 수득하였다.

[234] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz) 6 13.36知, 1¾, 10.39知, 1¾, 8.04 ( 8.4 Hz), 7.67 ( 1, / = 8.4 1¾), 7.39凡 /= 7.5 1¾), 7.29 (山 / = 8.2 1¾), 6.56 知, 1¾, 4.04知, 2¾

[235] 실시예 34: 3-(4 -클로로벤질 ^' )-八나 4 -페녹시페닐 ^' )- 1표-피라졸- 5 -카복사마이드의 제조

[236]

[237] 아이보리색

고체로서수득하였다.

[238] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.26知, 1¾, 10.03知, 1¾, 7.81 ( 1, 2¾ / = 8.7 7.09 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897 比 111, / = 7.0 1¾), 6.99 ((1, 211, /= 8.9 1¾), 6.97 (<1, 211, / = 7.9 1¾), 6.52知, 1¾, 4.03知, 2¾,

[239] 심시예 35:메팀 4-(3-(4 -큼로로벤짐 ) -1표

-피라좀 _ ₅ _카복사마이도)벤조에이트의제조

[24이

[241] 실시예 29와유사한방법으로표제화합물 24.0 (7 %)을담황색고체로서 수득하였다.

[242] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 5 13.37知, 1¾, 10.36知, 1¾, 7.97 8.8 6.55 知, 1¾, 4.04知, 2¾, 3.82知, 3¾

[243] 실시예 36: 3-(4 -클로로벤질 ^' )-八나 4 -메톡시페닐 ^' )- 1표-피라졸- 5 -카복사마이드의 제조

[244]

[245] 고체로서 수득하였다.

[246] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.24知, 1¾, 9.84知, 1¾, 7.68 7.4 8.1 Hz), 6.50 知, 1¾, 4.02知, 2¾, 3.73知, 3¾,

[247] 실시예 37: 3-(4 -클로로벤질)- -(3 -메톡시페닐)- 1 -피라졸- 5 -카복사마이드의

제조

[248]

[249] 실시예 29와유사한방법으로표제화합물 30.3 오일로서 수득하였다.

[25이 ¾ NMR 400 MHz): 知, 1¾, 7.40知, 1¾, 7.38 4 1¾), 7.30 8.1 1¾), 6.64 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

((1, 111, / = 7.4 6.52知, 1¾, 4.03知, 211), 3.73知, 311).

[251] 심시예 38: 3-(4 -큼로로벤질、- IV -(2 -메톡시페님 V：［표-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[252]

[253] 실시예 29와유사한방법으로표제화합물 20.2 (31 %)을담황색고체로서 수득하였다.

[254] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.33知, 1¾, 9.31知, 1¾, 8.28 / = 7.9

7.3 1¾), 7.08 ( 2¾, 6.95比내, / = ,

[255] 심시예 39: 3-(4 -큼로로벤짐 )-八^ -(2.3 -다이메톡시페님)- 1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[256]

[257] 실시예 29와유사한방법으로표제화합물 20.7 (25 %)을담황색고체로서 수득하였다.

[258] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.34知, 1¾, 9.38知, 1¾, 7.92 ( 8.2 6.81

((1, 111, / = 8.6 6.54知, 1¾, 4.03知, 211), 3.82知, 311), 3.80知, 3¾,

[259] 심시예 40: 3-(4 -큼로로벤짐 )-八^ -(2.4 -다이메톡시페님)- 1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[26이

[261] 아이보리색

고체로서수득하였다.

[262] ¾ NMR (000 ₃ , 400 MHz): 6 9.01知, 1¾, 8.31 (山 / = 8.4 7.22 (

= 8.3 Hz), 7.08 (山 2比 /= 8.4 Hz), 6.61 , 1¾, 6.48知, 1¾, 6.47凡내, /= 8.0 1¾ ₎ , 3.97知, 2¾, 3.82知, 3¾, 3.79知, 3¾, 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

[263] 심시예 41: 3-(4 -큼로로벤짐 )-八^ -(2.5 -다이메톡시페님) -1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

고체로서수득하였다.

[266] ¾ NMR (000 ₃ , 400 MHz): 6 9.22知, 1¾, 8.24 ( 1¾, 7.28 ( 2¾, 7.14 (

2¾, 6.81凡 /= 9.0 1¾), 6.66知, 1¾, 6.59 8.9, 3.0 1¾), 4.03知, 2¾,

3.86知, 3¾, 3.80知, 3¾,

[267] 심시예 42:八 벤조 / ¥1.31다이옥송- 5 -임- 3-(4 -큼로로벤짐)- 1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[268]

[269] 담황색고체로서 수득하였다.

[27이 ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.26知, 1¾, 9.92知, 1¾, 7.45知, 1¾, 7.38 (山

/ = 7.8 1¾), 6.49

[271] 심시예 43:

3-(3 -큼로로벤짐 )-＞ 2.4 -다이메톡시페님)- 111-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[272] 「다계 11에팀 5-(3 -큼로로페님 ^' )- 2.4 -다이옥소페타노에이트의제조

[273]

[274] 톨루엔 (50 )중에 3 -클로로페닐아세톤 (5.34 31.7 11111101)이교반된용액에 I -：8110 (38.0센, 38.0 11111101, 1.0 M 1¾印를 0ᄋ(：에서첨가하였다.동일한 온도에서 30분동안교반한후,상기반응혼합물에다이에틸 옥살레이트 (4.74 1111, 34.9 11111101)를첨가하였다.상기반응혼합물을 24시간동안상온에서 교반하고, NH ₄ C1포화수용액을이용해뒌칭시켰다.상기반 응혼합물을 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897 0쇼0를이용해추출하고,결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공 하에서농축시켰다.잔류물을실리카겔상에서� �래시 칼럼크로마토그래피 (¾0쇼 -핵산 = 1 :4)로정제하여표제화합물 5.77은 (68 %)을짙은적색 오일로서수득하였다.

