三环稠杂环类核苷氨基磷酸酯化合物、 其制备方法及应用

技术领域

本发明属于医药化学领域，具体涉及一类三环 稠杂环类核苷氨基磷酸酯化合 物、其制备方法、含有该核苷氨基磷酸酯化合 物的组合物， 以及所述化合物或组 合物作为病毒感染性疾病治疗药物的用途，特 别是作为病毒性肝炎治疗药物的用 途。 背景技术

丙型肝炎病毒 （HCV ) 是引起大多数非甲非乙型肝炎的主要病原体。 丙型 肝炎病毒感染是导致慢性肝病， 如肝硬化和肝癌的主要健康问题。 根据世界 卫生组织的数据， 全世界有超过 2亿的受感染人口， 一旦感染， 只有约 20% 的人可清除病毒， 其余的人将携带 HCV。

HCV是一种属于黄病毒科的病毒， 是黄病毒家族中的有包膜正链 RNA病毒。 单链 HCV RNA基因组的长度约 9500核苷酸， 含单个开放读框 （0RF)， 编码一个 约 3000个氨基酸的大聚合蛋白。

HCV与黄病毒科中的另外两个属即瘟病毒属和黄 病毒属的基因结构相似。 目 前， 治疗 HCV感染的标准方法有干扰素以及干扰素和利巴 韦林联合疗法。 不过， 仅 50%的治疗者对该方法都有反应， 且干扰素具有明显的副作用， 例如流行性感 冒样症状、体重减低以及疲乏无力， 而干扰素和利巴韦林联合疗法则产生相当大 的副作用， 包括溶血、 贫血症和疲乏。

长期以来， 由于缺乏合适的体外病毒复制的细胞模型， 开发新型的抗 HCV 药物进展缓慢。 直到 1999年， Lohmann建立了在肝癌细胞中可以高水平自主复 制的亚基因组复制模型 （复制子）， 该模型为选择性双顺反子亚基因组 HCV RNA 复制子系统， 其被公认为是 HCV RNA体外复制模型研究获得突破进展的里程碑。 复制子在人肝癌细胞株 Huh7细胞株中能高水平的自主复制。 研究发现复制子在 细胞中复制对宿主细胞生长和代谢无明显影响 ，高水平复制与病毒基因组的适应 性突变和宿主细胞的容受性有关。这些研究结 果为选择性 HCV全序列基因组复制 子的研究奠定了基础。 发明内容

本发明的一个目的在于提供用于治疗和 /或预防 HCV感染的通式（I )所示的 三环稠杂环类核苷氨基磷酸酯化合物、其立体 异构体、前体药物、药学上可接受 的盐、 水合物、 溶剂合物，

P*表示手性磷原子，

其中， （1 ) 选自 H和垸基， 所述垸基任选被一个或多个垸基、垸氧基、垸 氨基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 磺酰基、 亚磺酰基、 巯基、 芳基或杂芳基取代；

( 2 ) R ₂ 选自 H、 垸基、 氨基酰基、 芳基和杂芳基， 所述垸基任选被一个或多个 垸基、 垸氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 单垸氨基、 双垸氨基、 芳基或杂芳基取代；

( 3 ) R ₃ 为不存在， 或选自垸基、 烯基、 炔基、 垸氧基、 卤素、 卤代垸基、 垸基 氨基、 垸基磺酰基、 垸基磺酰氨基、 氨磺酰基垸基、 ¾代垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单垸氨基、 双垸氨基、 酰氨基、 酯基、 _CN、 环垸基、 杂环垸基、 芳基、 杂芳基、 芳垸基；

( 4) D选自 _ (CR _al R _a 0-、 - (CR _al R S -、 _S0_、 - S0 ₂ -、 - CO-、 - N (R _b ) -、 - N (R _b ) - CO-、 -C O ^) -, 其中所述的 R _al 、 各自为氢、 垸基、 卤素、 卤代垸基、 烯基或卤代 烯基， 或者 R _al 、 与它们连接的 C一起构成环垸基， 所述的 m为 0或 1， 所述 的 R _b 为不存在、 氢、 垸基、 垸基磺酰基或垸基羰基， 所述的 Rd、 各自为氢、 卤素、 垸基、 卤代垸基、 烯基或卤代烯基， 或当 Rd、 R。 ₂ 均为垸基时， C可与 Rd、 R。 ₂ 构成环垸基；

( 5 ) D ¹ 选自氧、 硫、 - S0_、 - S0 ₂ -、 -CO-, -N (R _d ) -、 - (CH)„-， 其中所述的 R _d 为 不存在、 氢、 垸基或卤代垸基， 所述的 n为 0、 1或 2， 所述的 _ (CH)„ -任选被垸 氧基、 垸氨基、 ¾素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基 酰基、 磺酰基、 亚磺酰基、 巯基、 芳基或杂芳基取代；

( 6 ) G、 G ¹ 各自为 -N-或 -CH-;

( 7 ) " = "为单键或双键， 其中两个" = "均为单键， 或者一个" = "为单键， 而另一个为双键； 和

( 8 ) 环 T选自：

a、 芳环或杂芳环， 所述的芳环或杂芳环可以被 取代， 其中 为垸基、 烯 基、 炔基、 垸氧基、 卤素、 卤代垸基、 卤代垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单垸氨 基、 双垸氨基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 酰氨基、 _CN、 芳基或杂芳 基； 和

b、 环垸烃或杂环垸烃， 所述的环垸烃或杂环垸烃可以被 R ₄ 取代， 其中 ¾ 为垸基、 烯基、 炔基、 垸氧基、 卤素、 卤代垸基、 卤代垸氧基、 羟基、 硝基、 氨 基、 单垸氨基、 双垸氨基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 酰氨基、 _CN、 芳基或杂芳基。 本发明的另一个目的在于提供制备本发明的通 式 （I ) 的核苷氨 基磷酸酯化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂 合物或结晶的方法。

本发明的再一个目的在于提供包含本发明的通 式（I )的核苷氨基磷酸酯化 合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物或溶剂合物和药效 可接受的载体的组合物以及包含本发明的通式 （I ) 的核苷氨基磷酸酯化合物、 其立体异构体、前体药物、药学上可接受的盐 、水合物或溶剂合物和另一种抗病 毒药的组合物。

本发明的还一个目的在于提供本发明的通式（ I )的核苷氨基磷酸酯化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物治疗和 /或预 防丙型肝炎病毒感染的方法以及本发明的通式 （I ) 的核苷氨基磷酸酯化合物及 其立体异构体、 盐、 水合物、 溶剂合物或结晶在制备用于治疗和 /或预防丙型肝 炎病毒感染的药物中的应用。

本发明的进一步目的是提供抑制 RNA依赖性 RNA病毒聚合酶， 特别是抑制 HCV NS5B聚合酶的方法。

本发明的目的还在于提供在治疗 RNA依赖性 RNA病毒复制， 特别是治疗 HCV 复制中的应用。

本发明的另一个目的还在于提供用于治疗 RNA依赖性 RNA病毒感染，特别是 治疗 HCV感染中的应用。

针对上述发明目的， 本发明提供以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种三环稠杂环类核苷 氨基磷酸酯化合物、其立体异 构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物或结晶， 所述化合物如 通式 （I) 所示：

P*表示手性磷原子，

其中，

(1) 选自 H和垸基， 所述垸基任选被一个或多个垸基、 垸氧基、 垸氨基、 卤 素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 磺酰基、 亚 磺酰基、 巯基、 芳基或杂芳基取代；

(2) R ₂ 选自 H、 垸基、 氨基酰基、 芳基和杂芳基， 所述垸基任选被一个或多个 垸基、 垸氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 单垸氨基、 双垸氨基、 芳基或杂芳基取代；

(3) R ₃ 为不存在， 或选自垸基、 烯基、 炔基、 垸氧基、 卤素、 卤代垸基、 垸基 氨基、 垸基磺酰基、 垸基磺酰氨基、 氨磺酰基垸基、 ¾代垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单垸氨基、 双垸氨基、 酰氨基、 酯基、 _CN、 环垸基、 杂环垸基、 芳基、 杂芳基、 芳垸基；

(4) D选自 _(CR _al R _a 0-、 -(CH S -、 -S0-、 - S0 ₂ -、 - CO-、 - N(R _b )-、 - N(R _b )- CO-、 -CO ^)-, 其中所述的 R _al 、 各自为氢、 垸基、 卤素、 卤代垸基、 烯基或卤代 烯基， 或者 R _al 、 与它们连接的 C一起构成环垸基， 所述的 m为 0或 1， 所述 的 R _b 为不存在、 氢、 垸基、 垸基磺酰基或垸基羰基， 所述的 Rd、 各自为氢、 卤素、 垸基、 卤代垸基、 烯基或卤代烯基， 或当 Rd、 R。 ₂ 均为垸基时， C可与 Rd、 R。 ₂ 构成环垸基；

(5) D ¹ 选自氧、 硫、 - S0_、 - S0 ₂ -、 -CO-, -N(R _d ) -、 - (CH)„-， 其中所述的 R _d 为 不存在、 氢、 垸基或卤代垸基， 所述的 n为 0、 1或 2， 所述的 _(CH)„ -任选被垸 氧基、 垸氨基、 ¾素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基 酰基、 磺酰基、 亚磺酰基、 巯基、 芳基或杂芳基取代；

(6) G、 G ¹ 各自为 -N-或 -CH-;

(7) "―"为单键或双键， 其中两个 "^"均为单键， 或者一个 "^"为单 键， 而另一个为双键； 和

( 8 ) 环 T选自：

a、 芳环或杂芳环， 所述的芳环或杂芳环可以被 取代， 其中 为垸基、 烯 基、 炔基、 垸氧基、 卤素、 卤代垸基、 卤代垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单垸氨 基、 双垸氨基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 酰氨基、 _CN、 芳基或杂芳 基； 和

b、 环垸烃或杂环垸烃， 所述的环垸烃或杂环垸烃可以被 R ₄ 取代， 其中 ¾为 垸基、 烯基、 炔基、 垸氧基、 卤素、 卤代垸基、 卤代垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单垸氨基、 双垸氨基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 酰氨基、 _CN、 芳基 或杂芳基。

在第一方面的一些实施方案中， 本发明提供上述通式 （I ) 的核苷氨基磷酸 酯化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物或 结晶， 其中

