L'invention a pour objet une composition orale à usage humain comprenant de la spiruline pour son utilisation dans le renforcement immunitaire.

Elle a plus particulièrement pour objet une telle composition comprenant d'autres ingrédients, pour son utilisation comme médicament ou complément alimentaire e† notamment en tan† qu'immunomodulateur.

Technique antérieure

L'immunité es† la capacité d'un organisme à se défendre contre des substances étrangères e† agents pathogènes. Le système immunitaire correspond à l'ensemble des mécanismes de défenses de l'organisme. Il es† composé d'organes, tissus, cellules e† molécules assurant l'immunité d'un organisme.

On appelle « réponse immunitaire » le déclenchement du système immunitaire face à un agresseur ou maladie. Le système immunitaire va ainsi assurer l'intégrité de l'organisme vis-à-vis d'éléments extérieurs e† aussi d'éléments constitutifs mais anormaux, tels que des cellules tumorales. Il permet de contenir le développement e† la dissémination des pathogènes dans l'organisme e† donc permet leur élimination.

Les pathogènes externes que doit affronter le système immunitaire son† principalement des virus, des parasites, des levures, des champignons e† des bactéries.

La réponse immunitaire déclenchée par un pathogène se caractérise par deux aspects fonctionnels : L'immunité naturelle d'une part qui es† innée e† non spécifique e† l'immunité spécifique d'autre par† qui es† acquise e† adaptative.

L'immunité naturelle es† la première lignée de défense, elle es† identique chez tous les individus d'une même espèce, quel que soi† le pathogène e† elle es† présente dès la naissance.

L'immunité spécifique es† dite spécifique car la réaction immunitaire associée es† dirigée contre un seul antigène : les pathogènes ayant réussi à franchir la première barrière de défense de l'organisme (la réaction inflammatoire), une deuxième ligne de défense se me† en action.

Une réaction immunitaire va permettre la différenciation des cellules immunitaires e† la production de nombreux effecteurs qui peuvent être cellulaires tels que des macrophages e† des monocytes, ou moléculaires tels que des cytokines, des interleukines ou des anticorps.

Les effecteurs moléculaires von† ainsi permettre à l'organisme de lutter contre le pathogène.

Plus précisément, il y a tou† d'abord, reconnaissances de pathogène possédant des motifs étrangers par les récepteurs d'une cellule phagocytaire (effecteurs cellulaires). Ce qui va déclencher la libération des médiateurs chimiques de l'inflammation (interleukines, histamine, TNF) par les cellules phagocytaires. Ces médiateurs Interleukines, Cytokines permettent la communication entre cellules e† facilitent ainsi l'arrivée d'autres cellules sur le lieu de l'infection. Ils entraînent l'apparition de la réaction inflammatoire nécessaire aux réactions immunitaires. Ils von† également permettre la phagocytose du pathogène. Ensuite, la réaction de défense s'amplifie, les lymphocytes T auxiliaires attirant les différents acteurs de la défense à l'endroit où le pathogène a été localisé. Enfin, il y a élimination du pathogène : les lymphocytes B produisent des anticorps qui se lient aux antigènes étrangers, les lymphocytes T cytotoxiques libèrent des enzymes destructrices et les macrophages phagocytent les cellules infectées.

Chaque jour, le système immunitaire es† mis à rude épreuve e† une défense immunitaire active es† donc nécessaire.

Dès l'Antiquité, les maladies on† décimé des populations entières en l'espace de quelques mois voire quelques jours, déclenchant la terreur des habitants face à un mal inconnu. Des pandémies causées par des bactéries ou des virus son† connues dès l'antiquité, par exemple la peste d'Athènes, première pandémie documentée de l'histoire, a notamment décimé un fiers de la ville d'Athènes en -430 avant Jésus Chris†. La peste Anfonine, la peste noire, la grippe espagnole, le choléra, la grippe asiatique ou encore le sida ton† partie des épidémies qui on† marqué l'histoire.

Plus récemment, d'autres virus on† vu le jour. On peu† citer notamment les épidémies de SARS, de MERS-Cov, Ebola, Zika, la grippe H 1 N 1. Enfin, la pandémie de Covid-19 fai† référence à « Coronavirus Disease 2019 », la maladie provoquée par un virus de la famille des Coronaviridae, le SARS-CoV-2. Ceffe maladie infectieuse es† une zoonose, don† l'origine es† encore débattue, qui a émergé en décembre 2019 dans la ville de Wuhan, dans la province du Hubei en Chine.

Les virus son† des particules microscopiques infectieuses qui ne peuvent se répliquer qu'en pénétrant dans des cellules et en utilisant leur machinerie cellulaire.

Lorsque les virus von† intégrer l'organisme, les cellules immunitaires von† reconnaître le pathogène, le non-soi, et von† activer une réaction immunitaire afin d'induire la prolifération des cellules immunitaires et la production des effecteurs moléculaires pour éliminer le virus du corps.

Il es† connu qu'avec l'âge ou la maladie, l'immunité s'affaibli† et le corps devient plus vulnérable aux infections.

Aussi, une alimentation équilibrée et un mode de vie sain permette de maintenir un bon système immunitaire. En effet, 70% du système immunitaire se trouve dans l'intestin. Ce† organe, e† plus particulièrement les bactéries qu'il contient, i.e. le microbiote, jouent un rôle majeur de défense contre les agents pathogènes. Préserver l'intégrité du microbiote intestinal es† essentiel pour maintenir de bonnes défenses e† les probiotiques peuvent y contribuer.

Il existe des éléments qui permettent de booster les défenses immunitaires, tels que des vitamines, des oligoéléments, des probiotiques des minéraux, cofacteurs e† bien d'autres. On les retrouve souvent soi† dans l'alimentation, soi† combinés sous forme de compléments alimentaires.

Les vitamines aussi son† connues pour leur contribution au bon fonctionnement du système immunitaire. Une bonne alimentation équilibrée permet d'absorber les vitamines. Les vitamines se trouvent facilement sous forme de compléments alimentaires.

Par ailleurs, d'autres plantes e† organismes on† été étudiés e† reconnus pour leur efficacité sur le système immunitaire. Il s'agi† notamment des myrtilles, canneberges, baies de goji, fraises, piments rouges, ail, gingembre, graine de chia, lin, quinoa, cacao, maca mais aussi la spiruline.

Depuis quelques années, des études on† montré que la spiruline permettait de stimuler un grand nombre de mécanismes physiologiques e† de booster les défenses immunitaires. Ce††e cyanobacférie es† riche en vitamines, minéraux, protéines, acide linolénique e† antioxydants. Le document intitulé « Impact of daily supplémentation of Spirulina platensis on †he immune System of naïve HIV-1 patients in Cameroon: A 12-mon†hs single blind, randomized, multicenter trial », Ngo-Ma†ip e† Al. (2015). Nutrition Journal a montré que la spiruline permet notamment de retarder efficacement la progression du VIH en améliorant les réponses immunitaires.

Aujourd'hui, il existe de nombreux compléments alimentaires mis sur le marché comprenant de la spiruline sous forme de comprimés, de gélules e† en poudre. La plupart de ces compléments utilisent la poudre de spiruline sans process d'extraction, contenant un haut pourcentage en phycocyanine.

Parmi ces produits on retrouve ceux des laboratoires NUTRIMEA™, NUTRI&CO™ e† NUTRALIE™. Ils son† annoncés pour améliorer de l'endurance e† la récupération après un effort, un renforcement de la vitalité, la suppression des carences alimentaires, le combat contre la fatigue, l'aide au contrôle du poids ainsi que le renforcement du système immunitaire e† des défenses naturelles. Ces compléments alimentaires son† sous forme de comprimés ou de gélules. Ils ne contiennent que de la spiruline seule, ou de la spiruline associée à des vitamines e† de la chlorophylle.

Le document brevet CN 108851055 décrit quan† à lui une composition alimentaire utilisée en tan† que remède contre les douleurs à l'intestin. La composition décrite comprend notamment de la spiruline e† du pollen.

Le document « Pho†osyn†he†ically Controlled Spirulina, bu† No† Solar Spirulina, Inhibits TNF- a Sécrétion: Potential Implications for COVID-19 Related Cytokine Storm Therapy » Tzachor, A. e† AL (2021) Mar Biotechnol 23, 149-155 divulgue l'effet de la spiruline (Arfhrospira platensis) photosynthétiquemen† contrôlée (Spiruline LED) sur les macrophages e† les monocytes activés par des LPS (lipopolysaccharides) qui se lien† aux récepteurs Toll-Like Receptor. Il a également été démontré que la Spiruline LED permet une diminution de la sécrétion de TNF- a induite par les macrophages e† les monocytes. Dans ce cas-là, la spiruline a un effet an†i-inflamma†oire lorsque le taux de cytokines inflammatoires es† élevé.

