En France, la pathologie vasculaire cérébrale (150000 nouveaux cas par an) représente la troisième cause de mortalité et la première cause de handicap chez l'adulte. Les accidents ischémiques et hémorragiques concernent respectivement 80% et 20% de cette pathologie. Les accidents ischémiques cérébraux constituent un enjeu thérapeutique important pour diminuer la morbidité et la mortalité de cette affection. Des avancées ont été faites non seulement dans le traitement de la phase aiguë de l'ischémie mais également dans sa prévention.

II est aussi important de noter que l'identification et la prise en charge des facteurs de risque sont essentielles au traitement de cette pathologie.

Les traitements médicamenteux des accidents ischémiques cérébraux sont fondés sur différentes stratégies. Une première stratégie consiste à prévenir la survenue des accidents ischémiques cérébraux par la prévention des facteurs de risque (hypertension artérielle, hypercholestérolémie, diabète, fibrillation auriculaire, etc. ) ou par la prévention de la thrombose, en particulier à l'aide d'anti- aggrégants plaquettaires ou d'anticoagulants (Gorelick 2002) (Adams 2002).

Une deuxième stratégie consiste à traiter la phase aiguë de l'ischémie, afin d'en diminuer les conséquences à long terme (Lutsep and Clark 2001).

La physiopathologie de l'ischémie cérébrale peut être décrite de la façon suivante : la zone de pénombre, zone intermédiaire entre le coeur de l'ischémie où les neurones sont nécrosés et le tissu nerveux intact, est le siège d'une cascade physiopathologique qui aboutit en quelques jours à la mort neuronale, si la reperfusion n'est pas assurée ou si la neuroprotection n'est pas assez efficace. Le premier événement, qui survient dans les premières heures, est une libération massive de glutamate qui aboutit à une dépolarisation neuronale ainsi qu'à un

oedème cellulaire. L'entrée de calcium dans la cellule induit des dégâts mitochondriaux favorisant la libération de radicaux libres ainsi que l'induction d'enzymes qui provoquent la dégradation membranaire des neurones. L'entrée de calcium et la production de radicaux libres activent à leur tour certains facteurs de transcription, comme NF-1cB. Cette activation induit des processus inflammatoires comme l'induction de protéines d'adhésion au niveau endothélial, l'infiltration du foyer ischémique par les polynucléaires neutrophiles, l'activation microgliale, l'induction d'enzymes comme l'oxyde nitrique (NO) synthase de type Il ou la cyclooxygenase de type Il. Ces processus inflammatoires conduisent à la libération de NO ou de prostanoides qui sont toxiques pour la cellule. L'ensemble de ces processus aboutit à un phénomène d'apoptose provoquant des lésions irréversibles (Dirnagl, ladecola et al. 1999).

Le concept de neuroprotection prophylactique s'appuie sur des bases expérimentales mettant en évidence une résistance vis-à-vis de l'ischémie dans des modèles animaux. En effet, différentes procédures appliquées préalablement à la réalisation d'une ischémie cérébrale expérimentale permettent de rendre celle-ci moins sévère. Différents stimuli permettent d'induire une résistance à l'ischémie cérébrale : le préconditionnement (ischémie brève précédant une ischémie prolongée) ; un stress thermique ; l'administration d'une faible dose de lipopolysaccharide bactérien (Bordet, Deplanque et al. 2000).

Ces stimuli induisent des mécanismes de résistance qui activent des signaux déclenchant les mécanismes de protection. Différents mécanismes de déclenchement ont été mis en évidence : cytokines, voies de l'inflammation, radicaux libres, NO, canaux potassique ATP dépendant, adénosine. Le délai observé entre le déclenchement des évènements précoces et la résistance à l'ischémie provient de la nécessité d'une synthèse protéique. Différents types de protéines ont été décrits comme induisant la résistance à l'ischémie : les protéines du choc thermique, les enzymes anti-oxydantes et les protéines anti-apoptotiques (Nandagopal, Dawson et al. 2001).

Il existe donc un réel besoin de composés capables de prévenir l'apparition des facteurs de risque de l'accident vasculaire cérébral tels que l'athérosclérose, le diabète, l'obésité, etc., capables d'exercer une activité prophylactique en terme

de neuroprotection mais également d'assurer une neuroprotection active dans la phase aiguë des accidents ischémiques cérébraux.

Les fibrates sont largement utilisés dans le cadre du traitement des hypertriglycéridémies. Ils ont également des effets favorables au niveau de l'hypercholestérolémie. Les fibrates ont un spectre d'action pléiotropique. Ils activent une classe de récepteurs nucléaires (PPARs) impliqués dans la coordination de l'expression de protéines responsables du transport ou du métabolisme des lipides. Le caractère pléiotropique du spectre d'action des fibrates réside dans la diversité des gènes cibles des PPARs. En effet, les fibrates sont capables de normaliser la lipémie et donc de réduire le développement de l'athérosclérose, mais ils ont également des propriétés anti-inflammatoires sur la paroi vasculaire et sur la thrombose (Fruchart, Staels et al. 2001).

Les PPARs (a, p, y) appartiennent à la famille des récepteurs nucléaires activés par les hormones. Lorsqu'ils sont activés par une association avec leur ligand, ils s'hétérodimérisent avec le Retinoïd-X-Receptor (RXR) et se fixent alors sur des « Peroxisome Proliferator Response Elements » (PPREs) qui sont localisés dans la séquence des promoteurs des gènes cibles. La fixation de PPAR sur le PPRE induit ainsi l'expression du gène cible (Fruchart, Staels et al. 2001).

Les PPARs sont distribués dans une grande variété d'organes, mais avec une certaine tissu-spécificité pour chacun d'entre eux à l'exception de PPAR, 8 dont l'expression semble ubiquitaire. L'expression de PPARa est particulièrement importante au niveau du foie et le long de la paroi intestinale alors que PPARy s'exprime principalement dans le tissu adipeux et la rate. Au niveau du système nerveux central les trois sous types (a, ß, y) sont exprimés. Les cellules telles que les oligodendrocytes ainsi que les astrocytes expriment plus particulièrement le sous-type PPARa (Kainu, Wikstrom et al. 1994).

Les gène cibles des PPARs contrôlent le métabolisme des lipides et des glucides. Cependant, des découvertes récentes suggèrent que les PPARs participent à d'autres processus biologiques. L'activation des PPARs par leurs ligands induit le changement de l'activité transcriptionnelle de gènes qui modulent le processus inflammatoire, les enzymes antioxydantes, l'angiogénèse, la prolifération et la différenciation cellulaire, l'apoptose, les activités des iNOS,

MMPases et TIMPs (Smith, Dipreta et al. 2001 ; Clark 2002). L'activation de PPAR a et y est par exemple responsable de l'arrêt de la prolifération des kératinocytes épidermiques et favorise leur différenciation (Ellis, Varani et al. 2000 ; Komuves, Hanley et al. 2000).

Les radicaux libres interviennent dans un spectre très large de pathologies comme les allergies, l'initiation et la promotion cancéreuse, les pathologies cardiovasculaires (athérosclérose, ischémie), les désordres génétiques et métaboliques (diabètes), les maladies infectieuses et dégénératives (Alzheimer, Parkinson, Prion, etc. ) ainsi que les problèmes ophtalmiques (Mates, Perez- Gomez et al. 1999).

Les espèces réactives oxygénées (ROS) sont produites pendant le fonctionnement normal de la cellule. Les ROS sont constituées de radicaux hydroxyle (OH), de l'anion superoxyde (O2-), du peroxyde d'hydrogène (H202) et de l'oxyde nitrique (NO). Ces espèces sont très labiles et, du fait de leur grande réactivité chimique, elles constituent un danger pour les fonctions biologiques des cellules. Elles provoquent des réactions de peroxydation lipidique, l'oxydation de certains enzymes et des oxydations très importantes des protéines qui mènent à leur dégradation. La protection vis-à-vis de la peroxydation lipidique est un processus essentiel chez les organismes aérobies, car les produits de peroxydation peuvent causer des dommages à l'ADN. Ainsi un dérèglement ou une modification de l'équilibre entre la production, la prise en charge et l'élimination des espèces radicalaires par les défenses antioxydantes naturelles conduisent à la mise en place de processus délétères pour la cellule ou l'organisme.

La prise en charge des ROS se fait via un système antioxydant qui comprend une composante enzymatique et non enzymatique. Le système enzymatique se compose de plusieurs enzymes dont les caractéristiques sont les suivantes - La superoxyde dismutase (SOD) détruit le radical superoxyde en le convertissant en peroxyde. Ce dernier est lui même pris en charge par un autre système enzymatique. Un faible niveau de SOD est constamment généré par la respiration aérobie. Trois classes de SOD ont été identifiées chez l'homme, elles contiennent chacune du Cu, Zn, Fe, Mn, ou Ni comme

cofacteur. Les trois formes de SOD humaines sont reparties de la manière suivante Cu-Zn SOD qui sont cytosoliques, une Mn-SOD mitochondriale et une SOD extracellulaire.

-La catalase est très efficace pour convertir le peroxyde d'hydrogène (H202) en eau et en O2. Le peroxyde d'hydrogène est catabolisé de manière enzymatique dans les organismes aérobies. La catalase catalyse également la réduction d'une variété d'hydroperoxydes (ROOH).

-La glutathion peroxydase contient du sélénium comme cofacteur et catalyse la réduction d'hydroperoxydes (ROOH et H202) en utilisant du glutathion, et protège ainsi les cellules contre les dommages oxydatifs.

Les défenses cellulaires antioxydantes non enzymatiques sont constituées par des molécules qui sont synthétisées ou apportées par l'alimentation.

Il existe des molécules antioxydantes présentes dans différents compartiments cellulaires. Les enzymes détoxifiantes sont par exemple chargées d'éliminer les radicaux libres et sont indispensables à la vie de la cellule. Les trois types de composés antioxydants les plus importants sont les caroténoides, la vitamine C et la vitamine E (Gilgun-Sherki, Melamed et al. 2001).

Pour éviter le phénomène d'apoptose induit par l'ischémie cérébrale et ses conséquences secondaires, les inventeurs ont mis au point de nouveaux composés capables de prévenir l'apparition des facteurs de risque décrits ci- dessus et capables d'exercer une activité prophylactique en terme de neuroprotection, mais également d'assurer une neuroprotection active dans la phase aiguë des accidents ischémiques cérébraux.

Les inventeurs ont également mis en évidence que les composés selon l'invention ont à la fois des propriétés d'activateurs PPAR, d'antioxydants et d'antiinfiammatoires et, à ces titres, les composés présentent un haut potentiel thérapeutique ou prophylactique des accidents ischémiques cérébraux.

La présente invention concerne ainsi de nouveaux dérivés de 1,3- diphénylprop-2-èn-1-one substitués, des compositions pharmaceutiques les comprenant, leurs applications en thérapeutique, notamment pour le traitement de l'ischémie cérébrale.

La présente invention a donc pour but de proposer de nouveaux dérivés de 1, 3-diphénylprop-2-èn-1-one substitués présentant une formule améliorée et une efficacité thérapeutique satisfaisante.

Ces buts et d'autres sont atteints par la présente invention qui a notamment pour objet des dérivés de 1, 3-diphénylprop-2-èn-1-one substitués de formule (1) suivante : dans laquelle : X1 représente un halogène ou un groupement-R1 ou un groupement répondant à la formule suivante :-G1-R1, X2 représente un atome d'hydrogène ou un groupement thionitroso ou un groupement hydroxy ou un groupement alkyloxy non substitué ou un groupement alkylcarbonyloxy ou un groupement thiol ou un groupement alkylthio ou un groupement alkylcarbonylthio, X2 peut également représenter un atome d'oxygène ou de soufre lié au carbone 3 de la chaîne propène, pour former un dérivé de type 2-phényl-4H-1-benzopyran-4-one (cette possibilité est représentée dans la formule (I) par les pointillés), X3 représente un groupement-R3 ou un groupement répondant à la formule suivante :-G3-R3, X4 représente un halogène ou un groupement thionitroso ou un groupement-R4 ou un groupement répondant à la formule suivante :-G4-R4,

X5 représente un groupement-R5 ou un groupement répondant à la formule suivante :-G5-R5, X6 est un atome d'oxygène ou un atome d'azote, dans le cas où X6 est un atome d'azote, il porte un atome d'hydrogène ou un groupement hydroxy ou un groupement alkyloxy, R1, R3, R4, R5, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle substitué ou non par au moins un groupement faisant partie du groupe 1 ou du groupe 2 définis ci-dessous, G1, G3, G4, G5, identiques ou différents, représentent un atome d'oxygène ou de soufre, avec au moins un des groupements X1, X3, X4 ou X5 répondant à la formule - G-R, et avec au moins un des groupements R1, R3, R4 ou R5 présent sous la forme d'un radical alkyle portant au moins un substituant du groupe 1 ou 2, ledit radical alkyle étant lié directement au cycle ou étant associé à un groupement G selon la formule-GR, les substituants du groupe 1 sont choisis parmi les groupements carboxy de formule :-COOR6 et les groupements carbamoyl de formule :-CONR6R7, les substituants du groupe 2 sont choisis parmi l'acide sulfonique (-SO3H) et les groupements sulfonamide de formule :-SO2NR6R7, avec R6 et R7, identiques ou différents, représentant un atome d'hydrogène ou un radical alkyle éventuellement substitué par au moins un groupe de type 1 ou 2, leurs isomères optiques et géométriques, leurs racémates, leurs tautomères, leurs sels, leurs hydrates et leurs mélanges,

à l'exclusion des composés de formule (1) dans laquelle : - Xi, X2, X3 et X5 représentent simultanément un atome d'hydrogène, X6 représente un atome d'oxygène et X4 représente un groupement de formule-0- CRsRe-COORio, avec R8 et R9, identiques ou différents, représentent un radical alkyle de C1 à C2 (comprenant un ou deux atomes de carbone), et Rio représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de C1 à C7 (comprenant de un à sept atomes de carbone), - X2, X3 et X5 représentent simultanément un atome d'hydrogène, Xi représente un atome d'halogène ou un radical R1 ou-G1R1, où R1 représente un radical alkyle non substitué de C1 à C2 et G1 représente un atome d'oxygène, X6 représente un atome d'oxygène et X4 représente un groupement de formule-0- CRnRi2-COORio, avec Ru et R12, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de C1 à C2, et Rio représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de C1 à C7, et - X2 représente un atome d'hydrogène et Xi représente-G1R1 où G1 représente un atome d'oxygène et R1 représente CH2COOH.

La présente invention inclut également les prodrogues des composés de formule (I), qui, après administration chez un sujet, vont se transformer en composés de formule (1) et/ou les métabolites des composés de formule (I) qui présentent des activités thérapeutiques comparables aux composés de formule (l) La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique comprenant, dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique, au moins un composé de formule (I) tel que décrit ci-dessus, éventuellement en association avec un autre actif thérapeutique.

Elle concerne aussi l'utilisation d'au moins un composé de formule (I) pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à traiter une pathologie vasculaire cérébrale, tel que l'ischémie cérébrale ou un accident hémorragique cérébral.

La présente invention a enfin pour objet un procédé de préparation des composés de formule (I).

Dans le cadre de la présente invention, les dérivés de formule (I) tels que décrits ci-dessus peuvent adopter la conformation cis ou trans.

De manière avantageuse, aucun des groupements X3, X4 et X5 ne représente un atome d'hydrogène. Les composés de la formule (1) répondant à la précédente définition constituent les composés de la famille générale (II).

De manière avantageuse, un ou deux des groupements X3, X4 et X5 représente un atome d'hydrogène et X1 est un groupement alkyle non substitué. Les composés de la formule (I) répondant à la précédente définition constituent les composés de la famille générale (III).

De manière avantageuse, un ou deux des groupements X3, X4 et X5 représente un atome d'hydrogène et X2 est groupement thionitroso ou un groupement alkylcarbonyloxy ou un groupement thiol ou un groupement alkylthio ou un groupement alkylcarbonylthio, X2 peut également représenter un atome d'oxygène ou de soufre lié au carbone 3 de la chaîne propène, pour former un dérivé de type 2-phényi-4H-1-benzopyran-4-one (cette possibilité est représentée dans la formule (I) par les pointillés). Les composés de la formule (I) répondant à la précédente définition constituent les composés de la famille générale (IV).

De manière avantageuse, un ou deux des groupements X3, X4 et X5 représente un atome d'hydrogène et au moins un des groupements X1, X3, X4 ou X5 est de la forme GR dans laquelle G est un atome de soufre. Les composés de la formule (I) répondant à la précédente définition constituent les composés de la famille générale (V).

De manière avantageuse, un ou deux des groupements X3, X4 et X5 représente un atome d'hydrogène et au moins un des groupements X1, X3, X4 ou

X5 est de la forme-G-R dans laquelle G est un atome d'oxygène et R est un groupement alkyle substitué par un substituant du groupe 1 dans lequel R6 n'est pas un atome d'hydrogène. Les composés de la formule (I) répondant à la précédente définition constituent les composés de la famille générale (VI).