D选自 _ (CR _al R _a 0-、 - (CR _al R _a2 )„S -、 -SO-、 - S0 ₂ -、 - CO-、 - N (R _b ) -、 - N (R _b ) - CO-、 -C O -, 其中所述的 IL、 各自为氢、 垸基、 卤素、 卤代 d- ₆ 垸基、 C ₂ - ₆ 烯基或卤代 C ₂ - ₆ 烯基， 或者 R _al 、 R _a2 与它们连接的 C一起构成 C ₃ — _s 环垸基， 所述的 m为 0或 1， 所述的 R _b 为不存在、 氢、 d— ₆ 垸基、 d— ₆ 垸基磺酰基或 d— ₆ 垸基羰基， 所述的 Rd、 各自为氢、 卤素、 d— ₆ 垸基、 卤代 d— ₆ 垸基、 C ₂ - ₆ 烯基或卤代 C ₂ - ₆ 烯 基， 或当 Rd、 R。 ₂ 均为垸基时， C可与 Rd、 ϋ ₂ 构成（ ₃ — ₈ 环垸基；

D ¹ 选自氧、 硫、 _S0-、 -S0 ₂ -、 -CO-, -N (R _d ) -、 _ (CH)„ -， 其中所述的 R _d 为不 存在、 氢、 d- ₆ 垸基、 卤代 d- ₆ 垸基， 所述的 n为 0、 1或 2， 所述的 _ (CH)„ -任选 被（^ ₆ 垸氧基、 d— ₆ 垸氨基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 d— ₆ 垸基酰基、 氨 基酰基、 （ - ₆ 垸氨基酰基、 磺酰基、 亚磺酰基、 巯基、 芳基或杂芳基取代； 和 环 T选自：

a、 。芳环或杂芳环， 所述的芳环或杂芳环可以被 R ₄ 取代， 其中 为 d 垸基、 C ₂ - ₆ 烯基、 C ₂ - ₆ 炔基、 d— ₆ 垸氧基、 卤素、 卤代 d— ₆ 垸基、 卤代 d— ₆ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单^ ₆ 垸氨基、 双^ ₆ 垸氨基、 d— ₆ 垸基酰基、 氨基酰基、 d— ₆ 垸氨基酰基、 酰氨基、 _CN、 芳基或杂芳基； 和

b、 。环垸烃或杂环垸烃， 所述的环垸烃或杂环垸烃可以被 R ₄ 取代， 其中 ¾为（— ₆ 焼基、 C ₂ - ₆ 烯基、 C ₂ - ₆ 炔基、 d- ₆ 垸氧基、 卤素、 卤代 d- ₆ 垸基、 卤代 d— ₆ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单^ ₆ 垸氨基、 双^ ₆ 垸氨基、 d— ₆ 垸基酰基、 氨基 酰基、 垸氨基酰基、 酰氨基、 -CN、 芳基或杂芳基。

在第一方面的另一些实施方案中， 本发明提供上述通式 （I ) 的核苷氨基磷 酸酯化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物 或结晶， 其中

¾选自 11和（^ ₆ 垸基， 所述垸基任选被一个或多个 d— ₆ 垸基、 d— ₆ 垸氧基、 d- ₆ 垸氨基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 （ - ₆ 垸基酰基、 氨基酰基、 d— ₆ 垸氨基 酰基、 磺酰基、 亚磺酰基、 巯基、 芳基或杂芳基取代；

选自 H、 d_ ₆ 垸基、 氨基酰基、 芳基和杂芳基， 所述垸基任选被一个或多个 d- ₆ 垸基、 d— ₆ 垸氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 单(^- ₆ 垸氨基、 双^ ₆ 垸氨基、 芳基或 杂芳基取代； 和

为不存在， 或选自 d— ₆ 垸基、 C ₂ - ₆ 烯基、 C ₂ - ₆ 炔基、 d— ₆ 垸氧基、 卤素、 卤代 d- ₆ 垸基、 d- ₆ 垸基氨基、 d- ₆ 垸基磺酰基、 d- ₆ 垸基磺酰氨基、 氨磺酰基 d- ₆ 垸基、 卤代 ( - ₆ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单(^ ₆ 垸氨基、 双(^- ₆ 垸氨基、 酰氨基、 酯 基、 _CN C ₃ — _s 环垸基、 C ₃ — _s 杂环垸基、 芳基、 杂芳基、 芳(^ ₆ 垸基。

在第一方面的另一些实施方案中， 本发明提供上述通式 （I) 的核苷氨基磷 酸酯化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物 或结晶， 其中

(1) 选自 11和^ ₆ 垸基， 所述垸基任选被一个或多个 d— ₆ 垸氧基、 d— ₆ 垸氨基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 （ - ₆ 垸基酰基、 氨基酰基、 d- ₆ 垸氨基酰基、 磺 酰基、 亚磺酰基、 巯基、 芳基或杂芳基取代；

(2) R ₂ 选自 H d— ₆ 垸基、 氨基酰基、 芳基和杂芳基， 所述垸基任选被一个或多 个 ( - ₆ 垸氧基、 卤素、 羟基、 氨基、 单 d— ₆ 垸氨基、 双 d— ₆ 垸氨基、 芳基或杂芳基 取代；

(3) R ₃ 为不存在， 或选自 d- ₆ 垸基、 d- ₆ 垸氧基、 卤素、 卤代 d- ₆ 垸基、 卤代 d— ₆ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单^ ₆ 垸氨基、 双^ ₆ 垸氨基、 酰氨基、 酯基、 _CN ( ₃ — ₈ 环垸基、 杂 C ₃ — _s 环垸基、 芳基、 杂芳基、 芳 d— ₆ 垸基；

(4) D选自 _(CR _al R _a 0- -(CH S - -S0- - S0 ₂ - - CO- - N(R _b )- - N(R _b )- CO- -CO -, 其中所述的 IL 各自为氢、 垸基、 卤素、 卤代 d- ₆ 垸基、 C ₂ - ₆ 烯基或卤代 C ₂ - ₆ 烯基， 或者 R _al R _a2 与它们连接的 C一起构成 C ₃ — _s 环垸基， 所述的 m为 0或 1， 所述的 R _b 为不存在、氢、垸基、垸基磺酰基或垸基 羰基， 所述的 Rd R。 ₂ 各自为氢、 卤素、 垸基、 烯基或卤代烯基， 或当 Rd R。 ₂ 均为垸基时， C可与 R _cl 构成环垸基；

(5) D ¹ 选自氧、 硫、 - S0_ - S0 ₂ - -CO-, -N(R _d ) - - (CH)„-， 所述的 R _d 为不存 在、 氢、 d— ₆ 垸基或卤代 d— ₆ 垸基， 所述的 n为 0 1或 2， 所述的 _(CH)„-任选被 d- ₆ 垸氧基、 d— ₆ 垸氨基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 d— ₆ 垸基酰基、 氨基 酰基、 （ _ ₆ 垸氨基酰基、 磺酰基、 亚磺酰基、 巯基、 芳基或杂芳基取代；

(6) G G ¹ 各自为 -N-或 -CH-;

(7) " = "为单键或双键， 其中两个" = "均为单键， 或者一个" = "为单键， 而另一个为双键， 和

a、当 G 均为 -CH -，且 G与 G ¹ 相连的 " "为双键时， D与 G相连的 " 为单键；

b、 当 G为 -CH - -N - G ¹ 为 -N-时， G与 G ¹ 相连的 " "为单键， D与 G相 连的 为单键； 只是当 G为 -CH - G ¹ 为 -N -， 且 D为 -N-时， G与 G ¹ 相连的 为单键， D与 G相连的 为双键；

c、当 G为 N G ¹ 为 -CH-时， G与 G ¹ 相连的 为单键， D与 G相连的 为单键；

(8) 环 T选自：

a、 五元及六元芳环或杂芳环， 所述的五元及六元芳环或杂芳环可以被 ¾取 代， 其中 为垸基、 烯基、 炔基、 垸氧基、 卤素、 卤代垸基、 卤代垸氧基、 羟 基、 硝基、 氨基、 单垸氨基、 双垸氨基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 酰 氨基、 _CN、 芳基或杂芳基； 和

b C ₃ — _s 环垸烃或杂环垸烃， 所述的环垸烃或杂环垸烃可以被 R ₄ 取代， 其中 ¾为 d— ₆ 垸基、 烯基、 炔基、 垸氧基、 卤素、 卤代垸基、 卤代垸氧基、 羟基、 硝 基、 氨基、 单垸氨基、 双垸氨基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 酰氨基、 _CN、 芳基或杂芳基。

在一些优选的实施方案中， 本发明提供通式 （I) 的三环稠杂环类核苷氨基 磷酸酯化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合 物或结晶， 其中

¾选自 H和 d- ₆ 垸基；

选自（— ₆ 焼基、 ^¾；

为不存在， 或选自 d- ₆ 垸基、 d- ₆ 垸氧基、 氟、 氯、 溴、 卤代 d- ₆ 垸基、 卤 代(^- ₆ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单(^ ₆ 垸氨基、 双(^- ₆ 垸氨基、 酰氨基、 酯基、

-CN、 C ₃ - ₆ 环垸基、 C ₃ - ₆ 杂环垸基、 芳基、 杂芳基、 芳垸基；

D选自 _(CR _al R _a 0-、 - (CR _al R _a2 )„S -、 -SO-、 - S0 ₂ -、 - CO-、 - N(R _b )-、 - N(R _b )- CO-、 -CO ^)-, 其中所述的 IL、 各自为氢或 d- ₆ 垸基； 所述的 m为 0或 1; 所述 的 R _b 为不存在、 氢、 d- ₆ 垸基、 d- ₆ 垸基磺酰基或 d- ₆ 垸基羰基； 所述的 Rd、 R。 ₂ 各自为氢、 卤素、 垸基、 C ₂ - ₆ 烯基或卤代 C ₂ - ₆ 烯基， 或当 Rd、 均选自 d- ₃ 焼 基时， C可与 Rd、 R。 ₂ 构成 C ₃ — ₇ 环垸基；

D ¹ 选自氧、硫、 _S0-、 -S0 ₂ -、 -CO-, -N(R _d ) -、 _(CH)„ -， 所述的 R _d 为不存在、 氢、 垸基； 所述的 n为 0、 1或 2;

G、 G ¹ 各自为 -N-或 -CH-; 以及

环 T选自：

(a)、至少含有一个杂原子的五元杂芳环或六元 杂芳环或苯环，所述的五 元或六元杂芳环或苯环可以被 R ₄ 取代， 其中 为 d- ₆ 垸基、 d- ₆ 垸氧基、 卤素、 卤代（ - ₆ 垸基、 卤代 d— ₆ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单（^ ₆ 垸氨基、 双 d— ₆ 垸氨 基、 酰氨基或 -CN; 和

