本发明涉及一种高纯度^效率盐酸万古霉素的� �业制备新方法。 具体地说， ¾方法首先通过东方拟无枝酸 iAmyco!atopsis Oriertcilis ) 在含有碳源、 氮源和无 机盐的培养基及适当的发酵条件下发酵， 得到含力 '古霉索发酵液， 经过系列纯化 后得到浓度大于 20% ( W/W ) 的盐酸力'古霉素超浓缩液， 此浓缩液在高温下短时 间内将溶剂蒸发， 可得到低杂质的盐酸万古霉素非无菌或无菌原 料药， 该无菌原 料药可以直接分装成注射用的粉针制剂供病人 使用。 背景技术

盐酸力 '古霉素是东方诺卡氏菌在控制发酵条件下产� �的一种两性糖肽类抗生 素， 其化学式为 C ₆₆ H ₇₅ C ₁₂ N ₉ 0 ₂₄ _HC1， 分子量为 1 .486。 已知盐酸力'古？ f素与黏肽 的^质末端 D-Ala-D-Ala结合， 抑制细菌细胞壁的合成。 此外， 盐酸 古霉素还可 以改变细胞膜的渗透性和 RNA的合成。盐酸万古霉素特别用于山抗 β-乳胺抗生素 的葡萄球菌引起的严重或重症感染的初歩治疗 ， 也用于治疗对吉霉素过敏或使用 青霉素和头孢菌素没有效果的患者。 商业销售的盐酸力"古霉素有口服 （溶液和胶 囊 /子弹型胶囊） 和注射 （小瓶的消毒静脉溶液） 形式。

盐酸万古霉素单独使用或与其它氨基葡糖苷结 合使用可以治疗山葡萄球菌、 链球菌、 肠球菌或 喉杆菌引起的心内膜炎。 只有在注射盐酸 古霉素对葡萄球 菌引起的小肠结肠炎没有效果的情况下， 才允许口服盐酸力 -古霉素。 只有注射用 盐酸万古霉素适用于其它所有的适应症。

力'古霉素分子 tfa两个基本结构组成，即糖基部分 a-o-vancosamine-p-o-glucosyl 和肽基部分中心七肽核， 其结构决定了它的不稳定性， 力'古霉素分子在酸碱或高 温条件下会降解产生降解产物， -般来说， 降解产物没有生物活性甚至会产生副 作用， 因为， 降低产品的相关物质， 提 ¾最终产品的纯度可¾加用药的安全性。 万古霉素在酸性条件和高温条件下会发生水解 ， 脱去一个糖基或二个糖基生成单 糖力古霉素或无糖力古霉素 ( desvancosaminyl vancomycin and aglucovancomycin )， 在弱酸环境下， 也可能脱去一个酰胺基降解成去氨基 古霉素， 它有两个异构体， 它们的结构式如下脱氨基力'占霉素 （杂质 B2 ) 的结构式 1 和 2 所示： ( Desamidovancomycin )。 脱氨基力'古霉素的形成机理已有报道 [ Alireza

Ghassempour , Vancomycin degradation products as potential chiral selectors in enantiomeric separation of racemic compounds, Journal of Chromatography A, 1 191 (2008) 182-187],参见如下脱氨基万古霉素的反应路径， 万古霉素分子中琥珀酰亚 胺发生水解 "古 素。

脱氨基万古霉素 （杂质 B2 ) 的结构式 1

esam ovancomycin 2

脱氨基力'古霄素 （杂质 B2 ) 的结构式 2

脱氨基力'古霉素的反应路径

工业化制备盐酸力'古^素的方法已有很多先 文献报道， US3067099 是 先 揭示盐酸万古霉素用于治疗感染的专利， 它是微生物发酵过程中产业的次级代谢 产物， 发酵过程中会同时产生多种副产物， 其中有药物活性且副作用低的是万占 霉素 B。

另有多种从发酵中分离纯化得到盐酸力'古^素� ��工艺被披露出来， 按照 US4.440J53所示的方法分离产品， 然后将其从含有水混合非溶剂如异闪醇、 乙醇 或丙酮的纯化发酵培养基中沉淀出来； 以铜盐的形式分离产品如美国专利 4,868,285所述； 过滤收集形成的咪唑 /万古霉素复合物， 如美国专利 4.868,285所 示。 在分离过程中无论利用铜盐还是利用咪唑 /力'古霉素复合物， 其随后分解物都 会使产品污染。 而利用异丙醇、 乙醇或丙酮分离力"古霉素会导致万古霉素呈� �溶 浆状而非常难以过滤。

US5853720揭示盐酸力'古霉素发酵液经微滤过滤� �， 经大孔树脂吸附， 洗脱， 浓缩脱盐后，再用活性炭脱色等工艺歩骤后得 到浓度为 100g/L， pH为 3的浓缩液， 此浓缩液可用冻干、 喷雾干燥或沉淀的方法得到盐酸力.古霉素固� �， 使用喷雾 干燥时， 空气进口温度为 1 15-130°C， 空气出口温度为 85±5 °C， 将盐酸力'古霉素中 的水分控制在 4%左右， 然后进一歩在真空转鼓 45-50'C干燥得到 S终千的盐酸力- 古霉素。 此专利中提到的盐酸万古霉素溶液色 ii!纯度为 93%左右， {H.没有提到烘 干后产品的色谱纯度和杂质情况， 业内有经验技术人员可以想象， 经过高温喷雾 干燥和中温真空干燥， 色 i f纯度会有较大幅度的下降， 杂质明显升高， 产品颜色 也会加深， 这种干燥方式明显会影响到最终产品的质—S� �。 美国专利 7018804提供了 种制备高含 fi盐酸万古霉素的方法， 发酵液先通 过强酸性离子交换树脂， 再经弱碱性离子交换树脂和氧化铝柱纯化， 最后经疏水 性树脂层析得到按欧洲药典 HPLC检测纯度不小于 95%的盐酸力 ^_ 古霉素浓缩液， 浓缩液用 5 倍体积的丙酮沉淀结品， 真空条件烘千 ( 40°C ) 得到盐酸万古霄素。 这种干燥方式同样会引起杂质水平升高而色谱 纯度下降。 同时还有一个问题， 这 种烘干方式不能较好地去除残留溶剂， 使其达到 ICH对药品残留溶液的要求， M. NIETO AND H. R. PERKINS [M. NIETO AND H. R. PERKINS, Physicochemical Properties of Vancomycin and lodovancomycin and their Complexes with Diacetyl-L-lysyl-D-alanyl-D-alanine, Biochem. J. (1971 ) 123. 773-787] 研究结果表明 盐酸万古霉素在水溶液下可形成胶束， 胶束的形成与很多因素相关， 包括酚离子 化程度、 氢键等， 具体结构尚不能确定。 加入某种辅料发表面活性剂或糖类可能 会减少胶束的形成， 从而使万古霉素的水溶液极限浓度增加。

因为盐酸万古霉素的热不稳定性， 在工业化生产过程中 般需要在较低温度 下迸行， 以免使最终产品杂质上升。 即使在高真空状态下进行低温干燥， 盐酸力' 古霉素的色谱纯度也会下降， 如低温冷冻千燥色谱纯度会下降 0.5%左右， 如使用 真空 40°C条件下进行干燥， 色谱纯度会下降 1.0%以上， 主要升髙的杂质是脱氨基 万古霉素。