[275] 『단계 21에틸 3-(3 -클로로벤질 ^' ) - 1산-피라좀- 5 -카복실레이트의 제조

60은, 9.68 _ ₀ 1)가교반된

용액에하이드라진모노하이드레이트 (0.941 1111, 19.4 11111101)를상온에서 첨가하였다. 24시간동안교반한후,상기 반응혼합물을 NaHCO ₃ 포화 수용액으로뒌칭하고, ¾0쇼(:를이용하여추출하였다.상기결합된유기 층을 건조시킨다음진공하에서농축시켰다.잔류물� �실리카겔상에서 플래시 칼럼크로마토그래피 (¾0쇼 -핵산 = 1 :3)로정제하여표제화합물 1.78 § (69 %)을적색고체로서수득하였다.

[278] 『단계 31 3-(3 -클로로벤짐 ^' )- 1산-피라좀- 5 -카복심산의제조

[279]

[28이 11또 (20 1111)중에단계 2에서제조된에틸 3-(3 -클로로벤질)- 1好

-피라졸- 5 -카복실레이트 (1.78은, 6.72 11111101)가교반된용액에 00比11 ₂ 0 (562 13.4 11111101) 111 ₂ 0 (10 )를상온에서 첨가하였다. 50ᄋ(：에서 24시간동안 교반한후,반응혼합물을 2N 11(：1로산성화시킨다음 ¾0쇼0로추출하였다.상기 결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.� �류물을 실리카겔상에서플래시 칼럼크로마토그래피 ( 0쇼0 -핵산 = 1:2에서

MeOH:EtOAc = 1 : 10)로정제하여표제화합물 1.13은 (71 %)을연분홍색고체로 수득하였다.

[281] 「다계 41 343 -큼로로베짐 ^' )- 2.4 -다이메톡시페님 ^' ) -1

-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[282]

2020/175957 1»（：1^1{2020/002897

[283] 01 ₂₍ ：1 ₂ (5 1111)중에단계 3에서제조된 3-(3 -클로로벤질)- 1好

-피라졸- 5 -카복실산 (61.8 0.261 11111101)과 2, 4 -다이메톡시아닐린 (37.2 ,

0.261 11111101)이교반된용액에 0.522 11111101)와 DMAP (3.19

26.1 011101)를상온에서 첨가하였다. 72시간동안교반한후,상기 반응혼합물을 추출하였다.상기결합된유기층을 MgSO ₄ 로 건조시킨다음진공하에서농축시켰다.잔류물� �실리카겔상에서플래시칼럼 크로마토그래피田於쇼 -핵산 = 1 :2)로정제하여표제화합물 90.3

갈색고체로서수득하였다.

[284] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.29知, 1¾, 9.12 (8, 1¾, 8.13 ((1,내, / = 8.6 Hz), 7.32 (111 6.52 ( 1¾, 4.05知, 2¾,

[285] 실시예 44: 3-(2 -클로로벤질)- -(4 -메톡시페닐)- 1 -피라졸- 5 -카복사마이드의 제조

[286] 「다계 11에팀 5-(2 -큼로로페님 ^' )- 2.4 -다이옥소페타노에이트의제조

[287]

[288] 톨루엔 (30 1111)중에 2 -클로로페닐아세톤 (2.98은, 17.7 11111101)이교반된용액에 I -：8110 (21.1 ^, 21.2 11111101, 1.0 M 1¾印를 0ᄋ (:에서 첨가하였다.동일한 온도에서 30분동안교반한후,상기반응혼합물에다이에틸 옥살레이트 (2.65 1111, 19.5 11111101)를첨가하였다.상기반응혼합물을 3시간동안상온에서 교반하고, NH ₄ C1포화수용액을이용해 뒌칭시켰다.상기반응혼합물을

0쇼0를이용해추출하고,결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공 하에서농축시켰다.잔류물을실리카겔상에서� �래시 칼럼크로마토그래피

(¾0쇼 -핵산 = 1 :4)로정제하여표제화합물 2.35은 (49 %)을짙은적색 오일로서수득하였다.

[289] 「다계 21에팀 3 2 -큼로로베짐 ^' ) - 1 -피라좀- 5 -카복심레이트의 제조

[29이

[291] 아세트산 (12 1111)중에 단계 1에서 제조된에틸

5-(2 -클로로페닐)- 2, 4 -다이옥소펜타노에이트 (2.35은, 8.75 _ ₀ 1)가교반된 용액에하이드라진모노하이드레이트 (0.849 1111, 17.5 11111101)를상온에서 첨가하였다. 24시간동안교반한후,상기 반응혼합물을 NaHCO ₃ 포화 수용액으로뒌칭하고, ¾0쇼(:를이용하여추출하였다.상기결합된유기 층을 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897

₄ 로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.� �류물을실리카겔상에서 플래시칼럼크로마토그래피 (¾0쇼0 -핵산 = 1:2)로정제하여표제화합물 1.71 은 (74 %)을오렌지색오일로서수득하였다.

[292] 『단계 31 3-(2 -클로로벤질 ^' ) -1표-피라좀- 5 -카복실산의제조

[293]

[294] 11또 (10 1111)중에단계 2에서제조된에틸 3-(2 -클로로벤질)- 1好

교반한후,반응혼합물을 2N 11(：1로산성화시킨다음 ¾0쇼0로추출하였다.상기 결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.� �류물을 실리카겔상에서플래시칼럼크로마토그래피 (¾0쇼0 -핵산 = 1:1에서

MeOH:EtOAc = 1:10)로정제하여표제화합물 685 11¾ (89%)을담황색고체로 수득하였다.