(b)、 C ₃ — _s 环垸烃或杂环垸烃， 所述的环垸烃或杂环垸烃可以被 R ₄ 取代， 其中 为 ^ ₆ 垸基、 d— ₆ 垸氧基、 卤素、 卤代 d— ₆ 垸基、 卤代 d— ₆ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单^ ₆ 垸氨基、 双^ ₆ 垸氨基、 酰氨基或 _CN。

在另一些优选的实施方案中， 本发明提供通式 （I) 的三环稠杂环类核苷氨 基磷酸酯化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂 合物或结晶， 其中

¾选自 H和 d— ₄ 垸基;

选自甲基、 乙基、 异丙基、 正丙基、 环丙基、 环戊基、 苄基；

为不存在， 或选自 d— ₄ 垸基、 （；- ₄ 垸氧基、 氟、 氯、 溴和苯基；

D选自 _(CR _al R _a 0-、 - (CR _al R _a2 )„S -、 -SO-、 - S0 ₂ -、 - CO-、 - N(R _b )-、 - N(R _b )- CO-、 -CO ^)-, 其中所述的 R _al 、 R _a2 各自为氢、 甲基或乙基； 所述的 m为 0或 1; 所 述的 R _b 为不存在、 氢、 甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 环丙基、 甲基磺酰基或甲 基羰基； 所述的 Rd、 各自为氢、 氟、 甲基、 乙基、 C ₂ — ₄ 烯基或卤代 C ₂ — ₄ 烯基， 或当 Rd、 R。 ₂ 均为甲基时， C与 Rd、 ϋ ₂ 构成环丙基；

D ¹ 选自氧、 硫、 _S0-、 -S0 ₂ -、 -CO-, -N(R _d ) -、 _(CH)„ -， 其中所述的 R _d 为不 存在、 氢或 ( — ₄ 垸基； 所述的 η为 0或 1;

G、 G ¹ 各自为 N或- CH-; 以及

环 T选自：

(a)、至少含有一个 N、 0或 S杂原子的五元杂芳环或六元杂芳环或苯环， 所述的五元或六元杂芳环或苯环可以被 R ₄ 取代， 其中 为（^ ₆ 垸基、 d- ₆ 垸氧基、 卤素、 卤代 d- ₆ 垸基、 卤代 d- ₆ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单 d- ₆ 垸氨基、 双 d- ₆ 垸氨基、 甲酰氨基、 乙酰氨基或 -CN; 和

(b)、 环戊垸、 环己垸、 环庚垸或至少含有一个^ 0或 S杂原子的杂环 戊垸、 杂环己垸、 杂环庚垸。

在一些进一步优选的实施方案中， 本发明提供通式 （I) 的三环稠杂环类核 苷氨基磷酸酯化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物或结晶， 其中 选自 H和 d- ₆ 垸基； R ₂ 选自 d- ₆ 垸基、 苄基； R ₃ 为不存 在， 或选自 垸基、 d- ₆ 垸氧基、 氟、 氯、 溴、 卤代 d- ₆ 垸基、 卤代 d- ₆ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单 垸氨基、 双 d— ₆ 垸氨基、 -CN; D选自 _ (CR _al R _a2 )„0-、 - (CR _al R S -、 -S0-, - S0 ₂ -、 -CO-, - N (R _b ) -、 - N (R _b ) - CO-、 - (CRd) -， 其中所述 的 R _al 、 R _a2 各自为氢或 ₆ 垸基， 所述的 m为 0或 1， 所述的 R _b 为不存在、 氢、 d- ₆ 垸基、 d— ₆ 垸基磺酰基或 d— ₆ 垸基羰基， 所述的 Rd、 各自为氢、 卤素、 d— ₆ 垸基、 C ₂ - ₆ 烯基或卤代 C ₂ - ₆ 烯基， 或当 Rd、 ϋ ₂ 均选自 d- ₃ 垸基时， C与 Rd、 R。 ₂ 构成 C ₃ - ₇ 环 垸基； D ¹ 选自氧、 硫、 -S0-、 -S0 ₂ -、 -CO-, -NR _d -、 _ (CH)„ -， 其中所述的 R _d 为不 存在、 氢或 d- ₆ 垸基， 所述的 n为 0、 1或 2 ; G、 G ¹ 各自为 -N-或 -CH-; 以及环 T 选自： （a )至少含有一个杂原子的五元杂芳环或六元杂� �环、 苯环， 其中所述的 五元或六元杂芳环或苯环可以被 R ₄ 取代， 其中 为（^ ₆ 垸基、 d- ₆ 垸氧基、 卤素、 卤代（ - ₆ 垸基、 卤代 d— ₆ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单（^ ₆ 垸氨基、 双 d— ₆ 垸氨 基、 酰氨基或 -CN; 和 （b ) C ₃ — _s 环垸烃或杂环垸烃， 所述的环垸烃或杂环垸烃可 以被 取代， 其中 为 为 垸基、 d- ₆ 垸氧基、 卤素、 卤代 d- ₆ 垸基、 卤代 d- ₆ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单(^ ₆ 垸氨基、 双^ ₆ 垸氨基、 酰氨基或 _CN。

在一些进一步优选的实施方案中， 本发明提供通式 （I ) 的三环稠杂环类核 苷氨基磷酸酯化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物或结晶， 其中 选自 H和 d— ₄ 垸基； R ₂ 选自甲基、 乙基、 异丙基、 正丙 基、 环丙基、 环戊基、 苄基； R ₃ 为不存在， 或选自 d— ₄ 垸基、 d— ₄ 垸氧基、 氟、 氯、 溴； D选自 _ (CR _al R _a2 )„0-、 - (CR _al R _a2 )„S -、 -S0-, - S0 ₂ -、 - CO-、 - N (R _b ) -、 - N (R _b ) - CO-、 -C O ^) -, 其中所述的 R _al 、 R _a2 各自为氢、 甲基或乙基， 所述的 m为 0或 1， 所 述的 R _b 为不存在、 氢、 甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 环丙基、 甲基磺酰基或甲 基羰基， 所述的 Rd、 各自为氢、 氟、 甲基、 乙基、 C ₂ — ₄ 烯基或卤代 C ₂ — ₄ 烯基， 或当 Rd、 R。 ₂ 均为甲基时， C与 Rd、 R。 ₂ 构成环丙基； D ¹ 选自氧、 硫、 -S0-、 -S0 ₂ -、 -CO-, -N (R _d ) -、 _ (CH)„ -， 其中所述的 R _d 为不存在、 氢或 d— ₄ 垸基， 所述的 n为 0 或 1 ; G、 G ¹ 各自为 -N-或 -CH-; 以及环 T选自： （a)、 至少含有一个 N、 0或 S杂 原子的五元杂芳环或六元杂芳环、苯环，所述 的五元或六元杂芳环或苯环可以被 ¾取代， 其中 为 - ₆ 垸基、 d- ₆ 垸氧基、 卤素、 卤代 d- ₆ 垸基、 卤代 d- ₆ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单(^ ₆ 垸氨基、 双^ ₆ 垸氨基、 甲酰氨基、 乙酰氨基或 -CN; 和 （b)、 环戊垸、 环己垸、 环庚垸或至少含有一个^ 0或 S杂原子的杂环戊垸、 环己垸、 环庚垸。

根据本发明的第一方面， 在一些优选的实施方案中， 当 D ¹ 为 _ (CH)„ -， 其中 n为 0， 即 D ¹ 不存在时， D、 G、 G ¹ 与它们连接的苯环构成苯并五元或六元环 ， 如 通式 （Π ) 所示

( 1 ) 选自 11和^ ₆ 垸基， 所述垸基任选被一个或多个垸基、 垸氧基、 垸氨基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 磺酰基、 亚磺酰基、 巯基、 芳基或杂芳基取代；

( 2 ) R ₂ 选自 H、 d— ₆ 垸基、 氨基酰基、 芳基和杂芳基， 所述垸基任选被一个或多 个垸基、垸氧基、 卤素、羟基、氨基、 单垸氨基、双垸氨基、 芳基或杂芳基取代， 例如卤代(^ ₆ 垸基、 苄基；

( 3 ) R ₃ 为不存在， 或选自垸基、 烯基、 炔基、 垸氧基、 卤素、 卤代垸基、 垸基 氨基、 垸基磺酰基、 垸基磺酰氨基、 氨磺酰基垸基、 ¾代垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单垸氨基、 双垸氨基、 酰氨基、 酯基、 _CN、 环垸基、 杂环垸基、 芳基、 杂芳基、 芳垸基；

( 4) D选自 _ (CR _al R _a 0-、 - (CR _al R S -、 _S0_、 - S0 ₂ -、 - CO-、 - N (R _b ) -、 - N (R _b ) - CO-、 -C O ^) -, 其中所述的 R _al 、 各自为氢、 垸基、 卤素、 卤代垸基、 烯基或卤代 烯基， 或者 R _al 、 与它们连接的 C一起构成环垸基， 所述的 m为 0或 1， 所述 的 R _b 为不存在、 氢、 垸基、 垸基磺酰基或垸基羰基， 所述的 Rd、 各自为氢、 卤素、 垸基、 卤代垸基、 烯基或卤代烯基， 或当 Rd、 R。 ₂ 均为垸基时， C可与 Rd、 R。 ₂ 构成环垸基；

( 5 ) G、 G ¹ 各自为 -N-或 -CH-;

( 6 ) " = "为单键或双键， 其中两个" = "均为单键， 或者一个" = "为单键， 而另一个为双键；

( 7 ) 环 T选自：

a、 芳环或杂芳， 例如可以为五元及六元芳环或杂芳环， 所述的芳环或杂芳 环可以被 取代， 其中 为垸基、 垸氧基、 卤素、 卤代垸基、 卤代垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单垸氨基、 双垸氨基、 酰氨基或 -CN; 和

b、 环垸烃或杂环垸烃， 所述的环垸烃或杂环垸烃可以被 R ₄ 取代， 其中 ¾为 垸基、 烯基、 炔基、 垸氧基、 卤素、 卤代垸基、 卤代垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单垸氨基、 双垸氨基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 酰氨基、 _CN、 芳基 或杂芳基。

在一些实施方案中， 本发明提供通式 （Π ) 的三环稠杂环类核苷氨基磷酸 酯化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物或 结晶， 其中

¾选自 H和 d- ₆ 垸基；

选自甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、 叔丁基和仲丁基、 环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 苄基；

