技术领域

本发明涉及药学活性化合物 (2)-/\/-[2-(二乙胺基)乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧 代 -3H-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四氢 -1 H-吲哚 -3-羧酰胺的酸加成盐形式。 背景技术

Glivec和 Iressa是较早应用于临床肿瘤治疗的小分子酪氨 酸激酶抑制剂，其良好的 临床应用效果极大地激发了全球各大制药公司 和研究机构对此类靶点的研究兴趣， 因此 研究者针对其中多个酪氨酸激酶靶点， 进行了大量小分子抑制剂的设计、 合成和临床前 研究。 目前， 已有多个小分子酪氨酸激酶抑制剂被批准用于 临床恶性肿瘤治疗， 同时很 多药物正在开展临床试验， 更显示出此类分子靶向抗肿瘤药物的广阔开发 前景。 参见： 张石革， 中国医院用药评价与分析， 2010， 10， 1 : 4-6。

药学活性化合物 (2)-/\/-[2-(二乙胺基)乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3〃-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四氢 -1 H-吲哚 -3-羧酰胺 (如式 I所示)对多种酪氨酸激酶具有显著的抑制 活性， 并且可以抑制多种人癌细胞株的增殖， 可用于抗肿瘤药物的制备。 该化合物生物 活性的具体描述及其制备， , (2008)。

式

用一种与药物带相反电荷的分子或离子与药物 结合成盐，可改善药物某些不理想的 物理化学或生物药学性质， 如改变药物的溶解度或溶出度、 降低吸湿性、 提高稳定性、 改变熔点、 改善研磨性能、 便于制备纯化、 提高渗透性、 实现缓控释或靶向给药、 改善 味觉和配伍性等。 药物的每一种盐形都具有独特的性质， 盐形的最终确定其实就是在物 理化学性质和生物药学性质之间寻找平衡。选 择药物盐形在物理化学性质上需要优先满 足以下要求：高结晶性、低引湿性、不同 pH条件下的水溶液稳定性（由药物用途确定）� �� 在加速试验中呈现优良的化学和固态稳定性 （即在 40°C， 相对湿度 75 %条件下具有最 小的化学降孵和固态改变）。 虽然盐形式的制剂可以改善碱性药学沽'「生� �合物的物埋或 药学性质是已知的， 但是在真正制备和表征盐形式前， 预测哪种盐形式可能具有用于特 定目的的优点是不可能的。 因此， 药物盐形的选择是药品开发成功与否的关键步 骤， 需 要有设计良好的筛选策略， 才能寻找到符合目标性能的盐形。 发明内容

本发明涉及药学活性化合物 (2)-/\/-[2-(二乙胺基)乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧 代 -3H-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四氢 -1 H-吲哚 -3-羧酰胺的不同盐化合物的制备及其理化性 质和生物学性质的测定， 包括溶解性、 引湿性、 动物体内的药学活性化合物血浆暴露量 以及动物体内抗肿瘤效果。

在此所使用的术语"药用组合物"指的是 (2)-N-[2- (二乙胺基)乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二 氢 -5-氟 -2-氧代 -3H-吲哚 -3-亚基 )-4,5,6,7-四氢 -1 H-吲哚 -3-羧酰胺的盐化合物与其它的 化学成分， 例如药学上可接受的载体和赋形剂的混合物。 药用组合物的目的是促进化合 物对生物体的给药。

"药学上可接受的载体"指的是对有机体不引起� ��显的刺激性和不干扰所给予化合物 的生物活性和性质的载体或稀释剂。

"赋形剂"指的是加入到药用组合物中以进一步� ��利于给予化合物的惰性物质。 赋形 剂的实例包括 （不局限于）碳酸钙、 磷酸钙、 多种糖类和多种类型的淀粉、 纤维素衍生 物、 明胶、 植物油和聚乙二醇。