La spiruline permet ainsi de modifier la réponse immune de l'organisme, c'es† ce que l'on appelle un immunomodulateur. Selon son utilisation, elle va permettre un renforcement du système immunitaire (état basale du taux de cytokines) ou un effet an†i-inflamma†oire (taux élevé de cytokines).

De nombreuses infections virales, don† le coronavirus de type Covid-19 ou SARS-Cov2, déclenchent le syndrome d'hémophagocytose (syndrome d'activation macrophagique). C'es† une anomalie qui résulte d'une dérégulation cytokinique (choc cytokinique), qui va aboutir à une surexpression des cytokines inflammatoires, notamment le TNF-a.

Le TNF- a es† une cytokine inflammatoire sécrétée par des macrophages activés. Dans le cas du SARS-Cov2, elle s'avère être responsable des formes sévères, e† donc du syndrome respiratoire aigu sévère.

Problème technique

Considérant ce qui précède, un problème que se propose de résoudre la présente invention es† de mettre en œuvre une composition orale apte à augmenter l'immunomodulation, e† donc renforcer le système immunitaire chez l'homme de façon efficace pour faire face par exemple aux virus émergeants tels que le SARS-Cov2 ou bien à d'autres infections.

Ainsi, le Demandeur a découvert, de manière inattendue, qu'une composition comprenant d'une part de la spiruline, et d'autre part, du pollen principalement obtenu à partir de plantes appartenant à la famille des pinacées et/ou des poacées, permettait de renforcer le système immunitaire chez l'homme.

Une telle composition prise seule et, avantageusement, en association avec une pluralité d'autres ingrédients agissant en synergie, présente une remarquable activité de potentialisation du système immunitaire, notamment dans l'activation de cellules de la première ligne de défense de l'organisme pour le traitement et /ou prévention d'infections bactériennes/ virales, fongiques ou parasitaires.

Solution technique

La solution de l'invention à ce problème technique posé a pour premier objet une composition orale comprenant de la spiruline ou un extrait de spiruline, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un extrait aqueux de cytoplasme de pollen(s), ledit(s) pollen(s) étant obtenu(s) à partir de plantes appartenant aux genres Secale, Zea, Pinus et/ou Dactylis, et éventuellement : - un extrait de pistil(s) ; du sélénium ; et/ou des vitamines.

Elle a également pour objet une composition orale comprenant de la spiruline ou un extrait de spiruline, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un extrait aqueux de cytoplasme de pollen(s), ledit(s) pollen(s) étant obtenu(s) à partir de plantes appartenant aux genres Secale, Zea, Pinus et/ou Dactylis, et éventuellement : un extrait de pistil (s) ; du sélénium ; et/ou des vitamines ; pour son utilisation comme médicament ou complément alimentaire.

Elle a encore pour objet une composition orale comprenant de la spiruline ou un extrait de spiruline et du pollen obtenu à partir de plantes appartenant aux genres Secale, Zea, Pinus et/ou Dactylis, pour son utilisation en tant qu' immunomodulateur.

Elle a aussi pour objet un procédé de préparation d'une composition selon l'invention, comprenant les étapes suivantes de : a. extraction aqueuse de cytoplasme de pollen et éventuellement de pistil ; b. séchage par atomisation du ou des extraits aqueux ainsi obtenus ; c. récupérations desdits extraits aqueux et mélange avec de la spiruline ou d' un extrait de spiruline et éventuellement :

^■ du sélénium et/ou

^■ des vitamines ; et d. récupération de la composition ainsi obtenue.

Avantages apportés Le Demandeur a notamment pu développer une composition qui est particulièrement efficace pour son utilisation dans l' activation et le renforcement du système immunitaire.

Brève description des dessins

L'invention et les avantages qui en découlent seront mieux compris à la lecture de la description et des modes de réalisation non limitatifs qui suivent, illustrés au regard des dessins annexés dans lesquels :

[fig. 1] illustre le mode opératoire utilisé pour la génération des résultats permettant d'éfudier l'effet de la composition A dans la production de cytokines, tel que détaillé à l'exemple 3.

[fig. 2] illustre l'effet de la composition A dans la production de différentes cytokines dans les monocytes humains ainsi que les concentrations de la composition A efficaces pour une production significative de cytokines telles que détaillés à l'exemple 4.

[fig. 3] illustre la production d'ILl-b par différentes compositions comprenant de la spiruline, des extraits de pollen, du sélénium, de la vitamine B6 ef/ou de la vitamine D3, tel que détaillé à l'exemple 5.

[fig. 4] illustre la production de TNF-a par différentes compositions comprenant de la spiruline, des extraits de pollen, du sélénium, de la vitamine B6 ef/ou de la vitamine D3, tel que détaillé à l'exemple 5.

[fig. 5] illustre la production d'IL-6 par différentes compositions comprenant de la spiruline, des extraits de pollen, du sélénium, de la vitamine B6 ef/ou de la vitamine D3, tel que détaillé à l'exemple 5.

[fig. 6] illustre la production de MCP-1 par différentes compositions comprenant de la spiruline, des extraits de pollen, du sélénium, de la vitamine B6 ef/ou de la vitamine D3, tel que détaillé à l'exemple 5.

[fig. 7] illustre la production d'IL-8 par différentes compositions comprenant de la spiruline, des extraits de pollen, du sélénium, de la vitamine B6 ef/ou de la vitamine D3, tel que détaillé à l'exemple 5.

[fig. 8] illustre la production de PGE-2 par différentes compositions comprenant de la spiruline, des extraits de pollen, du sélénium, de la vitamine B6 ef/ou de la vitamine D3, tel que détaillé à l'exemple 5.

[fig. 9] illustre l'effet de la composition A sur l'inhibition du RBD (de la protéine Spike) au récepteur ACE2 tel que détaillé à l'exemple 6.

Description des modes de réalisation

Dans ceffe description, à moins qu'il ne soif spécifié autrement, il es† entendu que, lorsqu'un intervalle es† donné, il inclut les bornes supérieure e† inférieure dudi† intervalle.

L'invention concerne une composition orale comprenant de la spiruline.

La composition selon l'invention es† administrable par voie orale, en une ou plusieurs formulations identiques ou différentes. Elle se présente sous une forme galénique quelconque normalement utilisée pour une administration orale e† notamment sous la forme de gélule, comprimé, capsule, capsule molle, dragée, sache†, tube, flacon, chewing-gum, bille, émulsion, suspension, liquide, solution, ampoule, boisson, sirop, poudre, solide, gel mou, semi-solide. Avantageusement, la composition est formulée sous forme de comprimé, gélule, capsule, gel mou, semi-solide, solide, liquide ou poudre.

Ladite composition comprend de la spiruline ou un extrait de spiruline. La spiruline es† un produit à base de cyanobactéries du genre Arfhrospira.

Il s'agi† de bactéries photosynthétiques microscopiques bleues, généralement séchées e† broyées.

L'espèce la plus fréquemment commercialisée es† Arfhrospira platensis, cultivée principalement en Chine, aux États-Unis, en France e† sur le continent africain. Dans une moindre mesure, la spiruline commercialisée peu† également être issue de l'espèce Arfhrospira maxima (syn. Spirulina maxima).

La spiruline es† commercialisée sous plusieurs formes : méthodes industrielles : comprimés, poudre, gélules e† liquide ; méthodes artisanales : brindilles, paillettes e† micro-aiguille††es (version non transformée donc alimentaire) ; e† parfois sous forme de produits alimentaires dérivés, don† des pâtes artisanales.

Selon l'invention, la spiruline utilisée dans les compositions es† un extrait d'Arthrospira platensis (syn. Spirulina plantensis). Préférentiellement, on utilise des polysaccharides extraits de Spirulina platensis dans la composition selon l'invention, plus préférentiellement il s'agi† d'un extrait aqueux de lipopolysaccharides de Spirulina plantensis.

Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, l'extrait de spiruline utilisé peu† être un extrait bru† de spiruline préparé en extrayant le matériel lyophilisé avec de l'éthanol. Ce† extrait bru† es† préparé par exemple selon le procédé décrit dans le brevet EPI 301191.

La composition selon l'invention comprend en outre au moins du pollen, e† éventuellement du pistil, obtenu à partir de plantes appartenant aux familles des poacées ef/ou des pinacées.