为不存在， 或选自 d— ₄ 垸基、 （；- ₄ 垸氧基、 氟、 氯、 溴、 苯基；

D选自- (CR _al R _a2 )„0-、 - (CR _al R _a2 )„S -、 -S0-, - S0 ₂ -、 - CO-、 - N (R _b )―、 - N (R _b ) - CO-、 -C O ^) -, 其中所述的 R _al 、 R _a2 各自为氢、 甲基或乙基， 所述的 m为 0或 1， 所 述的 R _b 为不存在、 氢、 甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 环丙基、 甲基磺酰基或甲 基羰基， 所述的 Rd、 R。 ₂ 各自为氢、 氟、 氯、 溴、 甲基、 乙基、 C ₂ - ₆ 烯基或卤代 C ₂ - ₆ 烯基， 或当 Rd、 R。 ₂ 均为甲基时， C可与 Rd、 构成环丙基；

G、 G ¹ 各自为 -N-或 -CH-;

为单键或双键， 其中两个 均为单键， 或者一个 为单 键， 而另一个为双键，

a、 当6、 G ¹ 均为 -CH -， 且 G与 G ¹ 相连的 为双键时， D与 G相 连的 为单键， 和

b、 当 G为 -CH -、 -N -， G ¹ 为 -N-时， G与 G ¹ 相连的 为单键， D 与 G相连的 为单键； 只是当 G为 -CH -， G ¹ 为 -N -， 且 D为 -N-时， G与 G ¹ 相连的 为单键， D与 G相连的 为双键； 和

环 T选自：

a、至少含有一个 N、 0或 S杂原子的五元杂芳环或六元杂芳环、苯环， 所述的五元或六元杂芳环或苯环可以被 R ₄ 取代， 其中 为^ ₄ 垸基、 d— ₄ 垸氧基、 卤素、 卤代 d- ₆ 垸基、 卤代 d— ₄ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单 d— ₄ 垸氨基、 双 d— ₄ 垸氨基、 酰氨基或 -CN; 和

b、 环戊垸、 环己垸、 环庚垸或至少含有一个^ 0或 S杂原子的杂环 戊垸、 杂环己垸、 杂环庚垸。

在一些优选的实施方案中， 本发明提供通式（Π )的三环稠杂环类核苷氨基 磷酸酯化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合 物或结晶， 其中

¾为11、 d— ₄ 垸基；

选自甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、 叔丁基和仲丁基、 环丙基、 环丁基、 环戊基、 苄基；

为不存在， 或选自氟、 氯、 溴、 苯基；

D选自- (CR _al R _a2 )„0-、 - (CR _al R _a2 )„S -、 -S0-, - S0 ₂ -、 - CO-、 - N (R _b )―、 - N (R _b ) - CO-、 -C O ^) -, 其中所述的 R _al 、 R _a2 各自为氢、 甲基或乙基， 所述的 m为 0或 1， 所 述的 R _b 为不存在、 氢、 甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 环丙基， 所述的 Rd、 各 自为氢、 氟、 甲基、 乙基、 C ₂ - ₆ 烯基或卤代 C ₂ - ₆ 烯基， 或当 Rd、 各自为甲基或 乙基时， C可与 Rd、 R。 ₂ 构成环垸基;

G、 G ¹ 各自为 N或- CH-;

为单键或双键， 其中两个 均为单键， 或者一个 为单 键， 而另一个为双键，

a、 当6、 G ¹ 均为 -CH -， 且 G与 G ¹ 相连的 为双键时， D与 G相 连的 为单键， 和

b、 当 G为 -CH -、 N， G ¹ 为 N时， G与 G ¹ 相连的 为单键， D与 G 相连的 " = "为单键； 只是当 _G 为 - _CH -， G ¹ 为 _N ， 且 D为 -N-时， G与 G ¹ 相连的 为单键， D与 G相连的 为双键； 和

环 T选自：

a、至少含有一个 N、 0或 S杂原子的五元杂芳环或六元杂芳环、苯环， 所述的五元或六元杂芳环或苯环可以被 R ₄ 取代， 其中 为^ ₄ 垸基、 d— ₄ 垸氧基、 卤素、 卤代 d- ₆ 垸基、 卤代 d— ₄ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单 d— ₄ 垸氨基、 双 d— ₄ 垸氨基、 甲酰氨基、 乙酰氨基或 -CN; 和

b、 环戊垸、 环己垸、 环庚垸或至少含有一个^ 0或 S杂原子的杂环 戊垸、 杂环己垸、 杂环庚垸， 所述环垸基或杂环垸基可以被 取代， 其中 ¾为 d— ₄ 垸基、 d— ₄ 垸氧基、 卤素、 卤代 d— ₆ 垸基、 卤代 d— ₄ 垸氧基、羟基、硝基、氨基、 单 ( — ₄ 垸氨基、 双 d— ₄ 垸氨基、 甲酰氨基、 乙酰氨基或 _CN。

在另一些优选的实施方案中， 本发明提供通式（Π )的三环稠杂环类核苷氨 基磷酸酯化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂 合物或结晶， 其中

¾为11、 甲基、 乙基； R ₂ 选自甲基、 乙基、 异丙基、 正丙基、 环戊基、 苄基；

为不存在， 或选自氟、 氯、 溴；

D选自 -0- - S - -S0- - S0 ₂ - -CO-, - N (R _b ) - - N (R _b ) - CO- - C (R _cl R _c2 ) - 其中所述的 R _b 为不存在、 氢、 甲基、 乙基、 丙基、 异丙基， 所述的 Rd 各自 为氢、 氟、 甲基、 乙基、 C ₂ — ₄ 烯基， 或当 Rd R。 ₂ 各自为甲基或乙基时， C与 Rd R。 ₂ 构成环垸基；

G G ¹ 各自为 -N-或 -CH-;

为单键或双键， 其中两个 均为单键， 或者一个 为单 键， 而另一个为双键，

a、 当6 G ¹ 均为 -CH -， 且 G与 G ¹ 相连的 为双键时， D与 G相 连的 为单键， 和

b、 当 G为 -CH - -N - G ¹ 为 N时， G与 G ¹ 相连的 " "为单键， D与 G相连的 " "为单键； 只是当 G为- CH - G ¹ 为 -N -， 且 D为 -N-时， G与 G ¹ 相连 的 为单键， D与 G相连的 为双键； 和

环 T为苯环或环己垸， 其中所述苯环或环己垸可以被 取代， 其中 为（^ ₄ 焼基、 垸氧基、 卤素、 卤代 d- ₆ 垸基、 卤代 d— ₄ 垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单 ( — ₄ 垸氨基、 双 d— ₄ 垸氨基、 甲酰氨基、 乙酰氨基或 _CN

本发明提供了以下具体化合物及其非对应异构 体、 前体药物、 药学上可接 受

S9T6.0/M0ZN3/X3d 9Z8t6I/ 0Z OAV

S9T6.0/M0ZN3/X3d 9Z8t6I/ 0Z OAV

a) 式 （1 ) 的化合物在碱性条件下与三氯氧磷反应后， 加入式 （2) 的化合物反 应， 再加入五氟苯酚反应得到式 （3) 的化合物； 和

b)低温条件下， 式 （3) 的化合物与式 （4) 的化合物反应， 得到式 （5) 的目标 化合物。

其中， 、 R ₂ 、 、 D、 D ¹ , G、 G ¹ , " = 环 T具有以上定义。

第三方面， 本发明提供药物组合物， 其包含本发明的通式（I )所示化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物或结晶。

在一些实施方案中， 本发明提供药物组合物， 其包含通式 （I )所示化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物或结晶， 还包 含选自下列组成的一种或多种抗 HCV治疗剂： HCV NS3蛋白酶抑制剂、 HCV NS5B RNA依赖性 RNA聚合酶抑制剂、 核苷类似物、 干扰素 ct、 聚乙二醇化的干扰素、 利巴韦林、 左旋韦林、 韦拉米啶、 TLR7激动剂、 TLR9激动剂、 亲环蛋白抑制剂、 α葡萄糖苷酶抑制剂、 NS5A抑制剂和 NS3解螺旋酶抑制剂。

可以将本发明的通式 （I ) 所示化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上 可接受的盐、水合物、溶剂合物或结晶与药学 上可接受的载体、稀释剂或赋形剂 混合制备成药物制剂， 以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括， 但不限于皮 内、 肌内、 腹膜内、 静脉内、 皮下、 鼻内和经口途径。 所述制剂可以通过任何途 径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或 皮肤粘膜 （例如口腔粘膜或直肠等） 吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的 。经口施用制剂的实例包括固体或 液体剂型， 具体而言， 包括片剂、 丸剂、 粒剂、 粉剂、 胶囊剂、 糖浆、 乳剂、 混 悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制 备， 且包含药物制剂领域常规使用 的载体、 稀释剂或赋形剂。

第四方面， 本发明提供本发明的通式 （I ) 所示化合物、 其立体异构体、 前 体药物、药学上可接受的盐、水合物、溶剂合 物或结晶或本发明的药物组合物治 疗黄病毒科病毒感染的受治疗者的方法， 包括向所述受治疗者施用通式 （I ) 的 化合物、 立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、 溶剂合物或结晶 或者包含通式 （I ) 的化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、 水合物、溶剂合物或结晶，以有效减少所述受 治疗者中所述病毒的病毒载量的量。 在一些实施方案中， 本发明提供用于治疗和 /或预防 RNA病毒例如黄病毒科病毒 感染的方法， 包括向有此需要的个体给予本发明的化合物、 其立体异构体、 盐、 水合物、溶剂合物或结晶或其药物组合物。在 另一些实施方案中， 本发明提供抑 制 RNA病毒例如黄病毒科病毒感染的方法，包括使 所述病毒与治疗有效量的本发 明的化合物、其立体异构体、盐、水合物、溶 剂合物或结晶或其药物组合物接触。

"黄病毒科病毒"是指黄病毒科的任何病毒， 包括感染人和非人动物的那些 病毒， 例如黄病毒、 鼠疫病毒和丙型肝炎病毒。本发明的化合物和 组合物可特别 用于治疗或预防性治疗 HCV。

另一方面， 本发明提供本发明的通式 （I ) 化合物、 其立体异构体、 前体药物、 药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或结晶 用于预防或治疗病毒性感染， 尤其 是黄病毒感染疾病的应用， 以及在制备预防 /治疗病毒性感染疾病的药物中的应 用， 特别是在制备预防 /治疗 HCV病毒感染， 如 HCV病毒性肝炎疾病的药物中的 应用。 术语定义

除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术 语具有与本发明所属领域的普 通技术人员通常理解的相同的含义。

