(I)皮膚保湿作用の評価方法
 本発明の皮膚保湿作用の評価方法は、評価� ��象とする被験物質を非ヒト動物に投与して� ��当該非ヒト動物の皮膚動脈交感神経の活動� ��測定することによって実施することができ� ��。

 測定に使用する非ヒト動物は、ヒト以外� ��哺乳動物または鳥類などの恒温動物であれ� ��特に制限されず、例えば、ラット、マウス� ��モルモット、ウサギ、サル、イヌおよびネ� ��などを挙げることができる。

 なお、測定に使用する非ヒト動物は、被� ��物質の匂い刺激によって生じる皮膚動脈交� ��神経への影響を消失しておくために、予め� ��臭症処理しておくことが好ましい。無臭症� ��理は、特に制限されず定法に従って行うこ� ��ができるが、例えば、鼻粘膜をキシロカイ� ��で局所麻酔する方法、または鼻粘膜に硫酸� ��鉛の1%水溶液を塗布する方法(Kolunie JM et al ., Horm. Behav. 1995, 29: 492-518)等を例示するこ とができる。好ましくは1%硫酸亜鉛水溶液に� ��る無臭症処理である。

 被験物質の投与方法としては、経皮投与� ��経口投与および経腸投与を挙げることがで� ��る。かかる投与方法は、被験物質の使用目� ��や使用形態に応じて適宜選択することがで� ��る。例えば、被験物質が、外用組成物(化粧 料や外用医薬品を含む)やその成分である場� �またはその用途で使用する場合は、当該被� �物質を非ヒト動物に経皮投与することによ� �て、皮膚に対する保湿作用を評価すること� �好ましい。また、被験物質が、経腸投与剤(� ��口投与や坐薬などその物質が腸を通過する� ��のを含む)やその成分である場合またはその 用途で使用する場合は、当該被験物質を非ヒ ト動物に経腸投与(直腸投与を含む)すること� ��よって、皮膚に対する保湿作用を評価する� ��とが好ましい。

 また、被験物質が、経口組成物(食品や経 口医薬品を含む)やその成分である場合また� �その用途で使用する場合は、当該被験物質� �非ヒト動物に経口投与することによって、� �膚に対する保湿作用を評価することが好ま� �い。なお、この場合、被験物質を経口投与� �てから、体内吸収されるか、或は、腸内に� �効果を発揮して皮膚動脈交感神経の活動に� �映されるまでに、多少の時間を要する。こ� �ため、まず被験物質を非ヒト動物に経腸投� �(経小腸投与)して、予め皮膚に対する保湿作 用を評価し(一次評価)、次いで、当該一次評� ��で皮膚保湿作用が確認された被験物質を非� ��ト動物に経口投与して、経口投与による皮� ��保湿作用を評価することもできる(二次評価 )。

 非ヒト動物に経皮投与する方法としては� ��被験物質を非ヒト動物の皮膚に塗布する方� ��、および被験物質を含浸または担持させた� ��ートを貼付する方法などを挙げることがで� ��、投与する被験物質の調製形態(例えば、ロ ーション、エアゾール剤、フォーム剤、乳液 、クリーム、軟膏、ゲル剤、貼付剤など)に� �じて適宜設定することができる。

 経皮投与する非ヒト動物の部位は、制限� ��されないが、好ましくは体毛の影響が少な� ��領域、具体的には毛がないか若しくは毛の� ��ない皮膚領域(例えば腹部、太ももの内側、 尻尾など)である。但し、試験領域を剃毛す� �ことによって体毛の影響を回避することが� �きるため、上記部位に特に拘泥はされない� �また、体毛の影響を回避するために、遺伝� �に毛のない動物(例えばヘアレスマウス、ヘ� ��レスラットなど)を使用することもできる。

 非ヒト動物に経腸投与する方法としては� ��非ヒト動物を麻酔下で開腹し、腸内にカニ� ��ーレを設置して被験物質を投与する方法、� ��たは肛門を介して直腸内に被験物質を投与� ��る方法を挙げることができる。また非ヒト� ��物に経口投与する方法としては、口腔内に� ��ニューレを設置して被験物質を強制摂取さ� ��る方法、または被験動物を食餌または水に� ��ぜて、非ヒト動物に食餌や水と一緒に飲食� ��せる方法を挙げることができる。