De manière avantageuse, un ou deux des groupements X3, X4 et X5 représente un atome d'hydrogène et au moins un des groupements X1, X3, X4 ou X5 est de la forme GR dans laquelle G est un atome d'oxygène et R est un groupement alkyle substitué par une sulfonamide telle que définie ci-dessus. Les composés de la formule (I) répondant à la précédente définition constituent les composés de la famille générale (Vil).

De manière avantageuse, X4 est un groupement thionitroso ou un groupement-R4 ou un groupement répondant à la formule-G4-R4. Les dérivés de la formule (I) dans lesquels X4 répond à la précédente définition représentent les dérivés de formule générale (VIII) dans laquelle G4 et R4 sont tels que définis précédemment.

De manière avantageuse, X2 est un groupement thionitroso ou un groupement hydroxy ou un groupement alkyloxy ou un groupement thiol ou un groupement alkylthio. Les dérivés de la formule (I) dans lesquels X2 répond à la précédente définition représentent les dérivés de formule générale (IX).

D'autres dérivés avantageux de la formule (I) de l'invention ont une formule générale (X) telle que X4 est un groupement thionitroso ou un groupement-R4 ou un groupement répondant à la formule-G4-R4 et X2 est un groupement thionitroso ou un groupement hydroxy ou un groupement alkyloxy ou un groupement thiol ou un groupement alkylthio, G4 et R4 étant tels que définis précédemment.

D'autres dérivés avantageux de la formule (I) de l'invention ont une formule générale (XI) telle que X1 représente un groupement-R1 ou un groupement répondant à la formule-G1-R1, avec R1 étant un groupement alkyle substitué par

un groupement faisant partie du groupe 1 et G1 et le substituant du groupe 1 étant tels que définis précédemment.

Plus préférentiellement, un autre objet de l'invention concerne les dérivés de la formule (XI) tels que décrits précédemment, caractérisés en ce que X1 est un groupement-G1-R1.

Encore plus préférentiellement, un autre objet de l'invention concerne les dérivés de la formule (XI) tels que décrits précédemment, caractérisés en ce que X1 est un groupement-G1-R1 dans lequel gel est un atome d'oxygène.

D'autres dérivés avantageux de la formule (t) de l'invention ont une formule générale (XII) telle que X1 représente un groupement-R1 ou un groupement répondant à la formule-G1-R1, avec R1 étant un groupement alkyle substitué par un groupement faisant partie du groupe 2 et G1 et le substituant du groupe 2 étant tels que définis précédemment.

D'autres dérivés avantageux de la formule (I) de l'invention ont une formule générale (XI11) telle que X3 représente un groupement-R3 ou un groupement répondant à la formule-G3-R3, avec R3 étant un groupement alkyle substitué par un groupement faisant partie du groupe 1 et G3 et le substituant du groupe 1 étant tels que définis précédemment.

D'autres dérivés avantageux de la formule (I) de l'invention ont une formule générale (XIV) telle que X3 représente un groupement-R3 ou un groupement répondant à la formule-G3-R3, avec R3 étant un groupement alkyle substitué par un groupement faisant partie du groupe 2 et G3 et le substituant du groupe 2 étant tels que définis précédemment.

D'autres dérivés avantageux de la formule (I) de l'invention ont une formule générale (XV) telle que X4 représente un groupement-R4 ou un groupement répondant à la formule-G4-R4 avec R4 étant un groupement alkyle substitué par

un groupement faisant partie du groupe 1 et G4 et le substituant du groupe 1 étant tels que définis précédemment.

Plus préférentiellement, un autre objet de l'invention concerne des dérivés de la formule (XV) tels que décrits précédemment, caractérisés en ce que X4 est un groupement-G4-R4.

Encore plus préférentiellement, un autre objet de l'invention concerne des dérivés de la formule (XV) tels que décrits précédemment, caractérisés en ce que X4 est un groupement-G4-R4 dans lequel G4 est un atome d'oxygène.

Encore plus préférentiellement, un autre objet de l'invention concerne des dérivés de la formule (XV) tels que décrits précédemment, caractérisés en ce que X4 est un groupement-G4-R4 dans lequel G4 est un atome d'oxygène, et X3 ou X5 représente respectivement R3 ou G3R3, d'une part, et R5 ou G5R5, d'autre part, avec R3 ou R5 étant des groupements alkyles portant un substituant du groupe 1, ledit substituant du groupe 1 étant tel que défini précédemment.

D'autres dérivés avantageux de la formule (I) de l'invention ont une formule générale (XVI) telle que X4 représente un groupement-R4 ou un groupement répondant à la formule-G4-R4 avec R4 étant un groupement alkyle substitué par un groupement faisant partie du groupe 2 et G4 le substituant du groupe 2 étant tels que définis précédemment.

D'autres dérivés avantageux de la formule (I) de l'invention ont une formule générale (XVII) telle que X1 représente un halogène.

D'autres dérivés avantageux de la formule (I) de l'invention ont une formule générale (XVIII) telle que X1 représente un groupement-R1 avec R1 étant un groupement alkyle de C1 à C4 substitué ou non par au moins un groupement faisant partie du groupe 1 ou du groupe 2 définis ci-dessus.

D'autres dérivés avantageux de la formule (I) de l'invention ont une formule générale (XIX) telle que X1 représente un groupement-G1 R1 avec R1 étant un groupement alkyle de C1 à C3 substitué ou non par au moins un groupement faisant partie du groupe 1 ou du groupe 2 définis ci-dessus.

D'autres dérivés avantageux de la formule (I) de l'invention ont une formule générale (XX) telle que X1 représente un groupement-R1 avec R1 étant un groupement alkyle de C5 à C24 substitué ou non par au moins un groupement faisant partie du groupe 1 ou du groupe 2 définis ci-dessus.

D'autres dérivés avantageux de la formule (I) de l'invention ont une formule générale (XXI) telle que X1 représente un groupement-G1 R1 avec R1 étant un groupement alkyle de C4 à C24 substitué ou non par au moins un groupement faisant partie du groupe 1 ou du groupe 2 définis ci-dessus.

D'autres dérivés avantageux de la formule (1) de l'invention ont une formule générale (XXII) telle que X6 représente un atome d'oxygène.

Un autre objet de l'invention concerne des dérivés de la formule (I) tels que décrits précédemment, caractérisés en ce que X4 est un groupement-G4-R4, R4 est tel que défini précédemment et X3 ou X5 représentent respectivement R3 ou G3R3, d'une part, et R5 ou G5R5, d'autre part, avec R3 ou R5 qui représente un groupement alkyle portant un substituant du groupe 1, ledit substituant du groupe 1 étant tel que défini précédemment.

Un autre objet de l'invention concerne les dérivés de formule (I) dans laquelle XI, X3, X4 ou X5 représente OC (CH3) 2COOR6 avec R6 étant tel que défini précédemment.

Un autre objet de l'invention concerne les dérivés de formule (I) dans laquelle X1, X3, X4 ou X5 représente SC (CH3) 2COOR6 avec R6 étant tel que défini précédemment.

Selon la présente invention, le terme"alkyle"désigne un radical hydrocarboné saturé, linéaire, ramifié ou cyclique, halogéné ou non, ayant plus particulièrement de 1 à 24, de préférence 1 à 10, atomes de carbone tels que méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, tert-butyle, pentyle, néopentyle, n-hexyle. Les groupes comportant un ou deux atomes de carbone ou comportant de deux à sept atomes de carbone sont particulièrement préférés. Les groupes méthyle et éthyle sont tout particulièrement préférés.

Le terme thionitroso fait référence à un groupement nitroso lié au cycle aromatique par l'intermédiaire d'un atome de soufre.

Le terme halogène représente un atome de chlore ou un atome de brome ou un atome d'iode ou un atome de fluor.

Le terme alkyloxy fait référence à une chaîne alkyle liée au cycle par l'intermédiaire d'un atome d'oxygène. La chaîne alkyle répond à la définition précédemment énoncée.

Le terme alkylthio fait référence à une chaîne alkyle liée au cycle aromatique par l'intermédiaire d'un atome de soufre (liaison thioéther). La chaîne alkyle répond à la définition précédemment énoncée.

Selon un mode particulier de l'invention, les composés préférés sont indiqués ci-dessous avec les formules qui leur sont associées : le 1- [2-hydroxy-4-chlorophényl]- 3- [4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn- 1-one et le 1- [2-hydroxy-4-chlorophényl]- 3- [4-isopropyloxycarbonyi diméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one :

R =-H,-CH (CH3) 2 le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one et le 1-[2-hydroxyphényl]-3-[4-isopropyloxycarbonyldiméthylméth yloxyphényl] prop-2- èn-1-one

R =-H,-CH (CH3) 2 le 1- [2-méthylcarbonyloxyphényl]-3- [4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2- èn-1-one et le 1-[2-méthylcarbonyloxyphényl]-3-[4-isopropyloxycarbonyldim éthyl méthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one :

R =-H,-CH (CH3) 2 le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]-1- hydroxyiminoprop-2-ène et le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [4- isopropyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl]-1-hydroxyimi noprop-2-ène :

R =-H,-CH (CH3) 2 le 1- [2-hydroxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]-3- [3, 5-ditertbutyl-4- hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one, le 1- [2-hydroxy-4-éthyloxycarbonyl diméthylméthyloxyphényl]-3- [3, 5-ditertbutyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one et le <BR> <BR> 1- [2-hydroxy-4-éthoxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl]-3- [3, 5-ditertiobutyl-4- hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one : le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [3-carboxydiméthylméthyloxy-4-hydroxy-5- tertbutylphényl] prop-2-èn-1-one et le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [3- isopropyloxycarbonyldiméthylméthyloxy-4-hydroxy-5-tertbuty lphényl] prop-2-èn-1- one :

R =-H, -CH (CH3) 2

le 1- [2-hydroxy-4-chlorophényl]-3- [3-carboxydiméthylméthyloxy-4-hydroxy-5- tertbutylphényl] prop-2-èn-1-one et le 1- [2-hydroxy-4-chlorophényl]-3- [3- <BR> <BR> isopropyloxycarbonyld iméthylméthyloxy-4-hydroxy-5-tertbutylphényl] prop-2-èn-1- one :

R =-H,-CH (CH3) 2 le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [3-carboxydiméthylméthyl-4-hydroxy-5- tertbutylphényl] prop-2-èn-1-one et le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [3- isopropyloxycarbonyldiméthylméthyl-4-hydroxy-5-tertbutylph ényl] prop-2-èn-1-one :

R =-H,-CH (CH3) 2 le 1-[2-hydroxy-4-chorophényl]-3-[3-carboxydiméthylméthyl-4- hydroxy-5- teributylphényl] prop-2-èn-1-one et le 1- [2-hydroxy-4-chlorophényl]-3- [3- isopropyloxycarbonyldiméthylméthyl-4-hydroxy-5-tertbutylph ényl] prop-2-èn-1-one :

R =-H,-CH (CH3) 2 le 1- [2-hydroxy-4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthoxy-4-carboxydiméthylméthyl oxyphényl] prop-2-èn-1-one et le 1- [2-hydroxy-4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthoxy-4- isopropyloxycarbonyldiméthylméthyloxy phényl] prop-2-èn-1-one :

R =-H,-CH (CH3) 2 le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [3, 5-diméthoxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop- 2-èn-1-one et le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [3, 5-diméthoxy-4- isopropyloxycarbonyidiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one :

R =-H,-CH (CH3) 2 <BR> <BR> <BR> le 1- [2-hydroxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]-3- [3, 5-diméthoxy-4- hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one et le 1- [2-hydroxy-4- isopropyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl]-3- [3, 5-diméthoxy-4- hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one : R =-H,-CH (CH3) 2 le 1-[2-hydroxy-4-chlorophényl]- 3-[3, 4-dihydroxy-5- carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one et le 1- [2-hydroxy-4- <BR> <BR> chlorophényl]-3- [3, 4-dihydroxy-5-isopropyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl ]- 2-propen-1-one : R =-H, -CH (CH3) 2 <BR> <BR> le 1- [2-hydroxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]- 3- [3, 5-diméthyl-4- hydroxyphényl]prop-2-èn-1-one et le 1-[2-hydroxy-4-isopropyloxycarbonyl diméthylméthyloxyphényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one : R =-H,-CH (CH3) 2 <BR> <BR> le 1- [2-hydroxy-4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyl<BR> <BR> <BR> oxyphényl] prop-2-èn-1-one et le 1- [2-hydroxy-4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- isopropyloxycarbonyldiméthylméthyloxy phényl] prop-2-èn-1-one (composé-15) :

R =-H,-CH (CH3) 2 et le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop- 2-èn-1-one et le 1-[2-hydroxyphényl]-3-[3,5-diméthyl-4-isopropyloxycarbonyl diméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one : R =-H,-CH (CH3) 2 et le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [3-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one et le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [3-isopropyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one :

R =-H,-CH (CH3) 2 le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [4-carboxydiméthylméthylthiophényl] prop-2-èn-1-one et le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [4-isopropyloxycarbonyldiméthylméthylthiophényl] prop-2- èn-1-one (composé-18) :

R =-H,-CH (CH3) 2 le 1- [2-mercapto-4-méthyloxyphényl]-3- 4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop- 2-èn-1-one et le 1- [2-mercapto-4-méthyloxyphényl]-3- [4- isopropyloxycarbonyidiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one :

R =-H,-CH (CH3) 2 le 1- [4-heptylphényl]-3- [3-méthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1- one et le 1- [4-heptylphényl]-3- [3-méthyl-4- isopropyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one :

R =-H,-CH (CH3) 2 le 1- [2-hydroxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]-3- [3, 5-dibromo-4- hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one, le 1- [2-hydroxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]-3- [3-hydroxyphényl] prop-2-èn- 1-one, le1- [2-hydroxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]-3- [4-méthylthiophényl] prop-2- <BR> <BR> èn-1-one,<BR> <BR> le 1- [2-hydroxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]-3- [4-méthylthiophényl] prop-2-<BR> <BR> èn-1-one

le 1- [2, 4-dihydroxyphényl]-3- [4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one le 1- [4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl]prop-2-èn- 1-one le1- [4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- isopropyloxycarbonyidiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one le 1- [4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2- èn-1-one <BR> <BR> le 1- [2-hydroxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]-3- [4-chlorophényl] prop-2-èn- 1-one le 1- [2-hydroxyphényl]-3- [4-carboxydiméthylméthylthiophényl] prop-2-èn-1-one le 1-[4-chloro-2-hydroxyphényl]-3-[4-carboxydiméthylméthylth iophényl] prop-2-èn- 1-one le 1- [4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]-3- [3, 5-diméthyl4-hydroxyphényl] prop-2- <BR> èn-1-one<BR> <BR> <BR> le 1- [4-méthylthiophényl]-3- [4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one le 1- 4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]-3- 4-chlorophényl] prop-2-èn-1-one le 1- [4-carboxydiméthylméthylthiophényl]-3- [4-méthylthiophényl] prop-2-èn-1-one le 1- [2-hydroxy-4-bromophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one <BR> <BR> le 1- [4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]-3- 4-méthylthiophényl] prop-2-èn-1-one le 1-t4-méthylthiophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one le 1- [4-méthylthiophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- isopropyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one le 1- [4-méthylthiophényl]-3- [3, 5-diméthyt-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop- 2-èn-1-one le 1- [2-méthoxyphényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one le 1- [2-méthoxyphényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2- èn-1-one le 1- [4-hexyloxyphényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyld iméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one

le 1- [4-hexyloxyphényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2- èn-1-one le 2-(3,5-diméthyl-4-tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxy phényl)-7-chloro-4H- 1-benzopyran-4-one le 2- (3, 5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl)-7-chloro-4H -1-benzopyran- 4-one le 1- [2-méthyloxy-4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one le 1- [2-méthyloxy-4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one le 1-[4-heptylphényl]-3-[3,5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl]prop-2-èn- 1-one le 1- [4-heptylphényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2- èn-1-one le 1- [4-bromophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one le 1- [4-bromophényl]-3-j3, 5-diméthyl-4-carboxy<BR> diméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one<BR> le 1- [2-hydroxyphényi]-3- [3, 5-diméthyl-4- isopropyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one.

Le procédé de la présente invention comprend une mise en contact en milieu basique ou en milieu acide d'au moins un composé de formule (A) avec au moins un composé de formule (B), les formules (A) et (B) étant :

formules dans lesquelles X1, X2, X3, X4 et X5 ont les définitions données précédemment.

Les conditions de mise en oeuvre de cette réaction en milieu acide ou basique sont à la portée de l'homme du métier et peuvent varier dans une large mesure.

La mise en contact de ces deux composés est avantageusement réalisée de manière stoechiométrique. Elle est réalisée de préférence à une température ambiante (entre environ 18°C et 25°C) et à pression atmosphérique.