US6001800 揭示了一种用喷雾干燥制备生物大分子粉体的 方法， 在溶液中加 入甘露醇、 甘氨酸和柠檬酸钠作为稳定剂和分散剂， 并得到一定粒径范围的活性 物质。 US6479049提到干扰素， 通过添加糖类、 多肽类， 氨基酸类物质作为载体， 一般常用的增加药物稳定性的方法是添加合适 的辅料， 而常用的辅料种类有糖类、 多元醇、 氨基酸、 有机胺类、 盐、 聚合物和表面活性剂。 搪和多元醇是常用的非 特定的稳定剂， 当选用糖类作为稳定剂时， 一般尽 fi避免选用还原糖， 蔗糖、 海 藻糖是很好的非还原糖， 甘露醇也经常用作稳定剂和增溶剂。 海藻糖是 ώ两个葡 萄糖分子以 a,a,l.l -糖苷键构成非还原性糖， 自身性质非常稳定， 海藻糖对生物体 具有神奇的保护作用， 是因为海藻糖在高温、 高寒、 高渗透压及干燥失水等恶劣 环境条件下在细胞表面能形成独特的保护膜， 有效地保护蛋白质分子不变性失活。 从而维持生命体的生命过程和生物特征。 许多对外界恶劣环境， 表现出非凡抗逆 耐受力的物种， 都与它们体内存在大量的海藻糖有直接的关系 。 和自然界中如蔗 糖、 葡萄糖等其它糖类， 均不具备这一功能。 这一独特的功能特性， 使得海藻糖 除了可以作为蛋白质药物、 酶、 疫苗和其他生物制品的优良活性保护剂。

除此之外， 氨基酸单独或与其它稳定剂组合使用来提高药 物的稳定性， 特别 对一些蛋白类药物具有良好的效果。 例如组氨酸、 甘氨酸、 天冬氨酸钠盐、 谷氨 酸、 盐酸赖氨酸与 5%的甘露醇在 lOmM磷酸缓冲液 （pH7.0) 能抑制重组人类角 化细胞生长因子胶束的形成。

另外 -方面， 因不同的千燥工艺而必须提高药物的稳定性， 在剧烈的干燥条 件下， 必须添加一些辅料来保证药物的稳定性和提「 ； ¾产品的性质， 而关键一点是 争将活性物质固定在无定形基质上， 无定形状态具有一个低分子流动性和低反应 活性的高粘度环境。 因此， 添加的辅料应尽可能具有使活性物质嵌入其中 并提高 玻璃化温度的性能， 选择辅料: 要基于提高稳定性的能力， 特别是对于喷雾干燥， 还应考虑药物的可接受性、 对粒径形成的影响， 及 g终产品的分散性和流动性。

盐酸力 '古霉素从 20世纪 50年代末丌始有商业销售， 在临床上使用的万古霉 索是其盐酸盐。 目 市场上的粉针制剂均为合格的原料药经溶解后 ， 装瓶经冷冻 干燥后得到的。 盐酸力'古霉素成品的冻干粉呈现类白色， 其水溶液为透明溶液， pH为 2.5〜4.5。

已有辅料用于盐酸力.古霉素静脉注射剂的报� �， 2002年在 H本上市商品名为 MEEK的 0.5g静脉注射剂中， 分别含有 100g D-Mannitol和 PEG400， R的是提高 产品的稳定性和溶解性， 而且据研究表明， 添加辅料的 MEEK与不添加任何辅料 的市售品相比， 还可以降低肾毐性 [Naoko Hodoshima, Drug Metab. Pharmacokin. 19(l):68-75(2004) ]，， 该上市产品是用冷冻干燥的方法制备的。

US2013009330揭示了将盐酸万古霉素溶解成〗0-20%� ��溶解液， 加入 2-4%的 PEG400和 2-4%的 Mannitol, 然后经喷雾干燥得到具有较好溶解性和稳定性 的可 用于注射的盐酸万古霉素。 该方法中使用的配方对抑制欧洲药典杂质 B的形成效 果不明显，且溶解液浓度只能达到 10-20%，喷雾干燥出来的产品密度低不易分装。

在抗生素的某些利用中， 减少抗生素高色谱纯度的可能副作用是非常重 要的， 迄今其它现存的千燥方法均无法做到这点。 而本发明正是为了提供一种高纯度、 高产率的盐酸万古霉素的千燥方法， 使得到的盐酸力-古霉素能够用于 Π服或注射 给药。

从目前文献报道来看， 用于盐酸力-古霉素的主要烘千方式有冷冻千� �， 真空 干燥和喷雾干燥。

冷冻干燥是目前生产制剂和原料的主要千燥方 式， 在原料冻干过程中， 因为 目^的无菌技术很难做到进箱、 出箱及收集粉碎文献保证无菌， 很难生产无菌原 料药， 非无菌原料药还需重新溶解再冻干制备成小瓶 装无菌粉针制剂， 冻千工艺 的缺点是设备投资大， 产量小， 效率低， 运行成本高， 特别不适合大剂量剂型的 生产， 如 lg以上的剂型， 破瓶率高且冻千时间长， 生产周期加长后， 杂质升高影 响产品的品质。

真空干燥的主要问题是因为盐酸万古霉素是热 敏性物质， 必须在低温高真空 下干燥， 而万古霉素与水及一些极性溶液结合紧密， 不容易去除， 千燥效率很低， 最大的问题是残留溶剂达不到 ICH对残留溶剂的要求， 同时干燥时间延长会使杂 质升高影响最终产品的品质。

喷雾干燥用于盐酸万古霉素工业化生产很少有 报道， 主要是因为喷雾千燥在 卨温环境进行， 会造成力"古霉素降解， 还有一个问题喷雾干燥 ^的浓缩液制备问 题， ·方面是对于喷雾干燥來说， 浓缩液浓度越高， 喷雾干燥效率越高， 得到的 粉体粒径均勾， 密度大， 适合于进一 的无菌分装。 但盐酸力'古霉素浓度越卨如 大于 20%， 粘度越大， 还因形成胶束， 相互聚集， 最后形成果胨一样的半固体状 物质或万古霉素析出造成过滤器堵塞等生产事 故， 所以 报道如 US2013009330 的喷雾干燥浓度一般只能达到 15%左右。 另外 方面， 还需要考虑溶液的稳定性， 闳为工业化生产中， 因为各工序的均有一定的准备时间， 浓缩液的存放可能会超 过 24小时， 如何保证浓缩液在 48小时内稳定， 杂质不上升不析出固形物也是工 业上需要解决的问题。 在喷雾干燥过程中， 瞬间温度会超过 80°C， 如何保证在高 温条件下盐酸万古霉素的稳定性也是喷雾千燥 用于干燥的障碍之 、 ¾后一个问 题是得到的粉体如果直接用于无菌分装， 要求粉体的溶解时 至少要与冻千工艺 生产的产品差不多， 便于使用。 喷雾干燥得到的产品粒径小， 溶解时间长， 而冻 干产品因其疏松结构更有利于溶解， 所以在喷雾千燥中必须加入增溶剂。 本发明 所公开的工艺较好地解决了上述问题， 揭示了 条高效率卨品质的盐酸力'占霉素 制造方法。 发明内容