 斯くして被験物質を投与した非ヒト動物� ��ついて、その皮膚動脈を支配する交感神経( 皮膚動脈交感神経)の活動を測定する。当該� �経活動の測定は、皮膚動脈交感神経の遠心� �の電気活動を測定することによって行うこ� �ができる。なお、経皮投与の場合、経皮投� �した皮膚領域の動脈を支配する交感神経の� �動を測定することが好ましい。

 皮膚動脈交感神経(遠心枝)の電気活動の� �定は、具体的には、麻酔下で、非ヒト動物� �皮膚動脈交感神経の遠心枝を、実体顕微鏡� �で剥離し、それを銀電極にのせて活動電位� �記録することによって行うことができる。� �お、銀電極は、乾燥を防ぐために、予め液� �パラフィンとワセリンの混合物に十分浸し� �おくことが好ましい。得られた神経の電気� �動は、差動増幅器にて増幅し、オシロスコ� �プにてモニターする。ここでノイズ信号は� �ィンドウ・ディスクリミネーターにより分� �する。信号をスパイク変換し、得られたス� �イクをレイトメーターにより5秒間のスパイ� ��数としてカウントする。これをA/D(アナログ /デジタル)変換した後、パソコンに記録する( 図1参照)。

 かかる方法により皮膚動脈交感神経の遠� ��枝の電気活動を、スパイク数として測定す� ��ことができる。すなわち、被験物質投与前� ��測定したスパイク数が、被験物質投与によ� ��て減少した場合には、被験物質投与によっ� ��皮膚動脈交感神経の電気活動が低下したと� ��断することができる。

 かかる皮膚動脈交感神経の電気活動の低� ��は、実験例1に示すように皮膚からの水分蒸 散量の低下、すなわち皮膚保湿効果と精度良 く相関する。このため、被験物質投与前に測 定した上記スパイク数が、被験物質の投与に よって減少した場合には、被験物質の投与に よって皮膚動脈交感神経の電気活動が低下し たと判断することができ、この場合、当該被 験物質に皮膚に対する保湿作用があると評価 することができる。一方、逆に、被験物質投 与前に測定した上記スパイク数が、被験物質 の投与によって変動しないか増加した場合に は、被験物質の投与によって皮膚動脈交感神 経の電気活動が変動しないか上昇したと判断 することができ、この場合、当該被験物質に は皮膚に対する保湿作用がないと評価するこ とができる。

 以上のことを総合するに、本発明の皮膚保� ��作用の評価方法は、下記の工程(1)を行うこ� ��によって実施することができる:
(1)被験物質を非ヒト動物に投与し、当該非ヒ ト動物の皮膚動脈交感神経の活動を測定する 工程。

 好ましくは本発明の皮膚保湿作用の評価方� ��は、上記工程(1)に続いて、下記の工程(2)を� ��うことによって実施することができる:
(2)上記工程(1)において、被験物質を投与した 非ヒト動物の皮膚動脈交感神経の活動が、被 験物質を投与しない非ヒト動物(対照非ヒト� �物)の皮膚交感神経の活動(対照活動)よりも� �下する場合に、当該被験物質について皮膚� �湿作用があると判断する工程。

 なお、工程(2)において対照とする非ヒト� ��物は、工程(1)で被験物質を投与した非ヒト� ��物と同一の動物であっても、また異なる動� ��であってもよい。前者の場合は、被験物質� ��投与する前に当該非ヒト動物について測定� ��れた皮膚動脈交感神経の活動が比較の対象� ��され、上記でいう対照活動となる。また、� ��者において、対照非ヒト動物として被験物� ��を投与した非ヒト動物と異なる動物を使用� ��る場合、当該動物は、被験物質を投与した� ��ヒト動物と同種の動物を用いることが好ま� ��い。