[295] 「다계 41 342 -큼로로베짐 ^' )- 4 -메톡시페님 ^' )- 1 -피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[296]

[297] 01 ₂₍ ：1 ₂ (6 1111)중에단계 3에서제조된 3-(2 -클로로벤질)- 1好

-피라졸- 5 -카복실산 (74.0 0.313 11111101)과 4 -메톡시아닐린 (38.5 11¾, 0.313 11111101)이교반된용액에 £00^01 (120 0.626 11111101)와 DMAP (3.82 31.3 나11101)를상온에서 첨가하였다. 24시간동안교반한후,상기 반응혼합물을 ₂ 0로뒌칭하고 ₂ 01 ₂ 로추출하였다.상기결합된유기층을 ₄ 로건조시킨 다음진공하에서농축시켰다.잔류물을실리카� �상에서플래시 칼럼

크로마토그래피 (¾0쇼£: -핵산 = 1 :2에서 2: 1)로정제하여표제화합물 66.6 (62 %)을담갈색고체로서수득하였다.

[298] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.29知, 1¾, 9.85知, 1¾, 7.69 ( 2¾, 7.47凡 111, / = 6.2 7.35 (111, 1¾, 7.31 (111, 2¾, 6.89 (山 211, / = 6.3 6.42知, 1¾,

4.14知, 2¾, 3.72知, 3¾,

[299] 실시예 45: 3-(2 -클로로벤질)- -(3 -메톡시페닐)- 1표 -피라졸- 5 -카복사마이드의 제조

[300] 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

[301] 실시예 44와유사한방법으로표제화합물 71.6 고체로서 수득하였다.

[302] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.34知, 1¾, 9.92知, 1¾, 7.47 ( 2¾, 7.39凡 111, / = 6.1 7.33 (111, 3¾, 7.20比 111, / = 6.5 6.64 (山 111, / = 6.2 6.43 知, 1¾, 4.14知, 2¾, 3.73知, 3¾,

[303] 실시예 46: 3-(2 -클로로벤질 ^' )-八네메톡시페닐 ^' )- 1표-피라졸- 5 -카복사마이드의 제조

[304]

[305] 실시예 44와유사한방법으로표제화합물 79.6 (77 %)을담갈색고체로서 수득하였다.

[306] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.38知, 1¾, 9.34知, 1¾, 8.31 (山 I = 7.2 ¾), 7.47 ((1, I = 6.9 ¾), 7.33 ( 3¾, 7.07 ( 2¾, 6.96 ( 1¾, 6.45知, 1¾, 4.15知, 2¾, 3.89知, 3¾,

[307] 실시예 47: 3-(2 -클로로벤질)- -(2.4 -다이메톡시페닐)- 1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[308]

[309] 실시예 44와유사한방법으로표제화합물 67.4 !!¾ (60 %)을아이보리색

고체로서수득하였다.

[31이 ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.32知, 1¾, 9.13知, 1¾, 8.11 8.1 ¾), 7.47 ((1, I = 6.6 ¾), 7.32 ( 8.8 ¾), 6.41 知, 1¾, 4.14知, 2¾, 3.87知, 3¾, 3

[311] 심시예 48: 3-(2 -큼로로벤짐 )-八^ -(2.5 -다이메톡시페님) -1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[312] 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

[313] 실시예 44와유사한방법으로표제화합물 44.0 (38 %)을담황색고체로서 수득하였다.

[314] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.38知, 1¾, 9.32知, 1¾, 8.00知, 1¾, 7.47 (山 I = 8.9 Hz), 6.44知, 1¾, 4.14知, 2¾, 3.84知, 3¾, 3.70知, 3¾,

[315] 실시예 49: 3-(4 -클로로벤질)- -(2.4-다이메톡시페닐)- -메틸- 1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[316]

[317] 실시예 29와유사한방법으로표제화합물 76.1 (54 %)을담황색고체로서 수득하였다.

[318] ¾ NMR (000 ₃ , 400 MHz): 6 7.18 (山 I = 8.4 7.02 (山 I = 8.7

6.97 I = 8.3 2.6 Hz), 4.68知, 1¾, 3.83知, 3¾, 3.78知, 2¾, 3.

[319] 심시예 50:

> 4 -폴루오로페님 니4 -메톡시베짐 ^' >-1 -메팀 - 111-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[32이 「다계 1 1에팀 3 4 -메톡시베짐 ^' )니 -메팀 - 1 -피라좀- 5 -카복심레이트의제조

[321]

[322] DMF (10 1111)중에에틸 3-(4 -메톡시벤질)- 1好-피라졸- 5 -카르복실레이트 (724 !!¾, 2.78 11111101)가교반된용액에 X ₂ 00 ₃ (462 !!¾, 3.34 11111101)및아이오도메탄 (0.208 1111, 3.34 11111101)를상온에서첨가하였다. 18시간동안교반한후,상기반응 혼합물을 ₂ 0로뒌칭하고, ¾0쇼(:를이용하여추출하였다.상기결합된 유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.� �류물을실리카겔 상에서플래시칼럼크로마토그래피 (¾0쇼0 -핵산 = 1:6)로정제하여표제 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897 화합물 347 (46 %)을무색오일로서수득하였다.

교반한후,반응혼합물을 1N 11(：1로산성화시킨다음 ¾0쇼0로추출하였다.상기 결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.� �류물을 실리카겔상에서플래시 정제하여 표제화합물 312 (92 %)을백색고체로수득하였다.