根据本发明的一个 的， 本发明提供了 -种含盐酸万古霉素的喷雾干粉， 所 述喷雾干粉包括 100重量份盐酸万古霉素、 5-50重景份的糖类稳定剂和 /或多元醇 类稳定剂和 0.005-0.05重量份增溶剂。

优选地， 所述用来生产盐酸万古霉素喷雾千粉的溶液为 色谱纯度不低于 95% 的盐酸万古霉素溶液。

优选地， 所述糖类稳定剂为果糖、 海藻糖、 山梨糖、 乳糖或葡萄糖， 所述多 元醇稳定剂为甘露醇。

优选地， 所述糖类稳定剂为海藻糖， 所述糖类稳定剂与盐酸万古 素的重: 比为 20-25%。

优选地， 所述增溶剂为表面活性剂， 所述表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇 单油酸酯 (吐温 80) 、 泊洛沙姆 188、 聚氧乙烯 (35)、 ¾化蓖麻油 (RH-35)、 聚羊 ΐ乙 烯 (40) 氢化蓖麻油 (RH-40)或聚乙二醇 - 12-羟基硬脂酸酯。

优选地， 所述增溶剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯 (吐温 80)， 所述增溶剂 与盐酸万古霉素的重量比为 0.01 %。

优选地， 所述喷雾干粉为可用于口服或注射用的无 Η粉。

根据本发明的另一目的， 本发明还提供了一种高纯度、 低杂质、 高效率、 高 产率的含盐酸万古霉素喷雾千粉的工业化制造 方法。 简^地说， 所述方法包括通 过东方拟无枝酸 Amycolatopsis Orier talis ) 在含有碳源、 氮源和无机盐的培养基 及适当的发酵条件下发酵， 得到含万古霉素发酵液， 经过系列纯化后得到色谱纯 度大于 95%以上浓缩液， 通过添加辅料， 提高浓缩液的稳定性和浓度， 可将盐酸 力 -古霉素浓度提高到 20-30%， 在此浓度下， 进行喷雾千燥， 得到盐酸万古霉素无 菌或非无菌原料药 API。 然后再在无菌条件下进行分装， 得到最终制剂产品。

所述工业化制备方法具体如下描述。 所述丁业化制备 法包括下列^骤： （1 ) 制备色谱纯度不低于 95%的盐酸力'古霉素溶液； （2 ) 向歩骤 （1 ) 100重 S:份所述 盐酸万古霉素溶液中加入 5-50 1：量份糖类稳定剂和 /或多元醇类稳定剂和 0.005-0.05重量份增溶剂， 得到盐酸力'古霉素复合溶液； （3 ) 用膜浓缩设备将歩骤 ( 2 ) 所述盐酸万古霉素复合溶液进一步浓缩至盐酸 力 '古 素浓度为 20-30wt.%得 到盐酸万古霉素浓缩液； （4 ) 将步骤 （3 ) 所述盐酸万古霉素浓缩液过滤得到已过 滤的盐酸万古霉素浓缩液； 以及 （5 ) 将^骤 （4 ) 所述已过滤的盐酸力 '古霉素浓 缩液经过喷雾干燥，得到欧洲药典所列的杂质 B小于等 f 1 .5wt.%的盐酸力古霉素 喷雾千粉。

优选地， 所述色谱纯度不低于 95%的盐酸力 ί¾素溶液来源于发酵液分离纯 化并精制后的浓缩液， ρΗ为 2.0-4.5。

首先， 按照中国专利申请号 01 132048.6所述的方法， 采用发酵菌种为东方拟 无枝酸 Amycolatopsis Oriertalis SIPI43491 , 经过接种体的培养， 接种: ¾一级种 子罐， 经二级种子扩大培养后， 进入发酵罐培养， 控制温度 24-34 Γ , 培养压力 0.01 -0.08MPa, 过程中控制溶解氧和 pH， 发酵周期为 4-6天， 得到力 '古 ¾素发酵 液。

按照中国专利申请号 200710198599.4所述， 将力'古¾素发酵液用氢氧化钠溶 液调 pH到 9.0〜10.0,然后用孔经为 0.02-0.5陶瓷膜过滤， 得到的澄清滤液,通过大 孔吸附树脂， 万古霉素被吸附在树脂， 树脂水洗后用含有溶剂的酸性水溶液洗脱， 典型的洗脱液为含乙醇的盐酸水溶液。 万古霉素被洗脱下来， 含有力 '古霉素的洗 脱液加入活性炭脱色， 过滤得到的滤液浓缩得到盐酸力'古霉素水溶� �， 水溶液的 浓度大约在 100mg/mL。 浓缩结束后， 接着进行沉淀操作。 在含有盐酸万古霉紊的 水溶液中加入 NH ₄ HC0 ₃ (数量为浓缩液体积的 6%~ 10% ( W/V ) ) , 然后用氨水调 节万古霉素浓缩液 pH至 7.5~8.5， 搅拌 45~60min， 使其混合均匀， 大 的万古霉 素从溶液中沉淀出来。 沉淀过 ¾的温度必须控制在 10〜20°C， 静 16-2 小时后. 把混合液固液分离， 使力'古霉素沉淀从溶液中分离出來得到固体� � '古霉素碱， 然 后用乙醇顶洗， 顶去固体中残留液， 分离后得到万古¾素粗品。 得到的万古霉素 碱中力 '古霉素色谱纯度不低于 80% ( HPLC ) o

按照专利申请号 200710187300.5所述， 将万古霉素粗品在纯化水単.溶解后用 0.01~0.5μηι 孔径 陶瓷膜过滤， 获得澄清的万古霉素滤液。 澄清力'古霉素滤液经 过离子交换层析柱层析纯化得到万古霉素 Β含量 95%以 I：的有效 ^析液。 这 所 说的离子交换层析柱所用填料阳离子交换葡聚 糖凝胶 （Sephadex ) 或琼脂糖凝胶 ( Sepharose ) o 上柱的力'古霉索滤液需在酸性条件下上层析� �， 在碱性条件下加入 碱性金属盐或钹盐层析，一般我们采用 NH ₄ ⁺ 盐和 Na ⁺ 盐，如 NaCl、NH ₄ HC0 ₃ , ( NH ₄ ) 2CO3等； 层析时收集万古霉素 B含量在 93%以上的部分可以使混合有效层析液中 万古霉素 B (按 USP药典 HPLC方法检测） 含量在 95%以上。 有效层析液经过超 滤、纳滤后得到含盐酸力'古霉素 12- 18%浓缩液（即，浓缩液为色诺纯度不低于 95% 的盐酸万古霉素溶液）。 浓缩液在 2-8 Ό下保存。

优选地， 所述色谱纯度不低于 95%的盐酸力-古霉素溶液也可以是 ώ盐酸力-古 霉素沉淀粉溶解于纯化水或注射用水中得到的 溶解液。

优选地， 所述发酵液山东方拟无枝酸 Amyco topsis Oriertalis ) 在含有碳源、 氮源和无机盐的培养基及适当的发酵条件下发 酵 4-8天所得， 发酵液经过滤、树脂 吸附、 脱色、 浓缩、 结品、 溶解、 层析、 凋 pH、 过滤并浓缩后得到浓缩液。

