以下、本発明を実施例により具体的に説� ��するが、本発明の範囲はこれら実施例に限� ��されるものではない。

〔参考例1〕カルシウム受容体遺伝子(cRNA)の� �製
 カルシウム受容体の遺伝子の調製は以下の� ��うに行った。NCBIに登録されたDNA配列(カル� �ウム受容体:NM_000388)を元に、PCRに使う合成オ リゴDNA(フォワードプライマー(配列番号1)、� �びリバースプライマー(配列番号2))を合成し� ��。

 ヒト腎臓由来のcDNA(Clontech社製)を材料と� �て、前記プライマー、及びPfu ultra DNA Polyme rase(Stratagene社製)を用い、以下の条件でPCRを� �施した。94℃で3分の後、94℃で30秒、55℃で30 秒、72℃で2分を35回繰り返した後、72℃で7分� ��応させた。PCRによって増幅がなされたか否� ��をアガロ-ス電気泳動を行い、DNA染色試薬で 染色した後、紫外線照射によって検出した。 同時に電気泳動したサイズ既知のDNAマ-カ-と� ��較することで、PCR産物の鎖長を確認した。� ��ラスミドベクタ-pBR322を制限酵素EcoRV(Takara社 製)によって切断した。その切断部位にPCRに� �って増幅された遺伝子断片をLigation Kit(Promeg a社製)を用いて連結した。この反応溶液でエ� ��ェリヒア・コリDH5α株を形質転換し、PCR増� �産物がクロ-ニングされたプラスミドを保持� ��る形質転換体を選抜した。PCR増幅産物をDNA� ��基配列解析によって確認した。この組換え� ��ラスミドを鋳型とし、cRNA作製キット(Ambion� �)を用いてカルシウム受容体遺伝子のcRNAを作 製した。

〔参考例2〕各種試料の調製
 L型アミノ酸試料として、各々特級グレード のアラニン、アルギニン、アスパラギン、ア スパラギン酸、システイン、グルタミン、グ ルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロ イシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フ ェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオ ニン、トリプトファン、チロシン、バリン、 オルニチン、タウリン(上記、味の素株式会� �)、ヒドロキシプロリン(ナカライテスク株式 会社)の23種類を用いた。D-CysおよびD-Trp(ナカ� ��イテスク株式会社)及び塩化カルシウムは特 級グレードのものを用いた。

 また、ペプチド試料として、γ-Glu-Cys-Gly(� ��グマアルドリッチジャパン株式会社)、γ-Glu -Cys(SNO)-Gly(株式会社同仁化学研究所)、γ-Glu-Al a(Bachem Feinchemikalien AG)、γ-Glu-Gly(Bachem Feinchem ikalien AG)、γ-Glu-Cys(シグマアルドリッチジャ� ��ン株式会社)、γ-Glu-Met(Bachem Feinchemikalien AG) 、γ-Glu-Abu-Gly(Abu:α-アミノ酪酸、Bachem Feinchemi kalien AG)、γ-Glu-Thr(国産化学株式会社)、γ-Glu- Val(国産化学株式会社)、γ-Glu-Leu(受託合成品)� ��γ-Glu-Ile(受託合成品)、γ-Glu-Orn(国産化学株� �会社)、Asp-Gly(受託合成品)、Cys-Gly(受託合成� �)、Cys-Met(受託合成品)、Glu-Cys(受託合成品)、G ly-Cys(受託合成品)、Leu-Asp(受託合成品)、γ-Glu- Val-Val(受託合成品)、γ-Glu-Val-Glu(受託合成品)� �γ-Glu-Val-Lys(受託合成品)、γ-Glu-γ-Glu-Val(受託� ��成品)、γ-Glu-Gly-Gly(受託合成品)、γ-Glu-Val-Phe (受託合成品)、γ-Glu-Val-Ser(受託合成品)、γ-Glu -Val-Pro(受託合成品)、γ-Glu-Val-Arg(受託合成品)� ��γ-Glu-Val-Asp(受託合成品)、γ-Glu-Val-Met(受託合 成品)、γ-Glu-Val-Thr(受託合成品)、γ-Glu-Val-His(� ��託合成品)、γ-Glu-Val-Asn(受託合成品)、γ-Glu-V al-Gln(受託合成品)、γ-Glu-Val-Cys(受託合成品)、 γ-Glu-Val-Orn(受託合成品)、γ-Glu-Ser-Gly(受託合� �品)を用いた。グルタミン、システインは用� ��調製し、他の試料は調製後、-20℃に保存し� ��。ペプチドは純度90%以上のものを用いた。� �-Glu-Cysのみ純度80%以上のものを用いた。