[326] 「다계 31 344 -메톡시베짐')- - -메톡시페님')- 1 -메팀- 1

-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[327]

[328] 01 ₂₍ ：1 ₂ (4 1111)중에단계 2에서제조된 3-(4 -메톡시벤질)- 1 -메틸- 1好

-피라졸- 5 -카복실산 (52.1 0.212 11111101)이교반된용액에옥살릴클로라이드 (53.8 , 0.636 1^101)를상온에서 첨가하였다. 30분동안교반한후,상기반응 혼합물을진공하에서농축하고 (：11 ₂₍ ：1 ₂ (2 1111)로희석하였다.반응혼합물에 (：!! 201 ₂ (1 1111)중의 4 -플루오로아닐린 (20.1 , 0.212 11111101)의용액과 (59.2 , 0.424 11111101)을상온에서 첨가하였다. 2시간동안교반한후,상기반응혼합물을 NH ₄ 01포화수용액으로뒌칭하고 ₂ 01 ₂ 로추출하였다.상기결합된유기층을

MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.� �류물을실리카겔상에서 플래시 칼럼크로마토그래피 (¾0쇼 -핵산 = 1 :2)로정제하여표제화합물 38.0 (53 %)을황색오일로서수득하였다.

[329] ¾ NMR (000 ₃ , 400 MHz): 6 7.68知, 1¾, 7.48 ( 2¾, 7.17 (&, I = 8.7

7.03 (111, 2¾, 6.84 (山 211, 1 = 8.7 6.29知, 1¾, 4.14知, 3¾, 3.91知, 211), 3.78知,

3¾,

[33이 심시예 51:

3-(4 -메톡시벤짐 )-＞ 4 -메톡시페님 VI -메팀 - 111-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[331] 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897

[332] 오일로서 수득하였다.

[333] ¾ NMR (000 ₃ , 400 MHz) 6 7.71知, 1¾, 7.41 (山 I = 9.0 7.16 I =

8.5 ¾), 6.84 (111, 4¾, 6.28知, 1¾, 4.13知, 3¾, 3.89知, 2¾, 3.78知, 3¾, 3.77知, 3¾,

[334] 심시예 52:

344 -큼로로베짐 ^' )-＞ 2.4 -다이메톡시베짐 VI -메팀 -111-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[335] 「다계 1 1에팀 3 4 -큼로로베짐 ^' )니-메팀- 피라좀- 5 -카복심레이트의제조

[336]

[337] DMF (3 1111)중에 에틸 3-(4 -클로로벤질)-내-피라졸- 5 -카르복실레이트 (278 1.05 11111101)가교반된용액에 1.58 11111101)및아이오도메탄 (98.4 , 1.58 11111101)를상온에서 첨가하였다. 10시간동안교반한후,상기 반응 혼합물을 1120로뒌칭하고, 0 를이용하여추출하였다.상기 결합된 유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.� �류물을실리카겔 상에서플래시칼럼크로마토그래피 (¾0쇼 11-핵산 = 1 :5)로정제하여표제 화합물 129 고체서수득하였다.

[338] 『단계 21 3-(4 -클로로벤짐 ^' )- 1 -메팀-내-피라좀- 5 -카복심산의 제조

[339]

[34이 11正 (4 1111)중에단계 1에서제조된에틸

3-(4 -클로로벤질)- 1 -메틸-내-피라졸- 5 -카복실레이트 (237 0.850 11111101)가 교반된용액에 1 0比 ₂ 0 (71.3 11¾, 1.70 11111101) ₂ 0 (2 )를상온에서 첨가하였다. 20시간동안교반한후,반응혼합물을 1N 11(그로산성화시킨다음 0쇼(:로추출하였다.상기결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897 하에서농축시켰다.잔류물을실리카겔상에서� �래시 칼럼크로마토그래피 (¾0쇼。 MeOH:EtOAc = 1 : 1)로정제하여표제화합물 202 (95 %)을담황색 고체로수득하였다.

[341] 「다계 31

3-(4 -큼로로베짐ᅵ水-와 -다이메톡시페님 VI -메팀-내-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[342]

[343] 제조된

3-(4 -클로로벤질)- 1 -메틸-내-피라졸- 5 -카복실산 (74.7 11¾, 0.298 11111101)이교반된 용액에옥살릴클로라이드 (75.7 , 0.894 11111101)를상온에서 첨가하였다. 1시간 동안교반한후,상기 반응혼합물을진공하에서농축하고 ₂ 01 ₂ (4 1111)로 희석하였다.반응혼합물에 2, 4 -다이메톡시아닐린 (42.5 , 0.2982 11111101)및 (83.2 , 0.596 1^101)를상온에서 첨가하였다. 40분동안교반한후,상기반응 혼합물을 NH ₄ 01포화수용액으로뒌칭하고 ₂ 01 ₂ 로추출하였다.상기 결합된 유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.� �류물을실리카겔 상에서플래시

1:1)로정제하여표제화합물 100 (87 %)을아이보리색고체로서수득하였다.