 斯くして本発明によれば、被験物質につ� ��て、経皮投与、経口投与または経腸投与に� ��る皮膚保湿効果を評価することができる。� ��お、皮膚保湿効果を評価する対象の被験物� ��は、測定者が任意に選択することができ、� ��えば既に皮膚保湿作用が知られている保湿� ��質や組成物(化粧料や外用医薬品などの外用 組成物、食品や経口医薬品などの経口組成物 を含む)であってもよいし、また皮膚保湿作� �が知られていない物質や組成物(化粧料や外� ��医薬品などの外用組成物、食品や経口医薬� ��などの経口組成物を含む)であってもよい。 前者の場合は、本発明の評価方法により、皮 膚保湿作用を再確認することができ、またそ の皮膚保湿作用を、他の物質の保湿作用と比 較評価をすることができる。また、後者の場 合は、本発明の評価方法により、今まで皮膚 保湿作用が知られていない物質や組成物につ いて新たに保湿作用を見出すことができる。

  (II)保湿物質のスクリーニング方� �
 本発明はまた、皮膚保湿作用を有する物質( 保湿物質)をスクリーニングする方法を提供� �る。当該方法は、多くの被験物質のなかか� �、非ヒト動物に投与した場合に、当該非ヒ� �動物の皮膚動脈交感神経の活動を低下させ� �作用を有する物質を選別することによって� �施することができる。

 具体的には、保湿物質のスクリーニングは� ��前述する被験物質の保湿作用の評価方法に� ��って、下記の工程(1) を行うことによって� �施することができる。
(1)被験物質を非ヒト動物に投与して、当該非 ヒト動物の皮膚動脈交感神経の活動を測定す る工程。

 好ましくは本発明のスクリーニング方法は� ��上記工程(1)に続いて、下記の工程(2)を行う� ��とによって実施することができる:
(2)上記工程(1)において、被験物質を投与した 非ヒト動物の皮膚動脈交感神経の活動が、被 験物質を投与しない非ヒト動物の皮膚動脈交 感神経の活動よりも低下する場合に、当該被 験物質について皮膚保湿作用があると判断す る工程。

 ここで使用する非ヒト動物の種類や皮膚� ��脈交感神経の活動の測定方法は、いずれも� ��述する本発明の評価方法で採用するものを� ��様に用いることができる。

 斯くして、非ヒト動物に投与した場合に� ��該動物の皮膚動脈交感神経の活動が低下す� ��ことが確認された被験物質は、皮膚保湿作� ��を有する物質(保湿物質)として判断取得す� �ことができる。

 なお、非ヒト動物への投与方法としては� ��前述する本発明の評価方法と同様に、経皮� ��与、経口投与および経腸投与を挙げること� ��できる。皮膚投与(塗布および貼付を含む)� �よって皮膚保湿作用を発揮する被験物質を� �クリーニングするためには、被験物質を経� �投与することが好ましい。経腸投与(小腸投� ��および直腸投与を含む)によって皮膚保湿作 用を発揮する被験物質をスクリーニングする ためには、被験物質を経腸投与することが好 ましく、また経口的に摂取させることによっ て皮膚保湿作用を発揮する被験物質をスクリ ーニングするためには、被験物質を経口投与 することが好ましい。なお、経口によって皮 膚保湿作用を発揮する被験物質を選別する場 合は、まず経腸投与を用いて第一次スクリー ニングすることで、予め経腸投与によって皮 膚保湿作用を発揮する被験物質を選別し、次 いで、ここで選別された被験物質について経 口投与を用いた第二次スクリーニングを行っ て、経口投与によって皮膚保湿作用を発揮す る被験物質を選別する方法を採用してもよい 。

 斯くして本発明のスクリーニング方法に� ��って選別された保湿物質は、さらに水分蒸� ��計や角質水分量測定装置などを用いた有効� ��試験、安全性試験、さらにヒトを対象とし� ��試験に供してもよく、これらの試験を実施� ��ることによって、より実用的な保湿物質を� ��別取得することができる。