 各試料を溶解した後、pHが酸性、アルカリ� �のものについては、NaOH、HClを用いて中性前� ��に調整した。アミノ酸、ペプチドの溶解液� ��アフリカツメガエル卵母細胞の調製用の溶� ��、卵母細胞の培養用の溶液は、以下の組成� ��ものを使用した。96mM NaCl、2mM KCl、1mM MgCl ₂ 、1.8mM CaCl ₂  、5mM Hepes、pH7.2。

〔参考例3〕γ-Glu-Val-Glyの合成
 Boc-Val-OH(8.69 g, 40.0 mmol)とGly-OBzl・HCl(8.07 g,  40.0 mmol)を塩化メチレン(100 ml)に溶解し、� �液を0℃に保った。トリエチルアミン(6.13 ml,  44.0 mmol)、HOBt(1-Hydroxybenzotriazole, 6.74 g, 44.0  mmol)及びWSC・HCl(1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carb odiimide Hydrochloride, 8.44 g, 44.0 mmol)を溶液に� ��え、室温で一夜撹拌した。反応液を減圧濃� ��し、残渣を酢酸エチル(200 ml)に溶解した。� ��液を水(50 ml)、5%クエン酸水溶液(50 ml x 2� �)、飽和食塩水(50 ml)、5%炭酸水素ナトリウム 水溶液(50 ml x 2回)、飽和食塩水(50 ml)で洗� �した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾� �し、硫酸マグネシウムを濾過して除き、濾� �を減圧濃縮した。残渣を酢酸エチル-n-ヘキ� �ンから再結晶してBoc-Val-Gly-OBzl(13.2 g, 36.2 mm ol)を白色結晶として得た。

 Boc-Val-Gly-OBzl(5.47 g, 15.0 mmol)を4N-HCl/ジオキ� ��ン溶液(40 ml)に加え、室温で50分撹拌した。 ジオキサンを減圧濃縮で除き、残渣にn-ヘキ� ��ン(30 ml)を加え減圧濃縮した。この操作を3� ��繰り返し、H-Val-Gly-OBzl・HClを定量的に得た� �
 上記H-Val-Gly-OBzl・HCl及びZ-Glu-OBzl(5.57 g, 15.0� �mmol)を塩化メチレン(50 ml)に溶解し、溶液を0 ℃に保った。トリエチルアミン(2.30 ml, 16.5  mmol)、HOBt(1-Hydroxybenzotriazole, 2.53 g, 16.5 mmol)� ��びWSC・HCl(1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide  Hydrochloride, 3.16 g, 16.5 mmol)を溶液に加え、 室温で二夜撹拌した。反応液を減圧濃縮し、 残渣を加熱した酢酸エチル(1500 ml)に溶解し� �。溶液を水(200 ml)、5%クエン酸水溶液(200 ml� �x 2回)、飽和食塩水(150 ml)、5%炭酸水素ナト� ��ウム水溶液(200 ml x 2回)、飽和食塩水(150 m l)で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウ� ��で乾燥し、硫酸マグネシウムを濾過して除� ��、濾液を減圧濃縮した。析出した結晶を濾� ��、減圧乾燥してZ-Glu(Val-Gly-OBzl)-OBzl(6.51 g,10.5  mmol)を白色結晶として得た。

 上記Z-Glu(Val-Gly-OBzl)-OBzl(6.20 g, 10.03 mmol)� �エタノール(200 ml)に懸濁し、10%パラジウム� �素(1.50 g)を加え、水素雰囲気下に55℃で5時� �還元反応を行った。この間、全量で100 mlの� ��を徐々に加えた。触媒を桐山ロートで濾過� ��て除き、濾液を半分に減圧濃縮した。反応� ��を更にメンブランフィルターで濾過し、濾� ��を減圧濃縮した。残渣を少量の水に溶かし� ��後にエタノールを加えて結晶を析出させ、� ��晶を濾過して集め減圧乾燥してγ-Glu-Val-Gly� �白色粉末(2.85 g, 9.40 mmol)を得た。

ESI-MS:(M+H) ⁺ =304.1.
¹ H-NMR(400MHz, D ₂ O)δ(ppm):0.87 (3H, d, J=6.8 Hz), 0.88 (3H, d, J=6.8  Hz), 1.99-2.09 (3H, m), 2.38-2.51 (2H, m), 3.72 (1 H, t, J=6.35 Hz), 3.86 (1H, d, J=17.8 Hz), 3.80 (1 H, d, J=17.8 Hz), 4.07 (1H, d, J=6.8 Hz).