"引湿性"在此指的是在一定温度及湿度条件下� ��合物吸收水分多少的特性。

本发明涉及 (Z)-N-[2- (二乙胺基)乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3- 亚基) -4,5,6,7-四氢 -1 H-吲哚 -3-羧酰胺的酸加成盐， 其选自 L-苹果酸盐、 盐酸盐、 磷酸 盐、 L-酒石酸盐、 苯磺酸盐、 硫酸盐、 甲烷磺酸盐、 丁二酸盐、 柠檬酸盐、 富马酸盐、 对甲苯磺酸盐、 氢溴酸盐、 L-扁桃酸盐、 乳酸盐、 乙酸盐和马来酸盐， 如下式 I I结构所

式 I I ^ # _m # 一 _n 本犮明公计了 (Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-¾- ² -氧代 -3〃-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四氢 吲哚 -3-羧酰胺盐化合物的制备方法， 将 (Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基)乙 基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四氢 -1 吲哚 -3-羧酰胺溶 解于乙腈和二氯甲烷的混合溶剂中， 加入一定量的酸， 加热回流反应后， 过滤， 滤液浓 縮至干后， 经无水乙醇洗涤得盐化合物。

进一步地，上述不同的盐化合物经溶解度和引 湿性测定，优选的 (Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基) 乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四氢 -1 吲哚 -3-羧酰胺 的酸加成盐， 包括 L-酒石酸盐、 苯磺酸盐、 L-扁桃酸盐、 丁二酸盐、 L-苹果酸盐、 柠檬 酸盐、 盐酸盐、 磷酸盐和乳酸盐。 更优选地选自 L-苹果酸盐、 柠檬酸盐、 盐酸盐、 磷酸 盐和乳酸盐。

引湿性测定方法可以为： 取一定量供试品置一已精密称重（m 的具塞玻璃称量瓶 中， 精密称重（m ₂ ); 把称量瓶敞口置于适宜的 25 °C±TC恒温干燥器内 （下部放置硫酸 铵饱和溶液， 相对湿度为 80%±2%)， 放置 24小时； 盖好称量瓶盖子， 精密称重（M ₃ )。 计算供试品增重百分率；

η¾ - η¾ 。 溶解度测定方法可以为： 25°C下， 取待试品约 100mg， 精密称定， 置 100ml量瓶 中， 加溶剂 [乙腈一水 （80:20) ]适量， 超声使溶解， 并用上述溶剂稀释至刻度， 摇匀， 精密量取 10μΙ注入液相色谱仪， 记录色谱图； 量取峰面积3 。量取纯化水 10 ml, 置 于 25ml茄型瓶中，于 25°C下逐渐加入待试品至溶液中有不溶性固体� ��止，超声 30min， 滤去不溶性固体， 精密量取滤液 10μΙ注入液相色谱仪， 记录色谱图； 量取峰面积 S «。 计算样品溶解度， 样品溶解度 = ^ x lmg /ml

S对照 。

进一步地，上述不同的盐化合物经相同剂量下 口服给药后大鼠体内的药学活性化合 物血浆暴露量的比较， 优选 (Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基)乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四氢 -1 吲哚 -3-羧酰胺的 L-苹果酸盐。

本发明还涉及 (Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基)乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四氢 -1 Η-吲哚 -3-羧酰胺的盐化合物在制备用于治疗过度增殖 性疾病或 恶性肿瘤的药物中的用途； 以及药用组合物， 它包括 (Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基)乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四氢 -1 吲哚 -3-羧酰胺的盐化合物 和药学上可接受的载体或赋形剂。 „

具体

以下通过实施例的方式进一步说明本发明，但 并不因此将本发明限制在所述的实施 例范围之中。

原料来源和规格：

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1Η-吲哚 -3-羧酰胺按文献方法合成， 参见： 唐锋， 等， WO2008/067756, (2008)。 其它试剂和溶剂均为市售商品， 化学纯或分析纯， HPLC测定所用试剂为色谱纯。 实施例 1：