优选地， 所述糖类稳定剂为果糖、 海藻糖、 山梨糖、 乳糖或葡萄糖， 所述多 兀醇稳定剂为甘露醇。

优选地， 所述糖类稳定剂为海藻糖， 所述糖类稳定剂与盐酸万古霉素的重量 比为 20-25%

优选地， 所述糖类稳定剂增溶剂为表面活性剂， 所述表面活性剂为聚氧乙烯 脱水山梨醇単油酸酯 (吐温 80) 、泊洛沙姆 188、聚氧乙烯 (35)、氢化蓖麻油 (RH-35)、 聚氧乙烯 (40) 氢化蓖麻油 (RH-40)或聚乙二醇 -12-羟基硬脂酸酯。

优选地， 所述增溶剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯， 所述增溶剂与盐酸力' 古 ¾素的重量比为 0.01 %。

优选地， 膜浓缩设备所用的胶为反渗透膜或分子 为 200-400Da的纳滤膜； 浓缩过程中温度≤20°〇。

优选地， 在歩骤 （5 ) 进行喷雾千燥中， 启动喷雾干燥机和加热装置， 控制进 风温度 160-240°C， 出风温度 80- 120Γ , 丌启进料丌关， 使系统保持正 ii状态， 采 用的加热载体为纯度为 95%以上的氮气。

优选地， 所述盐酸力-古霉索喷雾千粉的水分小于 3wt.%。

优选地， 所述盐酸力'古霉紊喷雾干粉为无菌粉， 通过用带 Auger 的无菌分装 机进行分装， 并在盖帽时先抽 ¾空再通入氮气， 剂型大小包括 0.5g、 0.75g、 1 .0g、 2g、 5g、 lOg和 20g。

本发明的含盐酸力 -古霉素的喷雾干粉的药理学数据表明， ¾含¾酸力'古霉素 的喷雾千粉对感染金葡萄球菌的小鼠 ED50=0.300-0.800mg/kg IV。

本发明相对于先前工艺，有如下优势： 本发明通过在原料药制备工艺过程中， 添加一定比例的辅料， 解决了 ^浓度下的盐酸力 '古霉素溶液的稳定性， 使得进进 入喷雾前的盐酸力'古霉素浓度提高至 20-30%, 这样大大提高了喷雾干燥的效率； 另外一方面， 盐酸万古霉素高浓度下还可提高无菌 API 的松密度， 从而 ¾1易丁-分 装。 加入辅料的另外一作个用是增加了喷雾干燥过 程产品的稳定性， 控制了杂质 含量的上升， 提高成品的溶解性能； 改善产品质; S; 本发明首次实现了从发酵至 无菌原料药， 再分装成无菌粉针的商业化生产， 缩短工艺歩骤， 提卨产品收率及 降低成本， 且容易实现工业化生产大规模生产。 附图说明

m 1为不同配方稳定剂的比较。 具体实施方式

通过以下实施例来对本发明作进一歩具体说明 ， 但并不仅限于以下实施例和 实施例中的工艺参数范围。 实施例 1 : 万古霉素浓缩液加不同辅料稳定性的实验

按照发明内容所述方法制备色谱纯度不低于 95%的盐酸力-古霉素溶液， 取万 古霉尜的浓缩液 900mL (批号为 310121 109， 力 m者 B组分色 ·纯度 96.50% )， 其中力'古霉素浓度为 25% (总共含 古霉素 225克）； 分成 9份， ί: 分 l OOmL, 其 中 8份分别加入 5克海藻糖、 5克甘露醇、 5克葡萄糖、 5克果糖、 5克甘^酸、 5 克谷胺酰氨、 5克山梨糖、 5克乳糖； 然后溶解充分； 再将这 8份料液和另外 1份 没加辅料的空白浓缩液分別通过 0.22 微米过滤器过滤， 得到的 9 份过滤液放入 2-8 Ό冰箱屮， 然后每隔 24小吋取样进行澄淸度观察， 结果如下表 1。 表 1 : ： 万古霉素浓缩液加不同数量海藻糖在 2-8Ό下澄清度观察表

加入辅料 24小时液

48小时液体外观 72小时液体外观 96小时液体外观 数量 （克） 体外观

有白色颗粒

0 有 1Ί色颗粒析出 有 11色颗粒析出 呈胶体状，没有流动性 析出

5克海藻糖 澄清 澄淸 澄洁 澄清

5克甘露醇 M 澄洁 澄洁 有丝状沉淀物

5克葡萄糖 澄清 澄清 有 β色颗粒析出 有 Α色颗粒析出

5克果糖 澄清 澄清 有白色颗粒析出 有 i' l色颗粒析出

5克甘氨酸 澄清 ―有白色颗粒析出 有 1Ί色颗粒析出 有 ί'— 1色颗粒析出

5克谷胺酰

澄清 有!^色颗粒析出 有白色颗粒析出 ¾胶体状，没有流动性 氨

5克山梨糖 澄清 澄清 有广1色颗粒析出 有 Π色颗粒析出

5克乳糖 澄淸 澄清 有 1Ί色颗粒析出 有白色颗粒析出 从表 1 中可以看出加入一些辅料会使力-古霉素浓缩� �在 2-8 °C下有 il好的稳定 性， 我们看到其中海藻糖是其中表现的 S好的。 实施例 2 : 不同浓度海藻糖对万古霉素浓缩液稳定性的影 响实验

按照发明内容所述方法制备色谱纯度不低于 95%的盐酸力'古霉素溶液， 取力' 古霉素浓缩液 800mL (批号为 310121 109， 力'古霉尜 B组分色谱纯度 96.50% ) (批 号为 310121 109)，其中万古 尜浓度为 25% (总共 A力'古 素 克）， 分成 8份， 每份 100mL， 含力"古霉素为 25克。

2.1、取其中一份料液加入 0克海藻糖，溶解充分后经过 0.22微米过滤器过滤， 过滤液 i己为 A; 放入 2-8 T：冰箱中， 然后毎隔 24小时取样进行澄清度观¾， 结果 如下表 2。

2.2、取其中一份料液加入 1.25克海藻糖 (加 为力—古霉素的 5%)， 溶解充分后 经过 0.22微米过滤器过滤， 过滤液记为 B: 放入 2-8 Γ冰箱屮， 然后每隔 24小时 取样进行澄清度观察， 结果如下衷 2。

2.3、取其中一份料液加入 2.5克海藻糖 (加量为力'古 素的 10%)， 溶解充分后 经过 0.22微米过滤器过滤， 过滤液记为 C: 放入 2-8 °C冰箱中， 然后 ^隔 24小时 取样进行澄清度观察， 结¾如下表 2。

2.4、 取其中一份料液加入 3.75克海藻糖 (加量为力-古霉素的 15%) , 溶解充分 后经过 0.22微米过滤器过滤， 过滤液 id为 D; 放入 2-8°C冰箱中， 然后每隔 24小 时取样进行澄清度观察， 结¾如下表 2

2.5、 取其中一份料液加入 5 克海藻糖 (加量为力' 素的 20%), 溶解充分后 经过 0.22微米过滤器过滤， 过滤液记为 E; 放入 2-8°C冰筘中， 然后 隔 24小时 取样进行澄清度观 ¾， 结果如下¾ 2