〔参考例4〕γ-Glu-Cys(S-Me)-Glyの合成[Cys(S-Me):S-� �チルシステイン]
 還元型グルタチオン(15.0 g, 48.8 mmol)を水(45  ml)に加え、窒素を吹き込みながら水酸化ナ� ��リウム(4.52 g, 2.2当量, 107 mmol)を少しずつ� ��えた。ヨウ化メチル(4.56 ml, 1.5当量, 73 mmo l)を加え、密栓して室温で2時間撹拌した。濃 塩酸で反応液のpHを2~3に調整し、エタノール( 150 ml)を加え冷蔵庫に一夜保存した。油状物� ��分離したので、上澄みを除いた。残った油� ��物を水に溶かしエタノールを徐々に加える� ��、一部結晶を伴う油状物が析出したので再� ��上澄みを除いた。残渣を水(300 ml)に溶解し� ��イオン交換樹脂(Dowex 1-acetate, 400 ml)を充填 したカラムに吸着させ、水洗した後に1N-酢酸 水溶液で溶出した。溶出液を減圧濃縮し、水 -エタノールから再沈殿させ、γ-Glu-Cys(S-Me)-Gly の白色粉末(5.08 g, 15.8 mmol)を得た。

FAB-MS:(M+H) ⁺ =322.
¹ H-NMR(400MHz, D ₂ O)δ(ppm):2.14 (3H, s), 2.15-2.22 (2H, m), 2.50-2.58  (2H, m), 2.86 (1H, dd, J=9.0 Hz, J=14.0 Hz), 3.03  (1H, dd, J=5.0 Hz, J=14.0 Hz), 3.84 (1H, t, J=6.5  Hz), 3.99 (2H, s), 4.59 (1H, dd, J=5.0 Hz, J=9.0 H z).

〔参考例5〕その他ペプチドの合成
 γ-Glu-Met(O)、γ-Glu-Val-NH ₂ 、γ-Glu-Val-ol、γ-Glu-Ser、γ-Glu-Tau、γ-Glu-Cys(S-Me )(O)、γ-Glu-t-Leu、γ-Glu-Cys(S-allyl)-Gly、γ-Glu-Cys(S -Me)は参考例3および参考例4に準じて合成した 。

〔参考例6〕カルシウム受容体の活性化作用� �評価
 カルシウム受容体の活性化作用の評価には� ��アフリカツメガエル卵母細胞発現系を用い� ��Ca濃度イオン依存性Clイオン電流測定法を用 いた。カルシウム受容体を発現させたアフリ カツメガエル卵母細胞に、各活性化剤を添加 すると、細胞内のCaイオンが増加する。次にC a濃度イオン依存性Clチャネルが開き、イオン 電流として細胞内電流値が変化する。この細 胞内電流値の変化を測定することで、カルシ ウム受容体の活性化作用の有無を知り得るこ とができる。

 具体的には、アフリカツメガエル腹部を� ��開し、卵塊を取り出した後、1%コラゲナ-ゼ� ��液により20℃で2時間処理することで個々の� ��母細胞を得た。1個あたりの卵母細胞に、マ イクロガラスキャピラリ-を用いて50nlの1μg/μ l受容体cRNAもしくは50nlの滅菌水を導入し、18� ��で2~3日培養した。培養時には、参考例2で示 した溶液に2mMピルビン酸と10U/mlペニシリンと 10μg/mlストレプトマイシンを加えたものを使� ��した。培養後、cRNAを注入した卵母細胞もし くは滅菌水を注入した卵母細胞に対し、試験 溶液を添加した。電気生理学的測定は、増幅 器Geneclamp500(Axon社製)および記録用ソフトAxoSco pe9.0(Axon社製)を用いて行った。卵母細胞を2電 極膜電位固定法により-70mVに膜電位固定し、C a濃度イオン依存性Clイオンを介した細胞内電 流を測定した。細胞内電流の最大値を応答電 流値とした。

〔参考例7〕カルシウム受容体に対するカル� �ウムの活性化作用の評価
 参考例6に記載した方法を用い、カルシウム 受容体に対するカルシウムの活性化作用を評 価した。すなわち、カルシウム受容体のcRNA� �しくは滅菌水を注入した卵母細胞を調製し� �2電極膜電位固定法により-70mVに膜電位固定� �た。膜電位固定された卵母細胞に、カルシ� �ム(2mM、5mM、10mM、20mM)を添加し、Ca濃度イオ� �依存性Cl応答電流を測定した。結果は図1に� �した。この結果より、卵母細胞に注入した� �ルシウム受容体のcRNAが機能的に発現してい� ��ことが確認された。また、水を注入した卵� ��細胞は、高い濃度のカルシウムにも反応し� ��いないことから、卵母細胞自身にはカルシ� ��ム受容体が発現していないことが確認され� ��。