如本文所用， 术语 "立体异构体"是指由分子中原子在空间上排列� ��式不同 所产生的异构体， 包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。 所有立体异构体 均属于本发明的范围。

如本文所用， 术语 "前体药物"是指本发明所述的化合物当被施用� ��哺乳动 物提供活性化合物的该化合物的任何药学上可 接受的形式 （例如酯、 酰胺化合 物）。

如本文所用， 术语 "盐"是指本发明所述的化合物与酸形成的药学� ��可接受 的盐， 所述的酸例如可选自， 但不限于： 磷酸、 硫酸、 盐酸、 氢溴酸、 柠檬酸、 马来酸、 丙二酸、 扁桃酸、 琥珀酸、 富马酸、 醋酸、 乳酸、 硝酸、 磺酸、 对甲苯 磺酸、 苹果酸、 甲垸磺酸或其类似物。

如本文所用， 术语 "溶剂合物"是指通过与溶剂分子配位形成固态� ��液态的 配合物的本发明化合物的形式。水合物是溶剂 合物的特殊形式，其中与水发生配 位。 在本发明范围内， 溶剂合物优选是水合物。

如本文所用， 术语 "结晶"是指本发明所述的化合物形成的各种固� ��形态， 包括晶型、 无定形。

如本文所用， 术语 "垸基"是指直链、 支链或环状的饱和烃基， "d 垸基" 是指 6个碳原子以下的饱和烃基， 包括直链或支链 d- ₆ 垸基以及 d- ₆ 环垸基。 例 如， 合适的 d- ₆ 垸基基团包括但不限于甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 环丙基、 正丁基、异丁基、叔丁基、环丁基、 正戊基、异戊基、环戊基、环己基、 正己基。 该术语包括取代或未取代的垸基，所述垸基可 任选被一个或多个选自以下的基团 取代： 垸基、 垸氧基、 芳氧基、 垸氨基、 芳基氨基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 磺酰基、 亚磺酰基、 巯基、 芳基或杂 芳基。

如本文所用， 术语 "烯基"是指含有一个或多个碳碳双键 （c=c) 的直链或 支链不饱和烃基，优选含有 2至 6个碳原子的烯基， 更优选含有 2至 4个碳原子 的烯基， 最优选含有 2个碳原子的烯基。 术语 "C ₂ - ₆ 烯基"是指含有 1个或 2个 碳碳双键且含有 2至 6个碳原子的不饱和烃基。 术语 "C ₂ — ₄ 烯基"是指含有 1个 或 2个碳碳双键且含有 2至 4个碳原子的不饱和烃基，合适的烯基基团包� �但不 限于乙烯基、 丙烯基。 类似地， 术语 "炔基"是指含有一个或多个碳碳三键 （C ≡C) 的直链或支链不饱和烃基， 优选含有 2至 6个碳原子的炔基， 更优选含有 2至 4个碳原子的炔基。

如本文所用， 术语 "垸氧基"是指 -0-垸基， 优选 d— ₆ 垸氧基， 合适的垸氧 基基团包括但不限于甲氧基、 乙氧基等。

如本文所用， 术语 "卤素"是指氟、 氯、 溴、 碘。

如本文所用， 术语"卤代垸基"是指至少被一个卤素原子取代� ��垸基， 优选 卤代（ - ₆ 垸基。

如本文所用， 术语 "垸基磺酰基"表示 "垸基 _S0 ₂ -"， 优选 d— ₆ 垸基 -so ₂ -， 合适的垸基磺酰基基团包括但不限于甲基磺酰 基、 乙基磺酰基。

如本文所用， 术语 "垸基羰基"表示 " ( - ₆ 垸基 -C (=0) -"， 合适的垸基羰基 基团包括但不限于甲基羰基、 乙基羰基。

如本文所用， 术语 "芳环"包括但不限于苯环、 萘环、 联苯环、 蒽环、 四氢 萘环、 芴环、 茚满环、 亚联苯环和苊环， 优选苯环。 该术语包括取代和未取代的 基团。 所述芳环可任选被一个或多个选自以下的基团 取代： 垸基、 烯基、 炔基、 垸氧基、 芳氧基、 卤素、 卤代垸基、 卤代垸氧基、羟基、硝基、氨基、 单垸氨基、 双垸氨基、 芳基氨基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 酰氨基、 _CN、 芳基 或杂芳基。

如本文所用，术语"杂芳环 "是指含有 1-4个选自 N、 0和 S的杂原子的 3-10 元杂芳族环系， 优选 C ₃ — ₇ 元杂芳族环系， 如噻吩、 吡啶、 咪唑、 呋喃、 吡咯、 噻 唑、 1， 2, 3-三氮唑、 1， 2, 4-三氮唑、 1， 2, 3-噻二唑，噁唑、 1， 2, 4-噁二唑、 1， 3， 4- 噁二唑等， 合适的杂芳环包括但不限于噻吩、 吡啶、 咪唑。 该术语包括取代和未 取代的基团。所述杂芳环可任选被一个或多个 选自以下的基团取代：垸基、烯基、 炔基、 垸氧基、 芳氧基、 卤素、 卤代垸基、 卤代垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单 垸氨基、双垸氨基、芳基氨基、垸基酰基、氨 基酰基、垸氨基酰基、酰氨基、 _CN、 芳基或杂芳基。

如本文所用， 术语 "杂环垸烃"是指至少含有一个 N、 0或 S杂原子的环垸 烃， 优选 C ₃ — ₇ 杂环垸烃， 包括但不限于杂环戊垸、 杂环己垸、 杂环庚垸。 本文中 的环垸烃或杂环垸烃包括取代和未取代的基团 。所述环垸烃或杂环垸烃可任选被 一个或多个选自以下的基团取代： 垸基、 烯基、 炔基、 垸氧基、 芳氧基、 卤素、 卤代垸基、 ¾代垸氧基、 羟基、 硝基、 氨基、 单垸氨基、 双垸氨基、 芳基氨基、 垸基酰基、 氨基酰基、 垸氨基酰基、 酰氨基、 _CN、 芳基或杂芳基。

如本文所用， 术语 "酰氨基"是 "d 垸基- C0N " ， 合适的酰氨基基团包 括但不限于甲酰氨基、 乙酰氨基,，

本发明的化合物含有多个不对称中心， 因此，可以以外消旋物和外消旋混合 物、单一对映异构体、非对应异构体、非对应 异构体混合物和单一非对应异构体 的形式存在。 具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细阐述， 但本发明不限于这些实施例。 除另有说明， 本发明使用的试剂和原料均为商购所得。

实施例 1 (2S)- 2- (((9 咔唑- 4-基氧基）（（（2R，3R,4R,5R)- 5- (2,4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰 基)氨基)丙酸异丙酯

步骤 1、 （2S)- 2- ("五氟苯氧基）（9 咔唑- 4-基氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯 的制备

在反应瓶中加三氯氧磷（0.84 g， 0. Olmol), 加二氯甲垸 (DCM, 30 mL)， 冷 却到 -60°C， 滴加 4-羟基咔唑（1 g， 0.01 mol)和三乙胺（0.55 g， 0.01 mol)的 二氯甲垸溶液， 滴毕， 室温反应过夜。 将此混合液冷却到 -60°C， 加入 L-丙氨酸 异丙酯盐酸盐， 搅拌 20 min后滴加三乙胺 （1.38 g， 0.025 mol) 的二氯甲垸溶 液， 滴加完毕， 升温到 -5°C， 滴加五氟苯酚 （l g， lOmmol) 和三乙胺 （0.82 g， 0.015 mol) 的二氯甲垸溶液， 滴毕， 至室温搅拌。 反应完全， 加水萃取， 干燥， 浓缩， 硅胶色谱柱分离， 得到标题化合物。

步骤 2、 (2S) -2- ( ( 咔唑- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧代 -3， 4- 二氢嘧啶 -1(2H)_基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨 基)丙酸异丙酯的制备

反应瓶中加入（2S) -2- ( ( (五氟苯氧基）（9 咔唑 -4-基氧基)磷酰基)氨基）丙 酸异丙酯（26 mg， 0.1 mmol), 密封， 氩气保护。 注射四氢呋喃 （THF， 1.5 mL), 冰浴冷却下注射叔丁基氯化镁 (0.3 mL)， 室温反应 3h。 冰浴下， 注射 (2'R)-2'_ 脱氧 -2' -氟 -2' -甲基尿苷（70 mg, 0.15 mmol)的 THF的溶液， 反应 15 h， 反应 结束。 在冰浴下， 用 6mL的 2NHC1淬灭， 乙酸乙酯萃取， 饱和碳酸氢钠溶液洗 涤， 干燥， 减压浓缩， 浓缩液经硅胶色谱柱分离， 纯化得到标题化合物。 ¾匪 R (300 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11. 46 (s, 1H)， 11. 43 (s, 1H)， 8. 19 (d， 1H)， 7. 49 (d， 1H)， 7. 39 (t， 1H)， 7. 32 (t， 1H)， 7. 30 (t， 1H)， 7. 16 (d， 1H)， 7. 13 (t， 1H)， 6. 18 (t， 1H)， 6. 01 (t， 1H)， 5. 83 (d， 1H)， 5. 24 (s， 1H)， 4. 86 (q, 1H)， 4. 44—4· 48 (m, 1H)， 4. 32—4· 33 (m, 1H)， 4. 05 (s， 1H)， 4. 02 (q, 1H)， 3. 84-3. 90 (m， 2H) , 1. 24 (s， 3H)， 1. 20 (d， 3H)， 1. 13 (d， 6H)。

ESI -MS m/z : [M+H] ⁺ = 619。

实施例 2 (2S) -2- ( ( (9—甲基 咔唑— 4—基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R)—5— (2, 4—二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸异丙酯

步骤 1 4-羟基- 9-甲基-^ "咔唑的制备

在反应瓶中， 将 4-羟基咔唑（2 g)溶解在 DMF (15 mL)中， 于 0°C下缓慢加 入 NaH (880 mg)， 然后至室温搅拌 30 min。 再加入 Mel ( 1. 5 g)， 继续在室温 下反应 lh， TLC显示反应结束，乙酸乙酯（100 mL)稀释，有机相依次用水、 10% LiCl 水溶液以及饱和食盐水洗， 干燥， 除去有机相得粗品， 粗品经硅胶柱 (PET : EA=10 : 1)纯化得到标题化合物， 淡黄色固体产品。