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1Η-吲哚 -3-羧酰胺 L-苹果酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 吲哚 -3-羧酰胺 8.49 g( 20 mmol)加到乙腈 500 ml,二氯甲烷 90 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入 L-苹果酸 3.22 g (24 mmol), 氮气保护， 搅拌升 温至回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 60 ml, 超声至 分散均匀后过滤， 滤饼经 40°C真空干燥后得黄色固体的标题化合物 10.39 g (18.6 mmol), 收率 93°/。。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm _: 1.15(6H,t, J=7.2 Hz), 1.93(2H, m), 2.36(1 H, dd, J= 15.5, 5.7 Hz), 2.47(3H, s), 2.57(1 H, dd, J= 15.5, 7.7 Hz), 2.83(2H, t, J= 5.8 Hz), 2.99(4H, q, J= 7.2 Hz), 3.02(2H, m), 3.03(2H, m), 3.50(2H, q, J= 6.1 Hz), 4.03(1 H, dd J = 7.7, 5.7 Hz), 6.84(1 H, dd, J = 8.5, 5.1 Hz), 6.91 (1 H, td, J = 8.6, 2.2 Hz), 7.37(1 H, dd, J=8.9, 2.0 Hz), 7.55(1 H, t, J=5.5 Hz), 10.01(3H, brs), 10.89(1 H, s), 14.58(1 H, s). 实施例 2:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1H-吲哚 -3-羧酰胺 盐酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g( 10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入 1.50 mol/L的盐酸乙腈溶液 8 ml, 氮气保护， 搅 拌升温至回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超 声至分散均匀后过滤， 滤饼经 4CTC真空干燥后得黄色固体的标题化合物 4.16 g (9 mmol)， 収卒 90%。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.25(6H, t, J= 7.1 Hz), 1.94(2H, m), 2.50(3H, s), 2.88(2H, t, J =5.7 Hz), 3.07(2H, t, J=5.9 Hz), 3.60(2H, q, J= 6.1 Hz), 6.88(1H, dd, J = 8.6, 5.1 Hz), 6.95(1 H, td, J =8.6, 2.3 Hz), 7.43(1 H, dd, J= 10.8, 2.2 Hz), 7.85(1 H, t, J=5.7 Hz), 10.48(1 H, brs), 10.96(1H, s), 14.61(1H, s). 实施例 3:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1H-吲哚 -3-羧酰胺 磷酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 -1 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g(10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入磷酸 1.18 g (12 mmol), 氮气保护， 搅拌升温至 回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超声至分散 均匀后过滤， 滤饼经 4CTC真空干燥后得黄色固体的标题化合物 4.65 g (8.9 mmol), 收 率 89%。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.12(6Η, t, J= 6.5 Hz), 1.93(2H, m), 2.47(3H, s), 2.85(8H, m), 3.05(2H, m), 3.46(2H, m), 6.86(1 H, dd, J = 8.4, 5.1 Hz), 6.93(1 H, m), 7.14(3H, brs), 7.41 (1H, m), 7.61(1H, m), 10.95(1H, s), 14.57(1H, s). 实施例 4:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1H-吲哚 -3-羧酰胺 L-酒石酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g( 10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入 L-酒石酸 1.76 g (12 mmol), 氮气保护， 搅拌升 温至回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超声至 分散均匀后过滤，滤饼经 4CTC真空干燥后得黄色固体的标题化合物 5.20 g (9.1 mmol), 收率 91%。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.10(6H, t, J= 6.9 Hz), 1.94(2H, m), 2.47(3H, s), 2.86(8H, m), 3.07(2H, m), 3.43(2H, m), 4.02(2H, s), 6.87(1 H, dd, J = 8.5, 5.3 Hz), 6.95(1 H, td, J =8.9, 1.8 Hz), 7.42(1 H, m), 7.50(1 H, m), 10.92(1 H, s), 14.58(1 H, s). 实施例 5:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1Η-吲哚 -3-羧酰胺 苯磺酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 -1 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g(10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入苯磺酸 1.90 g (12 mmol), 氮气保护， 搅拌升温 至回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超声至分 散均匀后过滤， 滤饼经 40°C真空干燥后得黄色固体的标题化合物 4.96 g (8.5 mmol), 收率 85%。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.23(6H, t, J =1.2 Hz), 1.94(2H, m), 2.49(3H, s), 2.86(2H, t, J= 5.9 Hz), 3.08(2H, t, J = 5.7 Hz), 3.19(6H, m), 3.58(2H, q, J = 6.4 Hz), 6.88(1 H, dd, J= 8.5, 5.1 Hz), 6.96(1 H, td, J= 8.8, 2.3 Hz), 7.30(3H, m), 7.43(2H, m), 7.71 (1H, t, J=5.5 Hz), 10.94(1 H, s), 14.62(1H, s). 实施例 6:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1H-吲哚 -3-羧酰胺 硫酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g( 10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入浓硫酸 1.19 g (12 mmol), 氮气保护， 搅拌升温 至回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超声至分 散均匀后过滤， 滤饼经 40°C真空干燥后得黄色固体的标题化合物 4.60 g (8.8 mmol), 收率 88%。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.24(6H, t, J= 7.1 Hz), 1.95(2H, m), 2.50(3H, s), 2.86(2H, t, J= 5.8 Hz), 3.07(2H, t, J=5.9 Hz), 3.22(6H, m), 3.57(2H, m), 6.84(1 H, dd, J = 8.5, 5.2 Hz), 6.96(1 H, td, J = 9.2, 2.1 Hz), 7.43(1 H, m), 7.62(1 H, t, J = 5.6 Hz), 9.12(2H, brs), 10.93(1H, s), 14.63(1H, s). 实施例 7:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 一 _{m L}