〔参考例8〕カルシウム受容体に対するL型ア� ��ノ酸の活性化作用の評価
 参考例6に記載した方法を用い、カルシウム 受容体に対するL型アミノ酸の活性化作用を� �価した。すなわち、カルシウム受容体のcRNA� ��しくは滅菌水を注入した卵母細胞を調製し� ��2電極膜電位固定法により-70mVに膜電位固定� ��た。膜電位固定された卵母細胞に、アラニ� ��(10mM)、アルギニン(10mM)、アスパラギン(10mM)� ��アスパラギン酸(10mM)、システイン(10mM)、グ� ��タミン(10mM)、グルタミン酸(10mM)、グリシン( 10mM)、ヒスチジン(10mM)、イソロイシン(10mM)、� ��イシン(10mM)、リジン(10mM)、メチオニン(10mM)� ��フェニルアラニン(10mM)、プロリン(10mM)、セ� ��ン(10mM)、トレオニン(10mM)、トリプトファン( 10mM)、チロシン(10mM)、バリン(10mM)、オルニチ� ��(10mM)、タウリン(10mM)、又はヒドロキシプロ� ��ン(10mM)を添加し、Ca濃度イオン依存性Cl応答 電流を測定した。結果は図2に示した。この� �果より、システイン、ヒスチジン、フェニ� �アラニン、トリプトファン、チロシンがカ� �シウム受容体に対する明瞭な活性化作用を� �することが示された。なお、上記アミノ酸� �ついてはProc Natl Acad Sci U S A. 2000 Apr 25; 97(9):4814-9で活性化作用が報告されている。

〔参考例9〕カルシウム受容体に対するD-シス テインの活性化作用の評価
 参考例6に記載した方法を用い、カルシウム 受容体に対するD-システインの活性化作用を� ��価した。すなわち、カルシウム受容体のcRNA もしくは滅菌水を注入した卵母細胞を調製し 、2電極膜電位固定法により-70mVに膜電位固定 した。膜電位固定された卵母細胞に、D-シス� ��イン(10mM)、L-システイン(10mM)、D-トリプトフ ァン(10mM)又はL-トリプトファン(10mM)を添加し� ��Ca濃度イオン依存性Cl応答電流を測定した。 結果は図3に示した。この結果より、D-システ インがカルシウム受容体に対する明瞭な活性 化作用を有することが示された。

〔参考例10〕カルシウム受容体に対するペプ� ��ドの活性化作用の評価
 参考例6に記載した方法を用い、カルシウム 受容体に対するペプチドの活性化作用を評価 した。すなわち、カルシウム受容体のcRNAも� �くは滅菌水を注入した卵母細胞を調製し、2� ��極膜電位固定法により-70mVに膜電位固定し� �。膜電位固定された卵母細胞に、γ-Glu-Cys-Gly (50μM)、γ-Glu-Cys(SNO)-Gly(50μM)、γ-Glu-Ala(50μM)、� �-Glu-Gly(500μM)、γ-Glu-Cys(50μM)、γ-Glu-Met(500μM)� �γ-Glu-Thr(50μM)、γ-Glu-Val(50μM)、γ-Glu-Orn(500μM)� ��Asp-Gly(1mM)、Cys-Gly(1mM)、Cys-Met(1mM)、Glu-Cys(50μM )、Gly-Cys(500μM)、Leu-Asp(1mM)を添加し、Ca濃度イ オン依存性Cl応答電流を測定した。結果は図4 に示した。この結果より、上記ペプチドは、 カルシウム受容体に対する活性化作用を有す ることが示された。

〔参考例11〕カルシウム受容体に対するペプ� ��ドの活性化作用の評価
 参考例10と同様に、カルシウム受容体に対� �るペプチドの活性化作用を評価した。膜に� �位固定された卵母細胞に、表1の各ペプチド� ��ついて、1000μM、300μM、100μM、30μM、10μM、3� �M、1μM、0.3μM、0.1μMを添加し、Ca濃度イオン� ��存性Cl応答電流を測定した。電流が検出さ� �た最低濃度を表1に活性として示した。この� ��果より、これら32種類のペプチドは、カル� �ウム受容体に対する活性化作用を有するこ� �が明らかとなった。