Les poacées (Poaceae), appelée également graminées (Gramineae), son† une famille de plantes monocofylédones de l'ordre des poales. Ceffe famille, composée d'environ 12 000 espèces regroupées en 780 genres, comprend la plupart des espèces appelées communément « herbes » e† « céréales ». Ce son† généralement des plantes herbacées, plus rarement ligneuses (bambous).

Comme tous les pollens anémophiles, le pollen des poacées es† de forme sphérique ou légèrement ellipsoïdale à ornementations réduites. L'aperfure unique (ou pore) es† ronde : c'est un des critères des monocofylédones. Le pollen des poacées es† de petite faille e† léger. La faille es† de l'ordre de 40 microns. Pour les céréales, la taille es† de 60 à 100 microns.

La famille des pinacées (Pinaceae), ou abiéfacées, regroupe des plantes gymnospermes ; elle compte 220-250 espèces réparties en 11 genres. Ce son† des arbres ou des arbustes, des régions tempérées, soif à feuilles persistantes en aiguille ou en écailles, soif caduques comme celles des mélèzes. Dans ceffe famille, les espèces indigènes en France se trouvent parmi les genres Abies (les sapins), Picea (les épicéas), Larix (le mélèze d'Europe), Pinus (les pins).

Les pinacées produisent de gros grains de pollen de manière abondante don† la taille es† généralement comprise entre 40 et 100 microns. Ils sont dépourvus de pores. Les grains de pollen des pins, sapins, épicéa et cèdre possèdent deux ballonnets qui facilitent leur suspension dans l'air. Les grains de pollen des mélèzes e† des douglas son† plus ou moins sphériques e† sans ballonne†.

Préférentiellement, les plantes à partir desquelles le pollen, e† éventuellement le pistil, son† obtenus son† choisies parmi les genres Secale, Zea, Pinus ef/ou Dacfylis, ou un mélange de ces derniers.

Plus particulièrement, les plantes à partir desquelles le pollen, e† éventuellement le pistil, es† obtenu son† préférentiellement choisies parmi les espèces Secale cereale L. (seigle), Zea mays L. (maïs), Pinus silvesfris L. (pin), ef/ou Dacfylis glomerafa L. (dactyle), ou un mélange de ces derniers.

De préférence, les plantes utilisées, à partir desquelles le pollen es† récolté son† fraichemenf récoltées. Le pollen utilisé pour la présente invention peu† être un pollen récolté par des insectes (tel que du pollen d'abeille) ou récolté par une intervention humaine. Le pollen d'abeille par exemple confient du pollen, mais aussi du nectar e† de la salive d'abeille. Le pollen récolté via une intervention humaine es† dépourvu de tels ingrédients additionnels. De préférence, lesdifs pollens des présentes compositions son† obtenus seulement par une intervention humaine. Ceci permet une fois de plus une standardisation du produit final.

Les compositions utilisées selon la présente invention son† avantageusement riches en superoxyde dismufase (SOD), tannins, polyphénols, vitamines, enzymes e† oligoélémenfs, acides aminés, acide gras e† minéraux. Par ailleurs, les compositions utilisées selon la présente invention ne contiennent pas d'hormones, tels que les phyfoesfrogènes.

De façon avantageuse, les extraits cytoplasmiques de pollen son† obtenus à partir du cytoplasme (partie inférieure de la graine de pollen dépourvue de son enveloppe). Comme l'enveloppe es† généralement une source d'allergènes, e† un obstacle à la disponibilité des composés du cytoplasme, I ' utilisation d'un extrait cytoplasmique de pollen présente un avantage évident comparé à G utilisation d'un extrait de pollen naturel. De tels extraits cytoplasmiques purifiés de pollen spécifiques, standardisés, on† également une forte teneur en superoxyde dismufase (SOD), tannins, polyphénols, vitamines, enzymes e† oligoéléments, acides aminés, acide gras e† minéraux, tou† comme en protéines bénéfiques e† en hydrates de carbone. La concentration de composés bénéfiques dans les différents extraits es† largement supérieure à la quantité de composés intéressants dans les pollens à l'état bru†.

Le pollen, e† éventuellement le pistil, utilisé dans les compositions selon l'invention es† avantageusement un extrait cytoplasmique de pollen et/ou de pistil, de préférence choisies parmi les espèces Secale cereale L. (seigle), Zea mays L. (maïs), Pinus silvestris L. (pin), et/ou Dacfylis glomerata L. (dactyle), ou un mélange de ces derniers.

Les extraits de pollen e† éventuellement le pistil selon l'invention peuvent être des extraits huileux et/ou aqueux.

Selon l'invention, on parle d'extraction lorsqu'on utilise un solvant, avantageusement respectueux de l'environnement comme l'eau, la glycérine, les glycols, les éthers, les huiles, les mélanges hydroalcooliques, l'éthanol e† les autres alcools, sur une matière première végétale pour en extraire certains composés ou molécules, après un éventuel mélange, décantation et filtration.

Le solvant peu† être ensuite éliminé partiellement ou totalement pour obtenir un extrait.

Par extrait huileux, on entend un extrait contenant des principes actifs liposolubles obtenu par extraction, par exemple une macération, une infusion, une digestion, une décoction, une percolation ou encore une lixiviation, préférentiellement une macération à température ambiante comprise entre 15 e† 27°C, d'une matière première végétale dans un solvant huileux tel qu'un éther, une cétone ou une huile.

A titre d'exemples non limitatifs, le solvant huileux es† un éther tel que l'éther diéthylique ou une cétone telle que l'acétone.

La composition utilisée selon l'invention comprend préférentiellement un extrait aqueux de pollen, e† éventuellement un extrait aqueux de pistil.

Par extrait aqueux, on entend un extrait contenant des principes actifs hydrosolubles obtenu par extraction, par exemple une hydrodistillation, une macération, une infusion, une digestion, une décoction, une percolation ou encore une lixiviation, préférentiellement une macération à basse température comprise entre 15 e† 40°C, d'une matière première végétale dans un solvant aqueux, c'est-à-dire un solvant comprenant de l'eau prise seule ou avantageusement en mélange avec d'autre(s) solvant(s) tels qu'un alcool, une cétone, et/ou un tensioactif non ionique.

A titre d'exemples non limitatifs, le solvant aqueux es† choisi parmi un mélange comprenant majoritairement de l'eau en combinaison avec un alcool tel que l'éthanol, une cétone telle que l'acétone, et/ou tensioactif non ionique.

Les extraits de pollen, e† éventuellement de pistil, utilisés dans la composition selon l'invention son† préférentiellement des extraits aqueux de cytoplasme de pollen et/ou de pistil.

Plus préférentiellement encore, le pollen, e† éventuellement le pistil, utilisé dans les compositions selon l'invention es† avantageusement un extrait aqueux de cytoplasme de pollen et/ou de pistil, de préférence choisies parmi les espèces Secale cereale L. (seigle), Zea mays L. (maïs), Pinus silvestris L. (pin), et/ou Dactylis glomerata L. (dactyle), ou un mélange de ces derniers.

De préférence, la composition selon l'invention comprend un extrait aqueux de cytoplasme de pistil obtenu à partir de la plante Zea.

En plus de spiruline e† de pollen, la composition selon l'invention comprend avantageusement en outre du pistil tel que décrit ci-dessus, un oligo-élémen† qui es† préférentiellement du sélénium et/ou des vitamines.

Les oligoéléments essentiels, aussi appelés éléments traces (ET), son† des éléments inorganiques don† des apports insuffisants causent de manière prévisible des perturbations biologiques e† une baisse de vitalité. Ils son† présents dans l'organisme humain en très faible quantité (< 0,01 % du poids corporel), mais en concentration très constante. Chimiquement, ce son† des métalloïdes qui on† un nombre variable de valences, don† les propriétés e† l'absorption digestive von† varier selon la valence. Douze éléments son† essentiels parmi lesquels on peu† citer le chrome, le cuivre, le fer, l'iode, le sélénium e† le zinc. De préférence, la composition telle que décrite ci-dessus comprend en outre du sélénium. Le sélénium (symbole Se dans le tableau périodique des éléments) est lié à différentes protéines et principalement stocké dans les muscles.

Le sélénium est important pour le fonctionnement des sélénoprotéines, telles que les glutathions péroxydases et la thiorédoxine réductase, qui agissent comme régulateurs redox et antioxydants cellulaires, en contrant potentiellement les espèces de radicaux libres produits pendant le stress oxydatif.

Ces enzymes, qui contribuent donc à neutraliser l'excédent de radicaux libres présents dans l'organisme qui accélèrent le vieillissement cellulaire et favorisent la survenue de diverses maladies.

De préférence, la composition telle que décrite ci-dessus comprend en outre au moins une vitamine.