En milieu basique, la réaction est de préférence réalisée en présence d'une base forte, tel qu'un hydroxyde de métal alcalin, comme l'hydroxyde de sodium ou un alcoolate de métal alcalin comme l'éthylate de sodium.

En milieu acide, la réaction est de préférence réalisée en présence d'un acide fort, tel que l'acide chlorhydrique.

Le schéma réactionnel peut être représenté comme suit : La synthèse en milieu basique peut être réalisée de la façon suivante : La cétone (composé (A)) à 1 équivalent-molaire et l'aldéhyde (composé (B)) à 1 équivalent-molaire sont solubilisés dans une solution hydroalcoolique d'hydroxyde de sodium à 20 équivalents-molaire. L'ensemble est agité pendant environ 18 heures à température ambiante (entre 18 et 25°C). Le milieu est ensuite acidifié

(pour atteindre en particulier un pH d'environ 2) notamment avec de l'acide chlorhydrique.

La 1, 3-diphénylprop-2-èn-1-one substituée attendue peut être obtenue par précipitation ou extraction solide/liquide après évaporation du milieu réactionnel. Elle peut être ensuite purifiée par chromatographie sur gel de silice ou par recristallisation.

La synthèse en milieu acide peut être réalisée de la façon suivante : La cétone (composé (A)) à 1 équivalent-molaire et l'aldéhyde (composé (B)) à 1 équivalent-molaire sont solubilisés dans une solution d'éthanol saturée d'acide chlorhydrique gazeux. L'ensemble est agité à température ambiante pendant environ 6 heures, le solvant est éliminé, notamment par évaporation sous pression réduite. La 1, 3-diphénylprop-2-èn-1-one substituée est purifiée, notamment par chromatographie sur gel de silice.

Le procédé de préparation des composés de formule (I) permet de préparer des composés appelés ci-dessous matières premières et composés intermédiaires. La présente invention a également pour objet certaines matières premières et composés intermédiaires obtenus dans le cadre de la présente invention.

Ces composés (matières premières et intermédiaires) sont plus particulièrement choisis parmi : le1- [4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 1), le 4-Ethyloxycarbonyl diméthylméthylthiocétophénone (matière première12) le 1- [4-méthylthiophényi]-3- [3, 5-diméthyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 2) le 1- [2-méthoxyphényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 3) le 1- [4-hexyloxyphényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1- one (composé intermédiaire 4)

le 1- [2-hydroxy-4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 5) le 2- (3, 5-dîméthyl-4-hydroxyphényl)-7-chloro-4H-1-benzopyran-4-on e (compose intermédiaire 6) le 1- [2-méthyloxy-4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- hydroxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 7) le 1- [4-heptylphényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire) le 1- [4-bromophényi]-3- [3, 5-diméthyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 8) Un autre objet de la présente invention concerne toute composition pharmaceutique comprenant dans un support acceptable sur le plan pharmaceutique au moins un composé de formule (I) tel que décrit ci-dessus.

Il s'agit avantageusement d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prophylaxie des pathologies vasculaires cérébrales et plus particulièrement de l'ischémie cérébrale ou des accidents vasculaires cérébraux. Il a en effet été trouvé de manière surprenante que les composés de formule (I) possédaient à la fois des propriétés d'activateurs PPAR, d'antioxydants et d'anti- inflammatoires et possédaient une activité prophylactique et neuroprotective aiguë de l'ischémie cérébrale.

L'invention concerne également l'utilisation d'un composé tel que défini ci- avant pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à la mise en oeuvre d'une méthode de traitement ou de prophylaxie du corps humain ou animal.

L'invention concerne également l'utilisation pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à traiter de manière curative ou préventive des pathologies vasculaires cérébrales et plus particulièrement l'ischémie cérébrale, d'un composé de formule (I), y compris les composés de formule générale (I) dans laquelle :

- Xi, X2, X3 et X5 représentent simultanément un atome d'hydrogène, X6 représente un atome d'oxygène et X4 représente un groupement de formule-0- CR8R9-COORio, avec R8 et Rg, identiques ou différents, représentent un radical alkyle de C1 à C2, et R6 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de C1 à C7, - X2, X3 et X5 représentent simultanément un atome d'hydrogène, Xi représente un atome d'halogène ou un radical R1 ou-G1R1, où R1 représente un radical alkyle non substitué de C1 à C2 et G1 représente un atome d'oxygène, X6 représente un atome d'oxygène et X4 représente un groupement de formule-0- CR11R12-COOR10, avec Ru et R12, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de C1 à C2, et Rio représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de C1 à C7 et - X2 représente un atome d'hydrogène et Xi représente-G1 R1 où G1 représente un atome d'oxygène et R1 représente CH2COOH.

L'invention concerne également une méthode de traitement des pathologies vasculaires cérébrales et plus particulièrement de l'ischémie cérébrale, comprenant l'administration à un sujet, notamment humain, d'une dose efficace d'un composé ou d'une composition pharmaceutique tels que définis ci-avant, y compris les composés de formule générale (I) dans laquelle : - Xi, Xz, Xs et k représentent simultanément un atome d'hydrogène, X6 représente un atome d'oxygène et X4 représente un groupement de formule-0- CRsR9-COORio, avec R8 et R9, identiques ou différents, représentent un radical alkyle de C1 à C2, et R6 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de C1 à C7, - X2, X3 et X5 représentent simultanément un atome d'hydrogène, Xi représente un atome d'halogène ou un radical R1 ou-G1R1, où R1 représente un radical alkyle non substitué de C1 à C2 et G1 représente un atome d'oxygène, X6 représente un atome d'oxygène et X4 représente un groupement de formule-0- CR11R12-COOR10, avec Ru et R12, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de C1 à C2, et Rio représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de C1 à C7, et

- X2 représente un atome d'hydrogène et Xi représente-G1 R1 où G1 représente un atome d'oxygène et R1 représente CH2COOH.

De préférence, la méthode de traitement des pathologies vasculaires cérébrales et plus particulièrement de l'ischémie cérébrale, comprend l'administration à un sujet, notamment humain, d'une dose efficace d'un composé de formule (I) ou d'une composition pharmaceutique tels que définis ci-avant, à l'exclusion des composés de formule générale (I) dans laquelle : - Xi, Xz, Xs et X5 représentent simultanément un atome d'hydrogène, X6 représente un atome d'oxygène et X4 représente un groupement de formule-0- CRsRg-COORio, avec R8 et Rg, identiques ou différents, représentent un radical alkyle de C1 à C2, et R6 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de C1 à C7, - X2, X3 et X5 représentent simultanément un atome d'hydrogène, Xi représente un atome d'halogène ou un radical R1 ou-G1R1, où R1 représente un radical alkyle non substitué de C1 à C2 et G1 représente un atome d'oxygène, X6 représente un atome d'oxygène et X4 représente un groupement de formule-0- CR11R12-COOR10, avec Ru et R12, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de C1 à C2, et Rio représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de C1 à C7, et - X2 représente un atome d'hydrogène et Xi représente-G1R1 où G1 représente un atome d'oxygène et R1 représente CH2COOH.

Les compositions pharmaceutiques selon l'invention comprennent avantageusement un ou plusieurs excipients ou véhicules, acceptables sur le plan pharmaceutique. On peut citer par exemple des solutions salines, physiologiques, isotoniques, tamponnées, etc., compatibles avec un usage pharmaceutique et connues de l'homme du métier. Les compositions peuvent contenir un ou plusieurs agents ou véhicules choisis parmi les dispersants, solubilisants, stabilisants, conservateurs, etc. Des agents ou véhicules utilisables dans des formulations (liquides et/ou injectables et/ou solides) sont notamment la méthylcellulose, l'hydroxyméthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, le polysorbate 80, le mannitol, la gélatine, le lactose, des huiles végétales, l'acacia,

etc.. Les compositions peuvent être formulées sous forme de suspension injectable, de gels, huiles, comprimés, suppositoires, poudres, gélules, capsules, etc., éventuellement au moyen de formes galéniques ou de dispositifs assurant une libération prolongée et/ou retardée. Pour ce type de formulation, on utilise avantageusement un agent tel que la cellulose, des carbonates ou des amidons.

Les composés ou compositions selon l'invention peuvent être administrés de différentes manières et sous différentes formes. Ainsi, ils peuvent être injectés par voie orale ou systémique, comme par exemple par voie intraveineuse, intra- musculaire, sous-cutanée, trans-dermique, intra-artérielle, etc.. Pour les injections, les composés sont généralement conditionnés sous forme de suspensions liquides, qui peuvent être injectées au moyen de seringues ou de perfusions, par exemple. Il est entendu que le débit et/ou la dose injectée peuvent être adaptés par l'homme du métier en fonction du patient, de la pathologie, du mode d'administration, etc.. Typiquement, les composés sont administrés à des doses pouvant varier entre 1 pg et 2g/administration, préférentiellement de 0,1 mg à 1 g /administration. Les administrations peuvent être quotidiennes ou répétées plusieurs fois par jour, le cas échéant. D'autre part, les compositions selon l'invention peuvent comprendre, en outre, d'autres agents ou principes actifs.

LEGENDES DES FIGURES Figure 1-1,1-2, 1-3 : Evaluation des propriétés antioxydantes des composé 2, composé 3, composé 12, composé 14 et composé 17 sur l'oxydation des LDL par le cuivre (Cu) Sur la figure 1-1, sont représentés les résultats de l'expérience mesurant la formation de diènes conjugués en fonction du temps. On peut observer que l'incubation des LDL avec les composés testés à la concentration de 1 0-4M retarde la formation de diènes conjugués. La Lag-Phase est de 111 minutes pour le cuivre seul alors que ce délai d'apparition des diènes conjugués est respectivement de 132,145, 134 et 203 minutes lorsque les LDL sont incubées avec les composé 3, composé 12, composé 14, composé 17. La Lag-Phase est supérieure à 480

minutes dans le cas où les LDL sont incubées avec le composé 2. Ce retard de formation de diènes conjugués est caractéristique de produits antioxydants.

La figure 1-2 représente la vitesse de formation des diènes en fonction des différents traitements. L'incubation des composés avec les LDL en présence de cuivre ralentit la vitesse de formation des diènes conjugués. La vitesse de formation des diènes conjugués est de 2 nmol/min/mg de LDL avec le cuivre seul, elle est de 1,7 nmol/min/mg de LDL lorsque les LDL sont incubées en présence du composé 17 à 1 0-4M, cette vitesse est non déterminée avec le composé 2 à 10- 4M (non mesurable car trop faible), La figure 1-3 représente la quantité maximum de diènes conjugués formés au cours du temps. L'incubation des LDL avec le cuivre entraîne la formation 348 nmol/mg de LDL de diènes conjugués, l'incubation avec le composé 2 à 10-4M diminue de 84% la formation de diènes conjugués (54.4 nmol/mg de LDL). Cette concentration est respectivement de 303 nmol/mg de LDL et 327 nmoUmg de LDL en présence des composés 3 et 17.

Figure 1-4,1-5, 1-6 : Evaluation des propriétés antioxydantes des composé 18, composé 19, composé 21 et composé 22 sur l'oxydation des LDL par le cuivre (Cu) Sur la figure 1-4, on peut observer que l'incubation des LDL avec les composés testés à la concentration de 10-4M retarde la formation de diènes conjugués. La Lag-Phase est de 178 minutes pour le cuivre seul alors que ce délai d'apparition des diènes conjugués est respectivement de 241, 182 et 241 minutes (de la mesure expérimentale) lorsque les LDL sont incubées avec les composé 18, composé 19, ou le composé 22. Elle est supérieure à 480 minutes dans le cas où les LDL sont incubées avec le composé 21. Ce retard de formation de diènes conjugués est caractéristique de produits antioxydants.

La figure 1-5 représente la vitesse de formation des diènes en fonction des différents traitements. La vitesse de formation des diènes conjugués est de 1,6

nmol/min/mg de LDL avec le cuivre seul, elle est de 1,4 nmol/min/mg de LDL lorsque les LDL sont incubées en présence des composés 18 à 10-4M et 1,3 nmol/min/mg de LDL lorsque les LDL sont incubées en présence des composés 22, cette vitesse est non déterminée avec le composé 21 à 10-4M (non mesurable car trop faible).

La Figure 1-6 représente la quantité maximum de diènes conjugués formée au cours du temps. L'incubation des LDL avec le cuivre entraîne la formation de 353 nmol/mg de LDL de diènes conjugués. L'incubation avec le composé 21 à 10-4M inhibe la formation de diènes conjugués. En présence des composés 18,19 et 22, elle est respectivement de 305 nmol/mg de LDL, 345 nmol/mg de LDL et 345 nmol/mg de LDL.

Figures 1-7,1-8 : Evaluation des propriétés antioxydantes des composé 25 et composé 29 sur l'oxydation des LDL par le cuivre (Cu) Sur la figure 1-7 sont représentés les résultats de l'expérience mesurant la formation de diènes conjugués en fonction du temps. On peut observer que l'incubation des LDL avec les composés testés à la concentration de 10-4M retarde la formation de diènes conjugués. La Lag-Phase est de 82 minutes pour le cuivre seul alors que ce délai d'apparition des diènes conjugués est respectivement de 120 et 135 minutes (de la mesure expérimentale) lorsque les LDL sont incubées avec les composé 25 et avec le composé 29.

La figure 1-8 représente la quantité maximum de diènes conjugués formée au cours du temps. L'incubation des LDL avec le cuivre entraîne la formation de 393 nmol/mg de LDL de diènes conjugués. En présence du composé 25 elle est de 378 nmol/mg de LDL.

Figures 1-9,1-10, 1-11 : Evaluation des propriétés antioxydantes des composé 31, composé 33 et composé 35 sur l'oxydation des LDL par le cuivre (Cu)

Sur la figure 1-9 sont représentés les résultats de l'expérience mesurant la formation de diènes conjugués en fonction du temps. On peut observer que l'incubation des LDL avec les composés testés à la concentration de 10-4M retarde la formation de diènes conjugués. La Lag-Phase est de 80 minutes pour le cuivre seul alors que ce délai d'apparition des diènes conjugués est respectivement de 139,247 et 149 minutes (de la mesure expérimentale) lorsque les LDL sont incubées avec les composé 31, composé 33 et le composé 35. Ce retard de formation de diènes conjugués est caractéristique de produits antioxydants.

La figure 1-10 représente la vitesse de formation des diènes en fonction des différents traitements. L'incubation des composés avec les LDL en présence de cuivre ralentit la vitesse de formation des diènes conjugués. La vitesse de formation des diènes conjugués est de 1,9 nmol/min/mg de LDL avec le cuivre seul, elle est de 1,6 nmol/min/mg de LDL lorsque les LDL sont incubées en présence des composés 31 à 10-4M et 0,8 nmol/min/mg de LDL lorsque les LDL sont incubées en présence du composé 33 et 1,5 nmol/min/mg de LDL lorsque les LDL sont incubées en présence du composé 35.

La Figure 1-11 représente la quantité maximum de diènes conjugués formée au cours du temps. L'incubation des LDL avec le cuivre entraîne la formation de 298 nmol/mg de LDL de diènes conjugués, en présence du composé 33 elle est de 257 nmol/mg de LDL.

Figures 1-12,1-13, 1-14 : Evaluation des propriétés antioxydantes des composé 37, composé 38 et composé 41 sur l'oxydation des LDL par le cuivre (Cu) Sur la figure 1-12 sont représentés les résultats de l'expérience mesurant la formation de diènes conjugués en fonction du temps. On peut observer que l'incubation des LDL avec les composés testés à la concentration de 10-4M retarde la formation de diènes conjugués. La Lag-Phase est de 120 minutes pour le cuivre seul alors que ce délai d'apparition des diènes conjuguées est respectivement de 196,284 et 411 minutes (de la mesure expérimentale) lorsque les LDL sont incubées avec les composé 37, composé 38 et le composé 41.

La figure 1-13 représente la vitesse de formation des diènes en fonction des différents traitements. L'incubation des composés avec les LDL en présence de cuivre ralentit la vitesse de formation des diènes conjugués. La vitesse de formation des diènes conjugués est de 1,8 nmol/min/mg de LDL avec le cuivre seul, elle est de 1,49 nmol/min/mg de LDL lorsque les LDL sont incubées en présence des composés 37 à 104M et 0,71 de LDL nmol/min/mg lorsque les LDL sont incubées en présence des composés 38 et 0,54 nmol/min/mg de LDL lorsque les LDL sont incubées en présence des composés 41.

La Figure 1-14 représente la quantité maximum de diènes conjugués formée au cours du temps. L'incubation des LDL avec le cuivre entraîne la formation de 372 nmol/mg de LDL de diènes conjugués. En présence des composés 37,38 et 41, elle est respectivement de 338 nmol/mg de LDL, 244 nmol/mg de LDL et 71 nmol/mg de LDL.