〔参考例12〕本発明に用いられるペプチド及� ��アミノ酸のコク味付与活性
 カルシウム受容体活性化作用が見出された� ��γ-Glu-X-Gly (X はCys(SNO)、Cys(S-allyl)、Gly、Cys(S -Me)、AbuまたはSerである)、γ-Glu-Val-Y (YはGly、 Val、Glu、Lys、Phe、Ser、Pro、Arg、Asp、Met、Thr、 His、Orn、Asn、CysまたはGlnである)、γ-Glu-Ala、� �-Glu-Gly、γ-Glu- Cys、γ-Glu-Met、γ-Glu-Thr、γ-Glu- Val、γ-Glu-Orn、Asp-Gly、Cys-Gly、Cys-Met、Glu-Cys、G ly-Cys、Leu-Asp、D-Cys、γ-Glu-Met(O)、γ-Glu-γ-Glu-Val 、γ-Glu-Val-NH ₂ 、γ-Glu-Val-ol、γ-Glu-Ser、γ-Glu-Tau、γ-Glu-Cys(S-Me )(O)、γ-Glu-Leu、γ-Glu-Ile、γ-Glu-t-Leuおよびγ-Glu -Cys(S-Me)、の中から代表例を選んで、官能評� �試験によりコク味付与活性の有無を調べた� �

 官能評価試験は以下のように実施した。� ��ルタミン酸ナトリウム(0.05g/dl)、イノシン酸 一リン酸(0.05g/dl)、塩化カルシウム(1mM)を含有 する蒸留水に、試料としてアリイン(alliin: S- allyl-cysteine sulfoxide、コク味付与活性のコン� �ロール)、γ-Glu-Cys-Gly、γ-Glu-Cys、γ-Glu-Ala、又 はγ-Glu-Valをそれぞれ0.2g/dlで混合した場合の� ��コク味付与活性の有無を判定した。なお試� ��溶解後に酸性を呈したサンプルについては� ��NaOHでpH6.8~7.2に合わせてから使用した。結果 を表2に示した。

〔参考例13〕本発明に用いられるペプチドの� ��ク味付与活性
 カルシウム受容体活性化作用が見出された� ��プチドについて定量的な官能評価試験によ� ��コク味付与活性の強度を調べた。
 定量的官能評価試験は以下のように実施し� ��。グルタミン酸ナトリウム(0.05g/dl)、イノシ ン酸一リン酸(0.05g/dl)、塩化ナトリウム(0.5g/dl )を含有する蒸留水に、試料としてγ-Glu-Cys-Gly (グルタチオン)、γ-Glu-Ala、γ-Glu-Met、又はγ-Gl u-Valをそれぞれ0.1g/dlにて混合した場合の、コ ク味付与活性の強度を測定した。なお試料溶 解後に酸性を呈したサンプルについては、NaO HでpH6.8~7.2に合わせて使用した。尚、グルタ� �オンは、食品にコク味を付与し得ることが� �られているため、比較対照として用いた。� �能評点について、コントロール:0点、グルタ チオン添加:3点として、n=3で実施し、結果を� ��3に示した。尚、「先中味」とは、先味と中 味を合わせたものである。

〔参考例14〕本発明に用いられるペプチドの� ��ク味付与活性
 カルシウム受容体活性化作用が見出された� ��プチドについて定量的な官能評価試験によ� ��コク味付与活性の強度を調べた。
 定量的官能評価試験は以下のように実施し� ��。グルタミン酸ナトリウム(0.05g/dl)、イノシ ン酸一リン酸(0.05g/dl)、塩化ナトリウム(0.5g/dl )を含有する蒸留水に、試料としてγ-Glu-Cys-Gly (グルタチオン)、γ-Glu-Cys、γ-Glu-Val、又はγ-Gl u-Val-Glyをそれぞれ0.1g/dl、必要に応じて0.01g/dl にて混合した場合の、コク味付与活性の強度 を測定した。なお試料溶解後に酸性を呈した サンプルについては、NaOHでpH6.8~7.2に合わせ� �使用した。官能評点について、コントロー� �:0点、グルタチオン添加:3点として、n=5で実� ��し、結果を表4に示した。

〔参考例15〕本発明に用いられるペプチドの� ��ク味付与活性
 カルシウム受容体活性化作用が見出された� ��プチドについて定量的な官能評価試験によ� ��コク味付与活性の強度を調べた。

 定量的官能評価試験は以下のように実施� ��た。グルタミン酸ナトリウム(0.05g/dl)、イノ シン酸一リン酸(0.05g/dl)、塩化ナトリウム(0.5g /dl)を含有する蒸留水に、試料としてγ-Glu-Cys- Gly(グルタチオン)、γ-Glu-Abu-Gly、又はγ-Glu-Val- Glyをそれぞれ0.1g/dl、もしくは0.01g/dlにて混合 した場合の、コク味付与活性の強度を測定し た。なお試料溶解後に酸性を呈したサンプル については、NaOHでpH6.8~7.2に合わせて使用し� �。官能評点について、コントロール:0点、グ ルタチオン添加:3点として、n=12で実施し、結 果を表5に示した。