氢 吲 μ -3-殁酰胺 甲烷磺酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 -1 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g(10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入甲烷磺酸 1.11 g (11.5 mmol), 氮气保护， 搅拌升 温至回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超声至 分散均匀后过滤，滤饼经 40°C真空干燥后得橙色固体的标题化合物 4.33 g (8.3 mmol), 收率 83%。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.24(6H, t, J =1.2 Hz), 1.95(2H, m), 2.35(3H, s), 2.49(3H, s), 2.86(2H, m), 3.08(2H, m), 3.23(6H, m), 3.03(2H, m), 3.57(2H, m), 6.92(2H, m), 7.43(1 H, m), 7.64(1 H, m), 9.93(1 H, m), 10.94(1 H, s), 14.6(1 H, s). 实施例 8:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1H-吲哚 -3-羧酰胺 丁二酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g( 10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入丁二酸 1.36g (11.5 mmol), 氮气保护， 搅拌升温 至回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超声至分 散均匀后过滤， 滤饼经 40°C真空干燥后得黄色固体的标题化合物 4.73 g (8.7 mmol), 收率 87%。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.03(6H, t, J= 7.1 Hz), 1.94(2H, m), 2.38(4H, s), 2.47(3H, s), 2.65(6H, m), 2.84(2H, t, J=5.8 Hz), 3.07(2H, t, J= 5.9 Hz), 3.34(2H, q, J = 6.3 Hz), 6.86(1 H, dd, J = 8.5, 5.2 Hz), 6.95(1 H, td, J = 8.9, 2.3 Hz), 7.32(1 H, m), 7.44(1 H, dd, J= 2.3, 8.7 Hz), 10.91(1H, s), 14.57(1 H, s). 实施例 9:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1H-吲哚 -3-羧酰胺 柠檬酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g( 10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入柠檬酸 2.31 g (12 mmol), 氮气保护， 搅拌升温 ^ _r „ 至回流， 反 i¾ 1h后， 趁热过滤， 滤淞减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超戸全分 散均匀后过滤， 滤饼经 40°C真空干燥后得黄色固体的标题化合物 5.68 g (9.2 mmol), 收率 92%

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.17(6H, t, J= 7.2 Hz), 1.95(2H, m), 2.49(3H, s), 2.52(2H, d, J= 15.2 Hz), 2.60(2H, d, J= 15.2 Hz), 2.85(2H, t, J =5.9 Hz), 3.07(8H, m), 3.51 (2H, m), 6.88(1 H, dd, J= 8.4, 5.0 Hz), 6.96(1 H, td, J= 8.7, 2.4 Hz), 7.43(1 H, dd, J = 10.8, 2.2 Hz), 7.53(1 H, m), 10.92(4H, brs), 14.61 (1H, s). 实施例 10:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1H-吲哚 -3-羧酰胺 富马酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g( 10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入富马酸 1.36g (11.7mmol)， 氮气保护， 搅拌升温 至回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超声至分 散均匀后过滤， 滤饼经 40°C真空干燥后得黄色固体的标题化合物 5.14 g (9.5 mmol), 收率 95%