2.6、 取其中一份料液加入 6.25克海藻糖 (加: a为万 霉素的 25%)， 溶解充分 后经过 0.22微米过滤器过滤，过滤液记为 F: 放入 2-8°C冰箱中，然后每隔 24小时 取样进行澄清度观察， 结果如下表 2

2.7、取其中一份料液加入 7.5克海藻糖 (加 为万古霉素的 30%)， 溶解充分后 经过 0.22微米过滤器过滤， 过滤液 I己为 G; 放入 2-8 冰箱中， 然后每隔 24小时 取样进行澄清度观察， 结果如下表 2

2.8、 取其中一份料液加入 8.75克海藻糖 (加≤为力 i霉素的 35%)， 溶解允分 后经过 0.22微米过滤器过滤， 过滤液记为 H; 放入 2-8°C冰箱屮， 然后每隔 24小 时取样进行澄清度观察， 结¾如 K表 2 表 2： 万古霉素浓缩液加不同数量海藻糖在 2-8°C下澄清度观察表

从表 2中我们看到海藻糖加呈在力 '古^素的 15% 35%的时候， 古霉素浓缩液 在 2-8°C下 144小时后依然保持澄清， 溶液稳定性很好。 实施例 3: 万古霉素浓缩液喷雾干燥工艺参数的研究实验

喷雾干燥设备选用歩琦 B-290型喷雾干燥机。

喷雾千燥原料参数： 批号 310121 109浓缩液， 力'古 素 B H.分 96.50%, 浓度 为 20% 实验过程：

3.1、 待喷雾干燥原料 200mL， 选择进风温度 170°C， 调节进料泵速度使出风 温度在 90-100°C， 收集干燥后的万古霉素粉， 记为批 ^ 1 12001， 将干粉做水分、 5%力'古霉素浓度下 pH值、 HPLC和 10%力'古霉素浓度下 OD值检测。 3.2、 待喷雾干燥原料 200 _m L， 选择进风温度 170Ό , 调节进料泵速度使出风 温度在 100-1 10O , 收集千燥后的力'古¾素粉， Id为批号 1 12002， 将十粉做水分、 5%万古霉素浓度下 pH值、 HPLC和 10%力'古霉素浓度下 OD位检测。

3.3、 待喷雾干燥原料 200mL， 选择进风温度 170°C， 调节进料泵速度使出风 温度在 1 10-120O , 收集干燥后的力'古霉素粉， 记为批号 1 12003， 将干粉做水分、 5%力'古霉素浓度下 pH值、 HPLC和】0%力-古霉素浓度下 OD值检测。

3.4、 待喷雾干燥原料 200mL， 选择进风温度 190°C， 调节进料泵速度使出风 温度在 90-100°C， 收集千燥后的万古霉素粉， 为批号 112004， 将千粉做水分、 5%力'古霉素浓度下 pH值、 HPLC和 10%万占霉素浓度下 OD值检测。

3.5、 待喷雾干燥原料 200mL， 选择进风温度 190°C， 调节进料泵速度使出风 温度在 100-110°C， 收集千燥后的万 霉素粉， 记为批号 1 12101， 将千粉做水分、 5%万古 ¾素浓度下 pH值、 HPLC和 10%力'古¾尜浓度下 OD ill检测。

3.6、 待喷雾千燥原料 200mL， 选择进风温度 190°C， 调节进料泵速度使出风 温度在 1 10-120°C， 收集干燥后的力'古霉素粉， 记为批号 112102 , 将干粉做水分、 5%万古霉素浓度下 pH值、 HPLC和 10%力'古霉素浓度下 OD 检测。

3.7、 待喷雾干燥原料 200mL， 选择进风温度 210°C， 调节进料泵速度使出风 温度在 90-100°C， 收集干燥后的力'古霉索粉， 记为批号 112103， 将千粉做水分、 5%万古霉素浓度下 pH值、 HPLC和 10%万古 ¾素浓度 OD值检测。

3.8、 待喷雾干燥原料 200niL， 选择进风温度 210°C， 凋节进料泵速度使出风 温度在 100-110°C， 收集干燥后的力 ' 霉素粉， id为批号 1 12104， 将千粉做水分、 5%万古霉素浓度下 pH值、 HPLC和 10%力'古霉尜浓度下 OD ίϋ检测。

3.9、 待喷雾干燥原料 200mL， 选择进风温度 210Ό， 调节进料泵速度使出风 温度在 110-120°C， 收集干燥后的力'占霉素粉， 记为批号 112105， 将千粉做水分、 5%万古霉素浓度下 pH值、 HPLC和 10%力-古霉素浓度下 OD值检测。

以上实验的记录和检测结 ¾见表 3- 1、 表 3-2、 表 4-1、 表 4-2。

表 3-2: 喷雾干燥记录表

表 4-1喷雾千燥粉检测结果

表 4-2喷雾干燥粉检测结果

从表 4-1和表 4-2， 我们 ¾-到： （1) 不加辅料的万古^素喷雾干燥后 HPLC中 万古霉素 B组分含量下降 T， 杂质 B,和杂质 B ₂ 上升 7； (2)进风^度在 170。C和 190°C、 210°C的时候喷雾千燥获得的粉质 fi相当，出风温度在 90-100°C、 100-110°C 和 110-120O的时候喷雾十燥获得的粉质量也相当； (3) 所有的粉水分偏卨。 实施例 4: 加入 25%海藻糖的不同浓度的万古霉素浓缩液的喷雾 干燥效果比较实 验

按照发明内容所述方法制备色谱纯度不低于 95%的盐酸力—占霉素溶液， 取批 号为 310121 1 10的力 -古^索浓缩液 1600mL, 古^索 B组分色谱纯度 96.28%, 其中力'古霉素浓度为 15% (总共含力'古¾素 240克）， 加入海藻糖 60克 （海藻糖 加量为万古霉素的 25% )， 溶解^全后用 200D的纳滤膜将料液浓缩 800 mL, 此 时力'古霉素浓度为 30%。 然后将料液通过 0.22微米的过滤器， 收集滤液， 将滤液 平均分为 4份， 每份为 200mL。

4.1、 取其中一份料液， 标 i己为 A， 料液 A中力-古霉素浓度为 30%;

4.2、 向其中一份料液中加入纯化水 40mL, 混合均匀后 £为料液 B , 料液 B 屮 古霉素浓度为 25%。

4.3、 向其中一份料液屮加入纯化水 l OOmL, 混合均匀后记为料液 C， 料液 C 中万古霉紊浓度为 20%。

4.4、 向其中一份料液中加入纯化水 200mL， 混合均匀后 I— d为料液 D， 料液 D 中力占霉素浓度为 15%。

将料液 A、 B、 C、 D 分别喷 ' 千燥， 进风温度为 190Γ , 出风温度控制为 100-1 10°C , 收集喷雾千燥粉检测水分、 HPLC、 10%力 ί霉素浓度下 450nm的 OD 值以及 5%力-古霉素浓度下的 pH flL 喷雾千燥数据见¾ 5， 检测结果见表 6。