〔実施例1〕本発明に用いられる化合物の甘� �に対する活性(I)
 カルシウム受容体活性化作用、及びコク味� ��与活性が見出されたペプチドについて、定� ��的な官能評価試験により、代表的な高甘味� ��甘味料に対する活性(ボディー感改善、苦味 改善)を調べた。

 定量的官能評価試験は以下のように実施し� ��。各甘味料の標準液として、以下のものを� ��いた。以下の各標準液は、甘味度がほぼ同� ��程度となる濃度として調整されている。
i)ショ糖(5g/dl)
ii)APM(0.025g/dl)
iii)スクラロース(0.008g/dl)
iv)Ace-K(0.025g/dl)
 尚、各高甘味度甘味料に対するペプチド類� ��添加効果は、ショ糖を参照して評価した。

 各甘味料を含有する蒸留水に、試料として� �-Glu-Cys-Gly(グルタチオン)、γ-Glu-Val-Gly又はγ-G lu-Abu-Gly、をそれぞれ0.0001~1g/dlとなるように� �合した場合の、それぞれ甘味に対するボデ� �ー感改善と苦味改善の程度を測定した。
 なお試料溶解後に試料無添加標準液に対し� ��性を呈したサンプルについては、NaOHで標準 液のpHに対しpH±0.2の幅に合わせて使用した。

 ボディー感改善についての官能評価は、コ� ��トロール(蒸留水のみ添加し、グルタチオン 及び/又は本発明のペプチドを添加していな� �もの)を0点として、コントロールを基準に、 弱い:-2点、やや弱い:-1点、やや強い:1点、強� ��:2点として、n=12で実施した。0点より高けれ ば、ボディー感改善効果があることを意味す る。
 一方、苦味の改善についての官能評価は、� ��ントロール(蒸留水のみ添加し、グルタチオ ン及び/又は本発明のペプチドを添加してい� �いもの)を0点として、コントロールを基準に 、弱い:-2点、やや弱い:-1点、やや強い:1点、� ��い:2点として、n=12で実施した。0点より低け れば、苦味改善効果があることを意味する。
 評価の結果、上記添加濃度で幅広く活性を� ��したが、代表的な濃度での結果を表6~8に示� ��た。表6、7、8に示した結果から分かるよう� ��、本発明のペプチド類はグルタチオンより� ��濃度で、ボディー感向上効果が認められた� ��また、本発明のペプチドには苦味改善効果� ��認められた。総じてペプチド類の添加によ� ��ボディー感向上、苦味の低減によりショ糖� ��近い甘味質を感じる。

〔実施例2〕本発明に用いられる化合物の甘� �に対する活性(II)
 カルシウム受容体活性化作用、及びコク味� ��与活性が見出されたペプチドについて、定� ��的な官能評価試験により高甘味度甘味料の� ��表的な組み合わせ配合品に対する効果(ボデ ィー感改善、苦味改善)を調べた。

 定量的官能評価試験は以下のように実施し� ��。各甘味料の組合せ標準液として、以下の� ��のを用いた。以下の各標準液は、甘味度が� ��ぼ同じ程度となる濃度として調整されてい� ��。
i)ショ糖(5g/dl)
ii)APM(0.02g/dl)+Ace-K(0.005g/dl)[甘味度比としてAPM  : Ace-K=8:2]
iii)スクラロース(0.0058g/dl)+Ace-K(0.0075g/dl)[甘味� ��比としてスクラロース : Ace-K=7:3]
iv)APM(0.0125g/dl)+スクラロース(0.0042g/dl)[甘味度� ��としてAPM : スクラロース=1:1]
v)APM(0.0125g/dl)+スクラロース(0.0021g/dl)+Ace-K(0.006 3g/dl)[甘味度比としてAPM :スクラロース: Ace-K =2:1:1]
 尚、各高甘味度甘味料に対するペプチド類� ��添加効果は、ショ糖を参照して評価した。

 上記の各甘味料を含有する蒸留水に、試料� ��してγ-Glu-Cys-Gly(グルタチオン)、γ-Glu-Val-Gly� ��はγ-Glu-Abu-Glyをそれぞれ0.0001~1g/dlにて混合� �た場合の、それぞれ甘味に対するボディー� �改善及び苦味改善の程度を測定した。各高� �味度甘味料に対するペプチド類の添加効果� �、ショ糖を参照して評価した。
 なお試料溶解後に、試料無添加標準液に比� ��て酸性を呈したサンプルについては、NaOHで 標準液のpHに対しpH±0.2の幅に合わせて使用し た。