¾ 匪 R (400MHz, MSO-de) δ ppm: 10. 10 (s， 1H)， 8. 16-8. 18 (d， 1H)， 7. 50-7. 53 (d， 1H)， 7. 38-7. 41 (t， 1H)， 7. 14 -7. 26 (m， 2H) , 6. 99 -7. 01 (d， 1H)， 6. 60 -6. 62 (d， 1H)， 3. 81 (s， 3H)。

LC-MS m/z : [M+H] ⁺ = 198。

步骤 2、 (2S) -2- ( ( (9-甲基 咔唑- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 4-羟基 -9-甲基 -9 /-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯 酚和（2' R) -2' -脱氧 -2' -氟 -2' -甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 可制得标 题化合物。

¾匪 R (400MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11. 51 (s， 1H)， 8. 22-8. 24 (d， 1H)， 7. 61-7. 63 (m, 1H)， 7. 40 -7. 51 (m, 4H)， 7. 17-7. 24 (m, 2H) , 6. 24-6. 33 (m, 1H)， 5. 90-6. 05 (m, 2H) , 5. 15 (s， 1H)， 4. 83-4. 89 (m, 1H)， 4. 31-4. 48 (m, 2H) , 3. 93-4. 14 (m, 1H)， 3. 84-3. 93 (m, 5H)， 1. 06-1. 22 (m, 12H)。

LC-MS m/z : [M+H] ⁺ = 633。

实施例 3 (2S) -2- ( ( (9-异丙基 咔唑- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4- 二氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H) -基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯

步骤

在反应瓶中， 加入 4-羟基咔唑（lg，5. 46mmol)， THF ( 20mL) ， 溶解后冷却 至 -10 °C， 缓慢加 NaH (0. 55g， 14mmol)， 加毕， 搅拌 30 分钟， 加 2-溴丙垸 0. 74g (6mmol) , 加毕， 至室温反应 3h， 加水淬灭， 乙酸乙酯萃取， 干燥， 浓缩， 浓缩液经制备色谱纯化， PET: EA=10%， 得到标题化合物， 灰褐色液体。

步骤 2、 (2S) -2- ( ( (9-异丙基-^ "咔唑 -4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二 氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H) -基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基） 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 4-羟基 -9-异丙基 卡唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯 酚和（2' R) -2' -脱氧 -2' -氟 -2' -甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得标题 化合物。

¾匪 R (500MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11. 46 (s, 1H)， 8. 20 (d, 1H)， 7· 73- 7· 13 (m，7H)， 6. 27-5. 67 (m， 3H)， 5· 14- 4· 31 (m， 4H) , 4. 02-3. 80 (m， 4H)， 1. 63 (d， 6 H) ， 1. 26-1. 2 2 (m， 6H)， 1. 16-1. 11 (m， 6H)。

ESI -MS m/z : [M+H] ⁺ =661· 2。

实施例 4 (2S) -2- ( ( (9-乙基 咔唑- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸异丙酯

步骤 1、 4-羟基- 9-乙基-^ "咔唑的制备

在反应瓶中， 加入 4-羟基咔唑（1 g， 5.46 mmol) , 溶于 THF (20 mL)，冷却至 -10°C， 加 NaH(0.55 g， 14 mmol), 加毕， 搅拌 30分钟后， 加溴乙垸（0.66 g， 6 mmol), 加毕， 室温反应 3 h， 反应结束， 加水淬灭， 乙酸乙酯萃取， 干燥， 浓 缩， 经制备色谱纯化， PET: EA=10%， 得标题化合物， 灰褐色液体。

步骤 2、 (2S) -2- ( ( (9-乙基 咔唑- 4-基氧基）（（（2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 4-羟基 -9-乙基 -9/-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯酚 和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得标题化 合物。

¾ NMR (500 MHz, DMSO- c _s ) δ ppm: 11.47 (s， 1H)， 7.61-8.23 (m， 3H)， 7.15-7.50 (m, 5H)， 5.96-6.02 (m, 2H) , 5.64-5.75 (m, 2H, ) , 5.16-5.32 (m, 2H)， 4.84-4.88 (m, 1H)， 4.44-4.48 (m, 2H, )， 4.30-4.37 (m, 1H)， 4.05—408 (m， 1H)， 3.61-3.65 (m， 1H)， 1.21-1.33 (m， 9H)， 1.12-1.17 (m， 6H)。

ESI -MS m/z: [M+H] ⁺ = 647.2。

实施例 5 (2S) -2- ( ( (9-氧代- 9 芴- 2-基氧基） ( ( (2R， 3R， 4R， 5R) -5- (2， 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰 基)氨基)丙酸异丙酯

以 2-羟基 -9-芴酮、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'- 脱氧 -2'_氟 _2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得标题化合物。

¾匪 R (300 MHz, DMS0-c _e ) δ： 11.43 (s， 1H)， 7.96 (d， 1H)， 7.81 (d， 1H)， 7.77 (d， 1H)， 7.59 (t， 2H) , 7.41-7.46 (m， 1H)， 7.36 (t， 1H)， 6.01 (d， 1H)， 5.62-5.66 (m， 2H)， 5.57 (d， 1H)， 4.82-4.85 (m， 1H)， 4.39-4.42 (m, 1H)， 4.26-4.29 (m, 1H)， 4.02—4.04 (m, 1H)， 3.80—3.90 (m, 2H)， 3.62-3.65 (m， 1H)， 1.27 (d， 3H)， 1.23 (d， 6H)， 1.13 (dd， 3H)。

ESI -MS m/z: [M+Na] ⁺ = 654.2。

实施例 6 (2S)-2-(((6, 7,8,9- 四 氢二苯并 [b， d] 呋喃 - 2-基氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)-5-(2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）

步骤 1、 2-羟基- 6，7，8，9-四氢二苯并 [b,d呋喃的制备

苯醌（5 g， 46 mmol)溶于甲苯中， 0°C下滴加 4- (环己基 -1-烯 -1-基）吗啡啉 (8.5 g， 51 mmol), 0°C搅拌反应过夜， 过滤， 滤渣用甲苯充分洗涤后干燥 4 h。 加入 100 mL水， 滴加 HC1 (20 mL, 1 5M)， 室温搅拌 18 h， 过滤， 滤渣用水充 分洗涤， 用二氯甲垸溶解后加水萃取， 干燥有机层， 柱纯化得标题化合物。

步 骤 2 、 （2S)- 2- (((6，7，8，9- 四 氢 二 苯 并 [b, 呋 喃 - 2-基氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 2-羟基 -6， 7， 8， 9-四氢二苯并 [6, ί]呋喃、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐 酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方 法， 制得标题化合物。

¾匪 R (300 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.51 (s， 1H)， 7.52 (s， 1H)， 7.43 (d， 1H)， 7.29 (s， 1H)， 7.04 (d， 1H)， 6.02 (d， 1H)， 5.97 (d， 1H)， 5.84 (s， 1H)， 5.49 (d， 1H)， 4.37-4.39 (m， 1H)， 4.23-4.24 (m， 1H)， 4.01-4.05 (m， 2H), 3.79—3.84 (m, 2H) , 2.70 (m, 2H) , 2.49 (m, 2H) , 1.86—1.87 (m, 2H) , 1.77-1.78 (m， 2H) , 1.25 (d， 3H) ， 1.21 (d， 3H)， 1.13 (t， 6H)。

ESI -MS m/z: [M+H] ⁺ = 624.3。

实施例 7 (2S) -2- ( ( (二苯并 [b, d]噻吩- 2-基氧基） ( ( (2R， 3R， 4R， 5R) -5- (2， 4- 二氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯

步骤 1、 2-羟基-二苯并 [b,d噻吩的制备

1.1 2-二氧代硼烷的制备

在干燥的反应瓶中， 加入 2-溴-二苯并 [6, c]噻吩（2.64 g， 10.0 mmol), 联硼酸频那醇酯（6.09 g， 24.0 mmol) , 醋酸钾 （2.94 g， 30.0 mmol) ， 1,4- 二氧六环（ 50 ml )和 [1， -双（二苯基膦）二茂铁]二氯化钯（Pd (dppf) Cl ₂ , 364 mg， 0.5 mmol) 。 在氮气保护下加热到 90°C， 反应 24h， TLC检测。 反应结束， 反应 体系降至室温后， 向其中加入水 （lOOmL), 用乙酸乙酯提取 （60mLX3) 三次， 合并有机相， 用饱和食盐水 （60 mL)洗涤一次。 干燥， 过滤， 浓缩， 经硅胶柱纯 化得到标题化合物， 黄色油状。 ¾匪 R (500 MHz, MSO-de) δ ppm _: 8.61 (s, 1H)， 8.25-8.23 (m, 1H) : 7.88-7.82 (m, 3H)， 7.45-7.43 (m, 2H) , 1.39-1.33 (m, 12H)。

1.2 2-羟基-二苯并 [b,d噻吩的制备

在干燥的反应瓶中， 加入上述步骤 1.1制得的化合物 2- (二苯并 [6, ί]噻吩 -2-基） -4， 4， 5， 5-四甲基 -1， 3， 2-二氧代硼垸（2.0 g， 6.44 mmol) , 乙醇 (20 ml)， 羟胺盐酸盐 （1.34 g， 19.32 mmol) 和氢氧化钠固体 (1.03 g， 25.76 mmol) 。 在氮气保护下室温搅拌 10分钟后， 加热到 60°C反应 24h， TLC检测。 反应体系 降至室温后， 向其中加入水 （lOOmL), 用乙酸乙酯提取 （60 mL) 三次， 合并有 机相， 然后用饱和食盐水 （60 mL) 洗涤一次。 干燥， 过滤， 浓缩， 经硅胶柱纯 化得到标题化合物， 黄色油状。

¾匪 R (500 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 8.06-8.05 (m, 1H)， 7.83-7.81 (m, 1H)， 7.69-7.37 (m, 1H)， 7.59-7.57 (m, 1H)， 7.45-7.41 (m, 2H) , 7.01-6.99 (m, 1H)， 4.79 (brs, 1H)。

步骤 2、 (2S) -2- ( ( (二苯并 [b, d]噻吩- 2-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以制备的 2-羟基-二苯并 [6, ί]噻吩、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制 得标题化合物。

¾醒 (500 MHz, DMS0) δ ppm: 11.47 (s， 1H)， 8.29 (d， 1H)， 8.19 (s， 1H)， 8.02 (m, 2H) , 7.58-7.56 (m, 1H)， 7.54-7.50 (m, 2H) , 7.41-7.40 (d， 1H)， 6.13-6.03 (m， 2H) , 5.85 (d， 1H)， 5.55 (d， 1H)， 4.87-4.82 (m， 1H)， 4.44-4.38 (m, 1H)， 4.30-4.28 (m, 1H)， 4.05—4.01 (m, 1H)， 3.90—3.86 (m, 2H) , 1.28-1.23 (m， 6H) , 1.18-1.12 (m， 6H)。

