说明书 发明名称：取代 2，4-(1Η，3Η)嘧啶二酮作为 PARP抑制剂及其应用 技术领域

[0001] 本发明涉及取代 2,4-(1Η,3Η)

嘧啶二酮类化合物、 及其作为治疗上有效的多聚 （ADP-核糖） 聚合酶 （PARP) 抑制剂的应用。

背景技术

[0002] PARP是聚二磷酸腺苷核糖聚合酶 [poly(ADP-ribose) polymerase]的简称， 是一 种与单链 DNA损伤修复密切相关的核酶， 对修复 DNA的损伤并维持基因组的完 整起着关键作用。 PARP是个大家族， 包括 18种亚型 （Ame, J. C, C Spenlehauer, and G. de Murcia. Bioessays

26:882-93.) 。 在 PARP中， 仅 PARP-1和 PARP-2涉及 D

NA单链断裂的修复。 其中 PARP-1在真核细胞内含量最高， 其功能研究也最为深 入。 PARP-1介导的 DNA修复起着多重分子生物学效应： 一方面 PARP能修复因 氧化或化疗药物引起的 DNA受损， 是导致化疗或放疗耐药的重要因素； 另一方 面， 按照合成致死理论， 两个基因之间若存在合成致死作用， 当其中任何一个 基因单独受到抑制或发生突变吋， 细胞的生存不受影响， 但同吋抑制两个基因 将导致细胞凋亡 (Kraus W. L. and Lis, J. T. (2003) . Cell 113:677-683； Ame, J. C, C. Spenlehauer, and G. de Murcia. Bioessays 26:882-93.) 。

[0003] PARP- 1/2被召集至 DNA损伤位点， 并且在通过其锌指进行 DNA结合后活化， 然后在组蛋白谷氨酸残基上聚 （ADP-核糖） 化 [poly(ADP-ribose)ation]。 这生成 高度带负电的 ADP-核糖链、 其依次导致通过碱基切除修复机制使损伤 DNA解旋 和修复。 PARP-1负责大部分与 PARP活性相关的 DNA损伤 （>90<¾) 。 由于其多 功能作用， PARP-1/2的活化已在多种人类疾病中起到作用， 如癌症、 中风、 心 肌梗塞、 炎症、 高血压、 动脉粥样硬化和糖尿病。

[0004] 放射和化疗是用于癌症治疗的两种重要治疗方 法。 电离放射和 DNA-甲基化剂 通过涉及 DNA单链断裂的机制杀死癌细胞。 但单链断裂激活 PARP-1并且启动碱 基切除修复机制以修复损伤， 造成药效降低或产生抗药性。 当 PARP-1活性被抑 制吋， 单链 DNA变得持久， 其导致基因组异常和凋亡， 最终细胞死亡 （Dantzer, F.， G. de La Rubia, et al. Biochemistry 2000; 39:7559-69) 。 因此， PARP-1抑制剂 可用作辅助抗癌剂， 以加强放射和化疗的临床效果 （Plummer R, Jones C, et al. Clin Cancer Res. 2008 Dec l;14(23):7917-23) 。

[0005] 乳腺癌和卵巢癌是造成女性死亡的主要疾病。 乳腺癌中 BRCA1或 BRCA2突变 占全部乳腺癌的 3-5%， 在卵巢癌中占比达 5%以上 （R. Wooster and B. L.

Weber (2003). N. Engl. J. Med. 348(23):2339-2347) 。 三阴性乳腺癌是指缺乏雌激 素以及孕激素受体、 也不表达 HER2的乳腺癌， 这类患者约占了全部乳腺癌的 15 %, 对目前的雌激素治疗以及 HER2靶向治疗均无反应， 尚无标准治疗方案。 BR CA1/2在通过被称为同源重组的机制进行的 DNA双链断裂修复中起着不可或缺的 作用。 BRCA1/2基因缺陷细胞不能修复 DNA双链断裂， 而主要依赖于 PARP-1/2 介导的碱基切除修复， 以保持遗传完整性。 PARP-1活性的抑制导致 BRCA1/2基 因缺陷癌细胞的合成致死性 (Bryant, H.E., N. Schultz, H.D. Thomas, et al. (2005). Nature. 434:913-917) 。 因此， PARP-1/2抑制剂可通过缺陷性 DNA修复机制作为 癌症治疗的单一药剂。

[0006] 目前， 选择性 PARP-1/2抑制剂目前有多个处于临床阶段 （如 AZD2281、 ABT-8

88和 AG014699等） 。 这些药物的临床评价包括乳腺癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 结 直肠癌、 胰腺癌、 肝癌、 黑色素瘤、 胃癌和实体瘤等。

[0007] 综上 PARP抑制剂理论上不仅是化疗、 放疗的增敏剂， 对于那些基因突变 （BR CA1/2突变） 或 HR缺陷的肿瘤单独使用吋也有抑制作用。

技术问题

[0008] 本发明的目的之一在于提供一种新的取代 2,4-(1Η,3Η)嘧啶二酮类化合物及其衍 生物或其可药用的盐。

[0009] 本发明的目的之二是提供该类化合物作为新型 高选择性 PARP-1/2抑制剂在制备 预防或治疗与 PARP酶相关疾病的药物中的用途， 所述与 PARP酶相关疾病包括 癌症 （乳腺癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 结直肠癌、 胰腺癌、 肝癌、 黑色素瘤、 胃 癌和实体瘤等） 、 各种缺血性疾病和神经退行性疾病 （帕金森氏症、 阿尔兹海 默症等） 。

问题的解决方案

技术解决方案

为实现上述目的， 本发明提供了如下通式 I表示的取代 2,4-(1Η，3Η)嘧啶二酮类 物或其可药用的盐：

Ϊ:

[0011] 其中：

[0012] R,, R ₂ 分别代表氢、 的烷基、 d-Cs的烷氧基、 卤素、 三氟甲基或氰 基；

[0013] 或者 R _1; R ₂ 与相连接的碳原子一起形成取代或未取代 的 5元至 6元脂肪环、 取代或未取代的苯环；

[0014] R _¾! R ₄ ， R ₅ ， R ₆ 分别代表氢、 CH^ 垸基、 ^ ₃ 的垸氧基、 卤素、 三 氟甲基或氰基；

[0015] R ₇ , 1 ₈ 独立地选自氢、

[0016] 或者 R ₇ ， R ₈ 与其所连接的氮原子一起形成取代或未取 代的 5元至 7元脂肪环， 该脂肪环上可含有 1个 Ν或 0或者 S， 且 N上可被 R _¾ 取代；

[0017] F 代表氢、 C _r C ₄ 的垸基、 苯基、 取代苯基、 C ₅ -C ₆ 的芳杂基、 酰基、 磺 酰基；

[0018] 其中酰基为 -C(=0)R ₁₍₎ ， R ₁₍₎ 是酰基取代基， 所述取代基为 d-C ₃ 烷基、 C ₃ -C 环烷基、 苯基、 _{R l} 取代苯基；