 ボディー感改善についての官能評価は、コ� ��トロール(蒸留水のみ添加し、グルタチオン 及び/又は本発明のペプチドを添加していな� �もの)を0点として、コントロールを基準に、 弱い:-2点、やや弱い:-1点、やや強い:1点、強� ��:2点として、n=12で実施した。0点より高けれ ば、ボディー感改善効果があることを意味す る。
 一方、苦味の改善についての官能評価は、� ��ントロール(蒸留水のみ添加し、グルタチオ ン及び/又は本発明のペプチドを添加してい� �いもの)を0点として、コントロールを基準に 、弱い:-2点、やや弱い:-1点、やや強い:1点、� ��い:2点として、n=12で実施した。0点より低け れば、苦味改善効果があることを意味する。
 評価の結果、上記添加濃度で幅広く活性を� ��したが、代表的な濃度での結果を表9~12に示 した。表9~12に示した結果から分かるように� �本発明のペプチド類はグルタチオンより低� �度で、ボディー感向上効果が認められた。� �た、本発明のペプチドには苦味改善効果も� �められた。総じてペプチド類の添加による� �ディー感向上、苦味の低減によりショ糖に� �い甘味質を感じる。

〔実施例3〕本発明に用いられる化合物の甘� �に対する活性(III)
 カルシウム受容体活性化作用、及びコク味� ��与活性が見出されたペプチド、及びカルシ� ��ム受容体活性化作用を有することが知られ� ��いるシナカルセット(Cinacalcet)について、定� ��的な官能評価試験により、代表的な高甘味� ��甘味料に対する活性(ボディー感改善、苦味 改善)を調べた。

 定量的官能評価試験は以下のように実施し� ��。各甘味料の標準液として、以下のものを� ��いた。以下の各標準液は、甘味度がほぼ同� ��程度となる濃度として調整されている。
i)ショ糖(5g/dl)
ii)APM(0.025g/dl)
iii)スクラロース(0.008g/dl)
iv)Ace-K(0.025g/dl)
 尚、各高甘味度甘味料に対する試料の添加� ��果は、ショ糖を参照して評価した。

 各甘味料を含有する蒸留水に、試料として� �-Glu-Val-Gly又はシナカルセットをそれぞれ0.000 1~1g/dlとなるように混合した場合の、それぞ� �甘味に対するボディー感改善と苦味改善の� �度を測定した。
 なお試料溶解後に試料無添加標準液に対し� ��性を呈したサンプルについては、NaOHで標準 液のpHに対しpH±0.2の幅に合わせて使用した。

 ボディー感改善についての官能評価は、コ� ��トロール(蒸留水のみ添加し、試料を添加し ていないもの)を0点として、コントロールを� ��準に、弱い:-2点、やや弱い:-1点、やや強い: 1点、強い:2点として、n=12で実施した。0点よ� ��高ければ、ボディー感改善効果があること� ��意味する。
 一方、苦味の改善についての官能評価は、� ��ントロール(蒸留水のみ添加し、試料を添加 していないもの)を0点として、コントロール� ��基準に、弱い:-2点、やや弱い:-1点、やや強� ��:1点、強い:2点として、n=12で実施した。0点� ��り低ければ、苦味改善効果があることを意� ��する。
 評価の結果、上記添加濃度で幅広く活性を� ��したが、代表的な濃度での結果を表13~15に� �した。表13~15に示した結果から分かるように 、γ-Glu-Val-Gly及びシナカルセットは、同程度� ��濃度で、ボディー感向上効果が認められた� ��また、本発明の試料には苦味改善効果が認� ��られた。総じて試料の添加によるボディー� ��向上、苦味の低減によりショ糖に近い甘味� ��を感じる。

〔実施例4〕本発明に用いられる化合物の甘� �に対する活性(IV)
 カルシウム受容体活性化作用、及びコク味� ��与活性が見出されたペプチド、及びカルシ� ��ム受容体活性化作用を有することが知られ� ��いるシナカルセット(Cinacalcet)について、定� ��的な官能評価試験により高甘味度甘味料の� ��表的な組み合わせ配合品に対する効果(ボデ ィー感改善、苦味改善)を調べた。

 定量的官能評価試験は以下のように実施し� ��。各甘味料の組合せ標準液として、以下の� ��のを用いた。以下の各標準液は、甘味度が� ��ぼ同じ程度となる濃度として調整されてい� ��。
i)ショ糖(5g/dl)
ii)APM(0.02g/dl)+Ace-K(0.005g/dl)[甘味度比としてAPM  : Ace-K=8:2]
iii)スクラロース(0.0058g/dl)+Ace-K(0.0075g/dl)[甘味� ��比としてスクラロース : Ace-K=7:3]
iv)APM(0.0125g/dl)+スクラロース(0.0042g/dl)[甘味度� ��としてAPM : スクラロース=1:1]
v)APM(0.0125g/dl)+スクラロース(0.0021g/dl)+Ace-K(0.006 3g/dl)[甘味度比としてAPM :スクラロース: Ace-K =2:1:1]
 尚、各高甘味度甘味料に対するペプチド類� ��添加効果は、ショ糖を参照して評価した。