Le retard de formation de diènes conjugués, la diminution de la vitesse de formation des diènes et la diminution de la quantité totale de diènes formés sont caractéristiques de produits antioxydants.

Figures 2-1,2-2, 2-3,2-4, 2-5,2-6 : Evaluation des propriétés d'agoniste PPARa des composés selon l'invention avec le système de transactivation PPARa/Gal4.

Les cellules RK13 sont incubées avec différents composés aux concentrations suivantes 10,30 et 100 guM ou 1,10 et 100 uM pendant 24h. Les résultats sont représentés par le facteur d'induction (signal luminescent par rapport aux cellules non traitées) en fonction des différents traitements. Plus le facteur d'induction est élevé meilleure est la propriété d'agoniste pour PPARa.

Figure 2-1 : Les résultats montrent les facteurs d'induction des composé 3, composé 4, composé 7, composé 8 et composé 9. Les valeurs de ces facteurs d'induction sont notées dans le tableau 2-1. Facteur Composé Concentration d'induction 10 M 30,12 30uM 27,27 Cp3 100µM 25,84 10 M 3,99 30uM 22,15 Cp4 100 M 61,07 10 M 36,48 30uM 50,37 Cp7 100uM 37,84 10 M 0,62 30µM 1,27 Cp8 100 M 9,98 10 M 2,11 30uM 5,00 Cp9 100 M 28,19 Tableau 2-1 Les résultats montrent que le composé 3 permet l'induction d'un facteur maximale 27 à la concentration de 30pM, le composé 4 a un facteur d'induction maximal de 60 à 100 uM, de 22 à 30 zuM et de 4 à 10 uM. Le composé 7 a un facteur d'induction maximal de 50 à 100µM. Le composé 8 active le système avec un facteur d'induction maximal de 10 pour la concentration de100 pM. Le composé 9 possède un facteur d'induction de 28 pour la plus forte concentration 100µM.

Figure 2-2 : Les résultats montrent les facteurs d'induction des composés composé 11, composé 12, composé 13, composé 14 et composé 17. Les valeurs de ces facteurs d'induction sont notées dans le tableau 2-2.

Facteur Composé Concentration d'induction 1 uM 1,20 10 uM 1,39 Cp11 100µM 10,19 1 uM 1,12 10 uM 8,45 Cp12 100µM 22,54 1 uM 1,20 10 uM 1,10 Cp13 100uM 1,5 1uM 1,25 10 uM 1,36 Cp14 100µM 1,38 1 uM 79,76 10 uM 85,69 Cp17 100uM 13,80 Tableau : 2-2 Les résultats montrent que le composé 11 permet l'induction d'un facteur maximal de 10 à 100 uM, le composé 12 a un facteur d'induction maximal de 22 à 100 pM, de 8 à 30 guM et de 1 à 10 pM. Les composés 13 et 14 ont des facteurs d'induction compris entre 1,1 et 1,5 pour les différentes concentrations testées. Le composé 17 active le système avec un facteur d'induction maximal de 85 pour la concentration de 10 uM et un facteur d'induction minimal de 13,8 pour la concentration de 100uM.

Figure : 2-3 Les résultats montrent les facteurs d'induction des composé 19, composé 20, composé 21, composé 22. Les valeurs de ces facteurs d'induction sont notées dans le tableau 2-3. Facteur Composé Concentration d'induction 1 µM 1,20 10 uM 15,62 Cp19 100 M 0,07 1 je 21,50 10 M 53,45 Cp20 100µM 1, 22 1 µM 0,78 10 PM 1,10 Cp21 100pM 22,80 1 µM 2,40 10 uM 49, 49 Cp22 100 M 2,73 Tableau : 2-3 Les résultats montrent que le composé 19 permet l'induction d'un facteur maximal de 15,6 à 10 uM, le composé 20 a un facteur d'induction maximal de 53 à 10 suM. Le composés 21 a des facteurs d'induction compris entre 0, 8 et 22 pour les différentes concentrations testées. Le composé 22 active le système avec un facteur d'induction maximal de 50 pour la concentrations de 10 µM.

Figure : 2-4 Les résultats montrent les facteurs d'induction des composé 23, composé 24, composé 25, composé 26, composé 29. Les valeurs de ces facteurs d'induction sont notées dans le tableau 2-4.

Facteur Composé Concentration d'induction 1 µM 1,55 10 M 3,67 Cp23 100 M 0,12 1 M 2,06 10 M 11,62 Cp24 100 M 0,00 1 PM 13,48 10, uM 21,03 Cp25 100µM 7,01 1 µM 1,75 10 uM 7, 85 Cp26 100 M 1,08 1 M 28,36 10 pM 25, 26 Cp29 100uM 0, 27 Tableau 2-4 Le composé 23 a un facteur d'induction maximal de 3,6 à 10 uM, le composé 24 a un facteur d'induction maximal de 11 à 10 uM. Le composé 25 active le système avec des facteurs compris entre 7 et 21 selon les concentrations testées. Le composé 26 a un facteur d'induction maximal de 7,8 pour la concentrations de10 uM. le composé 29 a des facteurs d'induction de 28 et 25 pour les concentrations de 1 et 10uM respectivement.

Figure : 2-5 Les résultats montrent les facteurs d'induction des composé 31 et composé 33.

Les valeurs de ces facteurs d'induction sont notées dans le tableau 2-5.

Facteur Composé Concentration d'induction 1 uM 3,77 10 M 15,52 Cp31 1 M 1,21 1 uM 22, 05 10 uM 44,52 Cp33 100, uM 77,62 1 ableau : 2-5 Le composé 31 active le système avec un facteur d'induction de 15,5 à la concentration de 10µM Les facteurs d'induction observés pour le composé 33 sont de 22,44 et 77 pour les concentration de 1,10 et 100µM respectivement.

Figure : 2-6 Les résultats montrent les facteurs d'induction des composé 37, composé 38, composé 41. Les valeurs de ces facteurs d'induction sont notées dans le tableau 2-6. Facteur Composé Concentration d'induction 1 M 24,55 10 M 27, 83 Cp37 1 ooph 0,02 1 uM 1470 10 je 22,22 Cp38 100 M 0,311 1 PM 34,61 10 M 31, 18 Cp41 100 M 3, 39 Tableau : 2-6 Les facteurs d'induction maximum pour les composés 37,38 et 41 sont respectivement de 27,22 et 31, ils sont observés pour la concentration de 1 OpM.

Ces résultats montrent que les composés selon l'invention testés possèdent la propriété de ligand vis-à-vis de PPARa et permettent aussi son activation au niveau transcriptionnel.

Figure 2-7 : Evaluation des propriétés d'agoniste PPARy des composés selon l'invention avec le système de transactivation PPARy/Gal4.

Les cellules RK13 sont incubées avec différents composés aux concentrations suivantes 1,10 et 100 uM pendant 24h. Les résultats sont représentés par le facteur d'induction (signal luminescent par rapport aux cellules non traitées) en fonction des différents traitements. Plus le facteur d'induction est élevé meilleure est la propriété d'agoniste pour PPARy.

Les résultats de la figure montrent les facteurs d'induction des composé 17, composé 33, et composé 29. Les valeurs de ces facteurs d'induction sont notées dans le tableau 2-7. Facteur Composé d'induction 1 M 15,37 10 M 24,92 Cep17 100 M 6,13 1 PM 15,65 10 M 33,90 Cp33 100 M 45,58 1 uM 17,05 10 M 33,89 Cp29 100 uM 0,01 Tableau 2-7 : Les résultats montrent que le composé 17 permet l'induction d'un facteur maximal de 25 à 10 uM. Le composé 33 a un facteur d'induction maximal de 45,6 à 100 uM et le composé 29 de 33,9 à la concentration de lOpM.

Ces résultats montrent que les composés selon l'invention testés possèdent la propriété de ligand vis-à-vis de PPARy et permettent aussi son activation au niveau transcriptionnel.

Figures 3-1 et figure 3-2 : Evaluation des propriétés neuroprotectices prophylactiques et en phase aiguë des composés selon l'invention.

Figure 3-1 : neuroprotection prophylactique.

Cette figure montre la taille de l'infarct en mm3 mesuré après l'occlusion intraluminale de l'artère moyenne cérébral pendant 60 minutes, reperfusion pendant 24 heures avant sacrifice. La figure 3-1 représente la taille de l'infarct obtenu avec trois groupes de souris C57 black/6. Deux de ces groupes d'animaux sont traités par gavage avec 200 mg par kg par jour de composé 15 ou 200 mg par kg par jour de composé 42 pendant 14 jours avant l'occlusion.

Cette figure permet de constater que la taille de l'infarct chez les animaux non traités est de 37 mm3 alors qu'elle est de 24 mm3 pour les animaux traités avec le composé 42 et de 32 mm3 avec le composé 15.

Figure 3-2 : neuroprotection aiguë.

La figure 3-2 représente la taille de l'infarct obtenu avec trois groupes de souris C57 black/6. Les animaux sont traités avec 200 mg par kg par jour de composé 15 ou 200 mg par kg par jour de composé 42 pendant 72 heures après l'occlusion.

Cette figure permet de constater que la taille de l'infarct total corrigé chez les animaux non traités est de 50 mm3 alors qu'elle est de 39 mm 3 pour les animaux traités avec le composé 42 et de 43 mm3 avec le composé 15.

Les résultats présentés par les figures 3-1 et 3-2 montrent l'efficacité des composés en tant que composés neuroprotecteurs. Ils sont actifs en traitement prophylactique et en traitement de la phase aiguë.

D'autres aspects et avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs.

EXEMPLES Les composés de l'invention sont préparés selon les méthodes générales décrites ci-dessous.

Description des méthodes générales de synthèse selon l'invention : Synthèse de 1, 3-diphénylprop-2-en-1-ones : X1 = OH, CI, Br-SCH3,-OC6H13,-C7H15, OC (CH3) 2COOR6, SC (CH3) 2COOR6, X2 = H, 0 (2-phényl-4-H-1-benzopyran-4-one), OCH3, OH X4 = OH, CI, Br, -SCH3, OC (CH3) 2COOR6, SC (CH3) 2COOR6 X3 et X5 = CH3, C (CH3) 3, OCH3, OH, OC (CH3) 2COOR6

R6 = CH2CH3, H Méthode générale 1 : Synthèse de 1, 3-diphénylprop-2-en-1-ones en milieu acide : La cétone (1 éq) et l'aldéhyde (1 éq) sont solubilisés dans une solution d'éthanol saturée d'acide chlorhydrique gazeux. L'ensemble est agité à température ambiante pendant 6h puis le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite. La 1, 3-diphénylprop-2-èn-1-one est purifiée par chromatographie sur gel de silice.

Méthode générale 2 : Synthèse de 1, 3-diphénylprop-2-en-1-ones en milieu basique : La cétone (1 éq) et l'aldéhyde (1 éq) sont solubilisés dans une solution hydroalcoolique d'hydroxyde de sodium (20 éq). L'ensemble est agité 18 heures à température ambiante. Le milieu est acidifié (pH = 2) avec de l'acide chlorhydrique.

La 1, 3-diphénylprop-2-èn-1-one est obtenue par précipitation ou extraction solide liquide après évaporation du milieu réactionnel. Elle est purifiée par chromatographie sur gel de silice ou par recristallisation.

Méthode générale 3 : Synthèse de 1, 3-diphénylprop-2-en-1-ones substituées en présence d'éthylate de sodium : Le sodium (1 éq) est dissout dans l'éthanol absolu. La cétone (1 éq) et l'aldéhyde (1 éq) sont ajoutés. L'ensemble est maintenu sous agitation à température ambiante pendant 12 heures puis une solution de soude 2N (5 éq) est ajoutée. L'ensemble est maintenu à 100°C pendant 12 heures. Le milieu réactionnel est acidifié par addition d'un solution aqueuse d'acide chlorhydrique 6N. Le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice ou par recristallisation.

O-Alkylation de phénols et S-alkylation de thiophénols Méthode générale 4 : X1 = CI, Br-SCH3,-OC6H13,-C7H15 X2 = H, 0 (2-phényl-4-H-1-benzopyran-4-one), OCH3 X3 et X5 = CH3 R6 = CH2CH3, H Le phénol (1 éq) est solubilisé dans l'acétonitrile, le dérivé halogéné (1 à 10 éq), puis le carbonate de potassium (5 éq) sont ajoutés. Le milieu réactionnel est maintenu environ 10 heures sous vive agitation à reflux. Les sels sont éliminés par filtration, le solvant et l'excès de réactif sont éliminés par évaporation sous pression réduite, le produit attendu est purifié par chromatographie sur gel de silice.

Acidolyse d'esters tertiobutyliques Méthode générale 5 : X3 et X5 = CH3, X2 = H, 0 (2-phényl-4-H-1-benzopyran-4-one), OCH3 , X1 = Cl, Br, -SCH3, OC6H13,-C7H15 L'ester tertiobutylique (1 éq) est solubilisé dans du dichlorométhane, l'acide trifluoroacétique (10 éq) est additionné, l'ensemble est maintenu 12 heures sous agitation à température ambiante. Le produit formé est purifié par chromatographie sur gel de silice ou par recristallisation.

Synthèse des matières premières servant à la synthèse des composés selon l'invention : Matière première 1 : 2'-Hydroxy-4'-éthoxvcarbonvldiméthvlméthoxy acétophénone : Ce composé est synthétisé à partir de 2', 4'-dihydroxyacétophénone et de bromoisobutyrate d'éthyle (1 éq) selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1H CDCb 8ppm : 1.25 (t, J = 7.17 Hz, 3H), 1.67 (s, 6H), 2.56 (s, 3H), 4.24 (q, J = 7. 17,2H), 6.27 (d, J = 2. 55 Hz, 1 H), 6.37 (dd, J = 2. 55Hz, J = 8. 72 Hz, 1 H), 7.62 (d, J = 8.72, 1H), 12,6 (signal, 1 H).

Bibliographie : Brevet US n° 3,629, 290 (1970), Fisons Pharmaceutical

Matière première 2 : Acétate de 3-chlorophénile

Le 3-chlorophénol est solubilisé dans le dichlorométhane. La triéthylamine (1éq) et l'anhydride acétique (2 éq) sont ajoutés. L'ensemble est agité 5 heures à température ambiante. Le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est repris par du dichlorométhane, séché sur sulfate de magnésium puis le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite. Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 95-5).

RMN 1 H CDC13 ôppm : 2.29 (s, 3 H), 6.99-7. 33 (m, 4 H) Matière première 3 : 4'-Chloro-2'-hydroxyacétophénone L'acétate de 3-chlorophényle (matière première 2) est mélangé au chlorure d'aluminium (3 éq). Le mélange est chauffé 1 heure à 200°C. Le milieu réactionnel est ramené à température ambiante puis versé dans la glace. La phase aqueuse est extraite par du chlorure de méthylène qui est séché sur sulfate de magnésium puis évaporé sous pression réduite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate d'éthyle : 95-5).

RMN 1 H CDC ! 3 appm : 3.41 (s, 3 H), 6.81 (dd, J = 8.82Hz, J = 1.47Hz, 1 H), 6.91 (d, J = 1.47Hz, 1H), 7.60 (d, 8.82Hz, 1 H), 12.33 (s, 1H) Bibliographie : Chen eta/, J Chem Soc, 1958,146-148.

Matière première 4 : 4-Ethyloxycarbonyldiméthvlméthyloxybenzaldéhvde

Ce composé est synthétisé à partir de 4-hydroxyabenzaldéhyde et de bromoisobutyrate d'éthyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1 H CDCI3 8 ppm : 1.20 (t, = 6.96Hz, 3H), 1.67 (s, 6H), 4.21 (q, J = 6.96Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.91 Hz, 2H), 7.79 (d, J = 8.94Hz, 2H), 9.87 (S, 1 H).

Matière première 5 : 3, 5-diméthyloxy-4-éthyloxycarbonyldiméthylméthyloxybenzald éhyde

Ce composé est synthétisé à partir de 3, 5-diméthyloxy-4- hydroxyabenzaldéhyde et de bromoisobutyrate d'éthyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 8-2).

RMN 1 H CDCI3 å ppm : 1.33 (t, J = 7.29Hz, 3H), 1.50 (s, 6H), 3.84 (s, 6H), 4.27 (q, J = 7.29Hz, 2H), 7.08 (s, 2H), 9.86 (s, 1 H) Matière première 6 : 3, 5-diméthyl-4-éthylocarbonyldiméthylméthyloxybenzaldéhvd e

Ce composé est synthétisé à partir de 3, 5-diméthyl-4- hydroxyabenzaldéhyde et de bromoisobutyrate d'éthyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 95-5).

RMN 1H CDCI3 å ppm : 1.37 (t, J = 7.14Hz, 3H), 1.50 (s, 6H), 2.29 (s, 6H), 4.30 (q, J = 7.14Hz, 2H), 7.54 (s, 2H), 9.88 (s, 1H) Matière première 7 : 3-Ethyloxycarbonyldiméthylméthyloxybenzaldéhyde : Ce composé est synthétisé à partir de 3-hydroxybenzaldéhyde et de bromoisobutyrate d'éthyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1).