[0019] 其中磺酰基为 -S(=0) ₂ R ₁₍₎ ， Ru)是酰基取代基， 所述取代基为 C _r C ₃ 烷基、 C

_{3 7} 环烷基、 苯基、 取代苯基；

[0020] X代表 S， 0， N;

[0021] Y代表 H， 0；

[0022] A代表

\、'

[0023] n为 1， 2， 3；

[0024] 代表单键或者双键。

[0025] 本发明还提供了药物组合物， 该药物组合物包含至少一种药用载体， 和至少 一种本申请所述式 （I) 化合物及其药用盐， 以作为 PARP抑制剂的应用。

[0026] 本申请所述的 "C i-C ₃ 的烷基 "是指甲基、 乙基、 正丙基或异丙基； 所述的 "C 的烷氧基"是指甲氧基、 乙氧基、 正丙氧基、 异丙氧基； 所述"卤素"是指 F、 Cl、 Br、 I； 所述" C ₃ -C 、烷基"是指环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基； 所述" C ₅ -C ^ 芳杂基 "是指 5至 6元芳香的单环， 其包含 1-3个杂原子， 该杂原子 选自 N， 0， S， 其余的环原子为碳。

[0027] 本发明的典型化合物包括， 但不限于以下表 1化合物：

[] 1]

8

8.0/.lOZN3/X3d 8£8LLI/L10Z OAV

01

8£8LLI/L10Z OAV

[0028] 或其可药用的盐。

[0029] 可药用盐的例子包括无机盐和有机盐， 例如盐酸盐、 氢溴酸盐、 硫酸盐、 磷 酸盐、 柠檬酸盐、 酒石酸盐、 琥珀酸盐、 马来酸盐、 富马酸盐、 扁桃体酸盐和

[0030] 本发明的部分化合物可采用如下的合成通法一 制备：

[0031] 根据 S Goto, H Tsuboi等在 Org. Pro. Res. & Dev.2003, pp700中报道的程序制备 1 ₄ ， 即取代 2,4-(1Η,3Η)嘧啶二酮 与六甲基二硅氮烷 (HMDS) 在酸性条件 下制得中间体 1 ₂ ， 1 ₂ 与1 ₃ 经取代反应制得酯中间体 1 ₄ ， 1 ₄ 经水解、 酰胺化反应 制得目标产物 I。

[0032] 本发明的部分化合物可采用如下的合成通法二 制备:

[0033] ₂ 与 1 ₇ 经取代反应制得中间体 1 ₈ ， 1 ₈ 与 1 ₆ 胺化反应制得目标产物 I。

[0034] 本发明涉及所述取代 2,4-(1Η,3Η)嘧啶二酮类衍生物为 PARP-1/2抑制剂， 所 述化合物可用于治疗多种因 PARP-1/2活性异常而引起的临床疾病， 如癌症。 这 类疾病包括但不限于乳腺癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 结直肠癌、 肝癌、 黑色素瘤 、 急性淋巴细胞白血病、 慢性淋巴细胞白血病、 多发性骨髓瘤、 肺癌、 胃癌、

[0035]

[0036] 同吋， 本发明也包括用于治疗 PARP-1/2活性异常而引起的其他疾病， 如中 风和神经退行性疾病等中枢神经系统疾病。

[0037] 本发明的衍生物在实施疾病治疗过程中， 可以组合物的形成通过口服、 注射 等方式， 用于治疗相关癌症及其他疾病。

[0038] 所述组合物包括治疗有效量的上述化合物或其 可药用的盐和医学上可接受的 载体。

[0039] 所述及的载体是指药学领域常规的载体， 如： 稀释剂、 赋形剂如水等； 粘合 剂如纤维素衍生物、 明胶、 聚乙烯吡咯烷酮等； 填充剂如淀粉等； 崩裂剂如碳 酸钙、 碳酸氢钠； 另外， 还可以在组合物中加入其他辅助剂如香味剂和 甜味剂

[0040] 用于口服吋， 可将其制备成常规的固体制剂如片剂、 粉剂或胶囊等； 用于注 射吋， 可将其制备成注射液。

[0041] 本发明的组合物的各种剂型可以采用医学领域 常规的方法进行制备， 其中活 性成分的含量为 0.1<¾〜99.5<¾ (重量比)。

[0042] 本发明的施用量可根据用药途径、 患者的年齢、 体重、 所治疗的疾病的类型 和严重程度等进行变化， 其日剂量为 0.005-30mg/kg体重（口服）或 0.005-30mg/kg 体重 (注射)。

发明的有益效果

有益效果

[0043] 本发明提供一种新的取代 2,4-(1Η,3Η)嘧啶二酮类化合物及其衍生物或其� �药用 的盐。 该类化合物作为新型高选择性 PARP-1/2抑制剂在制备预防或治疗与 PARP 酶相关疾病的药物中的用途， 所述与 PARP酶相关疾病包括癌症 （乳腺癌、 卵巢 癌、 前列腺癌、 结直肠癌、 胰腺癌、 肝癌、 黑色素瘤、 胃癌和实体瘤等） 、 各 种缺血性疾病和神经退行性疾病 （帕金森氏症、 阿尔兹海默症等） 。

本发明的实施方式

[0044] 实施例 1

[0045] 化合物 （1-1

) 1-(3-(4-环丙基羰基哌嗪 -1-羰基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0046] 步骤 1 : 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.5g， 2.98mmol) 、 HMDS ( l.2g ， 7.44mmol) 、 甲苯 （8mL) 加入反应瓶中， 搅拌下加入浓硫酸 （20mg) ， 搅 拌回流反应 12h。 减压浓缩溶剂至干。

[0047] 步骤 2: 步骤 1剩余物中依次加入 3-溴甲基苯甲酸甲酯 （1.02g， 4.46mmol) 、 D MF ( lmL) ， 升温至 130-135°C搅拌反应 5h。 降温至 90-100°C， 搅拌下加入 1,4- 二氧六环 （3mL) ， 进一步降温至 60-70°C， 加入甲醇 （5mL) ， 并保持此温度 搅拌 30min。 浓缩溶剂至干， 剩余物加乙醇 （10mL) 重结晶， 得白色固体中间体 1-(3-甲氧基羰基苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.5g， 二步收率 53.2 %) ， MS( m/ z): 317 [M+H] +。

[0048] 步骤 3: 1-(3-甲氧基羰基苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.5g， 1.58 mmol) 、 甲醇 （3mL) /四氢呋喃 （3mL) 、 水 （3mL) 加入反应瓶中， 搅拌下 加入氢氧化钠 （0.1g， 2.37mmol) ， 40-50°C反应 2h。 滴加 IN稀盐酸溶液调节 pH 至 2-3， 搅拌 lh。 过滤， 固体加乙醇 （3mL) 重结晶， 得白色固体中间体 1-(3-羧 基苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.45g， 收率 94.2%) ， MS(m/z): 303 [M+H] ÷。