Les vitamines sont des substances organiques essentielles à l'organisme. Le corps humain ne peut généralement pas les produire seul, et leur apport alimentaire est donc indispensable.

Les vitamines participent à la construction de l'organisme, au fonctionnement et à l'entretien du corps.

Parmi les vitamines utilisables dans la composition selon l'invention, on peut citer : la vitamine A, les huit vitamines du groupe B à savoir les vitamines Bl , B2, B3, B5, B6, B8, B9, B12, la vitamine C la vitamine D sous forme D2 et/ou D3, la vitamine E, et la vitamine K.

Plus préférentiellement, les vitamines utilisables dans la composition selon l'invention sont choisies parmi la vitamine D3, B6 ou E, prises seules ou en mélange.

La vitamine D3 est une forme de vitamine D, également appelée cholécalciférol. La vitamine D possède une double origine : elle est apportée par l'alimentation et synthétisée par l'organisme au niveau de la peau sous l'action des rayons UVB du soleil. La fonction essentielle de la vitamine D est d'augmenter la capacité d'absorption de l'intestin pour le calcium et le phosphore ce qui permet :

- d'assurer une minéralisation optimale des tissus minéralisés, notamment os, cartilage et dents ;

- de contribuer au maintien des concentrations plasmatiques du calcium et du phosphore.

La vitamine B6 est une vitamine hydrosoluble représentée par trois formes principales : la pyridoxine, le pyridoxal, et la pyridoxamine.

Présente dans une grande variété d'aliments végétaux et animaux, la vitamine B6 est notamment nécessaire au bon fonctionnement cellulaire, en particulier le système nerveux et cutané.

La vitamine E est une vitamine liposoluble recouvrant un ensemble de huit molécules organiques, quatre tocophérols et quatre tocotriénols. La forme biologiquement la plus active est l'alpha-tocophérol, la plus abondante dans l'alimentation étant le gamma-tocophérol. Ces molécules sont présentes en grande quantité dans les huiles végétales. Elles agissent essentiellement comme antioxydants contre les dérivés réactifs de l'oxygène produits notamment par l'oxydation des acides gras.

De façon avantageuse, la composition selon l'invention comprend : de la spiruline ou un extrait de spiruline ; un extrait de pollen de l'espèce Secale cereale L. ; un extrait de pollen de l'espèce Zea mays L ; un extrait de pollen de l'espèce Pinus silvestris L ; e† un extrait de pollen de l'espèce Dacfylis glomerata L.

De façon particulièrement avantageuse, la composition selon l'invention comprend : de la spiruline ou un extrait de spiruline ; un extrait de pollen de l'espèce Secale cereale L. ; un extrait de pollen de l'espèce Zea mays L ; un extrait de pollen de l'espèce Pinus silvestris L ; un extrait de pollen de l'espèce Dacfylis glomerata L. ; e† un extrait de pistil de l'espèce Zea mays L.

De façon alternative, la composition selon l'invention comprend : de la spiruline ou un extrait de spiruline ; un extrait de pollen de l'espèce Secale cereale L. ; un extrait de pollen de l'espèce Zea mays L ; un extrait de pollen de l'espèce Pinus silvestris L ; un extrait de pollen de l'espèce Dacfylis glomerata L. ; e† du sélénium.

De façon alternative encore, la composition selon l'invention comprend : de la spiruline ou un extrait de spiruline ; un extrait de pollen de l'espèce Secale cereale L. ; un extrait de pollen de l'espèce Zea mays L ; un extrait de pollen de l'espèce Pinus silvestris L ; un extrait de pollen de l'espèce Dacfylis glomerata L. ; e† au moins une vitamine choisie parmi la vitamine D3, B6 ef/ou E.

De façon particulièrement avantageuse, la composition selon l'invention comprend :

- de la spiruline ou un extrait de spiruline ;

- un extrait de pollen de l'espèce Secale cereale L. ;

- un extrait de pollen de l'espèce Zea mays L ;

- un extrait de pollen de l'espèce Pinus silvestris L ;

- un extrait de pollen de l'espèce Dacfylis glomerata L. ;

- un extrait de pistil de l'espèce Zea mays L ;

- du sélénium ; e†

- au moins une vitamine choisie parmi la vitamine D3, B6 ef/ou E.

De façon plus avantageuse encore, la composition selon l'invention comprend : de la spiruline ou un extrait de spiruline ; un extrait cytoplasmique de pollen de l'espèce Secale cereale L ; un extrait cytoplasmique de pollen de l'espèce Zea mays L ; un extrait cytoplasmique de pollen de l'espèce Pinus silvestris L ; un extrait cytoplasmique de pollen de l'espèce Dactylis glomerata L ; un extrait cytoplasmique de pistil de l'espèce Zea mays L ; du sélénium ; et au moins une vitamine choisie parmi la vitamine D3, B6 et/ou E.

De façon plus avantageuse encore, la composition selon l'invention comprend : de la spiruline ou un extrait de spiruline un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Secale cereale L ; un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Zea mays L ; un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Pinus silvestris L ; un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Dactylis glomerata L ; un extrait aqueux de cytoplasme de pistil de l'espèce Zea mays L ; du sélénium ; e† au moins une vitamine choisie parmi la vitamine D3, B6 et/ou E.

Selon un mode préféré, la composition selon l'invention comprend : de la spiruline ou un extrait de spiruline ; un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Secale cereale L ; un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Zea mays L ; un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Pinus silvestris L ; un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Dactylis glomerata L ; un extrait aqueux de cytoplasme de pistil de l'espèce Zea mays L ; du sélénium ; de la vitamine D3 ; de la vitamine B6 ; e† de la vitamine E.

Selon un mode particulier, la composition selon l'invention es† constituée : de spiruline ou d'un extrait de spiruline ; d'un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Secale cereale L ; d'un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Zea mays L ; d'un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Pinus silvestris L ; d'un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Dactylis glomerata L ; d'un extrait aqueux de cytoplasme de pistil de l'espèce Zea mays L ; de sélénium ; de vitamine D3 ; de vitamine B6 ; e† de vitamine E.

Selon un mode encore plus particulier, la composition selon l'invention es† constituée : de spiruline ou d'un extrait de spiruline ; de 60% à 95% en poids du poids total de l'extrait final de cytoplasme de pollen d'un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Secale cereale L, de préférence 60% à 86,5% ; de 4% à 20% en poids du poids total de l'extrait final de cytoplasme de pollen d'un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Zea mays L, de préférence 4% à 20% ; de 0,5% à 3% en poids du poids total de l'extrait final de cytoplasme de pollen d'un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Pinus silvestris L, ; de 5% à 15% en poids du poids total de G extrait final de pollen d'un extrait aqueux de cytoplasme de pollen de l'espèce Dactylis glomerata L ; de 1% à 10 % en poids du poids total de G extrait final de cytoplasme de pollen d'un extrait aqueux de cytoplasme de pistil de l'espèce Zea mays L ; de sélénium ; de vitamine D3 ; de vitamine B6 ; et de vitamine E.

Préférentiellement, la composition utilisée selon l'invention comprend, hors moyen d'encapsulation ou d'enrobage :

30% à 50% en poids du poids total de la composition de spiruline ou d'exfrai† de spiruline, préférentiellement environ 36% en poids du poids total de la composition ;

20% à 50% en poids du poids total de la composition d'extrait aqueux de cytoplasme de pollens choisis parmi l'espèce Secale cereale L, l'espèce Zea mays L, l'espèce Pinus silvestris L et/ou l'espèce Dactylis glomerata L ; préférentiellement environ 24,7% en poids du poids total de la composition ; éventuellement 4% à 20% en poids du poids total de la composition d'extrait aqueux de cytoplasme de pollen e† de pistil de l'espèce Zea mays L ; préférentiellement 4,5% en poids du poids total de la composition ; éventuellement 0,01 % à 5% en poids du poids total de la composition de sélénium ; préférentiellement 4,5% en poids du poids total de la composition ; éventuellement 0,001% à 5% en poids du poids total de la composition de vitamine D3 ; préférentiellement, 0,45% en poids du poids total de la composition ; éventuellement 0,001% à 4% en poids du poids total de la composition de vitamine B6 ; préférentiellement, 0,39% en poids du poids total de la composition ; e† éventuellement 0,01% à 5% en poids du poids total de la composition de vitamine E préférentiellement, 4,0% en poids du poids total de la composition.