RM N 1H CDOs 8 ppm : 1.24 (t, J = 7.27Hz, 3H), 1.62 (s, 6H), 4.25 (q, J = 7.27Hz, 2H), 7.11 (m, 1H), 7.31 (m, 1H), 7.40 (t, J = 8. 19Hz, 1H), 7.49 (m, 1H), 9.93 (s, 1 H).

Matière première 8 : 4-Ethvloxycarbonyldiméthylméthyl thiobenzaldéhyde

Le 4-méthylthiobenzaldéhyde (1 éq) est solubilisé dans du chlorure de méthylène, la solution est refroidie à 0°C. L'acide métachloroperbenzoique (1.5 éq) est ajouté par petites fractions. L'avancement de la réaction est suivi par chromatographie sur couche mince. Un éventuel complément d'acide métachloroperbenzoique est ajouté de façon à obtenir la disparition totale du produit de départ. Le précipité formé est éliminé par filtration. De l'hydroxyde de

calcium (1,5 éq) est ajouté. L'agitation est prolongée pendant 15 min. Le solide est éliminé par filtration, le filtrat est séché sur sulfate de magnésium puis le chlorure de méthylène est éliminé par évaporation sous pression réduite.

Le résidu d'évaporation est repris par de l'anhydride acétique, l'ensemble est chauffé 30 min à reflux puis évaporé à sec. Le résidu est repris par la solution méthanol/triéthylamine, agité 15 minutes à température ambiante puis les solvants sont éliminés par évaporation sous pression réduite. Le résidu huileux est repris par une solution aqueuse saturée de chlorure d'ammonium puis extrait par du chlorure de méthylène. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium puis évaporée sous pression réduite.

Le 4-mercaptobenzaldéhyde intermédiaire ainsi obtenu est utilisé sans autre purification. Il est alkylé selon la méthode générale 4 pour donner le 4- éthyloxycarbonyldiméthylméthylthiobenzaldéhyde.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1H CDCI3 6 ppm : 1.22 (t, J = 7.46Hz, 3H), 2.60 (s, 6H), 4.15 (q, J = 7.46Hz, 2H), 7.53 (d, J = 8.38Hz, 2H), 7.88 (d, J = 8.39, 2H), 9.99 (s, 1 H) Bibliographie : Young NR, Gauthier J Y., Coombs w (1984). Tetrahedron Letters 25 (17) : 1753-1756.

Matière première 9 : 4'-Ethylox carbonvldiméthylméthyloxyacétophénone : Ce composé est synthétisé à partir de 4'-hydroxyacétophénone et de bromoisobutyrate d'éthyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1H CDC ! 3 8 ppm : 1. 17 (t, J = 5.64Hz, 3H), 1.61 (s, 6H), 2.50 (s, 3H), 4.18 (q, J = 5.64Hz, 2H), 6.78 (d, J = 8.82Hz, 2H), 7.83 (d, J = 8.81 Hz, 2H).

Matière première 10 : Acétate de 3-bromophénvle Le 3-bromophénol est solubilisé dans le dichlorométhane. La triéthylamine (1éq) et l'anhydride acétique (2 éq) sont ajoutés. L'ensemble est agité 5 heures à température ambiante. Le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est repris par du dichlorométhane puis séché sur sulfate de magnésium. Le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 95-5).

RMN 1H CDCts 8 ppm : 2.30 (s, 3H), 7.0-7. 4 (m, 4H) Matière première 11 : 2'-hvdroxv-4'-bromoacétophénone L'acétate de 3-bromophényle (matière première 10) est mélangé au chlorure d'aluminium (3 éq), le mélange est chauffé 1 heure à 200°C. Le milieu réactionnel est ramené à température ambiante puis versé dans la glace. La phase aqueuse est extraite par du chlorure de méthylène qui est séché sur sulfate de magnésium.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate d'éthyle : 95-5).

RMN 1 H CDCI3 8 ppm : 2.59 (s, 3H), 7.01 (d, J = 8.5Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.5Hz, 1 H), 12.33 (s, 1 H) Matière première 12 : 4'-Ethyloxycarbonyl diméthylméthylthiocétophénone

La 4'-méthylthioacétophénone est solubilisée dans du chlorure de méthylène, la solution est refroidie à 0°C. L'acide métachloroperbenzoique (1.5 éq) est ajouté par petites fractions. L'avancement de la réaction est suivi par chromatographie sur couche mince. Un éventuel complément d'acide métachloroperbenzoique est ajouté de façon à obtenir la disparition totale du produit de départ. Le précipité formé est éliminé par filtration. De l'hydroxyde de calcium (1,5 éq) est ajouté. L'agitation est prolongée pendant 15 min. Le solide est éliminé par filtration, le filtrat est séché sur sulfate de magnésium puis le chlorure de méthylène est éliminé par évaporation sous pression réduite.

Le résidu d'évaporation est repris par de l'anhydride acétique, t'ensemble est chauffé 30 min à reflux puis évaporé à sec. Le résidu est repris par la solution Méthanol/Triéthylamine, agité 15 mn à température ambiante puis les solvants sont éliminés par évaporation sous pression réduite. Le résidu huileux est repris par une solution aqueuse saturée de chlorure d'ammonium puis extrait par du chlorure de méthylène. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium puis évaporée sous pression réduite.

La 4-mercaptoacétophénone intermédiaire ainsi obtenue est utilisée sans autre purification. Elle est alkylée selon la méthode générale 4 pour donner la 4- Ethyloxycarbonyldiméthylméthylthioacétophénone.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate d'éthyle : 9-1).

Bibliographie : Young NR, Gauthier J Y., Coombs w (1984). Tetrahedron Letters 25 (17) : 1753-1756.

RMN 1 H CDCI3 b ppm : 1.21 (t, J = 7. 32Hz, 3H), 1.51 (s, 6H), 2.59 (s, 3H), 4.12 (q, J = 7.32Hz, 2H), 7.51 (d, J = 8.40Hz, 2H), 7.79 (d, J = 8.40Hz, 2H) Synthèse de composés intermédiaires servant à la synthèse des composés selon l'invention :

Composé intermédiaire 1 : 1-[4-chlorophényl] <BR> <BR> - 3- [3, 5-diméthyl-4-hydroxyphénylprop-2-èn-1-one Ce composé est synthétisé à partir de 4-chloroacétophénone et de 3,5- diméthyl-4-hydroxybenzaldéhyde selon la méthode générale 1 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 95-5).

RM N 1H CDCb § ppm : 2.30 (s, 6H), 7.32 (s, 2H), 7.34 (d, J = 15.25Hz, 1 H), 7.47 (d, J = 8.86Hz, 2H), 7.75 (d, J = 15.26, 1 H), 7.97 (d, J = 8.86Hz, 2H).

Composé intermédiaire 2 : <BR> <BR> 1- [4-méthylthiophénvll<BR> <BR> <BR> -3-[35-diméthyl-4-hvdroxyphénylprop-2-èn-1-one :

Ce composé est synthétisé à partir de 4'-méthylthioacétophénone et de 3,5- diméthyl-4-hydroxybenzaldéhyde selon la méthode générale 1 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate d'éthyle : 8-2).

RMN 1 H DMSO b ppm : 2.22 (s, 6H), 2.54 (s, 3H), 7.36 (d, J = 8.20Hz, 2H), 7.48 (s, 2H), 7.62 (d, J = 15.7Hz, 1H), 7.74 (d, J = 15.7Hz, 1H), 8. 10 (d, J = 8. 20Hz, 2H), 8.92 (s, 1 H) Composé intermédiaire 3 : 1-[2-méthoxyphényl] - 3-f3, 5-diméthyl-4-hydroxyphénlprop-2-èn-1-one Ce composé est synthétisé à partir de 2'-méthoxyacétophénone et de 3,5- diméthyl-4 hydroxybenzaldéhyde selon la méthode générale 1 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane-acétate d'éthyle : 8-2).

RMN 1H DMSO S ppm : 2.39 (s, 6H), 2.22 (s, 6H), 7.58 (s, 2H), 7.67-7. 62 (m, 3H), 7.82 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 8. 17(d, 1H), 12. 96 (s, 1H) Composé intermédiaire 4 : 1- 4-hexyloxyphényll -3-[3,5-diméthyl-4-hydroxyphényl]prop-2-èn-1-one :

Ce composé est synthétisé à partir de 4-hexyloxyacétophénone et de 3,5- diméthyl-4-hydroxybenzaldéhyde selon la méthode générale 1 précédemment décrite.

Le composé attendu précipite dans le milieu réactionnel, il est essoré puis est utilisé sans autre purification pour la réaction suivante.

RM N 1H DMSO 8 ppm : 0.88 (m, 3H), 1.28-1. 43 (m, 6H), 1.72 (m, 2H), 2.21 (s, 6H), 4.05 (t, J = 6.42Hz, 2H), 7.40 (d, J = 8.43Hz, 2H), 7.48 (s, 2H), 7.57 (d, J = 15. 24Hz, 1H), 7.72 (d, J = 15. 24Hz, 1H), 8.12 (d, J = 8.43Hz, 2H), 8.89 (s, 1H) Composé intermédiaire 5 : 1-[2-hydroxy-4-chlorophényll -3-[3,5-diméthyl-4-hydroxyphényl]prop-2-èn-1-one

Ce composé est synthétisé à partir de 4'-chloro-2'-hydroxyacétophénone (matière première 3) et de 3, 5-diméthyl-4-hydroxybenzaldéhyde selon la méthode générale 1 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (toluène : 10).

RMN 1H DMSO 8ppm : 2. 21 (s, 6H), 7.1 (m, 2H), 7.55 (s, 2H), 7.72 (d, J = 15.4Hz, 1H), 7.80 (d, J = 15.4Hz, 1H), 8.25 (d, J=9. 0Hz, 1H), 9.09 (s, 1H), 13.04 (s, 1H) Composé intermédiaire 6 : 2- (3, 5-diméthyl-4-hydroxyphényl)-7-chloro-4H-1-benzopyran-4-one

Ce composé est synthétisé à partir de 1- [2-hydroxy-4-chlorophényl]-3- [3, 5- diméthyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 5) selon la méthode suivante :

La 1- [2-hydroxy-4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-hydroxyphényl] prop-2- èn-1-one est solubilisée dans du diméthylsulfoxyde, un cristal d'iode est ajouté, l'ensemble est maintenu 10 minutes à reflux.

Le milieu réactionnel est ramené à température ambiante, hydrolysé. Le précipité est essoré, rincé avec une solution de thiosulfate de sodium puis avec de l'eau.

Purification par dissolution dans le chlorure de méthylène et précipitation par addition d'heptane.

RMN 1H DMSO 8ppm : 2.25 (s, 6H), 6.87 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.55Hz, 1H), 7.73 (s, 2H), 7.98 (m, 2H) Bibliographie : Doshi AG, S. P., Ghiya BJ (1986). Indian J Chem Sect B 25 : 759.

Composé intermédiaire 7 : 1-j2-méthyloxy-4-chlorophényll -3-[3,5-diméthyl-4-hydroxydiméthylméthyloxyphényl]prop-2 -èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 4'-chloro-2'-méthoxyacétophénone et de 3, 5-diméthyl-4-hydroxybenzaldéhyde selon la méthode générale 1 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane-acétate d'éthyle : 85-15).

RMN 1H DMSO 6 ppm : 2.21 (s, 6H), 3.90 (s, 3H), 7.12 (m, 1H), 7.23 (d, J = 15. 5Hz, 1H), 7.29 (s, J = 1. 80Hz, 1H), 7.38 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 7.41 (s, 2H), 7.48 (d, J = 7.98Hz, 1H) Composé intermédiaire 8 : 1- 4-bromophényll-3- [3. 5-diméthyl-4-hydroxyphényllproo-2-èn-1-one :

Ce composé est synthétisé à partir de 4'-bromoacétophénone et de 3,5- diméthyl-4-hydroxybenzaldéhyde selon la méthode générale 1 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane-acétate d'éthyle : 85-15).

RMN 1H DMSO 8 ppm : 2,30 (s, 6H), 7.32 (s, 2H), 7.56-7. 66 (m, 3H), 7.75 (d, J = 15.27Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.70Hz, 2H), 9.82 (s, 1H) Composé intermédiaire 9 : 1- [4-heptylphényll<BR> - 3- [3, 5-diméthyl-4-hvdroxyphényllprop-2-èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 4'-heptylacétophénone et de 3,5- diméthyl-4-hydroxybenzaldéhyde selon la méthode générale 1 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane-acétate d'éthyle : 85-15).

RMN 1H DMSO 6 ppm : 0.84 (m, 3H), 1.25 (m, 8H), 1.60 (m, 2H), 2.21 (s, 6H), 2.65 (t, J = 7. 50Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.02Hz, 2H), 7.48 (s, 2H), 7.60 (d, J = 15.48Hz, 1 H), 7.71 (d, J = 15.48Hz, 1 H), 8.05 (d, J = 8.02Hz, 2H), 8.92 (s, 1 H) Synthèse des composés selon l'invention :

composé 1 : 1-r2-hydroxy-4-éthoxycarbonvldiméthylméthyloxyphényll< ;BR> <BR> -3-r35-ditertiobutyl-4-hvdroxvphénvllprop-2-èn-1-one Ce composé est synthétisé à partir de 2'-Hydroxy-4'- (éthoxycarbonyldiméthylméthoxy) acétophénone (matière première 1) et de 3,5- ditertiobutyl-4-hydroxybenzaldéhyde selon la méthode générale 1 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane-acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1H CDCI3 â ppm : 1.25 (t, J = 7. 11 Hz, 3H), 1.45 (s, 18H), 1.70 (s, 6H), 4.26 (q, J = 7.11 Hz, 2H), 5.63 (s, 1 H), 6.33 (d, J = 2.37Hz, 1 H), 6.42 (dd, J = 8.8Hz, J = 2.37Hz, 1 H), 7.41 (d, J = 15.39Hz, 1H), 7.5 (s, 2H), 7.83 (d, J = 8.8Hz, 1H), 7.88 (J = 15. 39Hz, 1H), 13.5 (s, 1H) Composé 2 : 1-[2-hydroxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] -3-[3,5-ditertiobutyl-4-hydroxyphényl]prop-2-èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 1- [2-hydroxy-4- éthoxycarbonyidiméthylméthyloxyphényl]-3- [3, 5-ditertiobutyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé 1) selon la méthode suivante : L'ester est solubilisé dans l'éthanol, une solution aqueuse de soude 1 N (5 éq) est ajoutée, l'ensemble est maintenu 10 heures à reflux. Le milieu est acidifié par addition d"acide chlorhydrique (12N) puis extrait par de l'acétate d'éthyle. La

phase organique est séchée sur du sulfate de magnésium puis évaporée sous pression réduite.

Purification par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12µm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78-0.1).