[0049] 步骤 4: 1-(3-羧基苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.2g， 0.66mmol [0050] 三吡咯烷基溴化魏六氟磷酸盐 （PyBrOP, 0.46g， 0.99mmol) 、 1-环丙甲酰基 哌嗪 (O.lg, 0.66mmol) 、 Ν,Ν-二异丙基乙胺 (DIPEA, 0.17g， 1.32mmol) 、 二氯甲烷 （5mL) 加入反应瓶中， 室温搅拌过夜。 反应液中加入二氯甲烷 （5mL ) 、 水 （5mL) ， 萃取， 有机层经水 （3mL) 洗， 干燥、 过滤、 浓缩得粗品。 该 粗品经硅胶柱层析 （流动相 CH ₂ C1 ₂ /CH ₃ OH 50/1) 得终产物 1-(3-(4-环丙基羰基 哌嗪 -1-羰基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 ( 1-1) ， 白色固体 (0.2g ， 收率 68.9%) ， MS( ml z): 461 [M+Na] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.60 (br, 1H), 7.47-7.35 (m, 4H), 7.22-7.20 (d, /= 8.0Hz, 1H), 7.18-7.16 (d,/= 8.0Hz, 1H), 5.16 (s, 2H), 3.73-3.43 (m, 8H), 1.26-1.21 (m, 1H), 0.73-0.70 (m, 4H)。

[0051] 实施例 2

[0052] 化合物 （1-2

) l-(4-氟 -3-(4-环丙基羰基哌嗪 -1-羰基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二 酮

[0053] 步骤 1: 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.5g， 2.98mmol) 、 HMDS (l.2g ， 7.44mmol) 、 甲苯 （8mL) 加入反应瓶中， 搅拌下加入浓硫酸 （20mg) ， 搅 拌回流反应 12h。 减压浓缩溶剂至干。

[0054] 步骤 2: 步骤 1剩余物中依次加入 2-氟 -5-溴甲基苯甲酸甲酯 （l.lg， 4.46mmol) 、 DMF (lmL) ， 升温至 130-135°C搅拌反应 5h。 降温至 90-100°C， 搅拌下加入 1, 4-二氧六环 （3mL) ， 进一步降温至 60-70°C， 加入甲醇 （5mL) ， 并保持此温度 搅拌 30min。 浓缩溶剂至干， 剩余物加乙醇 （10mL) 重结晶， 得白色固体中间体 1-(4-氟 -3-甲氧基羰基苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.6g， 收率 60.4 %) ， MS(m/z): 335 [M+H] +。

[0055] 步骤 3: 1-(4-氟 -3-甲氧基羰基苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.6g ， 1.8mmol) 、 甲醇 （3mL) /四氢呋喃 （3mL) 、 水 （3mL) 加入反应瓶中， 搅 拌下加入氢氧化钠 （0.1g， 2.37mmol) ， 40-50°C反应 2h。 滴加 IN稀盐酸溶液调 节 pH至 2-3， 搅拌 lh。 过滤， 固体加乙醇 （3mL) 重结晶， 得白色固体中间体 1-( 4-氟 -3-羧基苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.48g， 收率 83.5%) ， M S( m/ z): 321 [M+H] +。

[0056] 步骤 4: 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.21g， 0.66 mmol) 、 三吡咯烷基溴化魏六氟磷酸盐 （PyBrOP, 0.46g， 0.99mmol) 、 1-环 丙甲酰基哌嗪 （0.1g， 0.66mmol) 、 Ν,Ν-二异丙基乙胺 （DIPEA, 0.17g， 1.32m mol) 、 二氯甲烷 （5mL) 加入反应瓶中， 室温搅拌过夜。 反应液中加入二氯甲 烷 （5mL) 、 水 （5mL) ， 萃取， 有机层经水 （3mL) 洗， 干燥、 过滤、 浓缩得 粗品。 该粗品经硅胶柱层析 （流动相 CH ₂ C1 ₂ /CH ₃ 0H

50/1) 得终产物 1-(4-氟 -3-(4-环丙基羰基哌嗪 -1-羰基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2, 4(1H,3H)-二酮 （1-2) ， 白色固体 （0.19g， 收率 63.3%) ， MS( m/ z): 478

[M+Na] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.58 (br, 1H), 7.45-7.35 (m, 3H), 7.21-7.19 (d, J = 8.0Hz, 1H), 7.17-7.15 (d, /= 8.0Hz, 1H), 5.17 (s, 2H), 3.70-3.42 (m, 8H),

1.27-1.24 (m, 1H), 0.74-0.70 (m, 4H)。

[0057] 实施例 3

[0058] 化合物 （1-3) l-( 3-(4-甲基哌嗪 -1-甲基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)- 二酮

[0059] 步骤 1: 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.5g， 2.98mmol) 、 HMDS (l.2g ， 7.44mmol) 、 甲苯 （8mL) 加入反应瓶中， 搅拌下加入浓硫酸 （20mg) ， 搅 拌回流反应 12h。 减压浓缩溶剂至干。

[0060] 步骤 2: 步骤 1剩余物中依次加入间二溴苄 （1.18g， 4.46mmol) 、 DMF (lmL ) ， 升温至 130-135°C搅拌反应 5h。 降温至 90-100°C， 搅拌下加入 1,4-二氧六环 （ 3mL) ， 进一步降温至 60-70°C， 加入甲醇 （5mL) ， 并保持此温度搅拌 30min。 浓缩溶剂至干， 剩余物加乙醇 （10mL) 重结晶， 得白色固体中间体 1-(3-溴苄基 ) 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.6g， 二步收率 57.7%) ， MS( m/ z): 352 [M+H] +。 [0061] 步骤 3: l-(3-溴苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （0.2g， 0.57mmol) 、 1-甲基哌嗪 （0.06g， 0.63mmol) 、 Ν,Ν-二甲基甲酰胺 （DMF， 4mL) 、 DIPE A (0.15g， 1.14mmol) 加入反应瓶中， 室温搅拌反应 5h。 反应液中加入二氯甲 烷 （10mL) 、 水 （5mL) ， 萃取， 有机层经水 （3mL) 洗， 干燥、 过滤、 浓缩 得粗品。 该粗品经硅胶柱层析 （流动相 CH ₂ C1 ₂ /CH ₃ OH 30/1) 得终产物 1-( 3-(4- 甲基哌嗪 -1-甲基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 ( 1-3) ， 白色固体 (0.15g， 收率 71.1%) ， MS( m/ ： 371 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.58 (br, IH), 7.32-7.15 (m, 6H), 5.11 (s, 2H), 5.11 (s, 2H), 3.43 (s, 2H), 2.33 (m, 8H), 2.16 (s, 3H)。

[0062] 实施例 4

[0063] 化合物 （1-4) l-( 3-(4-羟基哌啶 -1-甲基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)- 二酮