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.45(6H, t, J =7.0 Hz), 1.94(2H, m), 2.47(3H, s), 2.71 (6H, m), 2.84(2H, t, J = 5.7 Hz), 3.07(2H, t, J= 5.9 Hz), 3.36(2H, q, J = 6.2 Hz), 6.50(2H, s), 6.87(1 H, dd, J= 8.5, 5.2 Hz), 6.95(1 H, td, J = 8.8， 2.1 Hz), 7.42(2H, m), 10.92(1H, s), 14.57(1 H, s). 实施例 11:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1H-吲哚 -3-羧酰胺 对甲苯磺酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g( 10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入对甲苯磺酸 2.21 g (13 mmol), 氮气保护， 搅拌 升温至回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超声 至分散均匀后过滤， 滤饼经 4CTC真空干燥后得黄色固体的标题化合物 5.43 g (9.1 mmol), 收率 91°/ Ή NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.23(6H, t, J= 7.3 Hz), 1.94(2H, m), 2.27(3H, s), 2.49(3H, s), 2.85(2H, t, J=5.7 Hz), 3.08(2H, t, J=5.6 Hz), 3.22(6H, m), 3.56(2H, q, J = 5.8 Hz), 6.88(1 H, dd, J = 8.4, 5.0 Hz), 6.96(1 H, td, J = 8.9, 2.3 Hz), 7.10(2H, m), 7.46(3H, m), 7.46(1 H, t, J =5.3 Hz), 9.94(1 H, brs), 10.94(1 H, s), 14.63(1 H, s). 实施例 12:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1H-吲哚 -3-羧酰胺 氢溴酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 -1 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g(10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入 40%氢溴酸水溶液 2.39 g (12mmol)， 氮气保护， 搅拌升温至回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超声至分散均匀后过滤， 滤饼经 4CTC真空干燥后得黄色固体的标题化合物 4.20 g (8.3 mmol), 收率 83°/。。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.25(6H, t, J =1.2 Hz), 1.94(2H, m), 2.50(3H, s), 2.88(2H, t, J= 5.6 Hz), 3.06(2H, t, J= 5.8 Hz), 3.22(6H, m), 3.59(2H, q, J= 5.9 Hz), 6.87(1 H, dd, J= 8.4, 5.2 Hz), 6.96(1 H, td, J =9.0, 2.3 Hz), 7.43(1 H, m), 7.69(1 H, t, J = 5.6 Hz), 9.40(1 H, brs), 10.93(1H, s), 14.62(1H, s). 实施例 13:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1H-吲哚 -3-羧酰胺 L-扁桃酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g( 10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入 L-扁桃酸 1.81 g (12 mmol), 氮气保护， 搅拌升 温至回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30ml， 超声至分 散均匀后过滤， 滤饼经 4CTC真空干燥后得橙色固体的标题化合物 5.02 g (8.7 mmol), 收率 87%。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.06(6H, t, J =7.0 Hz), 1.94(2H, m), 2.46(3H, s), 2.79(8H, m), 3.07(2H, m), 3.39(2H, m), 6.91 (2H, m), 7.27(3H, m), 7.38(2H, m),7.46(2H, m), 10.94(1 H, s), 14.58(1 H, s). 实施例 14:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1Η-吲哚 -3-羧酰胺 乳酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 -1 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g(10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入乳酸 1.08 g (12 mmol), 氮气保护， 搅拌升温至 回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超声至分散 均匀后过滤， 滤饼经 40°C真空干燥后得橙色固体的标题化合物 4.12 g (8 mmol), 收率 80%。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.03(6H, t, J = 7.2 Hz), 1.20(3H, d, J = 6.8 Hz),1.94(2H, m), 2.47(3H, s), 2.64(6H, m), 2.84(2H, t, J = 5.7 Hz), 3.07(2H, t, J= 5.6 Hz), 3.34(2H, q, J = 6.4 Hz),3.96(1H, q, J = 6.8 Hz), 6.88(2H, m), 7.39(2H, m), 10.91(1H, s), 14.57(1 H, s). 实施例 15：