RMN 1H CDC ! s S ppm : 1.49 (s, 18H), 1.73 (s, 6H), 5.62 (s, 1H), 6.44 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 7.01 (m, 2H), 7.57 (t, 1H), 7.81 (d, J= 15.5Hz, 1H), 7.87 (d, 2H), 7.93 (d, 1 H), 8.26 (d, 1 H) SM (ES-MS) : 453.2 (M-1) Composé 3 : 1- (2-hydroxy-4-chlorophényll<BR> - 3-4-carboxydiméthylméthyloxyphényllprop-2-èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 2'-hydroxy-4'-chloroacétophénone et de 4- ethyloxycarbonyidiméthylméthyloxybenzaldéhyde (matière première 9) selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1H DMSO 6 ppm : 1.58 (s, 6H), 6.87 (d, J = 8.54Hz, 2H), 7.05 (dd, J = 8.54Hz, 1.83Hz, 1H), 7.09 (d, J = 1.2Hz, 1H), 7.90-7. 80 (m, 4H), 8.25 (m, 8.52Hz, 1H), 12.84 (s, 1H), 13.26 (s, 1H) SM (ES-MS) : 359.0 (M-1) Composé 4 : 1-r2-hydroxyphényll -3-[4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one :

Ce composé est synthétisé à partir de 2'-hydroxyacétophénone et de 4- éthyloxycarbonyldiméthylméthyloxybenzaldéhyde (matière première 4) selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1H DMSO 6 ppm : 1.58 (s, 6H), 6.88 (d, 2H), 7.01 (m, 2H), 7.57 (t, 1H), 7.81 (d, J = 15,5 Hz, 1 H), 7.87 (d, 2H), 7.93 (d J = 15,5 Hz, 1 H), 8.26 (d, 1 H), 12.69 (s, 1H) SM (ES-MS) : 325.1 (M-1) Composé 5 : 1-f2-hydroxyphénvll -3-[3,5-diméthoxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]prop- 3-èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 2'-hydroxyacétophénone et de 3,5- diméthyloxy-4-éthyloxycarbonyldiméthylméthyloxybenzaldé hyde (matière première 5) selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1 H DMSO 8 ppm : 1.35 (s, 6H), 3.80 (s, 6H), 7.00-7. 03 (m, 2H), 7.25 (s, 2H), 7.59 (t, 1 H, J = 8,07 Hz, 1 H), 7.81 (d, J = 15,5 Hz, 1 H), 8.00 (d, J = 15,5 Hz, 1 H), 8.31 (d, J = 8,07 Hz, 1H), 12.36 (s, 1H), 12.69 (s, 1 H) SM (ES-MS) : 385.3 (M-1) Composé 6 : 1-92-hydroxv-4-chloroPhénvll<BR> <BR> - 3-r3, 5-diméthoxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényllprop-2-èn- 1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 2'-hydroxy-4'-chloroacétophénone (matière première 3) et de 3, 5-diméthyloxy-4- éthyloxycarbonyidiméthylméthyloxybenzaldéhyde (matière première 5) selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1 H DMSO 8 ppm : 1.34 (s, 6H), 3.80 (s, 6H), 7.08 (dd, J = 1.77Hz, 1H), 7.12 (d, J = 1.77Hz, 1H), 7.24 (s, 2H), 7.79 (d, J = 15,4 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 15,4 Hz, 1 H), 8.27 (d, J = 8, 3 Hz, 1 H), 12.36 (s, 1 H), 12.69 (s, 1 H) SM (ES-MS) : 419.0 (M-1) Composé 7 : 1-r2-hydroxy-4-chlorophényll-3-f3. 5-diméthyl-4-carboxydiméthyl méthyloxyphényllprop-2-èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 2'-hydroxy-4'-chloroacétophénone (matière première 3) et de 3, 5-diméthyl-4-éthyloxycarbonyidiméthylméthyloxybenzaldéh yde selon (matière première 6) la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1H DMSO 8 ppm : 1.39 (s, 6H), 2.22 (s, 6H), 7.07 (m, 1H), 7.12 (d, J= 2,07 Hz, 1H), 7.61 (s, 2H), 7.74 (d, J= 15,5 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 8.26 (d, 1H), 12.76 (s, 1H) SM (ES-MS) : 387.1 (M-1) Composé 8 : 1-f2-hydroxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényll-3-r3, 5-dibromo-4- hydroxyphényllprop-2-èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 2'-hydroxy-4'-éthyl oxycarbonyldiméthylméthyloxyacétophénone (matière première 1) et de 3,5- dibromo-4-hydroxybenzaldéhyde selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1H CDCI3 6 ppm : 1,60 (s, 6H), 6.24 (d, J = 2.47 Hz, 1H), 6.43 (dd, J = 2.47, J = 8.52Hz, 1H), 7.70 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 8.22 (s, 2H), 8.34 (d, J = 9.16 Hz, 1 H), 13.34 (s, 1 H) SM (ES-MS) : 498.6 (M-1) Composé 9 : 1-[2-hydroxyphényl] - 3-r3-carboxydiméthylméthyloxyphényllprop-2-èn-1-one :

Ce composé est synthétisé à partir de 2'-hydroxyacétophénone et de 3- éthyloxycarbonyidiméthylméthyloxybenzaldéhyde (matière première 7) selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1H DMSO 8 ppm : 1.56 (s, 6H), 6.91 (dd, J = 8. 01 Hz, J = 2.47Hz, 1H), 7.03-6. 99 (m, 2H), 7.41-7. 36 (m, 2H), 7.60-7. 52 (m, 2H), 7.77 (d, J = 15. 5Hz, 1H), 8. 00 (d, J = 15.5Hz, 1H), 8.31 (dd, J = 8.63Hz, J = 1.85Hz, 1H), 12.47 (s, 1H), 13. 17 (s, 1H) SM (ES-MS) : 325.8 (M-1) Composé 10 : 1-f2-hydroxy-4-carboxvdiméthylméthyloxyphényll - 3-r3-hydroxyphényllproa-2-èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 2'-hydroxy-4'-éthyloxycarbonyl diméthylméthyloxyacétophénone (matière première 1) et de 3- hydroxybenzaldéhyde selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1).

RM N 1H DMSO 8 ppm : 1.60 (s, 6H), 6.25 (d, J = 2. 47 Hz, 1 H), 6.43 (dd, J = 2.47Hz, 9.09 Hz, 1H), 6.89 (m, 1H ), 7.35-7. 24 (m, 3H), 7.73 (d, 1H), 7.92 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 13.21 (s, 1H), 13.39 (s, 1H).

SM (ES-MS) : 341 (M-1) Composé 11 : 1-r2-hydroxyphényll - 3-L, 5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényllprop-2-èn-1 -one :

Ce composé est synthétisé à partir de 2'-hydroxyacétophénone et de 3,5- diméthyl-4-éthyloxycarbonyidiméthylméthyloxybenzaldéhyd e (matière première 6) selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1) puis par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12pm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78-0.1).

RMN 1H DMSO 5 ppm : 1.57 (s, 6H), 2.31 (s, 6H), 6.96 (t, J= 8,17Hz, 1H), 7.04 (d, J= 8,72 Hz, 1H), 7.35 (s, 2H), 7.49 (t, J= 8,2 Hz, 1H), 7.58 (d, J= 15,8Hz, 1H), 7.84 (d, J= 15,8Hz, 1 H), 7.94 (d, J= 8,7Hz, 1H), 12. 87 (s, 1H) SM (ES-MS) : 353.1 (M-1) Composé 12 : 1-[2-hydroxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] -3-94-méthvlthiophényllprop-2-èn-1-one :

Ce composé est synthétisé à partir de 2'-hydroxy-4'- éthyloxycarbonyldiméthylméthyloxyacétophénone (matière première 1) et de 4- méthylthiobenzaldéhyde selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate

d'éthyle : 9-1) puis HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12pm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78-0.3).

RM N 1H DMSO 8 ppm : 1. 60 (s, 6H), 2.54 (s, 3H), 6.25 (d, 1H), 6.43 (dd, J= 2.47 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 8.56 Hz, 2H), 7.8 (d, 15.5Hz, 1H), 7. 86 (d, J = 8. 56Hz, 2H ), 7.98 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 9. 1Hz, 1H), 13.34 (s, 1H) SM (ES-MS) : 373.1 (M-1) Composé 13 : 1-[2,4-dinydroxyphényl]-3-[4-carboxydiméthylméthyloxyphé nyl] prop-2-èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 2', 4'-dihydroxyacétophénone et de 4- éthoxycarbonyldiméthylméthyloxybenzaldéhyde (matière première 4) selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane-acétate d'éthyle : 9-1) puis par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12µm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 34-66-0.1).

RMN 1H DMSO 8 ppm : 1.57 (s, 6H), 6.29 (d, J= 2,16 Hz, 1H), 6.41 (dd, J= 9,18, J = 2,16Hz, 1H), 6.86 (d, J= 8,64Hz, 2H), 7.75 (d, J= 15,67 Hz, 1H), 7.83- 7.88 (m, 3H), 8.19 (d, J= 9,18Hz, 1 H), 10.74 (s, 1 H), 13.53 (s, 1 H) SM (maldi-Tof) : 343.1 (M+1) Composé 14 : 1-[2-hydroxyphényl]-3-[4-carboxydiméthylméthyl oxyphényllprop-2-èn-1-one

Ce composé est synthétisé à partir de 4'-hydroxyacétophénone et de 4- éthoxycarbonyidiméthylméthyloxybenzaldéhyde (matière première 4) selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1) puis par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12pm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 34-66-0.1).

RMN 1H DMSO 6 ppm : 1.56 (s, 6H), 6.85 (d, J= 8,63 Hz, 2H), 6.90 (d, J= 9,21 Hz, 2H), 7.63 (d, J= 15,54Hz, 1H), 7.78 (m, 3H), 8.05 (d, J= 8,61 Hz, 2H), 10.40 (s, 1H), 13.22 (s, 1H) SM (maldi-Tof) : 327.1 (M+1) Composé 15 : <BR> <BR> <BR> 1- [4-chlorophényll-3- [3, 5-diméthyl-4-<BR> <BR> <BR> <BR> <BR> <BR> isopropyloxycarbonvIdiméthylméthyloxyphényllprop-2-èn-1- one : Ce composé est synthétisé à partir de 1- [4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 1) et de bromoisobutyrate d'isopropyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1) RMN 1H DMSO 6 ppm : 1.25 (d, J = 6.06Hz, 6H), 1.39 (s, 6H), 5.00 (sept, J = 6.06Hz, 1H), 7.57 (s, 2H), 7.62 (d, J = 8. 40Hz, 2H), 7.64 (d, J = 15.8Hz, 1H), 7.81 (d, J = 15.8, 1H), 8.16 (d, J = 8. 40Hz, 2H).

SM (Maldi-Tof) : 415.1 (M+1)

Composé 16 : 1-[4-chlorophényl]-3-[3, 5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl]prop-2-èn- 1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 1- [4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 1) et de bromoisobutyrate de tertiobutyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1).

Composé 17 : 1-[4-chlorophényl] -3-[3,5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]prop-2 -èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 1- [4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé 16) selon la méthode générale 5 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane-méthanol : 98-2) RMN 1 H DMSO 6, ppm : 1.39 (s, 6H), 2.22 (s, 6H), 7.58 (s, 2H), 7.67-7. 62 (m, 3H), 7.82 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 8.17 (d, 1H), 12.96 (s, 1H) SM (Maldi-Tof) : 373.3 (M+1) Composé 18 : <BR> <BR> 1-f2-hydroxy-4-carboxydiméthylméthyloxyphényll-3- [4-chlorophényl]prop-2-èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 2'-hydroxy-4'- éthyloxycarbonyldiméthylméthyloxyacétophénone (matière première 1) et de 4- chlorobenzaldéhyde selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1) puis par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12pm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78-0.1).

RMN 1 H DMSO 8 ppm : 1. 60 (s, 6H), 6.25 (d, J = 2,47 Hz, 1 H), 6.45 (dd, J = 2, 47, J = 9.12 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 8,55 Hz, 2H), 7.82 (d, J = 15, 54Hz, 1H), 7.97 (d, J = 8.55Hz, 2H), 8.03 (d, J = 15.54Hz, 1H), 8,29 (d, J = 9. 12Hz, 1H), 13,20 (s, 1 H), 13,39 (s, 1 H) SM (ES-MS) : 359.0 (M-1) Composé 19 : 1-[2-hydroxyphényl]-3-[4-carboxydiméthylméthyl thiophényllarop-2-èn-1-one Ce composé est synthétisé à partir de 2'-hydroxyacétophénone et éthyloxycarbonyldiméthylméthylthiobenzaldéhyde (matière première 8) selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane-méthanol : 95-5) puis par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12pm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78- 0.1).

RMN 1H DMSO 8 ppm : 1.44 (s, 6H), 6.99-7. 05 (m, 1H), 7.52 (d, J = 8. 1 Hz, 2H), 7.58 (m, 1H), 7.83 (d, J = 15.5Hz, 1H), 7.92 (d, J = 8. 1Hz, 1H), 8.09 (d, J = 15.5Hz, 1H), 8.26 (dd, J = 1.62, J = 8.6 Hz, 1H), 12.47 (s, 1H), 12.78 (s, 1H) SM (Maldi-Tof) : 242.9 (M+1) Composé 20 : 1-[4-chloro-2-hydroxyphényl] -3-[4-carboxydiméthylméthylthiophényl]prop-2-èn-1-one Ce composé est synthétisé à partir de 4'-chloro-2'-hydroxyacétophénone (matière première 3) et de 4-éthyloxycarbonyldiméthylméthylthiobenzaldéhyde (matière première 8) selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane-méthanol : 95-5) puis par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12pm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78- 0.1).

RMN 1H DMSO 6 ppm : 1. 43 (s, 6H), 7.05 (dd, J = 1,7Hz, J = 8,46Hz, 1H), 7.11 (d, J = 2,25Hz, 1H), 7.51 (d, J = 7,92Hz, 2H), 7.82 (d, J = 15,8 Hz, 1 H), 7.89 (d, J = 7,9Hz, 2H), 8.05 (d, J = 15,2Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8,46 Hz, 1H), 12.57 (s, 1H), 12.78 (s, 1H).

SM (Maldi-Tof) : 377.0 (M-1) Composé 21 : 1-[4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] - 3-r3, 5-diméthvl4-hydroxyphényllprop-2-èn-1-one

Ce composé est synthétisé à partir de 4-éthyloxycarbonyldiméthylméthyloxy acétophénone (matière première 9) et de 3, 5-diméthyl-4-hydroxybenzaldéhyde selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane-méthanol : 95-5) puis par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12pm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78- 0.1).

RMN 1H DMSO 6 ppm : 1.60 (s, 6H), 2.21 (s, 6H), 6.91 (d, J = 9.09Hz, 2H), 7.48 (s, 2H), 7.57 (d, J = 15.12Hz, 1H), 7.70 (d, J = 15.63Hz, 1H), 8.09 (d, J = 9,06Hz, 2H), 8.9 (s, 1H), 13.29 (s, 1H) SM (Maldi-Tof) : 355.2 (M+1) Composé 22 : 1-T4-méthvlthioahényll<BR> - 3-4-carboxydiméthylméthyloxyphényllproa-2-èn-1-one Ce composé est synthétisé à partir de 4'-méthylthioacétophénone (matière première 12) et de 4-éthyloxycarbonyldiméthylméthyloxybenzaldéhyde (matière première 9) selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane-méthanol : 95-5) puis par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12pm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78- 0. 1).

RMN 1H DMSO 8 ppm : 1.57 (s, 6H), 2.57 (s, 3H), 6.86 (d, J = 8,94Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8,40Hz, 2H), 7.69 (d, J = 15,2Hz, 1H), 7.84-7. 78 (m, 3H), 8.09 (d, J = 8,4Hz, 2H), 13.21 (s, 1 H) SM (Maldi-Tof) : 357.2 (M-1) Composé 23 : 1-[4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] - 3-[4-chlorophényllprop-2-èn-1-one :

Ce composé est synthétisé à partir de 4-éthyloxycarbonyl diméthylméthyloxyacétophénone (matière première 9) et de 4-chlorobenzaldéhyde selon la méthode générale 3 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane-méthanol : 95-5) puis par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12µm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78- 0.1).

RMN 1H DMSO 6 ppm : 1.72 (s, 6H), 6.97 (d, J = 8, 61 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8,25Hz, 2H), 7.50 (d, J = 15,72Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8, 61 Hz, 2H), 7.77 (d, J = 15,72Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8, 61 Hz, 2H), 13.30 (s, 1H) SM (Maldi-Tof) : 345.1 (M+1) Composé 24 : 1-f4-carboxydiméthylméthylthioahényll<BR> - 3-r4-méthylthiophényllprop-2-èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 4-éthyloxycarbonyl diméthylméthylthiocétophénone (matière première 12) et de 4-

méthylthiobenzaldéhyde selon la méthode générale 3 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane- méthanol : 95-5) puis par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12pm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78-0.1).

RM N 1 H DMSO 5 ppm : 1,46 (s, 6H), 2.54 (s, 3H), 7.33 (d, J = 8, 61 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 8. 1 OHz, 2H), 7.73 (d, J = 15.66Hz, 1H), 7.85 (d, J = 8. 1 OHz, 2H), 7.92 (d, J = 15.66Hz, 1H), 8.13 (d, 8. 10Hz, 2H), 12.85 (s, 1H) SM (Maldi-Tof) : 373.1 (M+1) Composé 25 : 1-[2-hydroxy-4-bromophényl] - 3-f3, 5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényllprop-2-èn-1 -one Ce composé est synthétisé à partir de 4'-bromo-2'-hydroxyacétophénone (matière première 11) et 3, 5-diméthyl-4- éthyloxycarbonyldiméthyloxybenzaldéhyde (matière première 6) selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane-méthanol : 95-5) puis par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12µm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78- 0.1).

RMN 1H DMSO 6 ppm : 1.39 (s, 6H), 2.22 (s, 6H), 7.20 (dd, J = 2.16, J = 8.55Hz, 1H), 7.25 (d, J = 1.59Hz, 1H), 7.60 (s, 2H), 7.73 (d, J = 15. 51 Hz, 1 H), 7.86 (d, J = 15, 51 Hz, 1 H), 8.16 (d, J = 8,58Hz, 1H), 12. 70 (s, 1H), 13.30 (s, 1H) SM (ES-MS) : 432.9 (M-1) Composé 26 : 1-4-carboxydiméthylméthyloxyphénvll - 3-r4-méthylthiophényllprop-2-èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 4'- éthyloxycarbonyldiméthylméthyloxyacétophénone (matière première 9) et de 4- méthylthiobenzaldéhyde selon la méthode générale 2 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane-méthanol : 95-5) puis par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12pm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78- 0.1).