[0064] 化合物 1-4

的合成按实施例 3方法进行， 起始原料为 1-(3-溴苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H, 3H)-二酮和 4-羟基哌啶。 得终产物 1-( 3-(4-羟基哌啶 -1-甲基)苄基） 噻吩并 [2,3-D] 嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-4) ， 白色固体。 MS( m/ ： 372 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.56 (br, IH), 7.32-7.13 (m, 6H), 5.13 (s, 2H), 4.32 (br, IH), 3.42 (s, 2H), 3.38 (m, IH), 2.52 (m, 2H), 1.92 (m, 2H), 1.67 (m, 2H), 1.32 (m, 2H)。

[0065] 实施例 5

[0066] 化合物 （1-5

) l-(4-氟 -3-(4-羟基哌啶 -1-羰基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0067] 化合物 1-5的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻吩 并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 4-羟基哌啶。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4-羟基哌啶 -1- 羰基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 ( 1-5) ， 白色固体。 MS( ml z): 426 [M+Na] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, IH), 7.35-7.13 (m, 6H), 5.11 (s, 2H), 4.30 (br, IH), 3.37 (m, IH), 2.51 (m, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.68 (m, 2H), 1.33 (m, 2H)。

[0068] 实施例 6 [0069] 化合物 （1-6

) l-(4-氟 -3-(4-甲基哌嗪 -1-羰基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0070] 化合物 1-6的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻吩 并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-甲基哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4-甲基哌嗪 - 1- 羰基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-6) ， 白色固体。 MS( ml z): 403 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.61 (br, 1H), 7.49-7.18 (m, 6H), 5.13 (s, 2H), 3.66 (m, 2H), 3.37 (m, 2H), 2.42 (m, 2H), 2.36 (m, 2H), 2.29 (s, 3H)。

[0071] 实施例 7

[0072] 化合物 （1-7) l-((N-(3-吗啉丙基） 苯甲酰胺)甲基）

噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0073] 化合物 1-7

的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 1-(3-羧基苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1 H,3H)-二酮和 3-吗啉丙胺。 得终产物 1-((Ν-(3-吗啉丙基） 苯甲酰胺)甲基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-7) ， 白色固体。 MS( m/ z): 429 [M+H] ÷ 。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.60 (br, 1H), 8.52 (br, 1H), 7.76-7.74 (m, 2H),

7.45-7.43 (m, 2H), 7.21-7.19 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.15-7.13 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.15 (s, 2H), 3.55-3.53 (m, 4H), 3.27-3.22 (m, 2H), 2.30 (m, 6H), 1.68- 1.63 (m, 2H)。

[0074] 实施例 8

[0075] 化合物 （1-8

) l-(4-氟 -3-(4-(2-吡啶基)哌嗪 - 1-羰基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0076] 化合物 1-8的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻吩 并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-(2-吡啶基)哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4-(2-吡 啶基)哌嗪 - 1-羰基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-8) ， 白色固体 。 MS( ml z): 466 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, 1H), 7.89 (m, 1H), 7.76-7.45 (m, 6H), 7.22-7.20 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.15-7.13 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.13 (s, 2H), 3.57-3.53 (m, 4H), 3.27-3.21 (m, 4H)。

[0077]

[0078] 实施例 9 [0079] 化合物 ( 1-9

) l-(4-氟 -3-(4-(2-吡啶基)哌嗪 -1-羰基)苄基） 苯并 [4,5]噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1Η, 3Η)-二酮

[0080] 化合物 1-9

的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 苯并 [4,5]噻吩并 [2, 3-D]嘧啶 -2,4(1Η,3Η)-二酮 (合成方法类似于实施例 1和 2， 起始原料为苯并 [4,5]噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1Η,3Η)-二酮和 2-氟 -5-溴甲基苯甲酸甲酯)和 1-(2-吡啶基)哌嗪 。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4-(2-吡啶基)哌嗪 -1-羰基)苄基） 苯并 [4,5]噻吩并 [2,3-D]嘧 啶 -2,4(1H,3H)-二酮 ( 1-9) ， 白色固体。 MS( m/ ： 516 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.61 (br, 1H), 7.92 (m, 3H), 7.73-7.53 (m, 6H), 7.35-7.30 (m, 2H), 5.11 (s, 2H), 3.58-3.55 (m, 4H), 3.29-3.22 (m, 4H)。

[0081] 实施例 10

[0082] 化合物 （1-10) l-(4-氟 -3-(4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪 -1-羰基)苄基） 吲哚并 [2,3-D] 嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0083] 化合物 1-10的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 吲 哚并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 (合成方法类似于实施例 1和 2， 起始原料为吲哚 并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 2-氟 -5-溴甲基苯甲酸甲酯)和 1-(3-三氟甲基苯基) 哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪 -1-羰基)苄基） 吲哚并 [2,3-D] 嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 ( 1-10) ， 白色固体。 MS( m/ ： 566 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 12.10 (br, 1H), 11.58 (br, 1H), 7.91-7.88 (m, 3H), 7.73-7.65 (m, 5H), 7.35-7.25 (m, 3H), 5.12 (s, 2H), 3.56-3.53 (m, 4H), 3.27-3.21 (m, 4H)。

[0084] 实施例 11

[0085] 化合物 （1-11

) l-(4-氟 -3-(4-环丙基羰基哌嗪 -1-羰基)苄基） 呋喃并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二 酮

化合物 1-11的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 呋 喃并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 (合成方法类似于实施例 1和 2， 起始原料为呋喃 并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 2-氟 -5-溴甲基苯甲酸甲酯)和 1-(3-三氟甲基苯基) 哌嗪。 得终产物 l-(4-氟 -3-(4-环丙基羰基哌嗪 -1-羰基)苄基） 呋喃并 [2,3-D]嘧啶 -2, 4(1H,3H)-二酮 （1-11) ， 白色固体。 MS( m/ ： 441 [Μ+Η] +。 Ή NMR

(DMSO-d ₆ ): d: 11.58 (br, IH), 7.46-7.37 (m, 3H), 7.25-7.20 (m, IH), 7.17-7.15 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.13 (s, 2H), 3.69-3.39 (m, 8H), 1.26- 1.24 (m, IH), 0.75-0.71 (m, 4H)。

[0087] 实施例 12

[0088] 化合物 （1-12

) l-(4-氟 -3-(4-环丙基羰基哌嗪 -1-羰基)苄基） 吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二 酮

[0089] 化合物 1-12的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 吡 咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 (合成方法类似于实施例 1和 2， 起始原料为吡咯 并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 2-氟 -5-溴甲基苯甲酸甲酯)和 1-(3-三氟甲基苯基) 哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4-环丙基羰基哌嗪 -1-羰基)苄基） 吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2, 4(1H,3H)-二酮 （1-12) ， 白色固体。 MS( m/ ： 440 [Μ+Η] +。 Ή NMR

(DMSO-d ₆ ): d: 11.60 (br, IH), 7.45-7.35 (m, 3H), 7.21-7.19 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.17-7.15 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.23 (br, IH), 5.11 (s, 2H), 3.67-3.42 (m, 8H), 1.27- 1.24 (m, IH), 0.76-0.71 (m, 4H)。