[344] ¾ NMR (000 ₃ , 400 MHz): 6 8.21 (山 I = 9.5 8.02知, 1¾, 7.27 (山 I

= 8.6 Hz), 7.19 (山 2比 I = 8.7도¾), 6.49 ( 2¾, 6.33知, 1¾, 4.17知, 3¾, 3.95知, 2¾, 3.85知, 3¾, 3.80知, 3¾,

[345] 심시예 53: 3-(4 -큼로로벤조임 )-八^ -(2.4 -다이메톡시페님)- 1표

-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[346] 「다계 11에팀 3-(4 -큼로로베조임 ^' ) - 1표-피라좀- 5 -카복심레이트의 제조

[347]

[348] 에틸 3-(4 -클로로벤질)- 1好-피라졸- 5 -카르복실 2.42 11111101)에

(5.82 1111, 29.1 11111101, 5.0 M 데칸)를상온에서 첨가하였다. 120ᄋ (:에서 22 시간동안교반한후,상기반응혼합물을 ₂ 0로뒌칭하고, ¾0쇼(;를이용하여 추출하였다.상기 결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서 농축시켰다.잔류물을실리카겔상에서플래시� �럼크로마토그래피 (¾0쇼 11 -핵산 = 1 :4)로정제하여표제화합물 645 고체서수득하였다. 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897

[349] 「다계 21 3-(4 -큼로로베조임 ^' ) - 1好-피라좀- 5 -카복심산의제조

교반한후,반응혼합물을 1N 11(：1로산성화시킨다음 ¾0쇼0로추출하였다.상기 결합된유기층을 MgSO ₄ 로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.� �류물을 실리카겔상에서플래시칼럼크로마토그래피 _£ 0兄01 ₂₍ ：1 ₂ = 1:10)로 정제하여표제화합물 534 (92 %)을백색고체로수득하였다.

[352] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 8.18 5.1 7.63 7.0

7.23知, 1¾,

[353] 「다계 31 344 -큼로로베조임 ^' )- -作.4 -다이메톡시페님 ^' ) -1 ¥!

-피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[355] DMF (2 )중에단계 2에서제조된 3-(4 -클로로벤조일)- 1好

-피라졸- 5 -카복실산 (93.7 0.37411111101)와 2, 4 -다이메톡시아닐린 (58.6 ,

0.411 11111101)이교반된용액에 0.561

0.561 11111101), (4.57 !!¾, 37.4 ^01)및 å>0¾쇼 (97.7 1, 0.561 11111101)를 상온에서첨가하였다. 7시간동안교반한후,상기반응혼합물을 ₂ 0로 뒌칭하고 ¾0쇼(:로추출하였다.유기층을 1N HC1로세척하였다.상기유기층을 4로건조시킨다음진공하에서농축시켰다.잔류� ��을실리카겔상에서 플래시칼럼크로마토그래피 (¾0쇼 ₀ -핵산 = 1:3 1 ₀ 1:1)로정제하여표제 화합물 117 ₁₁ ¾ (81 %)을버건디색고체로서수득하였다.

[356] ¾ NMR ( 00\ ₃ , 400 MHz): 6 11.91知, 1¾, 9.09知, 1¾, 8.39凡 I = 8.2

8.02 ((1, 211, 1 = 7.8 7.50 (山 211, 1 = 6.8 7.46知, 1¾, 6.53 (III, 211), 3.88知,

3¾, 3.81知, 3¾,

[357] 심시예 54: 3-(4 -메톡시베짐 休 (피리디 - 2 -임 VI -피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[358] 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

[359] DMF (2 1111)중에 3-(4 -메톡시벤질)- 111-피라졸- 5 -카르복실산 (122 0.525

[36이 ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.32知, 1¾, 10.27知, 1¾, 8.98知, 1¾, 8.27 (山 /

= 8.6 6.89 ((1, 211, /= 8.6 6.52知, 1¾, 3.96知, 2¾, 3.72知, 3¾

[361] 심시예 55: 3-(4 -메톡시벤짐 )-＞ 피리디- 3 -임)- 111-피라좀- 5 -카복사마이드의

[363] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 105.7 노란색

고체로수득하였다.

[364] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.32知, 1¾, 10.27知, 1¾, 8.98知, 1¾, 8.27 (山 /

= 8.6 6.89 ((1, 211, /= 8.6 6.52知, 1¾, 3.96知, 2¾, 3.72知, 3¾

[365] 심시예 56: 3-(4 -메톡시벤짐 ) -(피리디- 4 -임)- 111-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[366]

[367] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 57.5 고체로

수득하였다. 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

[368] ¾ NMR (000 ₃ , 500 MHz): 6 9.08知, 1¾, 8.39 6.3 7.62 (&, /

= 6.5 7.08 ((1, 211, /= 8.6 6.80 (山 211, / = 8.7 6.69知, 1¾, 3.98知, 2¾,

3.74知, 3¾,

[369] 심시예 57:

3-(4 -메톡시벤짐 )-＞ 6 -메톡시피리디 -3 -임 )-111 -피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[37이

[371] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 137.3 (82 %)을적갈색고체로 수득하였다.

[372] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 500 MHz): 6 13.24知, 1¾, 10.08知, 1¾, 8.55 1.8 Hz), 8.07 ((¾ / = 8.8, 2.1 / =8.7도¾), 6.88 (山 / = 8.7도¾),

6.79 ((1, 111, / = 8.9 6.48知, 1¾, 3.96知, 211), 3.82知, 311), 3.72知, 3¾,

[373] 심시예 58: 3-(4 -플루오로벤짐 ) -(피리디- 2 -임)- 111-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[374]

[375] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 27.3

고체로수득하였다.

[376] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.43知, 1¾, 9.52知, 1¾, 8.34 (山 / = 4.0 Hz), 8.16凡 / = 8.4 Hz), 7.83 ( 1¾, 7.31 ( 2¾, 7.15 ( 3¾, 6.60知, 1¾, 4.02知, 2¾;

[377] 실시예 59: 3-(4 -플루오로벤질)- 피리딘- 3 -일)- 111-피라졸- 5 -카복사마이드의 제조

[378]

[379] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 19.8 노란색

고체로수득하였다.