 またこのようにして選別された物質は、� ��要に応じて構造解析を行った後、その物質� ��種類に応じて、化学的合成、生物学的合成( 発酵を含む)または遺伝子学的操作によって� �工業的に製造することができ、保湿剤、保� �効果を有する外用組成物(化粧料および外用� ��薬品を含む)や経口組成物(食品および医薬� �)の有効成分として使用することができる。

  (III)皮膚保湿剤
 本発明はまた、上記本発明の評価方法で皮� ��保湿作用があると判断される保湿物質を保� ��の有効成分とする皮膚保湿剤を提供する。

 かかる保湿物質として、実験例4で示すよ うに、カルノシンを挙げることができる。当 該カルノシンは、非ヒト動物に投与(好まし� �は経口投与または経腸投与)して、当該動物� ��皮膚動脈交感神経活動の低下を指標に選別� ��得された物質である。当該カルノシンは、� ��時に、非ヒト動物への投与(好ましくは経口 投与または経腸投与)によって皮膚水分蒸散� �の低下(皮膚保湿作用)も確認されている。

 しかして当該カルノシンは、皮膚保湿有� ��成分、特に経口投与または経腸投与するこ� ��で皮膚保湿作用を発揮する保湿有効成分と� ��て、有効に用いることができる。このため� ��ルノシンは、皮膚保湿を効果・効能とする� ��膚保湿剤、特に経口または経腸投与用の保� ��剤の有効成分として使用することができる� ��すなわち、本発明によれば、カルノシンを� ��効成分とし、皮膚保湿を効能・効果とする� ��口または経腸投与形態を有する保湿剤を提� ��することができる。

 当該保湿剤に含まれるカルノシンの配合� ��は、保湿剤が皮膚保湿効果を備える限り、� ��に制限されず、通常1~100重量%の範囲から適� ��選択して用いることができる。好ましくは5 0~100重量%を挙げることができる。当該保湿剤 の形態は、経口または経腸投与形態であれば 特に制限されず、例えば飲料形態(ドリンク� �態)、ゲルまたはシロップ形態、錠剤形態、� ��剤形態、カプセル形態、粉末または顆粒状� ��態などの経口投与形態、ならびにクリーム� ��固形、またはカプセルなどの汎用の坐剤形� ��を有する経腸投与形態を挙げることができ� ��。

 また上記保湿物質として、実験例2および 3で示すように、非環式モノテルペンおよび� �式モノテルペンを挙げることができる。こ� �らのモノテルペン化合物は、非ヒト動物に� �皮投与して、当該動物の皮膚動脈交感神経� �動の低下を指標に選別取得された物質であ� �。当該テルペン化合物は、同時に、非ヒト� �物への経皮投与による皮膚水分蒸散量の低� �(皮膚保湿作用)も確認されている。

 しかして、これらの非環式モノテルペン� ��よび環式モノテルペンは、皮膚保湿有効成� ��、特に経皮投与することで皮膚保湿作用を� ��揮する保湿有効成分として、有効に用いる� ��とができる。このため当該非環式モノテル� ��ンおよび環式モノテルペンは、皮膚保湿を� ��果・効能とする皮膚保湿剤、特に経皮投与� ��態を有する皮膚保湿剤の有効成分として使� ��することができる。すなわち、本発明によ� ��ば、非環式モノテルペンおよび環式モノテ� ��ペンからなる群から選択される少なくとも� ��種のテルペン化合物を有効成分とし、皮膚� ��湿を効果・効能とする経皮投与形態の皮膚� ��湿剤を提供することができる。