[0090] 实施例 13

[0091] 化合物 （1-13

) l-(4-氟 -3-(4- (对甲苯基)哌嗪 -1-羰基)苄基） 呋喃并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0092] 化合物 1-13的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 呋 喃并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1- (对甲苯基)哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4- (对 甲苯基)哌嗪 - 1-羰基)苄基） 呋喃并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-13) ， 白色 固体。 MS( ml z): 463 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, IH), 7.43-7.35 (m, 3H), 7.27-7.24 (m, 2H), 7.19-7.14 (m, 4H), 5.13 (s, 2H), 3.65-3.40 (m, 8H), 2.17 (s, 3H)。

[0093] 实施例 14

[0094] 化合物 （1-14

) l-(4-氟 -3-(4- (甲烷磺酰)哌嗪 -1-羰基)苄基） 吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 [0095] 化合物 1-14的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 吡 咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-甲烷磺酰哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4- (甲烷 磺酰)哌嗪 - 1-羰基)苄基） 吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-14) ， 白色固 体。 MS( ml z): 450 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, IH), 7.43-7.31 (m, 3H), 7.21-7.19 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.18-7.16 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.22 (br, IH), 5.13 (s, 2H), 3.68-3.57 (m, 4H), 2.97 (s, 3H), 2.65-2.60 (m, 4H)。

[0096] 实施例 15

[0097] 化合物 （1-15

) l-(4-氟 -3- (哌嗪 - 1-羰基)苄基) -5-异丙基-吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0098] 化合物 1-15的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） -5- 异丙基-吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 (合成方法类似于实施例 1和 2， 起始原 料为 5-异丙基-吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 2-氟 -5-溴甲基苯甲酸甲酯)和 哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3- (哌嗪 - 1-羰基)苄基) -5-异丙基-吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1Η ,3H)-二酮 （1-15) ， 白色固体。 MS( m/ z): 414 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.58 (br, IH), 7.42-7.31 (m, 3H), 7.19 (s, IH), 5.21 (br, IH), 5.11 (s, 2H),

3.69-3.59 (m, 4H), 2.66-2.60 (m, 5H), 1.91 (m, IH), 1.25- 1.23 (m, 6H)。

[0099] 实施例 16

[0100] 化合物 （1-16

) l-(4-氟 -3-(4-(2-嘧啶基)哌嗪 - 1-羰基)苄基） 吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0101] 化合物 1-16的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 吡 咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-(2-嘧啶基)哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4-(2- 嘧啶基)哌嗪 - 1-羰基)苄基） 吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-16) ， 白色 固体。 MS( ml z): 450 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.58 (br, IH), 8.52-5.50 (m, 2H), 7.78-7.55 (m, 3H), 7.13-7.10 (m, 2H), 6.95-6.93 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.21 (br, IH), 5.13 (s, 2H), 3.56-3.53 (m, 4H), 3.26-3.21 (m, 4H)。

[0102] 实施例 17

[0103] 化合物 （1-17) l-(4-氟 -3-(4-(2'-吡啶甲酰基)哌嗪 - 1-甲基)苄基） 噻吩并 [2,3-D] 嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 [0104] 化合物 1-17的合成按实施例 3方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-溴苄基） 噻吩 并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 Ν-(2'-吡啶甲酰基)哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4-( 2'-吡啶甲酰基)哌嗪 -1-甲基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1Η,3Η)-二酮 （ 1-17) ， 白色固体。 MS( ml z): 480 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, 1H), 8.70-8.65 (m, 2H), 8.02-7.93 (m, 2H), 7.32-7.13 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 3.51-3.47 (m, 4H), 3.43 (s, 2H), 3.25-3.20 (m, 4H)。

[0105] 实施例 18

[0106] 化合物 （1-18

) l-(4-氟 -3-(4-(2'-吡啶基)哌嗪 - 1-甲基)苄基） -5-氰基-吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3 H)-二酮

[0107] 化合物 1-18的合成按实施例 3方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-溴苄基） -5-氰 基-吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-(2-吡啶基)哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4 -(2'-吡啶基)哌嗪 -1-甲基)苄基） -5-氰基-吡咯并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （ 1-18) ， 白色固体。 MS( m/ ： 460 [Μ+Η] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.60 (br, 1H), 8.53-8.47 (m, 2H), 8.01-7.95 (m, 2H), 7.33-7.11 (m, 4H), 5.13 (s, 2H), 3.50-3.47 (m, 4H), 3.45 (s, 2H), 2.65-2.58 (m, 4H)。

[0108] 实施例 19

[0109] 化合物 （1-19

) l-(4-氟 -3-(4-(3-呋喃基)哌嗪 - 1-羰基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0110] 化合物 1-19的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-(3-呋喃基)哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4-(3- 呋喃基)哌嗪 - 1-羰基)苄基） 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-19) ， 白色 固体。 MS( ml z): 455 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, 1H), 7.88-7.85 (m, 3H), 7.76-7.52 (m, 2H), 7.23-7.17 (m, 3H), 5.11 (s, 2H), 3.55-3.51 (m, 4H), 3.26-3.20 (m, 4H)。

[0111] 实施例 20

[0112] 化合物 （1-20) l-(2-三氟甲基 -4-氟 -3-(4- (环丁基羰基)哌嗪 -1-甲基)苄基) -5-异丙 基 -6-碘-噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 [0113] 化合物 1-20的合成按实施例 3方法进行， 起始原料为 1-(2-三氟甲基 -4-氟 -3-溴 苄基） -5-异丙基 -6-碘-噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-环丁甲酰基哌嗪。 得终产物 1-(2-三氟甲基 -4-氟 -3-(4- (环丁基羰基)哌嗪 -1-甲基)苄基) -5-异丙基 -6-碘- 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-20) ， 白色固体。 MS( m/ ： 709 [M+H] + 。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.21 (m, 1H), 3.53 (s, 2H), 3.43-3.38 (m, 4H), 2.95-2.81 (m, 11H), 1.29-1.27 (m, 6H)

[0114] 实施例 21

[0115] 化合物 （1-21) l-(2-甲基 -5-(4-苯基哌嗪 -1-羰基)苄基） -5,6-二氢 -4H-环戊基 [B] 噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0116] 化合物 1-21

的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(2-甲基 -5-羧基苄基） -5,6-二氢 -4H-环 戊基 [B]噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-苯基哌嗪。 得终产物 1-(2-甲基 -5-( 4-苯基哌嗪 -1-羰基)苄基） -5,6-二氢 -4H-环戊基 [B]噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)- 二酮 （1-21) ， 白色固体。 MS( m/ z): 501 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.60 (br, 1H), 7.75-7.58 (m, 3H), 7.08-6,93 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 3.56-3.42 (m, 8H), 3.02-2.88 (m, 4H), 2.42-2.38 (m, 2H), 2.25 (s, 3Η)=

[0117] 实施例 22

[0118] 化合物 （1-22

) l-(2,6-二甲基 -3-(4-苯甲酰基哌嗪 -1-羰基)苄基） -5-氰基-呋喃并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(