[38이 ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.34知, 1¾, 10.28知, 1¾, 8.97知, 1¾, 8.27 2020/175957 1 ^» (：1^1{2020/002897

(111, 1¾, 8.21 6.8 Hz), 7.35 ( 1¾, 7.32 ( 2¾, 7.15 ( 2¾, 6.54知,

1¾, 4.03知, 2¾,

[381] 심시예 60: 3-(4 -플루오로벤짐 )-＞ 피리디- 4 -임)- 111-피라좀- 5 -카복사마이드의

[383] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 10.0 (9 %)을연한노란색고체로 수득하였다.

[384] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.40知, 1¾, 10.44知, 1¾, 8.43 ( 2¾, 7.83 (111, 2¾, 7.31 (111, 2¾, 7.16 ( 2¾, 6.56知, 1¾, 4.03知, 2¾,

[385] 심시예 61 :

3-(4 -플루오로벤질 ^' )-＞ 6 -메톡시피리딘- 3 -일 ^' )- 111-피라졸- 5 -카복사마이드의 제조

[386]

[387] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 139 빨간색

고체로수득하였다.

[388] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 500 MHz): 6 13.27知, 1¾, 10.08知, 1¾, 8.53知, 1¾, 8.06 (山

= 8.9 6.50知, 1¾, 4.02知, 211), 3.82知, 3¾,

[389] 심시예 62: 3-(4 -큼로로벤짐 ) -(피리디- 2 -임)- 111-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[39이

[391] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 27.5 고체로

수득하였다.

[392] 400 MHz): 6 13.45知, 1¾, 9.52知, 1¾, 8.34 ( 3.4

4 1¾), 7.86 ( 1¾, 7.38凡 / = 8.3 1¾), 7.30 ( 6.62知, 1¾, 4.02知, 2¾, 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

[393] 심시예 63: 3-（4 -큼로로벤짐） -（피리디- 3 -임）- 111-피라좀- 5 -카복사마이드의

[395] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 19.1 고체로

수득하였다.

[396] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 500 MHz): 6 13.33知, 1¾, 10.26知, 1¾, 8.96知, 1¾, 8.26 (山

8.1, 4.7 7.30 ((1, 211, / = 8.3 6.54知, 1¾, 4.04知, 2¾,

[397] 심시예 64: 3-(4 -큼로로벤짐 ) -(피리디- 4 -임)- 111-피라좀- 5 -카복사마이드의

[399] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 25.3 고체로

수득하였다.

[400] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.40知, 1¾, 10.42知, 1¾, 8.43 ( 2¾, 7.82 (111, 2¾, 7.39 / = 8.1 Hz), 7.29凡 / = 8.0 Hz), 6.57知, 1¾, 4.03知, 2¾.

[401] 심시예 65:

3-(4 -클로로벤질)- (6 -메톡시피리딘- 3 -일)- 111-피라졸- 5 -카복사마이드의 제조

[402]

[403] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 71.3 (59 %)을오렌지색고체로 수득하였다.

[404] ¾ NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 6 13.30知, 1¾, 10.12知, 1¾, 8.54知, 1¾, 8.06 (山 111, / = 8.6 7.39 (山 211, / = 7.2 7.29 (山 211, / = 6.8 6.80 (山 111, / = 8.8

¾), 6.52知, 1¾, 4.03知, 2¾, 3.82知, 3¾,

[405] 심시예 66: 3-(3 -큼로로벤짐 ) -(피리디- 2 -임)- 111-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조 2020/175957 1 ^» (：1^1{2020/002897

[406]

[407] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 32.8

수득하였다.

[408] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.46知, 1¾, 9.54知, 1¾, 8.34 (山 / = 4.0

Hz), 8.17凡 / = 8.4 Hz), 7.83 ( 1¾, 7.36 ( 1¾, 7.34 ( 1¾, 7.30凡 / = 8.2 7.24 ((1, 111, /= 7.5 7.14 (III, 1¾, 6.67知, 1¾, 4.04知, 2¾,

[409] 심시예 67: 3-(3 -큼로로벤짐 ) -(피리디- 3 -임)- 111-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

6.62知, 1¾, 4.06知, 2¾,

[417] 심시예 69:

3-(3 -큼로로벤짐 ) -(6 -메톡시피리디- 3 -임 )-111 -피라좀- 5 -카복사마이드의제조

[418] 2020/175957 1 ^» (：1^1{2020/002897

[419] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 92.8 (74 %)을분홍색고체로 수득하였다.

[42이 ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.31知, 1¾, 10.12知, 1¾, 8.55 ( 1¾, 8.07 ((¾ / = 8.8, 2.0 1¾), 7.35 ( 2¾, 7.30 (山 / = 7.7 1¾), 7.24 (山 / = 7.3

6.80 ((1, 111, / = 8.8 6.56知, 1¾, 4.05知, 211), 3.82知, 3¾,

[421] 심시예 70: 3-(2 -큼로로베짐 피리디- 2 -임 )-111 -피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[422]

[423] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 60.7 노란색

고체로수득하였다.

[424] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.48知, 1¾, 9.54知, 1¾, 8.34 ( 1¾, 8.16凡 111, / = 8.4 1¾), 7.82 , 111, / = 7.9 7.46 (山 111, /= 6.8 7.35 (III, 1¾, 7.31 知1, 2¾, 7.13 0-, / = 5.9 1¾), 6.52知, 1¾, 4.14知, 2¾.

[425] 심시예 71 : 3-(2 -큼로로베짐 피리디 -임 VI -피라좀- 5 -카복사마이드의 제조

[426]

[427] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 66.7 오렌지색 고체로수득하였다.