De préférence, la dose journalière des extraits aqueux de pollen et/ou de pistil de la composition selon la présente invention es† comprise entre 50 mg e† 250 mg, plus préférentiellement entre 100 e† 200 mg, plus préférentiellement encore entre 1 10 e† 150 mg. Ce††e dose journalière es† préférentiellement administrée en 1 , 2 ou 3 prises (matin, midi et/ou soir) par exemple sous forme de 1 , 2, 3, 4 ou 6 gélules.

Le poids final de la gélule es† préférentiellement compris entre 300 mg e† 1000 mg. Plus préférentiellement encore, il est compris entre 375 mg et 700 mg.

De façon particulièrement avantageuse, le poids final de la gélule est de 689 mg.

Les compositions selon l'invention sont avantageusement administrées pendant une période d'au moins 10 jours en cure ou trois mois, préférentiellement six mois. Avantageusement, un tel mode d'administration va permettre de moduler au mieux l'immunité.

L'invention a également pour objet des compositions telles que décrites ci-dessus, pour leur utilisation comme médicament ou complément alimentaire.

Plus particulièrement, le Demandeur a pu mettre en évidence que les compositions selon l'invention était particulièrement adaptée à une utilisation en tant qu'immunomodulateur.

Ainsi, l'invention a également pour objet des compositions orales comprenant de la spiruline ou un extrait de spiruline et du pollen obtenu à partir de plantes appartenant aux genres Secale, Zea, Pinus et/ou Dactylis, pour leur utilisation en tant qu'immunomodulateur.

Un immunomodulateur est un produit qui permet une modification des réactions immunitaires.

Cette modification du système immunitaire de l'organisme peut être causée par des agents qui activent ou suppriment sa fonction.

L'expression immunomodulation selon l'invention englobe toutes les interventions thérapeutiques visant à modifier la réponse immunitaire. L'augmentation de la réponse immunitaire est notamment souhaitable pour prévenir les infections dans les états d'immunodéficience, pour combattre les infections établies et pour lutter contre le cancer.

Dans les cas d'allergie, d'auto-immunité et de transplantation d'organes, l'objectif est d'affaiblir la réponse immunitaire. Certaines allergies peuvent être traitées par une désensibilisation spécifique. Dans les cas d'auto-immunité et de transplantation, on utilise souvent des médicaments qui atténuent toutes les réponses immunitaires.

L'immunité désigne la capacité de l'organisme à se défendre contre des substances étrangères ; tel que des microorganismes pathogènes ou encore les cellules cancéreuses ; par le déclenchement d'une réaction immunitaire.

Lorsqu'un corps étranger se retrouve dans l'organisme, il y aura déclenchement du système immunitaire qui se traduit par la production de messagers tel que les interleukines et les cytokines.

Comme il ressort des exemples, le Demandeur a pu mettre en évidence qu'une synergie entre la spiruline et l'extrait de pollen, de préférence choisi parmi les espèces Secale cereale L. (seigle), Zea mays L. (maïs), Pinus silvestris L. (pin), Dactylis glomerata L. (dactyle), ou un mélange de ces derniers ; a été identifiée sur un test in vitro. En effet, cette association permet une forte libération de cytokines (IL-1 beta, TNF alpha, IL-6, MCP-1 , IL-8 et PGE-2) et donc un boost du système immunitaire.

De préférence, les compositions selon l'invention sont utilisées pour le traitement et/ou la prévention d'infections bactériennes, fongiques et/ou virales.

Selon l'invention, le terme « traitement » désigne une amélioration, une prophylaxie ou un renversement d'une maladie ou d'un trouble, ou d'au moins un symptôme discernable de celui- ci. Il s'agit également d'une amélioration, d'une prophylaxie ou d'un renversement d'au moins un paramètre physique mesurable lié à la maladie ou au trouble traité, ce qui n'est pas nécessairement perceptible par le sujet. Dans un autre mode de réalisation, le terme « traitement » désigne l'inhibition ou le ralentissement de la progression d'une maladie ou d'un trouble, soit physiquement, par exemple, la stabilisation d'un symptôme discernable, physiologiquement, par exemple, la stabilisation d'un paramètre physique, ou les deux. Le terme « traitement » désigne également le retard de l'apparition d'une maladie ou d'un trouble. Dans certains modes de réalisation particuliers de l'invention, les compositions d'intérêt sont administrées en tant que mesure préventive. Dans ce contexte, le terme « prévention » désigne une réduction du risque d'acquisition d'une maladie ou d'un trouble spécifié.

Plus particulièrement, le Demandeur a pu mettre en évidence que les compositions selon l'invention son† particulièrement efficaces pour le traitement et/ou la prévention d'infections virales telles que la grippe H 1 N 1 ou des infections au SARS, e† de toutes leurs variantes comme le SARS-Cov2/Covid-l 9/Coronavirus.

La grippe A (Hl Nl)v de 2009 es† une maladie respiratoire aiguë contagieuse provoquée par un virus de la grippe A de sous-type H 1 N 1. Ce nouveau virus grippal, contient des gènes de plusieurs virus connus d'origine porcine, aviaire e† humaine. Il es† différent du virus A ( H 1 N 1 ) responsable de la grippe saisonnière, d'origine humaine. Il existe un grand nombre de variantes de la grippe A tel que notamment : H1 N1, H1 N2, H1 N8, H2N2, H2N3, H3N1, H3N2, H3N3, H3N8, H4N1 , H5N1, H5N2, H5N3, H5N6, H5N8, H5N9, H7, H7N1, H7N2, H7N3, H7N7, H7N9, H9N2, H10N7, H10N8, H1 1 N2, H11 N9, H17N10, H18N11.

Le SARS-CoV-2 es† un virus du genre des betacoronavirus. Il s'agi† d'un virus à ARN positif possédant le plus grand des génomes des virus à ARN. Il possède une forme sphérique qui es† pléiomorphique, sa morphologie pouvant varier en fonction des conditions environnementales dans lesquelles il se développe. Le génome de ce virus code pour quatre protéines structurales nécessaires à la formation d'une particule virale complète, à savoir la protéine S (Spike), la protéine M (Membrane), la protéine N (Nucléocapside) e† la protéine E (Enveloppe).

Le SARS-CoV-2 peu† engendrer l'apparition de symptômes variés, allant de la fièvre ou la toux, à la détresse respiratoire (Syndrome de détresse respiratoire SDRA), l'insuffisance rénale voire le décès des individus infectés.

La protéine Spike, également appelée protéine S ou protéine de pointe, es† une protéine virale présente à la surface du SARS-CoV-2. Ce dernier peu† infecter les cellules épithéliales respiratoires humaines par l'interaction entre la protéine Spike e† la protéine humaine ACE2. Spike es† une glycoprotéine produite en grande quantité recouvrant la surface du virus permettant ainsi la pénétration dans les cellules humaines. La protéine Spike es† une protéine trimérique transmembranaire de 180-200 kDa. Elle possède un domaine N-†erminal extracellulaire e† un petit domaine C-terminal intracellulaire. D'une longueur de 1273 acides aminés, elle es† composée de deux sous-unités, à savoir SI e† S2. La sous-unité SI comprend un domaine de liaison au récepteur appelé RBD (Receptor Binding Domain), qui permet la reconnaissance e† la liaison avec la protéine ACE2, un récepteur de surface cellulaire de l'hôte. La sous-unité S2 correspond quan† à elle à la "tige" de la structure e† contient d'autres éléments de base nécessaires à la fusion membranaire. Elle es† également composée d'un domaine transmembranaire, d'un peptide de fusion, de deux séquences HR1 e† HR2 (Hepfapepfide Repea† sequence) e† d'un domaine cytoplasmique. Grâce à ses deux sous-unifés, la protéine Spike possède un rôle de médiateur dans la liaison au récepteur e† la fusion membranaire. En effet, lorsque le domaine RBD se lie à ACE2, un changement de conformation de la sous-unifé S2 a lieu, aboutissant à l'ancrage du peptide fusion sur la cellule hôte. Les domaines HR1 et HR2 du trimère von† former le 6-HB (six-Helical Bundle) par de multiples interactions permettant le rapprochement de la membrane virale de celle de l'hôte pour aboutir à la fusion membranaire. L'enzyme de conversion de l'angiotensine 2 (ACE2) es† un récepteur cellulaire homologue de l'enzyme de conversion de l'angiotensine (ACE). Ce récepteur es† exprimé au niveau des cellules épithéliales alvéolaires des poumons, du cœur ou encore des reins. Par son implication dans le système rénine/angiotensine/aldostérone, il occupe une place prépondérante dans les fonctions cardiovasculaires e† rénales. ACE e† ACE 2 on† des effets antagonistes. Plus précisément, l'activation du récepteur ACE2 es† impliquée dans les mécanismes de vasodilatation tandis qu' ACE entraîne la vasoconstriction. Ainsi, l'équilibre entre les phénomènes d'activation e† d'inactivation de ces deux récepteurs es† essentiel au maintien de l'homéostasie vasculaire. À l'état physiologique, ACE2 permet donc de lutter contre la vasoconstriction excessive des vaisseaux de l'organisme. Lors de l'infection par le SARS-CoV-2, le virus se fixe sur la protéine ACE2 afin de pouvoir infecter les cellules pulmonaires de l'hôte, e† plus particulièrement les pneumocytes de type II. L'équilibre entre les effets médiés par les protéines ACE e† ACE 2 es† alors décalé en faveur de ceux médiés par ACE, caractérisé par une augmentation de la vasoconstriction, responsable d'une grande diversité de dysfonctionnements chez les patients infectés par le SARS-CoV-2. En effet, ce††e anomalie du système rénine/angiotensine es† liée à différentes pathologies cardio-pulmonaires, comme le choc cytokinique responsable de l'inflammation aiguë des poumons. De plus, chez des patients hypertendus souffrant préalablement d'obésité ou de diabète, le déséquilibre accentué par l'infection du SARS-CoV-2 semble conduire au développement des formes les plus graves en créant des lésions additionnelles (fibrose pulmonaire, lésions cardiovasculaires, etc.).