IH, 3H)-二酮

[0119] 化合物 1-22的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(2,6-二甲基 -3-羧基苄 基） -5-氰基-呋喃并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和苯甲酰基哌嗪。 得终产物 1-(2, 6-二甲基 -3-(4-苯甲酰基哌嗪 -1-羰基)苄基） -5-氰基-呋喃并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H ) -二酮 （1-22) ， 白色固体。 MS( m/ z): 512 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d:

I I.59 (br, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.02-7.97 (m, 3H), 7.65-7.53 (m, 3H), 7.15-7.13 (m, 1H), 5.11 (s, 2H), 3.67-3.37 (m, 8H), 2.35 (s, 3H), 2.20 (s, 3H)。

[0120] 实施例 23 [0121] 化合物 （1-23) l-(4-氟 -2-异丙氧基 -5-(4-(3-氟苯基)哌嗪 - 1-羰基)苄基） -6-氟吲 哚并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0122] 化合物 1-23的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -2-异丙氧基 -5-羧 基苄基） -6-氟吲哚并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮)和 1-(3-氟苯基)哌嗪。 得终产 物 1-(4-氟 -2-异丙氧基 -5-(4-(3-氟苯基)哌嗪 -1-羰基)苄基） -6-氟吲哚并 [2,3-D]嘧啶- 2,4(1H,3H)-二酮 ( 1-23) ， 白色固体。 MS( m/ ： 592 [M+H] +。 Ή NMR

(DMSO-d ₆ ): d: 12.11 (br, IH), 11.59 (br, IH), 7.65-7.55 (m, 3H), 7.25-7.19 (m, 3H), 6.70-6.59 (m, 3H), 5.12 (s, 2H), 4.83 (m, IH), 3.57-3.51 (m, 4H), 3.26-3.21 (m, 4H) , 1.28- 1.26 (m, 6H)。

[0123]

[0124] 实施例 24

[0125] 化合物 （1-24

) l-(3-(4- (间甲苯磺酰基)哌嗪 -1-羰基)苄基） -7-甲基-吲哚并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3 H)-二酮

[0126] 化合物 1-24的合成按实施例 1方法进行， 起始原料为 1-(3-羧基苄基） -7-甲基- 吲哚并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮)和 1- (间甲苯磺酰基)哌嗪。 得终产物 1-(3-(4-( 间甲苯磺酰基)哌嗪 - 1-羰基)苄基） -7-甲基-吲哚并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （ 1-24) ， 白色固体。 MS( ml z): 572 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 12.10 (br, IH), 11.60 (br, IH), 7.89-7.54 (m, 6H), 7.35-7.23 (m, 3H), 6.93-6.85 (m, 2H), 5.11 (s, 2H), 3.58-3.51 (m, 4H), 3.27-3.20 (m, 4H), 2.35 (s, 3H), 2.33 (s, 3H)。

[0127] 实施例 25

[0128] 化合物 （1-25

) l-(3-溴 -5- (四氢噻唑 - 1-羰基)苄基) -5-氯噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0129] 化合物 1-25的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(3-溴 -5-羧基苄基) -5- 氯噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和四氢噻唑。 得终产物 1-(3-溴 -5- (四氢噻唑 - 1-羰基)苄基) -5-氯噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （ 1-25

) ， 白色固体。 MS( m/ z): 488 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, IH) 8.03 (s, IH), 7.69 (s, IH), 7.63 (s, IH), 6.21 (s, IH), 5.11 (s, 2H), 4.35-4.31 (m, 4H), 2.80-2.75 (m, 2H)。

[0130] 实施例 26

[0131] 化合物 （1-26) l-(4-氯 -3-(4-乙基高哌嗪 - 1-羰基)苄基) -5,6-二甲基呋喃并 [2,3-D] 嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0132] 化合物 1-26的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氯 -3-羧基苄基） -5- 氯噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-乙基高哌嗪。 得终产物 1-(4-氯 -3-(4-乙 基高哌嗪 - 1-羰基)苄基) -5,6-二甲基呋喃并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-26) ， 白色固体。 MS( ml z): 460 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, 1H), 7.68-7.54 (m, 3H), 5.11 (s, 2H), 3.45-3.39 (m, 4H), 3.02-2.93 (m, 4H), 2.68 (m, 2H),2.31 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.78 (m, 2H), 1.03- 1.00 (t, / = 4.0Hz, 3H)。

[0133] 实施例 27

[0134] 化合物 （1-27

) l-(2-甲氧基 -4-氟 -5-(4- (环己基羰基)哌嗪 - 1-羰基)苄基) -5-甲氧基-噻吩并 [2,3-D] 嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0135]

[0136] 化合物 1-27的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(2-甲氧基 -4-氟 -5-羧基 苄基） -5-甲氧基-噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-环己甲酰基哌嗪。 得终 产物 1-(2-甲氧基 -4-氟 -5-(4- (环己基羰基)哌嗪 - 1-羰基)苄基) -5-甲氧基-噻吩并 [2,3- D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-27) ， 白色固体。 MS( m/ ： 559 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.91 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 3.82 (s, 6H), 3.67-3.59 (m, 8H), 2.35-2.30 (m, 1H), 1.49-1.27 (m, 10H)。

[0137] 实施例 28

[0138] 化合物 （1-28

) l-(3-氰基 -5-(4- (环戊磺酰基)哌嗪 -1-甲基)苄基) -5-三氟甲基 -6-溴-噻吩并 [2,3-D] 嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0139] 化合物 1-28的合成按实施例 3方法进行， 起始原料为 1-(3-氰基 -5-溴苄基） -5- 三氟甲基 -6-溴-噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-环戊磺酰基哌嗪。 得终产 物 1-(3-氰基 -5-(4- (环戊磺酰基)哌嗪 -1-甲基)苄基) -5-三氟甲基 -6-溴-噻吩并 [2,3-D] 嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 ( 1-28) ， 白色固体。 MS( m/ ： 661 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 3.67 (s, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.90-2.76 (m, 8H), 1.95- 1.45 (m, 8H)。

[0140] 实施例 29

[0141] 化合物 （1-29) l-(4-氟 -3-(2-吡啶基哌嗪 - 1-羰基)苄基） -5,6,7,8-四氢苯并 [4,5]噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0142] 化合物 1-29

的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） -5,6,7,8-四氢苯并 [4 ,5]噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-(2-吡啶基)哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(2 -吡啶基哌嗪 - 1-羰基)苄基） -5,6,7,8-四氢苯并 [4,5]噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)- 二酮 ( 1-29) ， 白色固体。 MS( m/ z): 520 [M+H] ÷ = Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.58 (br, 1H), 7.89 (m, 1H), 7.65-7.55 (m, 4H), 7.20-7.16 (m, 2H), 5.15 (s, 2H), 3.57-3.53 (m, 4H), 3.27-3.21 (m, 4H) , 2.69-2.65 (m, 4H), 1.89- 1.84 (m, 4H)。