[428] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.41知, 1¾, 10.30知, 1¾, 8.97知, 1¾, 8.28 (111, 1¾, 8.20 (111, 1¾, 7.47 (山 / = 7.0 Hz), 7.33 ( 4¾, 6.47 , 1¾, 4.15知, 2¾,

[429] 심시예 72: 3-(2 -큼로로벤짐 ) -(피리디- 4 -임)- 111-피라좀- 5 -카복사마이드의 제조 2020/175957 1»(：1^1{2020/002897

[431] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 80.0

고체로수득하였다.

[432] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.48知, 1¾, 10.44知, 1¾, 8.44 ( 4.5

Hz), 7.83 7.0 Hz), 7.34 ( 3¾, 6.49 , 1¾, 4.15 , 2¾.

[433] 심시예 73:

3-（2 -클로로벤질）-＞ 6 -메톡시피리딘- 3 -일）- 111-피라졸- 5 -카복사마이드의제조

[434]

[435] 실시예 54와유사한방법으로표제화합물 140.5 mg (75 %)을연한갈색고체로 수득하였다.

[436] ¾ NMR (DMSO-d ₆ , 400 MHz): 6 13.35 (s, 1H), 10.11 (s, 1H), 8.54 (d, lH, / = 1.6 Hz), 8.07 (dd, 1H, / = 9.0, 2.2 Hz), 7.47 (d, 1H, / = 7.7 Hz), 7.33 (m, 3H), 6.80 (d, 1H, / = 9.0 Hz), 6.43 (s, 1H), 4.14 (s, 2H), 3.82 (s, 3H).

[437] 비교예

[438] Gliclazide는 Sigma- Aldrich (용인,한국)에서구입하여사용하였다. Gliclazide은 당뇨병환자의치료약으로인슐린분비촉진제에 해당한다.

[439] 심험예 1. INS-1세포 (췌장세포)의 이슘린분비능평가

[440] 1. INS-1세포배양

[441] 37°C, 90%공기 및 10% CO ₂ 상태에서 10% FBS,스트렙토마이신 (0.1 mg/mL), 페니실린 (100 U/ml), lO mM헤페스, 2 mM L-글루타민, I mM소둠-피루베이트 및 0.05 mM 2 -머캅토에탄올을포함하는 RPMI 1640배지에서 INS- 1세포를 배양하였다.

[442] 2.포도당자극에의한인슐린분비능 (GSIS, glucose stimulated insulin

secretion)의즉정

[443] INS- 1세포에서 각성분에 의한포도당의존인슐린분비항진양상을확인하 기 위하여 ,성분농도별인슐린분비항진양상 (stimulation index, SI)을즉정하였다.

[444] INS- 1세포주를 well당 5X10 ⁵ 개로 12 well조직 배양접시에접종하고 24시간 후에 Krebs-Ringer buffer (1 mM KH ₂ PO ₄ , 24 mM NaHCO ₃ , 115 mM NaCl, 5 mM KCI, 1 mM MgSO ₄ -7H ₂ 0, 2.5 mM CaCl ₂ .2H ₂ 0, 0.25 % BSA, pH 7.4)로 2번 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897 세적한뒤 Krebs -Ringer buffer에서 2시간동안 starvation시켰다.후보물질을 각각 2.5 _[ xM, 5 _[,i M, 10 _[ xM의농도로 Krebs-Ringer buffer에희석하여각 well에전 처리한뒤저농도포도당 3.3 mM (Basal working solution)과고농도포도당 16.7 mM (glucose working solution)를처리하였다. 1시간동안배양한후, 12,000 rpm,

4 °C에서 10분동안원심분리한뒤,상등액을 rat insulin ELISA kit (ALPCO, 80-INSMSH-E01)로측정하였다. Gliclazide (Sigma Aldrich/ CAS Number:

21187-98-4)를 2.5, 5, 10 ^iM의농도로사용한것을제외하고는위측정방법 과 동일하게측정하였다.

[445] 3.실험결과

[446] 본발명에따른화합물의존재하에서 1시간동안의인슐린분비를조사했을때 실시예 1, 13, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 39, 51, 54, 60, 63및 68의화합물등에서 가 농도의존적으로증가하여나타나는것을알수있 었다.

[447] INS-1세포는본발명에따른화합물 10 pM의존재하에서 SI값이기존에

사용되는제 2형당뇨병치료제인양성대조군인 Gliclazide 10 pM의존재하에서 SI값과비교하여동등수준이상의인슐린분비를� ��타낼수있음을

확인하였으며,이는장시간에따른고혈당조건� �서도췌장세포가손상되지 않았음을알수있다.

[448] 심험예 2. C2C12세포 (곰격근세포 ^' )의 MG53및 IRS-1의밤혀분석

[449] 실시예 1, 13, 30, 34, 36, 38, 40및 41각각의화합물에대해 C2C12

세포 (골격근세포)의 MG53및 IRS-1의발현분석을수행하였다.

[45이 1.세포배양

[451] 골격근세포주인 C2C12세포를 10% fetalbovine serum (FBS, Gibco-Brl, Grand Island, NY, USA),페니실린 G (100 ^ig/ml),스트렙토마이신설페이트 (100 ^ig/ml), 암포테리신 B (0.25 ^ig/ml)및 2 -머캅토에탄올 (50 pm)이포함되어있는 DMEM 배지에서배양하였으며 , 37 ^O C온도와 5% C0 ₂ 가공급되는습윤한조건으로 배양하였다.

[452] 2. C2C12세포분화

[453] C2C12세포의분화를유도하기위하여 , C2C12 myoblast가 90% confluency에 도달했을때 culture medium을 10% FBS대신에 2% horse serum으로교체하였다. 3~4일간배양후세포들은다핵성 myotube로분화되었으며 ,이후실험에 사용하였다.