Le bu† es† bien entendu d'empêcher l'interaction entre Spike e† ACE2 par des anticorps, produits par l'organisme lors de l'activation du système immunitaire, neutralisant ainsi la protéine Spike.

SARS-Cov2 présente une multitude de variants : « nigérian » B.1 .1 .207, « britannique » VOC- 202012 /01 , « danois », « sud-africain » 501.V2, « brésilien » ou « japonais » B.1.1.248, souche « espagnole » 20A EU.1 , « californien » CAL.20C, « new-yorkais » B.1 .526.

Selon un mode particulier de réalisation, l'invention a également pour objet des compositions tels que décrites ci-dessus utilisées pour le traitement et/ou la prévention d'un déficit immunitaire, d'immunodéficience (IMD) ou encore d'immunodépression qui es† une situation pathologique liée à l'insuffisance d'une ou de plusieurs fonctions immunologiques.

Un autre objet de la présente invention concerne un complément alimentaire comprenant la composition telle que décrite ci-dessus e† utilisée selon l'invention.

En effet, les pollens ou les préparations de pollen son† généralement consommés comme un complément alimentaire. Ils peuvent être pris dans leur forme rudimentaire, qui son† les pollens en tan† que tels, comme poudre sous forme libre ou encapsulée.

La composition selon l'invention comprend également un milieu physiologiquement acceptable proportionné à un rapport avanfage/risque raisonnable, comprenant des excipients connus e† couramment utilisés en phytothérapie tels que des liants, agents de désintégration, agents de charge, agents de dispersion, agents agglomérants, lubrifiants, agents mouillants, fensioacfifs, émulsifiants, épaississants, agents de coulance, agents aromatisants, agents édulcorants, colorants, agents de pelliculage, stabilisants ef/ou conservateurs.

L'homme du méfier veillera à choisir ces éventuels excipients e† leur quantité de manière à ce qu'ils ne nuisent pas aux propriétés intéressantes des compositions utilisées selon l'invention.

A fifre d'exemple d'excipients, on peu† citer notamment la cellulose, préférentiellement la cellulose microcristalline, le dioxyde de silicium.

Généralement, les compositions selon l'invention peuvent être obtenues par mélange des différents ingrédients (notamment pollens e† pistils) obtenus séparément par des procédés d'extraction, qui peuvent être identiques ou différents. Ainsi, la composition selon l'invention peu† par exemple comprendre de la spiruline, un premier extrait de pollen e† de pistil combiné avec un second extrait de pollen. Avantageusement, le premier extrait de pollen e† de pistil es† un extrait combiné de cytoplasme purifié de pollen e† de pistil, contenant une activité élevée d'une enzyme antioxydante, la superoxyde dismutase (SOD). Le second extrait de pollen es† un extrait cytoplasmique purifié de pollen pur. Le pollen e† les pistils son† sélectionnés e† récoltés, séparément e† de manière standardisée, parmi les membres de la famille des poacées. La culture e† la récolte des espèces définies son† effectuées dans des champs séparés sous un contrôle-qualité dûment établi conformément aux Bonnes Pratiques Agricoles applicables aux plantes médicinales. Le pollen es† sélectionné pour la préparation du second extrait de pollen, tandis que les pollens e† pistils sélectionnés son† mélangés d'une manière standardisée pour produire la formulation du premier extrait. Au cours du processus d'extraction, mis en oeuvre conformément aux Bonnes Pratiques de Fabrication, le pollen e† les pistils son† traités avec des enzymes pour obtenir l'ouverture germinative. L'extrait es† ensuite récupéré par filtration, laissant de côté les enveloppes des grains de pollen qui peuvent être allergisantes. L'extrait es† défini par chromatographie liquide haute performance (HPLC) e† chromatographie en phase gazeuse (GC) pour garantir la quantité des principes actifs. L'extrait es† mélangé dans une formule standardisée. Ce††e procédure de standardisation donne par exemple des comprimés qui contiennent, en plus de la spiruline, 100-140 mg du premier extrait de pollen e† de pistil e† 20- 60 mg du second extrait de pollen. Préférentiellement, la quantité d'extrait de pollen e† de pistil dans la composition finale es† de 136 mg.

L'invention a donc aussi pour objet un procédé de préparation d'un extrait de pollen e† de pistil de plan†e(s) appartenant préférentiellement à la famille des pinacées et/ou des poacées comprenant les étapes suivantes de : a. extraction aqueuse de cytoplasme de pollen e† éventuellement de pistil ; b. séchage par atomisation du ou des extraits aqueux ainsi obtenus ; c. récupérations desdits extraits aqueux et mélange avec de la spiruline ou un extrait de spiruline et éventuellement du sélénium et/ou des vitamines ; et d. récupération de la composition ainsi obtenue.

Le Demandeur a pu mettre en évidence que l'étape d'extraction aqueuse de cytoplasme était particulièrement sensible. Ainsi, la température de l'extraction doit être strictement inférieure à 45°C. Au-delà de cette température, un ou plusieurs pollens e† pistils détaillés ci-dessus ne son† plus présents (absence de marqueurs spécifiques). La qualité de la composition et/ou son efficacité ne son† donc pas assurées.

Préférentiellement, la température de l'extraction doit être inférieure à 42°C.

La durée de l'étape d'extraction, pour chacun des extraits, es† préférentiellement d'au moins 6h, préférentiellement au moins lOh, plus préférentiellement encore au moins 12h.

De plus, le Demandeur a pu mettre en évidence qu'une séparation dans des conditions trop soutenues dégradai† le ou les extraits. Ainsi, lorsque l'extraction es† couplée à une séparation, celle-ci ne doit pas dépasser les 6000 tours par minute (tr/min), préférentiellement 4500 †r/min, plus préférentiellement encore 2800 †r/min.

Le procédé ainsi développé permet de garantir une bonne traçabilité des pollens e† éventuellement des pistils utilisés. En effet, le Demandeur a pu mettre en évidence que les extraits fabriqués selon les procédés de l'art antérieur ne permettent pas de retrouver la présence d'un ou plusieurs marqueurs des pollens e† pistils e† donc, de facto, de la présence de l'ensemble des extraits de pollens et/ou de pistils dans la composition.

Les compositions de l'art antérieur ne son† donc pas homogènes e† ne contiennent pas, dans la composition finale, l'ensemble des extraits de pollens et/ou de pistils attendus.

Le procédé objet de l'invention comprend avantageusement des étapes additionnelles de séparation, de filtration et/ou d'évaporation permettant d'augmenter la concentration de G extrait final ou d'optimiser la préparation dudi† extrait.

Le procédé objet de l'invention présente par ailleurs les avantages suivants : il permet une standardisation ; il présente une excellente reproductibilité ; il permet une réduction des coûts en optimisant e† limitant le nombre d'opérations de l'outil industriel.

Il permet également de pouvoir tracer la présence des extraits dans la composition selon l'invention e† ainsi assurer sa qualité e† par là même son efficacité.