ESI -MS m/z: [M+H] ⁺ = 636.0。

实施例 8 (2S) -2- ( ( (9-氧代- ^"硫杂蒽- 2-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4- 二氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯

步骤 1、 2-羟基- 9-氧代- ^"硫杂蒽的制备

硫代水杨酸 （9 g)， 苯酚（24.7 g) ， 投入反应瓶中， 然后慢慢加入浓硫酸 (85 mL)， 反应在 75°C下加热至 2h， TLC监测， 停止反应。 反应液在搅拌下缓慢 倒入 60°C水中， 有固体析出， 过滤， 固体用二氯甲垸重结晶， 得标题化合物， 淡绿色固体。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 10.24 (s， 1H)， 8.49-8.52 (m， 1H)，

7.80-7.92 (m, 4H)， 7.53-7.63 (m, 1H)， 7.31-7.34 (m, 1H)。

步骤 2、 (2S) -2- ( ( (9-氧代 硫杂蒽 -2-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二 氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基） 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 2-羟基 -9-氧代 -9 /-硫杂蒽、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯 酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得标题 化合物。

¾ 匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.49 (s， 1H)， 8.41-8.44 (d， 1H)，

8.24 (s， 1H)， 7.83-7.91 (m， 3H)， 7.56—7.76 (m， 3H)， 6.19-6.22 (t， 1H)， 5.94-5.99 (m, 2H)， 5.86 (s， 1H)， 4.75-4.82 (m, 1H)， 4.23-4.29 (m, 2H)， 3.78-3.82 (m， 3H)， 1.11-1.24 (m， 6H)， 1.05-1.11 (m， 6H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 664。

实施例 9 (2S) -2- ( ( (9-氧代- ^"氧杂蒽- 3-基氧基） ( ( (2R， 3R， 4R， 5R) -5- (2， 4- 二氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯

步骤 1、 3-羟基- 9-氧代- ^"氧杂蒽的制备

1.1

在反应瓶中， 将 2-羟基 -4甲氧基苯甲醛（1.5 g)溶解在 DMF (40 mL)中， 室 温下缓慢加入 1， 2-二溴苯 (4.6 g) 和碳酸钾（2.76 g)， 然后加热到 120°C， 在氮 气保护下搅拌 12 h， TLC显示反应结束， 冷却至室温， 用乙酸乙酯（150 mL)稀释， 有机相依次用水、 10% LiCl水溶液以及饱和食盐水洗涤， 干燥， 除去有机相， 粗 品经硅胶柱 (PE:EA=10:1)纯化得到标题化合物， 白色固体产品。

¾匪 R (400 MHz, MSO-de) δ ppm: 8.16-8.19 (q, 1H)， 8.09-8.12 (d, 1H)， 7.83-7.88 (m， 1H)， 7.62-7.65 (m， 1H)， 7.45-7.50 (m， 1H)， 7.17-7.20 (d, 1H)， 7.05-7.08 (dd， 1H)， 3.94 (s， 3H)。

1.2 3-羟基- 9-氧代- ^"氧杂蒽的制备

在反应瓶中， 将上述步骤 1.1 制得的化合物 3-甲氧基 -9-氧代 -9/-氧杂蒽 (300 mg)溶解在二氯甲垸（5 mL)中， 在干冰丙酮浴及氮气保护下， 滴加 BBr ₃ (983 mg)， 搅拌直到反应结束， 用 lmL水淬灭， 加入 10 mL二氯甲垸， 有机相依次用 水、 饱和食盐水洗涤， 干燥二氯甲垸， 减压蒸去有机相得到粗产品， 经硅胶柱纯 化 (PE： EA=5： 1)后得到标题化合物， 白色固体产品。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.00 (s， 1H)， 8.15-8.17 (t, 1H)，

8.04-8.06 (d, 1H)， 7.29 (m, 1H)， 7.60-7.63 (m, 1H)， 7.45 (m, 1H)， 6.88-6.93 (m， 2H)。

步骤 2、 (2S) -2- ( ( (9-氧代 氧杂蒽 -3-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二 氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基） 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 3-羟基 -9-氧代 -9 /-氧杂蒽、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯 酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得标题 化合物。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.51 (s, 1H)， 8.18-8.23 (m, 2H) , 7.87-7.90 (m, 1H)， 7.66-7· 68 (d, 1H)， 7.49-7· 55 (m, 3H)， 7.33-7· 35 (m, 1H)， 6.33-6.40 (m, 1H)， 5.91-6.07 (m, 2H) , 5.57-5.59 (d, 1H)， 4.82-4.86 (m, 1H)， 4.35—4.44 (m, 2H) , 3.88—4.03 (m, 3H)， 1.14—1.29 (m, 6H)， 1.10-1.15 (m， 6H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =648。

实施例 10 (2S)- 2- (((SW"咔唑- 2-基氧基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰 基)氨基)丙酸异丙酯

以 2-羟基 -9 /-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯酚和 (2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得标题化合 物。 经过 HPLC纯化后得到异构体 I， 白色固体和异构体 II， 白色固体。

HPLC条件：仪器：岛津公司制备 HPLC (Preparative liquid chromatography Shimadzu)； 色谱柱： Benetnoch ^TM _C18， 20x250 mm, 10 μ m; 检测波长： 254 nm; 流动相 0 ： MeOH = 30 :70。

对应异构体 I:

¾匪 R (300MHz, DMS0-c _e ) δ： 11.48 (s, 1H)， 11.27 (s, 1H) , 8.06 (d, 2H)， 7.60-7.58 (d, 1H)， 7.46-7.45 (d, 1H)， 7.36-7.35 (d, 2H)， 7.33-7.31 (m, 1H)， 7.14-7.13 (d， 1H)， 6.08-6.12 (m， 2H) , 5.90 (d， 1H)， 5.59 (d， 1H)， 4.91-4.82 (m, 1H)， 4.67—4.32 (m, 1H)， 4.32—4.21 (m, 1H)， 4.05—4.01 (m, 1H)， 3.88-3.79 (m, 2H) , 2.3 (s, 3H)， 1.58 (d， 3H)， 1.30-1.20 (m, 9H)。 ESI -MS m/z: [M+Na] ⁺ =641.3。

对应异构体 II:

¾匪 R (300 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.48 (s, 1H)， 11.26 (s, 1H)， 8.01 (d, 2H), 7.61-7.59 (d， 1H)， 7.47-7.45 (d， 1H)， 7.36-7.34 (d， 2H) , 7.33-7.31 (m, 1H)， 7.14-7.13 (d， 1H)， 6.08-6.12 (m, 2H) , 5.91 (d， 1H)， 5.59 (d， 1H)， 4.91-4.82 (m， 1H)， 4.67-4.32 (m， 1H)， 4.32-4.21 (m， 1H)， 4.05-4.01 (m， 1H)， 3.88-3.79 (m， 2H) , 2.3(s, 3H)， 1.30-1.20 (m， 9H)， 1.58 (d， 3H)。

ESI -MS m/z: [M+Na] ⁺ = 641· 3。

实 施 例 11(2S)- 2- (((2，3，4，9- 四 氢 - 1H- 咔 唑 - 6- 基 氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)-5-(2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）

步骤 -羟基- 2， 3， 4， 9- ^ ^"四氢咔唑的制备

在反应瓶中， 加入对甲氧基苯肼盐酸盐（5 g， 29 mmol), 乙酸（30 mL)， 环 己酮（2.8 g， 29 mmol) , 加热到 70°C， 全溶， 继续搅拌 5分钟后， 大量黄色固 体析出， TLC监控至反应完全， 降到室温， 加 HBr/ 0溶液 30 mL， 再加热到 80 V， 反应 4小时， TLC监控至原料消失， 停止反应， 降到室温， 加乙酸乙酯和水 萃取，有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤 2次，干燥，浓缩，经制备色谱柱纯化 (PET： EA = 20%), 得到标题化合物， 黄色固体。

步 骤 2 、 （2S)- 2- (((2,3,4,9- 四 氢 - 1H- 咔 唑 - 6- 基 氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯

以 6-羟基 -2， 3， 4， 四氢咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五 氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得 标题化合物。

¾匪 R (500 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.47 (s, 1H)， 10.64 (s, 1H)， 7.51 (d， 1H), 7.17-7.11 (m， 2H) , 6.84 (d， 1H)， 6· 03- 5· 99 (m， 1H)， 5.86-5.80 (m， 2H)， 5.50-5.44 (m, 1H)， 4.88-4.83 (m, 1H)， 4.36-4.33 (m, 1H)， 4.22-4.19 (m, 1H)， 4.05—4.00 (m, 1H)， 3.84— 3.75 (m, 2H) , 2.68—2.54 (m, 4H)， 1.81—1.78 (m， 4H)， 1.26-1.21 (m， 6H)， 1· 17- 1· 14 (m， 6H)。

ESI -MS m/z: [M+H] ⁺ = 623.0。 实施例 12 (2S)- 2- (((SW"咔唑- 3-基氧基）（（（2R,3R,4R,5R)- 5- (2,4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰 基)氨基)丙酸异丙酯

步骤 1、 3-羟基-^ "咔唑的制备

1.1 -甲酰基 -9-叔丁氧基羰基-^ "咔唑的制备

在反应瓶中， 将 N-Boc-3-溴咔唑（3 g)溶解在 THF (10 mL)中， 在氮气保护 下冷却到 -78°C， 加入 n-BuLi (6.5 mL)， 反应液在 _78°C搅拌 1 h， 然后向其中 加入 DMF (952 mg)， 加完后， 停止冷却， 使反应温度自然升至室温， 用饱和的 NH ₄ C1溶液（1 mL)淬灭， 用 EA (20 mL)稀释， 有机相依次用水、 饱和食盐水洗， 干燥有机相， 浓缩除去溶剂， 粗产品经硅胶柱色谱纯化 （PE: EA=10:1) 得到标 题化合物， 白色固体。

1.2 3- - 9-叔丁氧基羰基-^ "咔唑的制备

在反应瓶中，将 3-甲酰基 -9-叔丁氧基羰基 -9 /-咔唑 (600 mg)溶解在 THF (10 mL)中， 再加入间氯过氧苯甲酸 (m-CPBA，688 mg)， 反应液在室温搅拌 5 h， 用二 氯甲垸 (20 mL)稀释， 有机相依次用水， 饱和碳酸氢钠水溶液洗， 干燥有机相， 浓缩除去溶剂， 得到标题化合物， 黄色固体。