[0143] 实施例 30

[0144] 化合物 （1-30) l-(4-氟 -3-(N-(l-哌啶甲基） 甲酰胺)苄基）

噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0145] 化合物 1-30的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和哌啶 - 1-甲胺。 得终产物 1-(4-氟 -3-(Ν-(1-哌啶 甲基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （ 1-30

) ， 白色固体。 MS( ml z): 417 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.60 (br, 1H), 8.53 (br, 1H), 7.77-7.74 (m, 2H), 7.43-7.42 (m, 1H), 7.21-7.19 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.15-7.13 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.78 (s, 2H), 3.12-3.08 (m, 4H), 2.15-2.09 (m, 6H)。

[0146] 实施例 31

[0147] 化合物 （1-31) l-(4-氟 -3-(N-(l-硫代吗啉乙基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D]嘧 啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0148] 化合物 1-31的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 4-(2-胺乙基)硫代吗啉。 得终产物 1-(4-氟 -3-(N -(1-硫代吗啉乙基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-31) ， 白色固体。 MS( ml z): 449 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, IH), 8.52 (br, IH), 7.78-7.74 (m, 2H), 7.43-7.42 (m, IH), 7.20-7.18 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.15-7.13 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.17 (s, 2H), 4.16-4.08 (m, 2H), 3.13-2.88 (m, 10H)。

[0149] 实施例 32

[0150] 化合物 （1-32) l-(4-氟 -3-(N-(4-羟基哌啶 -1-乙基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D] 嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0151] 化合物 1-32的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 4-(2-胺乙基)哌啶醇。 得终产物 1-(4-氟 -3-(N-(4 -羟基哌啶 - 1-乙基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-32) ， 白色固体。 MS( ml z): 447 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.63 (br, IH), 8.53 (br, IH), 7.79-7.74 (m, 2H), 7.44-7.42 (m, IH), 7.20-7.18 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.16-7.14 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.19 (s, 2H), 4.21-4.08 (m, 4H), 3.12-3.04 (m, 6H), 2.32-2.25 (m, 4H)。

[0152] 实施例 33

[0153] 化合物 （1-33) l-(4-氟 -3-(N- (吗啉 - 1-乙基） 甲酰胺)苄基）

噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0154] 化合物 1-33的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 N-(2-氨基乙基)吗啉。 得终产物 1-(4-氟 -3-(N-( 吗啉 - 1-乙基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-33) ， 白色 固体。 MS( ml z): 433 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.62 (br, IH), 8.52 (br, IH), 7.78-7.74 (m, 2H), 7.45-7.44 (m, IH), 7.19-7.17 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.17-7.15 (d, J = 8.0Hz, IH), 5.18 (s, 2H), 4.22-4.08 (m, 6H), 3.13-3.04 (m, 6H)。

[0155] 实施例 34

[0156] 化合物 （1-34) l-(4-氟 -3-(N-(4-氨基哌啶 -1-乙基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D] 嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0157] 化合物 1-34的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 4-(2-胺乙基)哌啶氨。 得终产物 1-(4-氟 -3-(N-(4 -氨基哌啶 - 1-乙基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-34) ， 白色固体。 MS( ml z): 446 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, IH), 8.52 (br, IH), 7.78-7.74 (m, 2H), 7.43-7.42 (m, IH), 7.19-7.17 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.13-7.11 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.18 (s, 2H), 4.13-4.08 (m, 2H), 3.13-3.04 (m, 7H), 2.33-2.25 (m, 4H)。

[0158] 实施例 35

[0159] 化合物 （1-35) l-(4-氟 -3-(N-(4-二甲氨基哌啶 -1-乙基） 甲酰胺)苄基）

噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0160] 化合物 1-35的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 4-(2-胺乙基)二甲氨基哌啶。 得终产物 1-(4-氟- 3-(N-(4-二甲氨基哌啶 - 1-乙基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

( 1-35) ， 白色固体。 MS( m/ z): 474 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.58 (br, IH), 8.53 (br, IH), 7.79-7.74 (m, 2H), 7.43-7.42 (m, IH), 7.18-7.16 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.13-7.11 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.19 (s, 2H), 4.15-4.11 (m, 2H), 3.15-3.04 (m, 7H), 2.42 (s, 6H), 2.32-2.25 (m, 4H)。

[0161] 实施例 36

[0162] 化合物 （1-36) l-(4-氟 -3-(N-(4-甲氨基哌啶 -1-乙基） 甲酰胺)苄基）

噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0163] 化合物 1-36的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 4-(2-胺乙基)甲氨基哌啶。 得终产物 1-(4-氟 -3- ( _N -(4-甲氨基哌啶 -1-乙基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （ 1-36) ， 白色固体。 MS( m/ z): 460 [M+H] ÷ = Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, IH), 8.52 (br, IH), 7.78-7.74 (m, 2H), 7.42-7.40 (m, IH), 7.18-7.16 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.14-7.12 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.18 (s, 2H), 4.13-4.11 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.16-3.04 (m, 7H), 2.30-2.25 (m, 4H)。

[0164] 实施例 37

[0165] 化合物 （1-37) l-(4-氟 -3-(N- (哌嗪 - 1-乙基） 甲酰胺)苄基）

噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 化合物 1-34的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 N-氨乙基哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(N- (哌嗪- 1-乙基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-37

) ， 白色固体。 MS( ml z): 432 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.58 (br, IH), 8.53 (br, IH), 7.79-7.74 (m, 2H), 7.46-7.44 (m, IH), 7.19-7.17 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.13-7.11 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.19 (s, 2H), 4.14-4.11 (m, 2H), 3.16-3.04 (m, 10H)。

[0167] 实施例 38

[0168] 化合物 （1-38) l-(4-氟 -3-(N-(4-甲基哌嗪 -1-乙基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D] 嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0169] 化合物 1-38的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 4-甲基 -1-哌嗪乙胺。 得终产物 1-(4-氟 -3-(N-(4- 甲基哌嗪 - 1-乙基） 甲酰胺)苄基）噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-38) ， 白色固体。 MS( ml z): 446 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, IH), 8.54 (br, IH), 7.79-7.73 (m, 2H), 7.45-7.44 (m, IH), 7.20-7.18 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.14-7.12 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.21 (s, 2H), 4.15-4.11 (m, 2H), 3.15-2.97 (m, 10H), 2.35 (s, 3H)。

[0170] 实施例 39

[0171] 化合物 （1-39

) l-(4-氟 -3-(4- (环庚基羰基)哌嗪 -1-羰基)苄基) -噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二 酮

[0172]

[0173] 化合物 1-39的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-环庚甲酰基哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4- (环 庚基羰基)哌嗪 - 1-羰基)苄基) -噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-39) ， 白色 固体。 MS( ml z): 513 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.58 (br, IH), 7.62-7.58 (m, 2H), 7.45-7.43 (m, IH), 7.21-7.19 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.13-7.11 (d, / = 8.0Hz, 1H)， 5.11 (s, 2H), 3.67-3.59 (m, 8H), 2.33-2.28 (m, IH), 1.59- 1.37 (m, 12H)。