Parmi les avantages permettant de réduire les manipulations e† les coûts, on peu† citer : une planification simplifiée ; une occupation des équipements optimisés ; des temps improductifs réduits (nettoyage, changement de lot, nombre de validations, etc.) ; une gestion du nombre de référence limitée ; une diminution des opérations à risque (nettoyage, pesées, procédures de travail, coûts réduits en validation, stabilité, formulation du comprimé simplifiée, risque microbiologique, traçabilité, etc.). Le Demandeur a pu mettre en évidence que la production d'une composition à partir d'extraits de plantes requiert souvent des étapes de production spécifiques telles que par exemple le séchage par atomisation, la granulation. Ces étapes peuvent avoir un impact sur la composition finale e† ses constituants telles que les protéines. Certaines protéines qui son† présentes dans la matière végétale brute son† susceptibles, à cause de la nature spécifique du procédé de fabrication (typiquement le séchage par atomisation), de perdre leur activité ou d'être perdues. Le Demandeur a notamment pu mettre en évidence que l'utilisation d'un procédé de séchage par atomisation optimisé (différence de température de 50°C entre la température d'entrée e† celle de sortie) évitai† la dénaturation de protéines cibles concernées. Le Demandeur a également trouvé que la présence dans la composition finale d'au moins une de ces protéines ou peptides dérivés depuis ces protéines cibles permet d'assurer la qualité de la composition. Les extraits utilisés dans la composition son† ainsi optimaux e† de qualité pharmaceutique, l'activité de la composition n'étan† pas altérée. Par ailleurs, en fournissant un contrôle qualité adéquat, une meilleure uniformité du contenu peu† être assurée, ce qui es† important quand on traite des patients pour des symptômes spécifiques et/ou des inconforts.

De plus, la composition es† fortement reproductible entre différents lots (en termes de qualité e† d'ingrédients présents), ce qui permet un contrôle qualité, une standardisation, une traçabilité des lots, e† un profilage de protéines reproductibles. Elle es† ainsi en conformité avec les bonnes pratiques de fabrication des produits pharmaceutiques e† des compléments alimentaires sur le marché (produits botaniques de qualité pharmaceutique). Ce††e reproductibilité donne également la garantie que chaque nouveau lot d'extrait de pollen et/ou de pistil satisfait aux spécifications établies e† de ce fai† à la même activité physiologique que les lots utilisés pour les études cliniques. Le procédé de fabrication permet d'obtenir le composé bénéfique recherché.

La présente invention concerne également des compositions orales qui comprennent au moins de la spiruline e† un composant dérivé d'extrait de pollen et/ou des pistils de plan†e(s) appartenant à la famille des pinacées et/ou des poacées e† dans lesquelles la présence d'un ou plusieurs marqueurs de protéines es† détectable, selon lesquelles ces marqueurs de protéines son† une bonne indication de la qualité de la composition finale. Ces marqueurs peuvent être également utilisés pour la standardisation des compositions.

Lesdits marqueurs ou traceurs son† avantageusement des protéines ou des peptides dérivés de protéines, lesdites protéines étant choisies parmi le groupe de l'oxydase de réticuline, de l'endochitinase A, de la bêta-l ,3-glucanase, de l'exopolygalacturonase, de la protéine de transfert lipidique non spécifique ou de toute combinaison de ces dernières.

Selon l'invention, la présence de marqueurs spécifiques de protéines ou de peptides provenant de ces protéines (marqueurs) peu† être confirmée dans la composition finale, lesdits marqueurs étant révélateurs de la qualité de la composition e† peuvent donc être utilisés pour la standardisation e† le contrôle qualité.

En effet, le Demandeur a pu mettre en évidence que la présence de certains traceurs ou marqueurs (protéine ou peptide dérivé de ladite protéine) permettaient de confirmer la présence de certains extraits de pollen et/ou de pistil dans la composition finale. Comme il ressort de la figure 2, le Demandeur a pu mettre en évidence que l'effet synergique de G extrait de cytoplasme de pollen et de la spiruline es† dose dépendante. Plus la dose de la composition A ou B es† élevée, plus G effet synergique augmente e† permet une meilleure activation des cytokines.

La présente invention va maintenant être illustrée au moyen des exemples suivants : Exemple 1 : Composition selon l'invention Composition A :

Forme galénique : Capsule

Poids de la gélule : environ 689 mg tou† compris, soi† 550 mg sans l'enveloppe ;

Les pourcentages ci-dessous son† donnés en poids du poids total de la composition hors moyen d'encapsulation ou d'enrobage :

Spiruline : environ 36% en poids du poids total de la composition ;

Extrait aqueux de pollen qui es† ici du cytoplasme de pollen : environ 25% en poids du poids total de la composition ;

Excipients : environ 39% en poids du poids total de la composition.

Tableau 1 : Ingrédients de l'exfrai† aqueux de pollen exprimés en poids du poids total de l'exfrai† final de pollen (cytoplasme de pollen) :

D'autres ingrédients dans le produit final son† par exemple : la cellulose microcristalline, la fécule de pomme de terre, le stéarate de magnésium. La gélule végétale es† à base de HPMC : hydroxypropylmethylcellulose. La dose quotidienne recommandée es† de 1 gélule par jour, à prendre le matin ou le soir.

L'exfrai† de pollen (cytoplasme de pollen) de la gélule ci-dessus a été obtenu en utilisant un procédé classique de préparation des extraits de pollen ef/ou de pistil.

Exemple 2 : Composition selon l'invention

Composition B

Forme galénique : Capsule

Poids de la gélule : environ 689 mg fou† compris, 550 mg sans l'enveloppe.

Les pourcentages ci-dessous son† donnés en poids du poids total de la composition hors moyen d'encapsulation ou d'enrobage :

Spiruline : environ 36% en poids du poids total de la composition ;

Extrait aqueux de pollen qui es† ici du cytoplasme de pollen : environ 25% en poids du poids total de la composition ;

Sélénium : environ 4,5% en poids du poids total de la composition ;

Vitamine D : environ 0,5% en poids du poids total de la composition ;

Vitamine B6 : environ 0,4% en poids du poids total de la composition ; Vitamine E : environ 4,0% en poids du poids total de la composition ;

Excipients : environ 29,4% en poids du poids total de la composition.

Tableau 2 : Ingrédients de l'extrait exprimés en poids du poids total de l'extrait final de pollen (cytoplasme de pollen) :

D'autres ingrédients dans le produit final son† par exemple : la cellulose microcristalline, la fécule de pomme de terre, le stéarate de magnésium. La gélule végétale es† à base de HPMC : hydroxypropylmethylcellulose. La dose quotidienne recommandée es† d'une gélule par jour, à prendre le matin ou le soir.

L'extrait de pollen (cytoplasme de pollen) de la gélule ci-dessus a été obtenu en utilisant un procédé classique de préparation des extraits de pollen et/ou de pistil.

Exemple 3 : Mode opératoire utilisé pour la génération des résultats permettant d'étudier l'effet de la composition A dans la production de cytokines

Cultures de cellules de monocytes : Les monocytes primaires humains on† été préparés à partir de la couche leuco-plaque††aire de donneurs de sang humains sains selon une procédure standardisée.

Traitement des cellules monocytes e† tes† ALAMARBLUE® : Les cellules on† été ensemencées dans des plaques de 96 puits à une densité de 220000 cellules/puifs pour les mesures de viabilité. Les éléments du tes† on† été dissous dans des milieux de culture cellulaire. 1 mI de la solution mère ou des dilutions on† été ajoutés par puits (100 mI). Les monocytes on† été ensemencés dans 96 puits e† incubés avec : NaF (250 mr/itiI), un contrôle positif, un contrôle de milieu e† des concentrations croissantes des éléments à tester. Après 24 heures d'incubation, 10 mI d'ALAMARBLUE® (Biosource, USA) on† été ajoutés à chaque puits. Après 2 heures, la fluorescence a été mesurée avec un specfrophofomèfre de fluorescence en utilisant des réglages de filtre 544EX nm /590EM nm. La quantité de fluorescence es† proportionnelle au nombre de cellules vivantes e† correspond à l'activité métabolique des cellules. Les cellules endommagées e† non viables on† une activité métabolique innée plus faible e† génèrent donc un signal proportionnellement plus faible que les cellules saines. Le principe actif d'ALAMARBLUE® (resazurine) es† un composé perméable aux cellules, non toxique, de couleur bleue e† pratiquement non fluorescent. Lorsqu'elle pénètre dans les cellules, la resazurine es† réduite en résorufine, qui produit une fluorescence rouge très vive. Les cellules viables convertissent continuellement la resazurine en résorufine, générant ainsi une mesure quantitative de la viabilité e† de la cytotoxicité.