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1H-吲哚 -3-羧酰胺 乙酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g( 10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入乙酸 0.72 g (12 mmol), 氮气保护， 搅拌升温至 回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30ml， 超声至分散均 匀后过滤， 滤饼经 40°C真空干燥后得黄色固体的标题化合物 3.64 g (7.5 mmol), 收率 75%。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 0.98(6H, t, J =7.3 Hz), 1.91 (3H, s), 1.94(2H, m), 2.47(3H, s), 2.55(6H, m), 2.83(2H, t, J= 6.0 Hz), 3.07(2H, t, J= 6.0 Hz), 3.29(2H, q, J = 6.5 Hz), 6.87(1 H, dd, J= 8.6, 5.2 Hz), 6.94(1 H, td, J= 9.1, 2.3 Hz), 7.22(1 H, t, J = 5.2), 7.43(1 H, dd, J= 5.5, 2.1 Hz), 10.89(1H, s), 14.56(1H, s). 实施例 16:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 一

氢 吲 μ -3-殁酰胺 马来酸盐

将 (Ζ)-Λ/-[2-(二乙胺基）乙基 ]-2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3Η-吲哚 -3-亚 基) -4,5,6,7-四氢 -1 吲哚 -3-羧酰胺 4.25 g(10 mmol)加到乙腈 250 ml,二氯甲烷 50 ml 的混合液中， 超声至分散均匀， 加入马来酸 1.39 g (12 mmol), 氮气保护， 搅拌升温 至回流， 反应 1h后， 趁热过滤， 滤液减压浓縮至干， 加入无水乙醇 30 ml, 超声至分 散均匀后过滤， 滤饼经 40°C真空干燥后得黄色固体的标题化合物 4.87 g (9 mmol), 收 率 90%。

¹ H NMR (DMSO-de) δ ppm: 1.23(6H, t, J= 6.8 Hz), 1.96(2H, m), 2.49(3H, s), 2.86(2H, t, J= 6.0 Hz), 3.10(2H, t, J= 5.6 Hz), 3.22(4H, m), 3.34(2H, m), 3.56(2H, q, J = 6.0 Hz), 6.02(2H, s), 6.88(1 H, dd, J = 8.4, 5.2 Hz), 6.97(1 H, td, J = 8.8, 2.4 Hz), 7.45(1 H, dd, J= 10.8, 2.0 Hz), 7.61 (1H, t, J= 5.2), 10.96(1 H, s), 14.64(1 H, s). 实施例 17:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1H-吲哚 -3-羧酰胺（药学活性化合物）及其 L-酒石酸盐、 L-苹果酸盐、 盐酸盐、 磷酸 盐、 苯磺酸盐、 马来酸盐、 富马酸盐、 L-扁桃酸盐、 硫酸盐、 对甲苯磺酸盐、 乳酸盐、 柠檬酸盐、 氢溴酸盐、 丁二酸盐、 乙酸盐、 甲烷磺酸盐引湿性的测定

测定方法： 取一定量供试品置一已精密称重（m 的具塞玻璃称量瓶中， 精密称重 (m ₂ ) _; 把称量瓶敞口置于适宜的 25°C±TC恒温干燥器内 （下部放置硫酸铵饱和溶液， 相对湿度为 80%±2%)， 放置 24小时； 盖好称量瓶盖子， 精密称重 （M ₃ )。 增重百分率 = ^"^χ 100% 引湿性特征描述与引湿增重的界定：

潮解： 吸收足量水分形成液体；

极具引湿性： 引湿增重不小 15%;

有引湿性： 引湿增重小于 15%且不小于 2%;

略有引湿性： 引湿增重小于 2%且不小于 0.2%;