 本発明が対象とする上記非環式モノテル� ��ンとしては、リナロール(Linalool)、ゲラニオ ール(Geraniol)、シトラール(Citral)、ゲラニアー ル(Geranial)、ネラール(Neral)、シトラールジメ� ��ルアセタール(Citral Dimethyl Acetal)、ゲラニ� �ールジメチルアセタール(Geranial DimethylAcetal) 、ネラールジメチルアセタール(NeralDimethyl Ac etal)並びにこれらのエステルおよび塩を挙げ� ��ことができる。ここでエステルには、上記� ��ノテルペンと酢酸や蟻酸などのカルボン酸� ��のエステル(カルボン酸エステル)が含まれ� �。制限はされないが、具体的には、酢酸ゲ� �ニオール、蟻酸ゲラニオール、酢酸リナリ� �ル、および酢酸ネリルを例示することがで� �る。好ましくは、リナロール、ゲラニオー� �、シトラール、ゲラニアール、ネラール、� �トラールジメチルアセタール、ゲラニアー� �ジメチルアセタール、およびネラールジメ� �ルアセタールを挙げることができ、より好� �しくはリナロール、ゲラニオール、シトラ� �ル、およびシトラールジメチルアセタール� �挙げることができる。なお、シトラールはtr ans体としてゲラニアール、およびcis体として ネラールを含有する混合物であり、シトラー ルジメチルアセタールはtrans体としてゲラニ� ��ールジメチルアセタール、およびcis体とし� ��ネラールジメチルアセタールを含有する混� ��物である。これらの非環式モノテルペンは1 種単独で、本発明の皮膚保湿剤の有効成分と して使用してもよいし、また2種以上を任意� �組み合わせて使用してもよい。

 また本発明が対象とする単環式モノテル� ��ンとしては、テルピネン-4-オール(Terpinen-4-o l)、α-テルピネオール(α-Terpineol)、並びにこ� �らのエステルおよび塩を挙げることができ� �。これらの単環式モノテルペンは1種単独で� ��本発明の皮膚保湿剤の有効成分として使用� ��てもよいし、また2種以上を任意に組み合わ せて使用してもよい。

 また本発明の皮膚保湿剤は、上記の非環� ��モノテルペンと単環式モノテルペンの両方� ��保湿有効成分とするものであってもよい。� ��発明の皮膚保湿剤に含まれるこれらのモノ� ��ルペン化合物の配合割合としては、皮膚保� ��剤が保湿作用を有するかぎり特に制限され� ��、通常これらのモノテルペン化合物の総量� ��して0.001~100重量%の範囲から適宜選択するこ とができる。好ましくは0.05~50重量%を例示す� ��ことができる。

 当該皮膚保湿剤の形態は、経皮投与形態� ��あれば特に制限されず、例えば、ローショ� ��(液剤、分散液)形態、乳液形態、クリーム� �態、軟膏形態、ゲル形態、フォーム形態、� �アゾール形態、およびパップやパックなど� �含む貼付剤形態などを挙げることができる� �また、その使用態様としては、外用医薬品� �皮膚化粧料、頭皮化粧料、毛髪化粧料(養毛� ��やトリートメント剤を含む)、および洗浄剤 (ボディー洗浄剤、毛髪洗浄剤、洗顔料を含� �)を挙げることができる。

 なお、本発明の皮膚保湿剤は、その皮膚� ��湿作用が損なわれないことを限度として、� ��須成分である上記保湿物質(モノテルペン化 合物)に加えて、通常皮膚外用剤(例えば、医� ��品、医薬部外品、皮膚化粧料、毛髪化粧料� ��および洗浄料を含む)に配合される成分、例 えば界面活性剤(乳化剤を含む)、油性成分、� ��ルコール類、可溶化剤、増粘剤、酸化防止� ��、キレート剤、pH調整剤、香料、色素、紫� �線吸収または散乱剤、ビタミン類、アミノ� �類、および防腐剤を、必要に応じて配合す� �ことができる。

 また、本発明の効果を損なわない範囲に� ��いて、他の皮膚保湿剤を配合してもよい。� ��かる皮膚保湿剤としては、制限されないが� ��例えばグリセリン、プロピレングリコール� ��1,3-ブチレングリコール、ソルビトール、ポ リグリセリン、ポリエチレングリコール、ジ プロピレングリコール等の多価アルコール類 ;アミノ酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカ� �ボン酸ナトリウムなどのNMF成分;ヒアルロン� ��、コラーゲン、ムコ多糖類、コンドロイチ� ��硫酸等の水溶性高分子物質を挙げることが� ��きる。