 上記の各甘味料を含有する蒸留水に、試料� ��してγ-Glu-Val-Gly又はシナカルセットをそれ� �れ0.0001~1g/dlにて混合した場合の、それぞれ� �味に対するボディー感改善及び苦味改善の� �度を測定した。各高甘味度甘味料に対する� �料の添加効果は、ショ糖を参照して評価し� �。
 なお試料溶解後に、試料無添加標準液に比� ��て酸性を呈したサンプルについては、NaOHで 標準液のpHに対しpH±0.2の幅に合わせて使用し た。

 ボディー感改善についての官能評価は、コ� ��トロール(蒸留水のみ添加し、試料を添加し ていないもの)を0点として、コントロールを� ��準に、弱い:-2点、やや弱い:-1点、やや強い: 1点、強い:2点として、n=12で実施した。0点よ� ��高ければ、ボディー感改善効果があること� ��意味する。
 一方、苦味の改善についての官能評価は、� ��ントロール(蒸留水のみ添加し、試料を添加 していないもの)を0点として、コントロール� ��基準に、弱い:-2点、やや弱い:-1点、やや強� ��:1点、強い:2点として、n=12で実施した。0点� ��り低ければ、苦味改善効果があることを意� ��する。
 評価の結果、上記添加濃度で幅広く活性を� ��したが、代表的な濃度での結果を表16~19に� �した。表16~19に示した結果から分かるように 、γ-Glu-Val-Gly及びシナカルセットは、同程度� ��濃度で、ボディー感向上効果が認められた� ��また、本発明の試料には苦味改善効果も認� ��られた。総じて試料の添加によるボディー� ��向上、苦味の低減によりショ糖に近い甘味� ��を感じる。

〔実施例5〕本発明に用いられる化合物の高� �味度甘味料使用ドリンクヨーグルトにおけ� �活性
 カルシウム受容体活性化作用、及びコク味� ��与活性が見出されたペプチド、及びカルシ� ��ム受容体活性化作用を有することが知られ� ��いるシナカルセット(Cinacalcet)について、定� ��的な官能評価試験により、代表的な高甘味� ��甘味料使用ドリンクヨーグルトにおける活� ��(ボディー感改善、苦味改善)を調べた。

 定量的官能評価試験は以下のように実施し� ��。各甘味料のドリンクヨーグルト標準液と� ��て、以下のものを用いた。以下の各標準液� ��、甘味度がほぼ同じ程度となる濃度として� ��整されている。
i)ショ糖(5g/dl)
ii)APM(0.025g/dl)
 尚、各高甘味度甘味料に対する試料の添加� ��果は、ショ糖を参照して評価した。

 各甘味料を含有するドリンクヨーグルトに� ��試料としてγ-Glu-Val-Gly又はシナカルセット� �それぞれ0.0001~1g/dlとなるように混合した場� �の、それぞれ甘味に対するボディー感改善� �苦味改善の程度を測定した。
 なお試料溶解後に試料無添加標準液に対し� ��性を呈したサンプルについては、NaOHで標準 液のpHに対しpH±0.2の幅に合わせて使用した。

 ボディー感改善についての官能評価は、コ� ��トロール(蒸留水のみ添加し、試料を添加し ていないもの)を0点として、コントロールを� ��準に、弱い:-2点、やや弱い:-1点、やや強い: 1点、強い:2点として、n=12で実施した。0点よ� ��高ければ、ボディー感改善効果があること� ��意味する。
 一方、苦味の改善についての官能評価は、� ��ントロール(蒸留水のみ添加し、試料を添加 していないもの)を0点として、コントロール� ��基準に、弱い:-2点、やや弱い:-1点、やや強� ��:1点、強い:2点として、n=12で実施した。0点� ��り低ければ、苦味改善効果があることを意� ��する。
 評価の結果、上記添加濃度で幅広く活性を� ��したが、代表的な濃度での結果を表20に示� �た。表20に示した結果から分かるように、γ- Glu-Val-Gly及びシナカルセットは、同程度の濃� ��で、ボディー感向上効果が認められた。ま� ��、本発明の試料には苦味改善効果が認めら� ��た。総じて試料の添加によるボディー感向� ��、苦味の低減によりショ糖に近い甘味質を� ��じる。