RM N 1 H DMSO 6 ppm : 1.60 (s, 6H), 2.53 (s, 3H), 6.93 (d, J = 9. 00Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.49Hz, 2H), 7.68 (d, 15.51 Hz, 1 H), 7.82 (d, J = 8.52Hz, 2H), 7.89 (d, J = 15. 51 Hz, 1 H), 8.13 (d, 9. 00Hz, 2H), 13.30 (s, 1H) SM (Maldi-Tof) : 355.0 (M+1) Composé 27 : 1-[4-méthylthiophényl]-3-[3,5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényllarop-2-èn- 1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 1- [4-méthylthiophényl]-3- [3, 5- diméthyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 2) et de bromoisobutyrate de tertiobutyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 8-2).

Composé 28 : 1-[4-méthylthiophényl]-3-[3,5-diméthyl-4- isopropyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényllprop-2-èn-1- one : Ce composé est synthétisé à partir de 1- [4-méthylthiophényl]-3- [3, 5- diméthyl-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 2) et de bromoisobutyrate d'isopropyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1).

RMN 1H DMSO 6 ppm : 1.25 (d, J = 6.18Hz, 6H), 1.39 (s, 6H), 2.18 (s, 6H), 2.57 (s, 3H), 4.99 (sept, J = 6. 18Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.28Hz, 2H), 7.58 (s, 2H), 7.62 (d, J = 15. 5Hz, 1H), 7.82 (d, J = 15.5Hz, 1H), 8.10 (d, J = 8.28Hz, 2H), 12.97 (s, 1H) SM (Maldi-Tof) : 427.1 (M+1) Composé 29 : 1-f4-méthylthlophényll -3-[3,5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]prop-2 -èn-1-one :

Ce composé est synthétisé à partir de 1- [4-méthylthiophényl]-3- [3, 5- diméthyl-4-tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl ] prop-2-èn-1-one (composé 28) selon la méthode générale 5 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane -méthanol : 98-2).

RMN 1H DMSO 8 ppm : 1.39 (s, 6H), 2.22 (s, 6H), 2.57 (s, 3H), 7.40 (d, J = 8.55Hz, 2H), 7.57 (s, 2H), 7.62 (d, J = 15.5Hz, 1H), 7.83 (d, J = 15.5Hz, 1H), 8.10 (d, J = 8. 55Hz, 2H), 12.97 (s, 1 H) SM (ES-MS) : 383.3 (M-1) Composé 30 : 1-[2-méthoxyphényl]-3-[3, 5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényllprop-2-èn- 1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 1- [2-méthoxyphényl]-3- [3, 5-diméthy 1-4-hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 3) et de bromoisobutyrate de tertiobutyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1).

Composé 31 : 1-r2-méthoxyphényll - 3-f3, 5-diméthyl-4-carboxvdiméthylméthyloxyphényllprop-2-èn-1 -one :

Ce composé est synthétisé à partir de 1-[2-méthoxyphényl]-3-[3,5-diméthyl- 4-tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé 30) selon la méthode générale 5 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane-méthanol : 98-2).

RMN 1H DMSO S ppm : 1.38 (s, 6H), 2.19 (s, 6H), 3.93 (s, 3H), 7.05 (m, 1H), 7.20 (d, J = 8. 31 Hz, 1 H), 7.25 (d, J = 15. 5Hz, 1H), 7.37 (d, J = 15.5Hz, 1H), 7.39 (s, 2H), 7.46 (d, J = 7.2Hz, 1H), 7.53 (m, 1H), 12.93 (s, 1H) SM (ES-MS) : 367.1 (M-1) Composé 32 : 1-[4-hexyloxyphényl] -3-[3,5-diméthyl-4-tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthylox yphényl]prop-2- èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 1- [4-hexyloxyphényl]-3- [3, 5-diméthyl- 4-hydroxyphényl]prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 4) de bromoisobutyrate de tertiobutyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 95-5) Composé 33 : 1-r4-hexyloxyphényll - 3-r3, 5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényllprop-2-èn-1 -one :

Ce composé est synthétisé à partir de 1- [4-héxyloxyphényl]-3- [3, 5-diméthyl- 4-tertiobutyloxycarbonyidiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé 32) selon la méthode générale 5 précédemment décrite.

Purification par recristallisation dans le méthanol.

RM N 1 H DMSO 8 ppm : 0.88 (t, J = 6.33Hz, 3H), 1.30 (m, 4H), 1.39 (s, 6H), 1.44 (m, 2H), 1.73 (m, 2H), 2.22 (s, 6H), 4.06 (t, J = 6. 30Hz, 2H), 7.06 (d, J = 8.61 Hz, 2H), 7.56 (s, 2H), 7.58 (d, J = 15.5Hz, 1H), 7.82 (d, J = 15.5Hz, 1H), 8.13 (d, J = 6. 61 Hz, 2H) SM (ES-MS) : 437.2 (M-1) Composé 34 : 2- (3, 5-diméthyl-4-tertiobutyloxycarbonvldiméthylméthyloxyphén yl)-7- chloro-4H-1-benzopyran-4-one : Ce composé est synthétisé à partir de 2- (3, 5-diméthyl-4-hydroxyphényl)-7- chloro-4H-1-benzopyran-4-one (composé intermédiaire 6) et de bromoisobutyrate de tertiobutyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par précipitation dans le mélange de solvants dichlorométhane/heptane.

Composé 35 : 2- (3, 5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl)-7-chloro-4H -1-<BR> <BR> benzopyran-4-one

Ce composé est synthétisé à partir de 2- (3, 5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl)-7-chloro-4 H-1-benzopyran-4-one (composé 34) selon la méthode générale 5 précédemment décrite.

Purification par HPLC préparative (phase inverse RP18, licrospher 12µm, élution : eau-méthanol-acide trifluoroacétique : 22-78-0.1).

RMN 1 H DMSO 8 ppm : 1.24 (s, 6H), 2.28 (s, 6H), 7.02 (s, 1 H), 7.56 (dd, J = 8.71 Hz, J = 1.75Hz, 1 H), 7.85 (s, 2H), 8.03 (d, J = 1.75Hz, 1 H), 8.06 (d, J = 8.71 Hz, 1H) SM (Maldi-Tof) : 387.1 (M+1) Composé 36 : 1- (2-méthyloxy-4-chlorophényll -3-[3,5-diméthyl-4-tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthylox yphényl]prop-2- èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 1-[2-méthyloxy-4-chlorophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4-hydroxydiméthylméthyloxyphényl]prop-2-èn-2 -one (composé intermédiaire 7) et de bromoisobutyrate de tertiobutyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1) Composé 37 : 1-r2-méthyloxy-4-chlorophényll -3-[3,5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényl]prop-2 -èn-1-one :

Ce composé est synthétisé à partir de 1- [2-méthoxy-4-chlorophényl]-3- [3, 5- diméthyl-4-tertiobutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl ] prop-2-èn-1-one (composé 36) selon la méthode générale 5 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane/méthanol : 98-2) RMN 1H DMSO 8 ppm : 1.38 (s, 6H), 2.19 (s, 6H), 3.89 (s, 3H), 7.12 (dd, J = 7.98, J = 1.71 Hz, 1 H), 7.23 (d, J = 15. 56Hz, 1 H), 7.29 (s, J = 1.71 Hz, 1 H), 7.38 (d, J = 15. 7 Hz, 1H), 7.41 (s, 2H), 7.48 (d, J = 7. 98Hz, 1H) SM (ES-SM) : 401. 2 (M-1) Composé 38 : 1- 4-heptvlahénvll<BR> - 3-f3, 5-diméthyl-4-tertiobutyloxycarbonyldiméthvlméthyloxyphén yllprop-2- èn-1-one :

Ce composé est synthétisé à partir de 1- [4-heptylphényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 9) et de

bromoisobutyrate de tertiobutyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1) Composé 39 : 1-r4-heptylphényll - 3-f3, 5-diméthyl-4-carboxydiméthylméthyloxyphényllprop-2-èn-1 -one : Ce composé est synthétisé à partir de 1- [4-heptylphényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- tertiobutyloxycarbonyidiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé 38) et de bromoisobutyrate de tertiobutyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane/méthanol : 98-2) RMN 1 H DMSO 8 ppm : 0.85 (m, 3H), 1.30-1. 24 (m, 8H), 1.39 (s, 6H), 1.60 (m, 2H), 2.22 (s, 6H), 2.67 (t, 2H, J = 7.4Hz), 7.37 (d, J = 8.04 Hz, 2H), 7.57 (s, 2H), 7.62 (d, J = 15.66 Hz, 1 H), 7.82 (d, J = 15.69 Hz, 1 H), 8.07 (d, J = 8.07 Hz, 2H) SM (ES-MS) : 435.3 (M-1) Composé 40 : 1-Î4-bromophényll-3-f3. 5-diméthyl-4-<BR> tertiobutyloxycarbonvldiméthvlméthyloxyphényllarop-2-èn- 1-one :

Ce composé est synthétisé à partir de 1- [4-bromophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- hydroxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé intermédiaire 8) et de bromoisobutyrate de tertiobutyle selon la méthode générale 4 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : cyclohexane- acétate d'éthyle : 9-1) Composé 41 : 1-[4-bromophényl]-3-[3, 5-diméthyl-4-carboxy diméthylméthyloxyphényllarop-2-èn-1-one : Ce composé est synthétisé à partir de 1- [4-bromophényl]-3- [3, 5-diméthyl-4- tertibutyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one (composé 40) selon la méthode générale 5 précédemment décrite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : dichlorométhane- méthanol : 98-2) RMN 1 H DMSO b ppm : 1.39 (s, 6H), 2.22 (s, 6H), 7.58 (s, 2H), 7.65 (d, J = 15. 39Hz, 1H), 7.84-7. 77 (m, 3H), 8.09 (d, J = 8. 19Hz, 1H), 13.01 (s, 1H) SM (ES-MS) : 417.2 (M-1) Composé 42 : 1-f2-hydroxyphényll-3-r3, 5-diméthyl-4- isopropyloxycarbonyldiméthylméthyloxyphényl]prop-2-èn-1- one :

Le 1- [2-hydroxyphényi]-3- [4-carboxydiméthylméthyloxyphényl] prop-2-èn-1-one (Composé 4,1 éq) est solubilisé dans le dichlorométhane. Le dichlorométhylméthylether (3 éq) est ajouté, L'ensemble est maintenu 8 heures à reflux. Le solvant et l'excès de réactif sont éliminés par évaporation sous pression réduite. Le résidu d'évaporation est repris par de l'isopropanol (50 éq). Après 12 heures d'agitation à température ambiante, l'isopropanol est éliminé par évaporation sous pression réduite.

Purification par chromatographie sur gel de silice (élution : toluène-acétate d'éthyle : 7-3) RMN 1H CDCI3 âppm : 1.21 (d, J = 6.09Hz, 6H), 1.65 (s, 6 H), 5.10 (sept, J = 6. 1 OHz, 1H), 6.86 (d, J = 8.65Hz, 2H), 6.95 (m, 1H), 7.02 (dd, J=8.65Hz, J = 1.53Hz, 1 H), 7.48 (m, 1 H), 7.54 (d, J=15. 25Hz, 1 H), 7.57 (d, J=8.65Hz, 2H), 7.87 (d, J=15. 25Hz, 1H), 7.93 (d, J = 8.40 Hz, 1 H), 12.94 (signal échangeable D2O, 1H) SM (Maldi-Tof) : 369.1 (M+1) EXEMPLE 2 : Evaluation des propriétés antioxydantes des composés selon l'invention 1. Protection de l'oxydation des LDL par le cuivre : Les composés selon l'invention, testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples décrits ci-dessus.

L'oxydation des LDL est une modification importante et joue un rôle prépondérant dans la mise en place et le développement de l'athérosclérose (Jurgens, Hoff et al. 1987). Le protocole suivant permet la mise en évidence des propriétés antioxydantes des composés. Sauf mention différente, les réactifs proviennent de chez Sigma (St Quentin, France).

Les LDL sont préparés suivant la méthode décrite par Lebeau et al. (Lebeau, Furman et al. 2000).

Les solutions de composés à tester sont préparées à 10-2 M dans un tampon bicarbonate (pH = 9) et diluées dans du PBS pour avoir des concentrations finales allant de 0,1 à 100 uM pour une concentration totale d'éthanol de 1% (v/v).

Avant l'oxydation, l'EDTA est retiré de la préparation de LDL par dialyse.

L'oxydation a ensuite lieu à 30°C en ajoutant 100 ut d'une solution à 16,6 pM de CuS04 à 160 uL de LDL (125 pg de protéines/ml) et 20 ut d'une solution du composé à tester. La formation de diènes, l'espèce à observer, se mesure par densité optique à 234 nm dans les échantillons traités avec les composés mais avec ou sans cuivre. La mesure de la densité optique à 234 nm est réalisée toutes les 10 minutes pendant 8 heures à l'aide d'un spectrophotomètre thermostaté (tecan Ultra 380). Les analyses sont réalisées en triplicata. Nous considérons que les composés ont une activité antioxydante lorsqu'ils induisent un retardement de la lag phase, diminuent la vitesse d'oxydation et la quantité de diènes formés par rapport à l'échantillon témoin. Les inventeurs mettent en évidence que les composés selon l'invention présentent au moins une des propriétés antioxydantes citées ci dessus ceci indiquant que les composés selon l'invention possèdent un caractère antioxydant intrinsèque.

Des exemples de résultats sont donnés sur les figures 1-1,1-2, 1-3,1-4, 1-5, 1-6, 1-7,1-8, 1-9,1-10, 1-11,1-12, 1-13 et 1-14 où les propriétés antioxydantes des composés 2,3, 4,5, 6,7, 8,9, 10,14, 17,18, 19,21, 22,25, 29,31, 33,35, 37,38 et 41 selon l'invention sont illustrées.

2. Evaluation de la protection conférée par les composés selon l'invention vis-à-vis de la peroxvdation lipidique : Les composés selon l'invention testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples décrits ci-dessus.

La mesure de l'oxydation des LDL est réalisée par la méthode des TBARS.

Selon le même principe que celui décrit précédemment, les LDL sont oxydés avec du CuS04et la peroxydation lipidique est déterminée de la manière suivante : Les TBARS sont mesurés à l'aide d'une méthode spectrophotométrique, l'hydroperoxydation lipidique est mesurée en utilisant l'oxydation péroxyde-lipide dépendante de l'iodide en iodine. Les résultats sont exprimés en nmol de malondialdehyde (MDA) ou en nmol d'hydroperoxyde/mg de protéines.

Les résultats obtenus précédemment, en mesurant l'inhibition de la formation de diènes conjugués, sont confirmés par les expériences de mesure de peroxydation lipidique des LDL. Les composés selon l'invention protègent également de manière efficace les LDL contre la peroxydation lipidique induite par le cuivre (agent oxydant).

Exemple 3 : mesure des propriétés antioxydantes des composés selon l'invention sur des culture de cellules Protocole de culture : Les lignées cellulaires utilisées pour ce type d'expériences sont de type neuronales, neuroblastomes (humains) et cellules PC12 (rat). Les cellules PC12 ont été préparées à partir d'un pheochromocytome de rat et sont caractérisées par Greene et Tischler (Greene and Tischler, 1976). Ces cellules sont couramment utilisées pour des études de différenciation neuronale, transduction du signal et mort neuronale. Les cellules PC12 sont cultivées comme précédemment décrit (Farinelli, Park et al. 1996), dans du milieu complet RPMI (Invitrogen) complémenté avec 10% de sérum de cheval et 5% de sérum de veau foetal.

Des cultures (primaires) de cellules endothéliales et muscles lisses sont également utilisées. Les cellules sont commandées chez Promocell (Promocell GmBH, Heidelberg) et sont cultivées selon les indications du fournisseur.'- Les cellules sont traitées avec différentes doses de composés de 5 à 300 uM pendant 24 heures. les cellules sont alors récupérées et l'augmentation de l'expression des gènes cibles est évaluée par PCR quantitative.

Mesure des ARMm : Les ARNm sont extraits des cellules en culture traitées ou non avec les composés selon l'invention. L'extraction est réalisée à l'aide des réactifs du kit Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene, France) selon les indications du fournisseur. Les ARNm sont ensuite dosés par spectrométrie et quantifiés par RT- PCR quantitative à l'aide du kit Light Cycler Fast start DNA Master Sybr Green 1 kit (Roche) sur un appareil Light Cycler System (Roche, France). Des paires d'amorces spécifiques des gènes de la Super Oxyde Dismutase (SOD), de la Catalase et de la Glutathion Peroxydase (GPx), enzymes anti-oxydantes, sont utilisées comme sondes. Des paires d'amorces spécifiques des gènes p-actine et cyclophiline sont utilisées comme sondes témoin.

L'augmentation de l'expression des ARNm, mesurée par RT-PCR quantitative, des gènes des enzymes antioxydantes est mise en évidence dans les différents types cellulaires utilisés, lorsque les cellules sont traitées avec les composés selon l'invention.