表 5: 不同万古霉素浓度喷雾干燥数据

表 6: 不同浓度万古霉素喷雾干燥粉检测数据

Test No. 浓缩液原检 30%浓度 25%浓度 20%浓度 15%浓度 水分 （％) NA 3.8 3.7 4.1 4.3

10%浓度 pH 2.81 2.89 2.81 2.81 2.82

10%A ₄₅ o 0.054 0.057 0.057 0.052 0.052

B组分含量 （％) 96.28 96.24 96.22 96.18 96.15 杂质 B, ( % ) 0.96 0.94 0.95 0.95 0.96 杂质 (% ) 0.05 0.06 0.08 0.06 0.07 杂质 加杂质 B ₂ ( % ) 1 .01 1 .00 1.03 1.01 1.03 从衮 6 中来看不 M浓度的力'占 素喷雾千燥粉质 没有明 W的区別， fti足浓 度越高， 相冋数量的万古^ 喷雾千燥 ; 要的时间越短， 浓度有利于节约能源， 提¾效率。 实施例 5: 25%万古霉素浓度的浓缩液加不同数量的海藻糖 喷雾千燥的实验

按照发明内容所述方法制备色 i齊纯度不低于 95%的盐酸力'古¾素溶液，取批号为 310121113的盐酸力 -古霉素溶液 （力'古 ¾素8组分色谱纯度 96.28% ) 3000mL, 其屮 万古霉素浓度为 10% (总共含 J古 素 300克），将料液平均分为 6份，毎份为 500mL， 含力'古霉素 50克。

5.1、 取其中一份料液加入海藻糖 2.5 克 （海藻糖加 为万古？素的 5%)， 溶 解完全后将料液用 D200的纳滤胶浓缩: ΐ 200 mL， 此时力 "古霉素浓度为 25%， 然 后将浓缩液通过 0.22微米的过滤器， 滤液 ill为 A。

5.2、 取其中- -份料液加入海藻糖 5克 (海藻糖加 /δ为万古禅尜的 10%), 溶解 完全后将料液用 D200的纳滤膜浓缩 ί 200 niL, 此时力-古霉素浓度为 25%， 然后 将浓缩液通过 0.22微米的过滤器， 滤液记为 B。

5.3、 取其中一份料液加入海藻搪 7.5克 （海藻糖加量为力'古霉紊的 15%)， 溶 解完全后将料液用 D200的纳滤胶浓缩至 200 mL， 此时力—古霄素浓度为 25%， 然 后将浓缩液通过 0.22微米的过滤器， 滤液 i 为 C。

5.4、 取其中一份料液加入海藻糖 10克 （海藻糖加 ft为力"古霉紊的 20%)， 溶 解完全后将料液用 D200的纳滤膜浓缩: 200 mL, 此时 古霉素浓度为 25%， 然 后将浓缩液通过 0.22微米的过滤器， 滤液记为 D。

5.5、 取其中一份料液加入海藻糖 12.5克 （海藻糖加量为力'古霉素的 25%)， 溶解完全后将料液用 D200的纳滤胶浓缩^ 200 mL, 此时万古霉素浓度为 25%， 然后将浓缩液通过 0.22微米的过滤器， 滤液 £为 Ε。

5.6、 取其中一份料液加入海藻糖 15克 （海藻糖加 为力'古霉 ¾的30%)， 溶 解 全后将料液用 D200的纳滤胶浓缩 ¾ 200 mL， 此时力 ^_ 古¾尜浓度为 25%， 然 后将浓缩液通过 0.22微米的过滤器， '；虑液记为 F。

将料液 A、 B、 C、 D、 E、 F分别喷雾千燥， 进风温度为 190°C， 出风温度控 制为 100-110°C， 收集喷劣千燥粉检测水分、 HPLC、 10%力'古霉素浓度下 450nm 的 OD值以及 5%力'古霉紊浓度下的 pH值，喷雾干燥数据见表 7，检测结 ¾见¾ 8。

表 8: 海藻糖不同加量的浓缩液喷雾干燥粉检测数据

表 8可以看出， 海藻糖加 ίή:从 5 %到 30 %， 得到的盐酸力 ^索喷千粉的质 相当。

6、 实施例 6: 加入不同浓度的吐温 80的万古霉素浓缩液喷雾干燥的实验

按照发明内容所述方法制备色^纯度不低于 95%的盐酸力"古霉索溶液， 取批号 为 310130102的盐酸力 .古¾尜溶液 （力古 组分色谱纯度 96.08 % ) 2500mL， 其屮万古 ' 素浓度为 10% (总 JC. 力 Γ 素 250 -克）， 加入 62.5 海藻糖， 海藻糖 加 M为力 -占霉素的 25 % , 川 D200的纳滤股浓缩至 1000 mL,此时万古霉尜浓度为 25 % , 然后将料液 - 均分为 5份， f:j:份为 200mL， 含 古霉素 50克。

6.1、 取其中 份料液， 通过 0.22微米的过滤器， 滤液记为八。

6.2、 取其屮一份料液， 加入 O. l mL 的 2.5%吐温 -80 水溶液， 加入的吐温 -80 的重量为力'古霉素的 0.005%, 溶解充分后通过 0.22微米的过滤器， 滤液 id为 B。

6.3、 取其中一份料液， 加入 0.2mL 的 2.5%吐温 -80水溶液， 加入的吐 ¾-80 的重 S为力'古霉素的 0.01 %, 溶解充分后通过 0.22微米的过滤器， 滤液 1己为 。

6.4、 取其中一份料液， 加入 0.4mL 的 2.5%吐温 -80水溶液， 加入的叶.温 -80 的重量为力 ^_ 古霉素的 0.02%, 溶解充分后通过 0.22微米的过滤器， 滤液记为 D。

6.5、 取其屮一份料液， 加入〗mL的 2.5%吐温 -80水溶液， 加入的吐温 -80的 重量为力'古霉素的 0.05%， 溶解充分后通过 0.22微米的过滤器， 滤液 为 £。

将料液 A、 B、 C、 D、 E分别喷雾 Τ·燥， 进风温度为 190°C， 出风温度控制为 100-110°C， 收集喷雾十燥粉检测水分、 HPLC、 10%力―占 ¾素浓度下 450nm的 OD 值以及 5%力.古霉尜浓度下的 pH位， 喷 ¾T燥数据见¾ 9， 检测结果见表】0。 表 9: 吐温 -80不同加量的万古霉素浓缩液喷雾千燥实验数 据

表 10: 吐温 -80不同加量的万古霉素浓缩液喷雾干燥粉检测 结果

从表 10屮可以看出： 1、 加入吐温后， 喷雾千燥粉的水分明显下降； 2、 加入 吐温后， 5 %溶解速度明 ¾变快。 7、 实施例 7: 加海藻糖 +吐温 -80的浓缩液和加甘露醇 +PEG-400的浓缩液喷雾干 燥的比较实验

按照发明内容所述方法制备色谱纯度不低十 95%的盐酸力'占^素溶液， 取批 ¾" 为 310130105的盐酸力'古¾紊溶液 (力'古霉素 B组分色谱纯度 96.40%) 2000 mL， 其屮 古¾素浓度为 15% (总 力' 素 300克），平均分为 2份，每份 1000 mL， 含盐酸力'古霉素 150克。

7.1、 取其中一份加入 37.5 ¾海藻糖， 海藻糖加量为万古霉素的 25%， 溶解充 分后用 D200纳滤胶浓缩个: 600 mL ； 然后向浓缩液中加入 0.6mL2.5%吐温 -80水 溶液， 吐温 -80加量为力'古 ¾¾的 0.01%, 充分溶解后将料液通过 0.22微米的过滤 器， 收集滤液， 滤液 kl为 A。