无或几乎无引湿性： 引湿增重小于 0.2%。 编号 待测物 引湿界定

1 药学活性化合物 几乎无引湿性

2 柠檬酸盐 略有引湿性

3 盐酸盐 几乎无引湿性

4 磷酸盐 略有引湿性

5 L-酒石酸盐 略有引湿性

6 乳酸盐 有引湿性

7 苯磺酸盐 有引湿性

8 富马酸盐 略有引湿性

9 L-扁桃酸盐 有引湿性

10 硫酸盐 略有引湿性

1 1 氢溴酸盐 几乎无引湿性

12 丁二酸盐 略有引湿性

13 乙酸盐 极具引湿性

14 对甲苯磺酸盐 略有引湿性

15 L-苹果酸盐 几乎无引湿性

1 6 马来酸盐 略有引湿性

17 甲烷磺酸盐 极具引湿性 实施例 18：

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1 Η-吲哚 -3-羧酰胺（药学活性化合物）及其 L-酒石酸盐、 L-苹果酸盐、 盐酸盐、 磷酸 盐、 苯磺酸盐、 马来酸盐、 富马酸盐、 L-扁桃酸盐、 硫酸盐、 对甲苯磺酸盐、 乳酸盐、 柠檬酸盐、 氢溴酸盐、 丁二酸盐、 乙酸盐、 甲烷磺酸盐在水中溶解度的测定

试验条件：

液相色谱仪： Agilent 1200 高效液相色谱系统 （二极管阵列检测器） chemstation 色谱工作站

色谱柱： Aglinet C ₁₈ 5μ 250x4.6 mm

流动相： 乙腈一水

检测波长： 264n m 流速： 1 .0ml/min

进样量： 10μΙ

试验方法：

25°C下，取待试品约 100mg，精密称定，置 100ml量瓶中，加溶剂 [乙腈—水（80:20)] 量， 超声使溶解， 并用上述溶剂稀释至刻度， 摇匀， 精密量取 10μΙ注入液相色谱仪， 录色谱图； 量取峰面积3

量取纯化水 10 ml, 置于 25ml茄型瓶中， 于 25°C下逐渐加入待试品至溶液中有不溶 固体为止， 超声 30min， 滤去不溶性固体， 精密量取滤液 10μΙ注入液相色谱仪， 记录 谱图； 量取峰面积 S 样品溶解度 = ^ x lmg /ml

、 、

实施例 19：

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1 Η-吲哚 -3-羧酰胺 （药学活性化合物） 及其 L-苹果酸盐、 柠檬酸盐、 盐酸盐、 磷酸 盐、 乳酸盐的动物体内血浆暴露量 (AUC)的测定

试验方案：

实验动物： 雄性 SD大鼠

给药剂量： 10 mg/kg (按药学活性化合物计）

盐配制处方： 纯水溶解

药学活性化合物配制处方： 0.5°/。CMC (carboxymethylcellulose)混悬

动物试验分组及过程 ：

每组各 3只雄性大鼠， 体重 180〜210g。 灌胃给药采血时间点为： 5min、 15min、 30min、 45min、 1 h、 2h、 4h、 6h、 10h禾口 24h， 由眼眶静脉丛取血 250μΙ_左右于肝素化 试管中， 离心， 取血浆 100μΙ_用于 LC-MS分析。

AUC测试结果：

实施例 20:

(Ζ)-Λ/-[2- (二乙胺基）乙基] -2-甲基 -7-(1 ,2-二氢 -5-氟 -2-氧代 -3W-吲哚 -3-亚基) -4,5,6,7-四 氢 -1 Η-吲哚 -3-羧酰胺 （药学活性化合物） 及其 L-苹果酸盐对人结肠癌 ΗΤ-29裸小鼠移 植瘤的疗效

试验方案：

实验动物： BALB/cA-nude裸小鼠， 6-7周， ？

给药剂量： 40 mg/kg (按药学活性化合物计）

L-苹果酸盐配制处方： 纯水溶解

药学活性化合物配制处方： 0.5°/。CMC (carboxymethylcellulose)混悬 买验歩骤：

裸小鼠皮下接种人结肠癌 HT-29细胞， 待肿瘤生长至 150-250 mm ³ 后， 将动物随 机分成 3组 (d0)，连续灌胃给药 21天，每周测 2— 3次瘤体积，记录数据。肿瘤体积（V) 计算公式为： V= 1 /2xaxb ² ， 其中 a、 b分别表示长、 宽。

相对肿瘤增殖率 T/cc½ =rr-T。y(c-c。)xioo，其中 τ、 c为实验结束时的肿瘤体积；

To Co为实验开始时的肿瘤体积， 抑瘤率 =1 - T/C(%)。

实验结果：