Immunomodulation dans les monocytes humains : Comme il ressort de la figure 1, les monocytes primaires humains on† été isolés à partir de la couche leucocytaire de trois donneurs de sang humains sains. Les cellules on† été ensemencées dans des plaques de 24 puits à une densité de 2200000 cellules/puits pour les mesures ELISA. Les monocytes on† été incubés avec les éléments à tester (5 concentrations différentes) pendant 24 h. Le LPS (10 ng/ml, Salmonella fyphimurium SL1181) a servi de témoin positif pour la libération de cytokines. Après 24 h, les surnageants on† été retirés, centrifugés e† étudiés pour les concentrations en IL-16, MCP-1, IL-6, TNF e† IL-8 par ELISA en utilisant le protocole du fabricant (n=6, 3 donneurs différents).

Les concentrations testées des ingrédients individuels se réfèrent aux concentrations dans la composition B, c'est-à-dire :

- 200 mg Spiruline (36%)

- 136 mg d'extrait de pollen (25%)

- 25 mg Sélénium (4,5%)

- 2,5 mg Vitamine D3 (0,5%)

- 2,15 mg Vitamine B6 (0,4%).

Exemple 4 : Effet de la composition A selon l'invention sur la production de cytokines

Comme il ressort de la figure 2, l'administration de la composition A induit la libération d'IL- 16, TNFa, IL-8, MCP-1 e† PGE2 dans les monocytes humains, qui commence à partir de la concentration de >10 pg/ml étant maximal à la dose testée de lOOMg/ml.

L'induction es† dépendante de la dose de la composition.

IL-I b es† une interleukine sécrétée par les macrophages, elle a un rôle pro-inflamma†oire. La libération d'IL-16 a été induite à partir de 10 pg/ml jusqu'à lOOMg/ml. Entre 50 pg/ml e† 100Mg/ml, le pourcentage d'activation passe de 25% à 100%.

TNFa (Tumor Necrosis Factor) es† une cytokine impliquée dans l'inflammation. La libération de TNFa a été induite à partir de 50 pg/ml jusqu'à 100 pg/ml. Entre 50 pg/ml e† 100 pg/ml, le pourcentage d'activation passe de 20% à 40%.

IL-6 es† une interleukine sécrétée par les macrophages, les lymphocyte T e† les cellules endothéliales. Elle permet la synthèse des protéines de la phase aiguë e† la prolifération des cellules productrices d'anticorps. La libération de l'IL-6 a été induite à partir de 50 pg/ml jusqu'à lOOMg/ml. Entre 50 pg/ml e† 100 pg/ml, le pourcentage d'activation passe de 40% à 55%.

IL-8 es† une interleukine produite par les cellules épithéliales à la suite de la détection d'agents microbiologiques ou chimiques potentiellement pathogènes. La libération d' IL-8 a été induite à partir de 50 g/ml jusqu'à lOOMg/ml. Entre 50 g/ml e† 100 g/ml, le pourcentage d ' activation passe de 150% à 210%.

MCP-1 (Monocyte Chemoa††rac†an† protein 1) es† une cytokine de type chimiokine, elle a donc un pouvoir attractif sur certaines cellules immunitaires. La libération de MCP-1 a été induite à partir de 0.1 g/ml jusqu'à lOOMg/ml. Entre 50 g/ml e† 100 g/ml, le pourcentage d'activation passe de 60% à 190%.

PGE2 (Prostaglandine E2) es† un acide gras de la classe des prostaglandines, jouant un rôle important dans l'inflammation. La libération de PGE2 a été induite à partir de de 0.1 g/ml jusqu'à lOOMg/ml. Entre 50 g/ml e† 100 g/ml, le pourcentage d'activation passe de 60% à 145%.

On peu† donc dire que la composition A permet d'induire la production de plusieurs cytokines pro-inflamma†oires et attractrices des cellules immunitaires. Celle-ci a donc la capacité d'activer le système immunitaire et de le booster.

De tels résultats, non illustrés, ont également été observés en utilisant la composition B telle que décrite à l'exemple 2.

Exemple 5 : Synerqie entre les extraits de pollen (cytoplasme de pollen) et la soiruline

L'effet de la composition A es† plus important que les effets des ingrédients individuels spiruline e† extrait de pollen (cytoplasme de pollen) _ :

IL-1 B : comme il ressort de la figure 3, la spiruline (55 Mg/ml) induit une libération de 200 pg/ml d'IL-l B. L'extrait de pollen (37 Mg/ml) induit une libération de 1 000 pg/ml d'IL-l B. La composition A (100 Mg/ml) induit une libération de 5000 pg/ml d'IL-l 6.

TNFa : comme il ressort de la figure 4, la spiruline (55 Mg/ml) induit une libération de 10 000 pg/ml de TNFa. L'extrait de pollen (37 Mg/ml) induit une libération de 10 000 pg/ml de TNFa. La composition A (100 Mg/ml) induit une libération de 45000 pg/ml de TNFa.

IL-6 : comme il ressort de la figure 5, la spiruline (55 Mg/ml) induit une libération de 12 000 pg/ml I d'IL-6. L'extrait de pollen (37 Mg/ml) induit une libération de 25 000 pg/ml d'IL-6. La composition A (100 Mg/ml) induit une libération de 47000 pg/ml d'IL-6.

MCP-1 : comme il ressort de la figure 6, la spiruline (55 Mg/ml) induit une libération de 3 100 pg/ml de MCP-1. L'extrait de pollen (37 Mg/ml) induit une libération de 3 200 pg/ml de MCP-1. La composition A (100 Mg/ml) induit une libération de 6000 pg/ml de MCP-1.

IL-8 : comme il ressort de la figure 7, la spiruline (55 Mg/ml) induit une libération de 15 000 pg/ml d'IL-8. L'extrait de pollen (37 Mg/ml) induit une libération de 25 000 pg/ml d'IL-8. La composition A (100 Mg/ml) induit une libération de 47000 pg/ml d'IL-8.

PGE-2 : comme il ressort de la figure 8, la spiruline (55 Mg/ml) induit une libération de 2 000 pg/ml de PGE-2. L'extrait de pollen (37 Mg/ml) induit une libération de 9 500 pg/ml de PGE-2. La composition A (100 Mg/ml) induit une libération de 15500 pg/ml PGE-2.

On peu† dire que les effets de la composition A son† encore plus forts que la somme des effets de la spiruline e† de l'extrait de pollen (cytoplasme de pollen), ce qui indique des activités synergiques possibles des ingrédients en ce qui concerne l'immunomodulation. Ni le sélénium, ni la vitamine B6, ni la vitamine D3 n'on† eu d'effet sur la libération basale de cytokines dans les monocytes humains jusqu'à la plus forte concentration étudiée (0,68 Mg/ml e† 0,59 Mg/ml respectivement).

De tels résultats, non illustrés, on† également été observés en utilisant la composition B telle que décrite à l'exemple 2.

Exemple 6 : Examen des effets de la composition A sur l'interaction ACE2 : SARS-CoV-2

Méthode : La composition A été préparée dans du PBS/DMSO à 5x les solutions mères (conc. finale DMSO 0,1%). L'interaction ACE2 : SARS-CoV-2 Spike (RBD) a été testée selon les instructions du fournisseur (BPS Bioscience, USA). Comme contrôle positif, l'anticorps neutralisant le Spike SI (BPS Bioscience 100793) a été inclus dans le tes† (50 nM e† 100 nM). Après l'incubation, la chimiluminescence a été immédiatement lue (temps de mesure de la luminescence : 0,1 s, Victor X5, Perkin Elmer, USA).

Tableau 3 : Résultats du tes† de criblage de l'inhibiteur ACE2 : Spike SI e† l'effet inhibiteur de la composition A.

Les données du tableau représentent la moyenne n=4 ± SD (la liaison de contrôle a été fixée à 100%

Le tableau 3 ci-dessus représente le pourcentage de liaison entre ACE2 e† Spike en fonction de la présence d'anticorps anfi-Spike et de la composition A.

Le contrôle permet de dire qu'il y a bien une liaison qui se forme entre Spike et ACE2 à 100% ± 8.0%.

Comme il ressort de la figure 9 :

100 nM d'anticorps anfi-Spike permettent d'inhiber la liaison de Spike RBD à la protéine ACE2 à 90% ± 3.3%.

10 nM d'anticorps anfi-Spike permettent d'inhiber la liaison de Spike RBD à la protéine ACE2 à 70% ± 5.3%.

La composition A permet une réduction de la liaison Spike RBD à la protéine ACE2 de 40% ± 10.4% à 100 Mg/rnl et de 10% ± 8.5% à 50 g/ml. On peu† donc en conclure que la composition A es† efficace e† représente une bonne alternative pour diminuer la liaison du Spike RBD à la protéine ACE2.

De tels résultats, non illustrés, on† également été observés en utilisant la composition B telle que décrite à l'exemple 2.