7.2、 将另 -份料液加入 30 i!-¾fi和 30 PEG-400, 甘露醉加 为力^ ¾ 素的 20%， PEG-400加 为力'古 素的 20%， 充分溶解后用 D200纳滤膜浓缩至 600 mL, 然后将料液通过 0.22微米的过滤器， 收集滤液， 滤液记为 B。

将滤液 A分为 3份， 每份 200 mL， 分别进行喷雾千燥进风温度为 190°C， 出 风温度控制为】 00-110 ， 收 喷雾下燥粉分别 ^为 0204批、 0205批、 0206批； 将滤液 Β分为 3份， 每份 200 mL， 分別进行唢雾千燥进^温度为 190Γ， 出 L温 度控制为 100-110°C， 收 喷雾 燥粉分别 id为 0201批、 0202批、 0203批。 检测 各个批次喷雾千燥粉的水分、 HPLC、 10%力'古霉素浓度下 450nm的 OD值以及 5% 力'古霉素浓度下的 pH值。 喷雾 H 数据见表 11， 检测结 ¾见表 12。 表 Π: 不同配方的万古霉素浓缩液喷雾干燥实验数据

25%海藻糖 +0.01%吐温 -80 20 %甘 ^醇 + 20 % PEG-400

Test No.

0204 0205 0206 0201 0202 0203 喷雾时间 13:34-14:12 14:30-15:04 15:40-16:17 8:34-9:08 9:49-10:20 10:40-11:09 綱 °c) 190 190 190 190 190 190 出聽 °c) 100-110 100-110 100-110 100-110 100-110 100-110 进风 100 100 100 100 100 100 泵转速 (％) 30 30 30 30 30 30 压缩 气

50 50 50 50 50 50

Wii . (mm )

系统 ffi力

15 15 15 15 15 15 ( mbar ) 表 12: 不同配方的万古霉素浓缩液喷雾千燥粉检测结 果

从表 12中可以看到： 1、配方为海藻糖和吐温的万古 ^素喷千粉的力-占霉 B 纽分 ¾卨， 杂质 B更小； 2、 ¾ '为海藻糖和吐温的万古霉素喷千粉的 5%溶解速 度更快。

8、 实施例 8: 不同辅料配方的万古霉素浓缩液喷雾千燥稳定 性考察

按照发明内容所述方法制^色^纯度不低 Γ 95%的盐酸力'古¾紊溶液， 取批号 ¾ 310130208的力—古¾索浓缩液 1500mL， 力'古¾素 B 分色谱纯度为 96.40%, 力'古霉索浓度为 10%， 含力古 ¾¾桌 150克。将浓缩液 f均分为 3份， 每份 500mL， 含力'古霉素 50克。

8.1、 取其屮一份浓缩液， 加入海藻糖 12.5克 （海藻糖为力 '占 ^素的 25%)， 溶解充分后用 D200的纳滤膜浓缩: 200 mL， 然后冉加入 0.5 mL1.0%吐温一 80水 溶液 （吐温一 80为溶液中万古¾¾的 0.01%)， 溶解充分后经过 0.22微米的过滤 器过滤， 滤液 'H为料液 A， 其屮力 ¾素浓度为 25%。

8.2、 取另 -份浓缩液， 川 D200的纳滤股浓缩至 200mL， 经过 0.22微米的过 滤器过滤， 滤液记为料液 B, 中力 素浓度为 25%。

8.3、 取另外一份浓缩液， 加入 疆 10 克 （廿¾醉为力 '古 紊的 20%)、 PEG-40010克 (PEG-400为溶液屮力古 -素的 20% )， 溶解充分后用 D200的纳滤 膜浓缩至 200mL， 然后经过 0.22微米的过滤器过滤， 滤液记为料液 C, 其屮 占 霉素浓度为 25%。

将料液 A、B、C分别唢雾 Γ燥，进风温度为 190°C，出风温度控制为 100-110°C, 收集喷雾千燥粉检测 5% ' A 尜浓 HPLC、 10%力—古 ^紊 浓度下 450nm的 OD值以及 5%力―古霉素浓度下的 pH值， 喷雾 f燥数据见表 13, 检测结果见表 14。

将喷 燥粉放 f 60°C的温 箱'屮， 每隔 -段时 取样检测 HPLC, 60Γ下的 HPLC杂质变化惜况。 结 见¾ 15。 表 13、 不同辅料的万古霉素浓缩液喷雾千燥实验数据

表 14、 加辅料和不加辅料的万古霉素浓缩液喷雾干燥 粉质量比较

表 15、 加辅料和不加辅料的万古霉素浓缩液喷雾干燥 粉稳定性考察

加辅料： 海藻糖和吐温:

Test No. 60°C下 1 尺 60。C卜 2天 60°C下 3天 60°C下 5大

B组分含 t (%) 95.76 95.35 94.95 94.48 杂质 (%) 0.82 ' 0.85 1.08 1.25 杂质 B ₂ (%) 0.08 0.17 0.25 0.29 杂质 B,加 B ₂ (%) 0.90 1.02 1.33 1.54 不加辅料:

注： 其屮 1是指配方为海藻糖加吐温 80， 2是指没加辅料， 3足指配方为廿露 醇加 PEG— 400。

从表 15 1中可以 ί出， 稳定性最好的足加海藻糖和 ΙΗ:温 80的喷雾 T燥 粉，其次足加甘露醇和 PEG— 400的喷雾 T燥粉， 不加辅料的喷雾千燥粉稳定性 ® 差。

9、 不同浓度的万古霉素浓缩液喷雾干燥实验

按照发明内容所述方法制^色 ^纯度不低于 95%的盐酸力"古 素溶液， 取批 - 为 310130210的万古¾素浓缩液 1800mL, )} ^ ^ B组分色谱纯度为 96.05%, 力'古霉素浓度为 10%， 含力 H紊 180克。 向其屮加入海藻糖 45克（海藻糖为溶 液中力 '古霉素的 25%), 溶解充分 /ήί!] D200的纳滤股浓缩至 600 mL， 然后加入 1.8 mL1.0%吐温一 80水溶液 (叶.温一 80为溶液中力 素的 0.01%), 溶解充分 后经过 0.22微米的过滤器过滤， 滤液 均分为 3份， 每份 200mL (含力 '古霉紊 60 克）。

9.1、 取其中一份滤液， 加入 40 mL的纯化水， 为料液 A， 其中力 '古霉素的 浓度为 25%。

9.2、 取其中 份滤液， 加入 100 mL的纯化水， 为料液 B， 其中力 '古霉素的 浓度为 20%。

9.3、 取其屮一份滤液， i为料液 C， 其屮力 H ^的浓度为 30%。

将料液 A、B、C分別唢雾千燥，进风温度为 190°C，出风温度控制为 100-110O, 收集喷雾千燥粉检测 5%力 i ^浓度的溶解时 、 水分、 HPLC、 10%力—古¾素 浓度卜.450nm的 OD值以及 5%力"古 素浓度下的 pH ffi， 喷雾十燥数据见衣 16，

人 表 16、 不同万古霉素浓度喷雾干燥数据

Test No. 30%浓度 25%浓度 20%浓度 喷 时 I'Hj 14:15-14:46 15:10-15:55 16:35-17:35 进风温度（°c) 190 190 190 出风 度（°c) 100-110 100-110 100-110 进风 ·(%) 100 100 100 泵转速(％) 30 30 25