[0174] 实施例 40

[0175] 化合物 （1-40 ) l-(4-氟 -3-(4-丙酰基哌嗪 -1-羰基)苄基) -噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 化合物 1-40的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-丙酰基哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4-丙酰基 哌嗪 - 1-羰基)苄基) -噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （ 1-40

) ， 白色固体。 MS( ml z): 445 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.59 (br, IH), 7.63-7.58 (m, 2H), 7.46-7.44 (m, IH), 7.19-7.17 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.12-7.10 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.13 (s, 2H), 3.66-3.59 (m, 8H), 1.98- 1.95 (q, / = 4.0Hz, 2H), 1.25- 1.23 (t, / = 4.0Hz, 3H)。

[0177] 实施例 41

[0178] 化合物 （1-41

) l-(4氟 -3-(4- (4-氟苯甲酰基） 哌嗪 -1-羰基)苄基） -噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3 H)-二酮

[0179] 化合物 1-41的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） -呋 喃并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-(4-氟苯甲酰基)哌嗪。 得终产物 1-(4氟 -3-(4- (4-氟苯甲酰基） 哌嗪 - 1-羰基)苄基） -噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-41

) ， 白色固体。 MS( m/ ： 511 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.58 (br, IH), 8.36-8.32 (m, 2H), 8.15-8.12 (m, 2H), 8.02-7.97 (m, 3H), 7.18-7.16 (d, / = 8.0Hz, IH), 7.12-7.10 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.13 (s, 2H), 3.65-3.40 (m, 8H)。

[0180] 实施例 42

[0181] 化合物 （1-42) l-(4氟 -3-(4- (3-三氟甲基苯甲酰基） 哌嗪 - 1-羰基)苄基） -噻吩 并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮

[0182] 化合物 1-42的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） -呋 喃并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-(3-三氟甲基苯甲酰基)哌嗪。 得终产物 1-(4 氟 -3-(4- (3-三氟甲基苯甲酰基） 哌嗪 - 1-羰基)苄基） -噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3 H)-二酮 ( 1-42) ， 白色固体。 MS( ml z): 561 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.57 (br, IH), 8.38-8.35 (m, 2H), 8.17-8.15 (m, 2H), 8.03-7.97 (m, 3H), 7.21-7.19 (d, J = 8.0Hz, IH), 7.13-7.11 (d, / = 8.0Hz, IH), 5.12 (s, 2H), 3.63-3.41 (m, 8H)。

[0183] 实施例 43 [0184] 化合物 ( 1-43

) l-(4-氟 -3-(4-异丁酰基哌嗪 -1-羰基)苄基) -噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 [0185] 化合物 1-43的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） 噻 吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-异丁酰基哌嗪。 得终产物 1-(4-氟 -3-(4-异丁 酰基哌嗪 - 1-羰基)苄基)-噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （1-43) ， 白色固体 。 MS( ml z): 459 [M+H] +。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.58 (br, 1H), 7.62-7.58 (m, 2H), 7.45-7.44 (m, 1H), 7.17-7.15 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.12-7.10 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.15 (s, 2H), 3.67-3.59 (m, 8H), 2.37-2.33 (m, 1H), 1.33- 1.28 (m, 6H)。

[0186] 实施例 44

[0187] 化合物 （1-44

) l-(4氟 -3-(4- (3-氰基苯甲酰基） 哌嗪 -1-羰基)苄基） -噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1Η ,3H)-二酮

[0188] 化合物 1-44的合成按实施例 2方法进行， 起始原料为 1-(4-氟 -3-羧基苄基） -呋 喃并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮和 1-(3-氰基苯甲酰基)哌嗪。 得终产物 1-(4氟 -3-( 4- (3-氰基苯甲酰基） 哌嗪 -1-羰基)苄基） -噻吩并 [2,3-D]嘧啶 -2,4(1H,3H)-二酮 （ 1-44) ， 白色固体。 MS( ml z): 518 [M+H] ÷。 Ή NMR (DMSO-d ₆ ): d: 11.58 (br, 1H), 8.37-8.34 (m, 2H), 8.17-8.14 (m, 2H), 8.02-7.98 (m, 3H), 7.20-7.18 (d, / = 8.0Hz, 1H), 7.13-7.11 (d, / = 8.0Hz, 1H), 5.13 (s, 2H), 3.62-3.41 (m, 8H)。

[0189] 实施例 45

[0190] 生物测试

[0191] 活性测试： 利用 HT通用化学发光 PARP分析试剂盒 （Trevigen, Gaithersburg, MD, USA) 确定 PARP-1活性。 分析将测量 DNA活化后由 PARP- 1催化的生物素聚

(ADP-核糖） 惨入到组蛋白。 实验程序根据分析试剂盒提供的说明书进行。 即 在组蛋白包被的带孔中， 在测试品存在或不存在的情况下， 将 PARP- 1 (0.5单位 / 孔） 与反应缓冲液中的活化 DNA和 NAD+在 25°C下温育 45分钟。 温育后， 用含有 0.1%Triton X-100的 PBS洗涤带孔， 然后在 25°C下用 Strep-HRP温育带孔 60分钟。 在添加 PeroxyGlowTM至带孔后， 立即用 Victor X52030 Multilabel Reader (Perkin Elmer) 测量化学发光。 利用中效法 （median-effect method) (Chou,T.C.(2006) .Pharmacol.Rev.58 (3) :621-681) 计算 IC ₅ 。值。 实 施例化合物的 IC ₅ 。值显示在表 2中。

[0192] 活性测试： PARP-2活性测试按 PARP-1测试方法进行。

[0193] 细胞增殖分析： MDA-MB-436细胞购自 American Type Culture Collection(USA)

。 将细胞保持在 37°C， 5% CO ₂ 的湿润气氛中。 对于增殖测试， 将 MDA-MB-436 细胞以低密度接种于 96孔板中的补充有 10% FBS的 RPMI-1640培养基中， 并在 37 °C下、 5%。0 ₂ 的湿润气氛中温育241。 在测试品存在或不存在的情况下、 在新 鲜培养基中将细胞在 37°C下进一下温育 7天。 禾 lj用 Ceimt _er 96 ®水相非放射性细胞 增殖试剂盒 （Promega) ， 通过 3- (4， 5-二甲基噻唑 -2-基） -5- (-3羟基甲氧基苯 基） -2- (4-磺苯基） -2H-四唑 （MTS) 分析， 测量细胞增殖。 通过 Victor X52030 Multilabel Reader (Perkin Elmer) 确定 490nm下的吸光度 （A490) 。 利用中效法 (Chou,T.C.(2006) .Pharmacol.Rev.58 (3) :621-681) 计算 EC ₅ 。值。 实施例化合 物的 EC ₅ 。值显示在表 2中。

[0194] 表 2.测试结果：

[]

2]

[0195]

[0196] 注： A > 500nM， 500nM> B > ΙΟΟηΜ， 100nM> C > 20nM， D≤20nM。