Contrôle du stress Oxydatif : Mesure des espèces oxydantes dans les cellules en culture : Les propriétés antioxydantes des composés sont également évaluées à l'aide d'un indicateur fluorescent dont l'oxydation est suivie par l'apparition d'un signal fluorescent. La diminution d'intensité du signal fluorescent émis est mesurée dans les cellules traitées avec les composés de la manière suivante : les cellules PC12 cultivées comme précédemment décrit (plaques noire 96 puits fonds transparents, Falcon) sont incubées avec des doses croissantes de H202 (0,25 mM-1 mM) dans du milieu sans sérum pendant 2 et 24 heures. Après l'incubation le milieu est enlevé et les cellules sont incubées avec une solution de dichlorodihydrofluorescéine diacetate (DCFDA, Molecular Probes, Eugene, USA) 10 uM dans du PBS pendant 30 min à 37°C et dans une atmosphère contenant 5% de C02. Les cellules sont ensuite rincées avec du PBS. La détection de la fluorescence émise par l'indicateur de l'oxydation est mesurée à l'aide d'un

fluorimètre (Tecan Ultra 384) à une longueur d'onde d'excitation de 495 nm et une longueur d'onde d'émission de 535 nm. Les résultats sont exprimés en pourcentage de protection par rapport au témoin oxydé.

L'intensité de fluorescence est plus faible dans les cellules incubées avec les composés selon l'invention que dans les cellules non traitées. Ces résultats indiquent que les composés selon l'invention favorisent l'inhibition de la production d'espèces oxydantes dans des cellules soumises à un stress oxydatif. Les propriétés antioxydantes décrites précédemment sont également efficaces pour induire une protection antiradicalaire dans des cellules en culture.

Mesure de la peroxydation lipidique : L'effet protecteur des composés sur la péroxydation lipidique sur des cultures de cellules (modèles cellulaires cités précédemment) est déterminé de la façon suivante : les différentes lignées cellulaires ainsi que les cellules en culture primaire sont traitées comme précédemment, le surnageant des cellules est récupéré après le traitement et les cellules sont lysées et récupérées pour la détermination de la concentration protéique. La détection de la peroxydation lipidique est déterminée de la manière suivante : La peroxydation lipidique est mesurée à l'aide d'acide thiobarbiturique (TBA) qui réagit avec la lipoperoxydation des aldéhydes tel que le malondialdéhyde (MDA).

Après les traitements, le surnageant des cellules est collecté (900 pl) et 90 ut d'hydroxytoluène butylé y sont ajoutés (Morliere, Moysan et al. 1991). Un ml d'une solution de TBA à 0,375% dans 0,25M HCL contenant 15% d'acide trichloroacétique est également ajouté aux milieux réactionnels. Le mélange est chauffé à 80°C pendant 15 min, refroidit sur glace et la phase organique est extraite avec du butanol. L'analyse de la phase organique se fait par spectrofluorométrie (Rexc=515 nm et hem=550 nm) à l'aide du spectrofluorimètre Shimazu 1501 (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japon). Les TBARS sont exprimés en équivalents MDA en utilisant un standard le tetra-ethoxypropane. Les résultats sont normalisés par rapport au contenu en protéines.

La diminution de la peroxydation lipidique observée dans les cellules traitées avec les composés selon l'invention confirme les résultats obtenus précédemment.

Les composés selon l'invention présentent avantageusement des propriétés antioxydantes intrinsèques qui permettent de ralentir et/ou d'inhiber les effets d'un stress oxydatif. Les inventeurs montrent également que les composés selon l'invention sont capables d'induirent l'expression des gènes d'enzymes antioxydants. Ces caractéristiques particulières des composés selon l'invention permettent aux cellules de lutter plus efficacement contre le stress oxydatif et donc d'être protégées vis à vis des dommages induits par les radicaux libres.

Exemple 4 : Evaluation de l'activation des PPARs in vitro par les composés selon l'invention Les composés selon l'invention, possédant une fonction acide carboxylique, testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples décrits ci- dessus.

Les récepteurs nucléaires membres de la sous-famille des PPARs qui sont activés par deux classes majeures de composés pharmaceutiques, les fibrates et les glitazones, abondamment utilisées en clinique humaine pour le traitement des dislipidémies et du diabète, jouent un rôle important dans l'homéostasie lipidique et glucidique. Les données expérimentales suivantes montrent que les composés selon l'invention activent PPARa et PPARy in vitro.

L'activation des PPARs est évaluée in vitro dans des lignées de type fibroblastique RK13 par la mesure de l'activité transcriptionnelle de chimères constituées du domaine de liaison à l'ADN du facteur de transcription Gal4 de levure et du domaine de liaison du ligand des différents PPARs. Ces derniers résultats sont ensuite confirmés dans des lignées cellulaires selon les protocoles suivants : L'exemple est donné pour les cellules RK13.

a. Protocoles de culture Les cellules RK13 proviennent de l'ECACC (Porton Down, UK) et sont cultivées dans du milieu DMEM supplémenté de 10% vol/vol sérum de veau foetal, 100 U/ml pénicilline (Gibco, Paisley, UK) et 2 mM L-Glutamine (Gibco, Paisley, UK). Le milieu de culture est changé tous les deux jours. Les cellules sont conservées à 37°C dans une atmosphère humide contenant 5% de C02 et 95% d'air. b. Description des plasmides utilisés en transfection Les plasmides pG5TkpGL3, pRL-CMV, pGal4-hPPARa, pGal4-hPPARy et pal4-+ ont été décrits par Raspe, Madsen et al. (1999). Les constructions pGal4-mPPARa et pGal4-hPPARy ont été obtenues par clonage dans le vecteur pal4-+ de fragments d'ADN amplifiés par PCR correspondants aux domaines DEF des récepteurs nucléaires PPARa et PPARy humains. c. Transfection Les cellules RK13 sont ensemencées dans des boîtes de culture de 24 puits à raison de 5x104 cellules/puit et sont transfectées pendant 2 heures avec le plasmide rapporteur pG5TkpGL3 (50 ng/puit), les vecteurs d'expression pal4-+, pGal4-mPPARa, pGal4-hPPARa, pGal4-hPPARy (100 ng/puit) et le vecteur de contrôle de l'efficacité de transfection pRL-CMV (1 ng/puit) suivant le protocole décrit précédemment (Raspe, Madsen et al. 1999) et incubées pendant 36 heures avec les composés testés. A l'issue de l'expérience, les cellules sont lysées (Gibco, Paisley, UK) et les activités luciférase sont déterminées à l'aide du kit de dosage Dual-LuciferaseTM Reporter Assay System (Promega, Madison, Wl, USA) selon la notice du fournisseur comme décrit précédemment. Le contenu en protéines des extraits cellulaires est ensuite évalué à l'aide du kit de dosage Bio- Rad Protein Assay (Bio-Rad, München, Allemagne) selon la notice du fournisseur.

Les inventeurs mettent en évidence une augmentation de l'activité luciférase dans les cellules traitées avec les composés selon l'invention et transfectées avec le

plasmide pGal4-hPPARa. Cette induction de l'activité luciférase indique que les composés selon l'invention, sont des activateurs de PPARa.

Un exemple de résultats est donné sur les figures 2-1,2-2, 2-3,2-4, 2-5,2-6 où les propriétés activatrices PPARa des composés 3,4, 7,8, 9,11, 12,13, 14,17, 19, 20,21, 22,23, 24,25, 26,29, 31,33, 37,38, 41 selon l'invention sont illustrées.

Les inventeurs mettent en évidence une augmentation de l'activité luciférase dans les cellules traitées avec les composés selon l'invention et transfectées avec le plasmide pGal4-hPPARy. Cette induction de l'activité luciférase indique que les composés selon l'invention, sont des activateurs de PPARy.

Des exemples de résultats sont représentés par la figure 2-7 où les propriétés activatrices PPAR y des composés 17,33 et 29 sont illustrées.

Exemple 5 : évaluation des propriétés anti-inflammatoires des composés selon l'invention La réponse inflammatoire apparaît dans de nombreux désordres neurologiques, comme les scléroses multiples, la maladie d'Alzheimer et de Parkinson, les ischémie cérébrales et les accidents traumatiques du cerveau, de plus l'inflammation est l'un des facteurs importants de la neurodégénérescence. Lors d'accidents cérébraux, une des premières réactions des cellules de la glie est de libérer des cytokines et des radicaux libres. La conséquence de cette libération de cytokines et de radicaux libres est une réponse inflammatoire au niveau cérébral qui peut mener à la mort des neurones (Rothwell 1997).

Les lignées cellulaires et les cellules primaires sont cultivées comme décrit précédemment.

Le LPS, endotoxine bactérienne (Escherichia coli 0111 : B4) (Sigma, France) est reconstitué dans de l'eau distillée et conservé à 4°C. les cellules sont traitées avec une concentration de LPS de 1 ug/ml pendant 24 heures. Pour éviter toutes interférences avec d'autres facteurs le milieu de culture des cellules est totalement changé.

Le TNF-a est un facteur important de la réponse inflammatoire à un stress (oxydant par exemple). Pour évaluer la sécrétion de TNF-a en réponse à une stimulation par des doses croissantes de LPS, le milieu de culture des cellules stimulées est prélevé et la quantité de TNF-a est évaluée avec un kit ELISA-TNF- a (Immunotech, France). Les échantillons sont dilués 50 fois afin d'être en adéquation avec la gamme étalon (Chang, Hudson et al. 2000).

La propriété anti-inflammatoire des composés est caractérisée de la manière suivante : le milieu de culture des cellules est totalement changé et les cellules sont incubées avec les composés à tester pendant 2 heures. Après cette incubation, du LPS est rajouté au milieu de culture à une concentration finale de 1 pg/ml. Après 24 heures d'incubation, le surnageant de cellules est récupéré et stocké à-80°C lorsqu'il n'est pas traité directement. Les cellules sont lysées et la quantité de protéines est quantifiée, à l'aide du kit de dosage Bio-Rad Protein Assay (Bio-Rad, München, Allemagne) selon la notice du fournisseur.

La mesure de la diminution de sécrétion de TNF-a favorisée par le traitement avec les composés testés est exprimée en pg/ml/pg de protéine et rapporté en pourcentage par rapport au témoin. Ces résultas montrent que les composés selon l'invention possèdent des propriétés anti-inflammatoires.

Exemple 6 : Evaluation des effets neuro-protecteurs des composés selon l'invention dans un modèle d'ischémie-reperfusion cérébral Modèle Prophylactique : 1/Traitements des animaux 1.1 Animaux et administration des composés Des souris C57 black/6 (sauvages) ont été utilisés pour cette expérience.

Les animaux sont maintenus sous un cycle lumière/obscurité de 12 h à une température de 20 +/-3°C. Les animaux ont un accès libre à l'eau et à la nourriture. La prise de nourriture et la prise de poids sont enregistrées.

Les animaux sont traités par gavage avec les composés selon l'invention (200 mg/kg/jour) ou le véhicule (carboxycellulose 0,5% (CMC)), pendant 14 jours avant l'induction de l'ischémie de l'artère moyenne cérébrale.

1.2 Induction d'une ischémie-reperfusion par occlusion intraluminale de l'artère moyenne cérébrale : Les animaux ont été anesthésiés à l'aide d'une injection intra-péritonéale de 300 mg/kg d'hydrate de chloral. Une sonde rectale est mise en place et la température du corps est maintenue à 37 +/-0, 5°C. La pression artérielle est mesurée au cours de toute l'expérience.

Sous un microscope chirurgical, la carotide droite est mise à jour à l'aide d'une incision cervicale médiale. L'artère ptérygopalatine a été ligaturée à son origine et une artèriotomie est réalisée dans l'artère carotide externe afin d'y glisser un mono-filament de nylon. Ce filament est alors doucement avancé dans l'artère carotide commune puis dans l'artère carotide interne afin d'obturer l'origine de l'artère cérébrale moyenne. Après 1 heure, le filament est retiré pour permettre la reperfusion.

2/Mesure du volume de l'infarctus cérébral : 24 heures après la reperfusion, les animaux préalablement traités ou non traités avec les composés sont tués par une overdose de pentobarbital.

Les cerveaux sont rapidement congelés et sectionnés. Les sections sont colorées au violet Cresyl. Les zones non colorées des sections cérébrales ont été considérées comme lésées par l'infarctus. Les aires ont été mesurées et le volume de l'infarctus et des deux hémisphères ont été calculés par la formule suivante (Volume de l'infarctus corrigé = Volume de l'infarctus- (volume de l'hémisphère droit-volume de l'hémisphère gauche)) pour compenser l'oedème cérébral.

L'analyse des coupes de cerveaux d'animaux traités révèle une nette diminution du volume de l'infarctus par rapport aux animaux non traités. Lorsque les

composés selon l'invention sont administrés aux animaux avant l'ischémie (effet prophylactique), ils sont capables d'induire une neuroprotection.

Un exemple de résultats est donné sur les figures 3-1 où les propriétés neuroprotectrices prophylactiques des composés 15 et 42 selon l'invention sont illustrées.

3/mesure de l'activité des enzymes anti-oxydantes : Les cerveaux des souris sont congelés, écrasés et réduits en poudres puis re- suspendus dans une solution saline. Les différentes activités enzymatiques sont ensuite mesurées comme décrits par les auteurs suivants : superoxide dismutase (Flohe and Otting 1984) ; glutathion peroxidase (Paglia and Valentine 1967) ; glutathion reductase (Spooner, Delides et al. 1981) ; glutathion-S-transferase (Habig and Jakoby 1981) ; catalase (Aebi 1984).

Les différentes activités enzymatiques mentionnées ci-dessus sont augmentées dans les préparations de cerveaux des animaux traités avec les composés selon l'invention.

Modèle curatif ou traitement de la phase aiguë 1/Induction d'une ischémie-reperfusion par occlusion intraluminale de l'artère moyenne cérébrale.

Des animaux tels que décrits précédemment sont utilisés pour cette expérience.

Les animaux sont anesthésiés à l'aide d'une injection intra-péritonéale de 300 mg/kg d'hydrate de chloral. Une sonde rectale est mise en place et la température du corps est maintenue à 37 +/-0, 5°C. La pression artérielle est mesurée au cours de toute l'expérience.

Sous un microscope chirurgical, la carotide droite est mise à jour à l'aide d'une incision cervicale médiale. L'artère ptérygopalatine a été ligaturée à son origine et une artèriotomie est réalisée dans l'artère carotide externe afin d'y glisser un mono-filament de nylon. Ce filament est ensuite doucement avancé dans l'artère carotide commune puis dans l'artère carotide interne afin d'obturer l'origine de l'artère cérébrale moyenne. Après 1 heure, le filament est retiré pour permettre la reperfusion.

2/traitement des animaux : Les animaux ayant subi une ischémie-reperfusion préalable sont traités par les composés selon l'invention par voie orale ou systémique une ou plusieurs fois après la reperfusion.

3/Mesure du volume de l'infarctus cérébral : 72 heures après la reperfusion, les animaux préalablement traités ou non traités avec les composés sont tués par une overdose de pentobarbital.

Les cerveaux sont rapidement congelés et sectionnés. Les sections sont colorées au violet Cresyl. Les zones non colorées des sections cérébrales ont été considérées comme lésées par l'infarctus. Les aires ont été mesurées et le volume de l'infarctus et des deux hémisphères ont été calculés par la formule suivante (Volume de l'infarctus corrigé = Volume de l'infarctus- (volume de l'hémisphère droit-volume de l'hémisphère gauche)) pour compenser l'oedème cérébral.

Dans les cas d'un traitement curatif (traitement de la phase aiguë), les animaux traités avec les composés selon l'invention ont des dommages au niveau cérébral réduit par rapport aux animaux non traités. En effet le volume de l'infarctus est diminué lorsque les composés selon l'invention sont administrés une ou plusieurs fois après l'ischémie-reperFusion.

Un exemple de résultats est donné sur les figures 3-2 où les propriétés neuroprotectrices en phase aiguë des composés 15 et 42 selon l'invention sont illustrées.

L'utilisation des composés selon l'invention dans différents modèles expérimentaux montre que ces nouveaux composés possèdent une activité antioxydante intrinsèque, capable de retarder et de réduire les effets d'un stress oxydatif, de plus ils induisent également l'expression des gènes des enzymes antioxydantes ce qui associé à leur caractère antioxydant permet de renforcer les

protections anti-radicalaires de cellules en culture. Par ailleurs les composés selon l'invention possèdent également un pouvoir anti-inflammatoire et la propriété d'activer le récepteur nucléaire PPARa.

Enfin, l'utilisation des composés selon l'invention, possédant une fonction ester ou une fonction acide carboxylique, dans un modèle d'ischémie reperfusion chez l'animal montre l'effet bénéfique sur la neuroprotection aussi bien avec un traitement préventif que curatif.

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