Hi缩空气流 _ (mm) 50 50 50 系统 ffi力 （mbar) 15 15 15 表 17、 不同浓度万古霉素喷雾干燥粉检测数据

Test No. 浓缩液原检 30%浓度 25%浓度 20%浓度 水分 （％) NA 2.8 2.7 3.1

10%浓度 pH 3.05 3.14 3.11 3.16

10%A ₄ 5o 0.046 0.052 0.047 0.051

B组分含 (%) 96.05 96.01 95.91 95.92

0.67 0.63 0.64 0.64

/ 1 1 / 杂质 B,加 B ₂ (%) 0. 67 0.63 0.64 0.64

5%溶解速度 NA 17秒 14秒 15秒 备注：5%溶解速度是指含 0.5g盐酸力-古霉^的样品投入装有 10ml注射用水的 15ml 西林瓶中^荡直: i ^部溶解所^的时 I'tiJ。

从表 17中可以 Φ出， 20%、 25%、 30%浓度 古霉素的喷雾千燥粉质¾相 当， 没有明显区别。

10、 实施例 10: 不同辅料配方的万古霉素浓缩液喷雾干燥实验

按照发明内容所述方法制备 诺纯度不低于 95%的盐酸万古霉素溶液， 取批 为 310130208的力' ^浓缩液 3500mL， 力 H B组分色谱纯度为 96.40%, 万古霉素浓度为 10%， 力古 尜 350克。 加入海 ¾糖 87.5克， 海藻糖加 为力' 古霉素的 25%， 溶解完 ^：/^用 D200纳滤膜浓缩至 1400mL， 然后 f均分为 7份， 每份 200mL， 含力古 ' 50 i；。

10.1、 取 屮 ·份浓缩液， 0.5 mL1.0%吐温一 80的水溶液 （吐温一 80为溶液 中力 ' 霉素的 0.01 % )，溶解充分 经过 0.22微米的过滤器过滤，滤液 为料液 A， 其中力 "古 ¾；素浓度为 25%。

10.2、 取其屮一份浓缩液， 经过 0.22微米的过滤器过滤， 滤液 IL!为料液 B， 其 中力'古霉素浓度为 25%。

10.3、 取其屮一份浓缩液， 加入 1.0%';ί- Γ洛沙姆 188的水溶液 2.5 mL (泊洛沙 姆 188为万古 ¾素的 0.05% )， 溶解充分后经过 0.22微米的过滤器过滤， 谑液己为 料液 C, 其屮力 '古 ^紊浓度为 25%。

10.4、 取其屮一份浓缩液， 加入 1.0%¾ 乙烯的水溶液 2.5 mL (聚氧乙烯为 力-古霉素的 0.05% )， 溶解充分 经过 0.22微米的过滤器过滤， 滤液 Ιιί为料液 D， 其中力"古霉素浓度为 25%。

10.5、 取其中- 分浓缩液， 加入 1.0% 化蓖麻油的水溶液 2.5 mL 化蓖麻 油为万古^索的 0.05%)， 溶解充分后经过 0.22微米的过滤器过滤， 滤液记为料液 E， 其屮力"古霉素浓度为 25%。

10.6、 取其中- -份浓缩液， 加入 1.0%聚乙二醇 -12-羟基硬脂酸酯的水溶液 2.5 mL (聚乙 醇 -12-羟基硬脂酸酯为力―古 0.05% )， 溶解充分后经过 0.22微米 的过滤器过滤， 滤液 IL为料液 F， 屮力'古 ¾尜浓度为 25%。

10.7、取其中 -份浓缩液，加入 1.0%聚 乙烯; ¾化蓖麻油的水溶液 2.5 mL (聚 氧乙烯 S化蓖麻油为力 「^素的 0.05%)，溶解充分后经过 0.22微米的过滤器过谑， 滤液记为料液 G， 其屮力 Υί ^浓度为 25%。

将料液 A、 B、 C、 D、 E、 F、 G分别唢 ΓΓ燥， 进风温度为 190°C， 出风温度 控制为 100-110°C， 收集喷雾丁燥粉检测 5%万古^ ¾浓度的溶解时间、 水分、 5% 万古霉素浓度下的 pH值， 喷 千燥粉检测结果见表 18。

表 18、 不同辅料配方的万古霉素浓缩液喷雾干燥粉质 量比较

从表 18中可以 出加了辅料的喷雾千燥粉溶解速度比空 l-Ί的史快，水分: 低， 其中优选的辅料是吐温 80。 实施例 11: 万古霉素粉溶解后喷雾千燥实验

取纯化水 160 mL, 向 屮加入海藻糖 12.5 'd, 溶解充分后加入万古霉紊 冻千粉 50克（万古 -冻十粉批' 为 310121106,力古霉素 B组分为 95.01 % )， 待粉全部溶解 加入 0.5 mL l .0 % 111: 一 80水溶液 (叶温一 80为溶液屮力古 索的 0.01 % )，溶解充分 向溶液中加纯化水 t't 200 mL，搅拌均匀后经过 0.22 微米的过滤器过滤， 收^滤液。

将料液喷雾千燥， 进风 Λ.度为 190°C， 出风温度控制为 100-1 10Γ , 收柒喷 雾千燥粉检测 5 %力 '古 ^浓度的溶解时问、 水分、 HPLC、 10%力'古 素浓度 下 450nm的 OD位以及 5%力— 浓度卜'的 ρΗ位， 喷雾丁燥粉检测结 ¾见 ¾ 19。

表 19 : 万古霉素冻千粉和喷雾干燥粉检测数据

¾ 19屮， 冻千粉足指川冻千粉， 按实施例 1 1制备得到喷雾千粉， 喷雾干粉 是指按实施 8用浓缩液制备的喷 千粉

衷 19的' 验数 ';¾^ _: 不论用冻十粉还是用浓缩液， 两者得到的喷雾干粉在 那些指标屮基本 -致， 也就足说用同样的配方， 也 'J以用其它盐酸力'古 紊固体 溶解后， 在加稳定剂和增溶剂， 得到 样的效 。 实施例 12 : 含盐酸万古霉素的喷雾干粉的药理学实验

按照本领域常规的盐酸力 H索药理学¾验， 屮请人对本发明的含盐酸力 '古 素的喷雾 T粉进行了药理学¾验， 所得到的药理学数据表明， 本发明的含盐酸 力'古 素的喷雾千粉对感染金 1¾ί萄球 1¾]的小鼠的 ED50=0.300-0.800mg/kg IV。

本发明通过上曲 '的实施例进行举例说明， fm 应当理解， 本发明并不限于 这¾所描述的特殊¾例和 ¾施方 ¾。 在这 ^: 包含这 ^特殊实例和 ¾施方案的 Π的 在于 ¾助本领域中的技术人 ¾践本发明。 何本领域中的技木人 ¾很容 在不 脱离本发明精神和范 1 的惜况下进行进 的改进和 ¾#， 此本发明只受到本 发明权利要求的内容和范 [ Ι的限制， ItH冬 I涵 所 W包括在 ώ附^权利要求所限 定的本发明精神和范 内的^选方案和等 I ' JJ %。