[454] 3. MG53단백질발현평가

[455] 인큐베이터에서처리가끝난세포를 PBS (phosphate buffer saline)로세척한후, PBS를넣고 cell scraper를이용하여세포를배양 dish에서떼어내 , 4 ^O C에서 13,200 rpm으로 10분간원심분리하여세포를모았다. 320 mM sucrose, 200 mM 헤페스, 1 mM EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid)로조성된 lysis buffer (pH 7.2)에 protease inhibitor cocktail과 phosphatase inhibitor cocktail·^：첨 7]·한후 상기에서모아진세포에넣고, 4 ^O C에서초음파기를이용하여세포막을 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897 파쇄하였다. BCA protein Assay kit를이용하여총단백질양을정량하고,각각의 샘늘들을 20 [xg씩취하여 sample buffer와섞은후, 10% SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)에 65 volt로 3시간동안 실온에서전기영동하여단백질을분리하였다 . Gel상에서분리된단백질을 polyvinylidene fluoride(PVDF) microporous membrane으로 25 mM tris, 192 mM glycine, 10 % methanol이포함된 blocking용액을이용하여 4 °C에서 12시간이상 15 volt로이동시켰다.이동이끝난 membrane은 TBS-T buffer (40 mM Tris-HCl pH 7.4, 25 mM NaCl, 0.1% Tween-20)에 5% non-fat dry milk or 5% bovine serum albumin을첨가하여,항체와의비특이적결합을억� ��하기위해 shaker위에서 1 시간동안반응시켰다.이후, blocking용액에항체를이용하여각각실온에서 2 시간동안 shaker위에서반응시키고, TBS-T buffer로 5분씩 5회세척한후, 1차 항체와반응하는 HRP-conjugated 2차항체를 blocking용액에넣고 1차항체와 동일한조건으로 2시간동안반응시켰다. TBS-T buffer로 5분씩 5회세척후, 암실에서 ECL system을이용하여필름에감광시켜각단백질의발 현양상을 관찰하였다.

[456] 4. IRS-1발현평가

[457] INS- 1세포주를 well당 4X10 ⁵ 개로 6 well조직배양접시에접종하고 24시간 후에 glucose를 16.7 mM이되도록 RPMI 1640배지에희석하여각 well에 처리하였다. 48시간후에후보물질을다양한농도 (5 ^iM, 10 ^iM, 20 ^iM, 50 [xM)로처리하였다. 24시간동안배양한후세포를수집하여 phosphate -buffered saline로 1회세척하고, 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride를포함한 RIP A buffer (Cell Signaling, MA, USA)를첨가하여 20분동안방치한후, 4 ^O C에서 20분간 12,000 rpm으로원심분리해서세포용해물 (cell lysate)을분리하였다.분리된 세포용해물은단백질분석키트 (BCA protein detection kit, Thermo Scientific, Rockford, IL, USA)를사용하여단백질정량을실시하고, well당 20 의세포 용해물을 10% SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel

electrophoresis)로변성분리하였다.이를 PVDF membrane (Merck Millipore, Darmstadt, Germany)으로단백질을 transfer시키고, membrane을항체의비특이적 결합을방지하기위해 5% skim milk를이용하여실온에서 2시간동안

blocking하였다.이후 TBST buffer (20 nM tris-HCl, 150 mM NaCl, 0.05%

Tween-20, pH 7.5)로 W분씩 3회세척하였으며,세포내 apop to tic protein의 발현양을측정하기위해 1차항체 (Cell Signaling, Danvers, MN, USA)를

1: 1, 000으로희석하여상온에서 1시간동안반응시키고 TBST buffer로 10분간 3회세척하였다.이후 2차항체 (goatantirabbit lgG, Calbiochem, La Jolla, CA,

USA)를 1:2, 000으로희석하여상온에서 2시간동안반응시키고,단백질을 ECL 검출키트 (GE healthcare)로확인하였다.

[458] 5.실험결과

[459] 실시예 13, 30, 38, 40및 41각각의화합물에대한 C2C12세포 (골격근세포)의 2020/175957 1»（：1^1{2020/002897

MG53및 11«-1의 발현분석 결과를도 1에나타내었다.

[46이 실시예 13및 30의 화합물을농도 (0, 5, 10, 29, 50 )별로처리하였을때 11«- 1 단백질의 발현양은농도의존적으로증가하는경향을나타 났고, ^«}53단백질의 발현양은농도의존적으로감소하여나타났으며 .특히, 50 _l· iM농도에서큰 효과를나타내었다.실시예 38, 40및 41의 화합물을각각농도 (0, 5, 10, 29, 50 l _·l M)별로처리하였을때 ^- 1단백질발현양은농도의존적으로증가하는 경향을나타내었으며,특히, 10, 20, 50 _l· iM농도에서크게증가하는경향을 나타내었다.특히, 50ᅡ 농도에서크게증가하였으며. MG53단백질의 발현양은 20, 50 농도에서크게감소하였다.

[461] 상기실험 결과로부터본발명에따른피라졸아마이드유도 체화합물은

골격근세포에서 MG53의활성을효과적으로억제할수있으며,이로� ��터

11«- 1이분해를감소시킬수있어, 11«- 1으로인한인슐린에 대한민감성을 증가시킬수있을뿐만아니라,장시간에 따른당의 노출에서도췌장베타세포를 보호할수있어 저혈당유발이 없이 혈당수치를매우효과적으로낮춰줄수 있다.

[462] 이상으로본발명내용의특정한부분을상세히기 술하였는바,당업계의

통상의지식을가진자에게 있어서,이러한구체적기술은단지바람직한실� � 양태일뿐이며,이에의해본발명의 범위가제한되는것이아닌점은명백할 것이다.따라서본발명의실질적인범위는첨부� �청구항들과그것들의 등가물에 의하여정의된다고할것이다.