1.3 -羟基- 9-叔丁氧基羰基-^ "咔唑的制备

在反应瓶中， 将 3-甲酰基氧基 -9-叔丁氧基羰基 -9 /-咔唑 (670 mg)溶解在 Me0H/H ₂ 0(7.5 mL (体积比 2: 1))中， 再加入 K ₂ C0 ₃ ( 890 mg), 反应液在室温搅 12 h， 用乙酸乙酯（20 mL)稀释， 有机相依次用水、 饱和食盐水水洗， 干燥有机相， 浓缩除去溶剂， 粗产品经硅胶柱色谱 (PET:EA=20:1)纯化得到标题化合物， 淡黄 色固体。

1.4 3-羟基- 5 ^咔唑的制备 H

将 3-羟基 -9-叔丁氧基羰基 -9 /-咔唑 (240 mg)溶解在二氯甲垸 (4 mL)中， 于 0°C下滴加三氟乙酸 （TFA， 2 mL), 搅拌 2h， 反应结束， 将反应液在搅拌下倒入 适量的冰水中， 用饱和的碳酸氢钠溶液调节 PH至中性， 用二氯甲垸萃取（10 mL X2)， 有机相依次用水、 饱和食盐水洗涤， 干燥二氯甲垸， 减压蒸去有机相得到 粗产品， 经硅胶柱纯化 (PET:EA = 3:1)得到标题化合物， 淡黄色固体。

步骤 2、 (2S) -2- ( ( 咔唑- 3-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧代 -3， 4- 二氢嘧啶 -1(2H)_基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨 基)丙酸异丙酯的制备

以 3-羟基 -9 /-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯酚和 (2' R)-2' -脱氧 -2' -氟 -2' -甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得标题化合 物。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.53 (s, 1H)， 11.28 (s, 1H)， 7.59-8.06 (m, 2H), 7.57-7.60 (m, 1H)， 7.40-7.47 (m, 3H)， 7.16-7.28 (m， 1H)， 7.12-7.14 (m, 1H)， 6.03-6.06 (m, 2H)， 5.52-5.55 (m, 1H)， 4.82-4.86 (m, 2H)， 3.86 (m, 1H)， 3.85 (m， 2H) , 1.21-1.27 (m， 6H)， 1.11-1.14 (m， 6H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 619。

实施例 13 (2S) -2- ( ( (9-甲基- ^"咔唑- 3-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二 氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基） 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯

步骤 1、 3-羟基- 9-甲基-^ "咔唑的制备

1.1

在反应瓶中， 0°C下将 3-羟基 -9 /-咔唑（400 mg)溶解于无水 DMF (10 mL)， 加 入碘甲垸 (0.55 mL)， 保持 0°C继续搅拌 0.5 h。 再加入氢化钠（352 mg)， 搅拌 5 分钟后， 升至室温搅拌至 TLC显示反应结束。 用乙酸乙酯（50 mL)稀释， 有机相 依次用水、 10% LiCl 溶液以及饱和食盐水洗涤， 干燥， 除去有机相， 粗品经硅 胶柱 (PE:EA=10: 1)纯化得到标题化合物， 灰白色固体。

¾匪 R (400 MHz, MSO-de) δ ppm: 8.04-8.06 (d， 1H)， 7· 58- 7· 59 (d， 1H)， 7.11-7.48 (m, 5H)， 3.94 (m， 3H)， 3.83

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =212。

1.2

在反应瓶中， 将 3-甲氧基 -9-甲基 -9 /-咔唑（115 mg)溶解在二氯甲垸（5 mL)， 在干冰丙酮浴及氮气保护下， 缓慢滴加 BBr ₃ (0.1 mL), 滴毕， 升至室温搅拌至 TLC显示反应结束。 用水（1 mL)淬灭， 加入二氯甲垸（10 mL)， 有机相依次用水、 饱和食盐水洗， 干燥二氯甲垸， 减压蒸去有机相得到粗产品， 经柱层析纯化分离 (PET： EA=5： 1)得到标题化合物， 白色固体产品。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 9.01 (s， 1H)， 8.01-8.03 (d， 1H)， 7.37-7.51 (m, 4H)， 7.09-7.13 (m, 1H)， 6.94-6.97 (m, 1H)， 3.80 (s， 3H)。 步骤 2、 (2S) -2- ( ( (9-甲基 咔唑- 3-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 3-羟基 -9-甲基 -9 /-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯 酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得标题 化合物。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.53 (s, 1H)， 7.95-8.13 (m, 2H) , 7.46-7.60 (m, 4H)， 7.18—7.37 (m, 2H) , 5.92—6.08 (m, 3H)， 5.51—5.55 (m, 1H)， 4.83-4.88 (m, 1H)， 4.24-2.32 (m, 2H) , 4.03-4.06 (m, 1H)， 3.81-3.87 (m， 5H)， 1.10-1.27 (m， 12H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =633 ₀

实施例 14 (2S)- 2- (((10-甲基- 9-氧代 - 9,10-二氢吖啶 - 2-基氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧

步骤 1、 2-羟基- 10-甲基- 9-氧代- 9， 10-二氢吖啶的制备

1.1

在反应瓶中， 将 2-氟苯甲酸（1.68 g)和对甲氧基苯胺（1.23g)溶解在 THF (15mL)中， 室温下缓慢加入氨基锂 （460 mg)， 在氮气保护下， 加热到 50°C搅拌 4h， 反应结束。 冷却至室温， 用水（l mL)淬灭， 反应混合物用乙酸乙酯 （50 mL) 和浓盐酸 (2 mL)稀释， 有机相依次用水和饱和食盐水洗涤， 浓缩后得到粗产品， 加入异丙醇 （10mL)， 并加热到 65°C至固体完全溶解， 冷却到室温， 再加入水（10 mL), 在冰浴下冷却， 过滤得到标题化合物， 黄色固体。

¾匪 R (400 MHz, MSO-de) δ ppm: 12.98 (s, 1H)， 9.50 (s, 1H)， 7.90-7.93 (m, 1H)， 7.37—7.39 (m, 1H)， 7.35 (m, 2H) , 6.97—7.02 (m, 3H)， 6.71—6.74 (m， 1H)， 3.81 (s， 3H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 244。

1.2

在反应瓶中， 将 2-(4-甲氧基苯胺基）苯甲酸(8001!^)悬浮在？0(1 ₃ (10 mL) 中， 加热回流直到反应完成（LC-MS检测）， 减压蒸去 P0C1 _3; 浓缩液中加入乙醇: 10%的盐酸=8:1(¥:¥)溶液（101^)， 加热回流 lh， 冷却到室温， 加入水（10 mL)， 有黄色固体析出， 过滤， 得到标题化合物， 黄色固体。

¾ 匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.77 (s, 1H)， 8.22-8.24 (d, 1H)， 7.40-7.73 (m, 5H)， 7.22-7.26 (m, 1H)， 3.86 (s， 3H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 226。

1.3 -羟基- 9-氧代- 9， 10-二氢吖啶的制备

在反应瓶中， 将 2-甲氧基 -9-氧代 -9， 10-二氢吖啶（670 mg)加到 40% HBr水 溶液（13mL)中， 然后加热回流 24h， 反应结束， 冷却到室温， 过滤， 得到标题化 合物， 黄色固体。

¾ 匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.64 (s, 1H)， 8.18-8.20 (m, 1H)， 7.68-7.69 (m, 1H)， 7.45-7.56 (m, 3H)， 7.17-7.27 (m, 2H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 212。

1.4 备

在反应瓶中， 将 2-羟基 -9-氧代 -9， 10-二氢吖啶（211 mg)溶解在 DMF (3 mL) 中， 于 0°C下， 加入 NaH (160 mg)， 然后搅拌 30min， 再加入 Mel (0.18 mL)， 至室温继续反应 30 min,反应结束。用水（1 mL)淬灭，混合物用乙酸乙酯 （10 mL) 稀释， 有机相依次用水、 10% LiCl 水溶液及饱和食盐水洗涤， 干燥， 过滤后浓 缩得到粗产品， 经硅胶柱色谱 (PE:EA=3:1)纯化得到标题化合物， 黄色固体。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 240。

1.5 2-羟基- 10-甲基- 9-氧代- 9， 10-二氢吖啶的制备

在反应瓶中， 将 2-甲氧基 -10-甲基 -9-氧代 -9， 10-二氢吖啶（156 mg)溶解在 二氯甲垸（3 mL)， 干冰丙酮浴及氮气保护下， 缓慢滴加 BBr ₃ (0.125 mL) , 滴毕， 升至室温搅拌至 TLC显示反应结束。 用水（1 mL)淬灭， 加入二氯甲垸（10 mL)， 有机相依次用水、 饱和食盐水洗， 干燥二氯甲垸， 减压蒸去有机相得到粗产品， 经柱层析分离 (PE:EA=5:1)纯化得到标题化合物， 黄色固体产品。

¾ 匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 9.69 (s， 1H)， 8.29-8.31 (d， 1H)，

7.67-7.79 (m, 4H)， 7.26-7.34 (m, 2H) , 3.91 (s， 3H)。

IX- MS m/z: [M+H] ⁺ = 212。

步骤 2、 (2S)-2-(((10- 甲基 - 9-氧代 -9， 10-二氢吖啶 - 2-基氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 2-羟基 -10-甲基 -9-氧代 -9， 10-二氢吖啶、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐 酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方 法， 制得标题化合物 （白色固体）。

¾ NMR (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.53 (s， 1H)， 8.32-8.34 (d， 1H)，

8.13-8.14 (d， 1H)， 7.92 (m， 3H)， 7.85 (m， 1H)， 7.71 (m， 1H)， 7.35 (m， 1H)， 6.16 (t， 1H)， 5.86-6.04 (m， 2H) , 5.53-5.55 (d， 1H)， 4.81-4.85 (m， 1H) , 4.41 (m， 1H)， 4.28 (m， 1H)， 4.01 (m， 1H)， 3.96 (s， 3H)， 3.80 (m， 2H) , 1.22-1.28 (m， 6H)， 1.10-1.134 (m， 6H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 661。

实施例 15 (2S) -2- ( ( (1-氟 - 咔唑- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸异丙酯

步骤 1、 1-氟- 4-羟基- 9 咔唑的制备

1.1 -氟- 2-甲氧基苯硼

2-溴 -4-氟苯甲醚 （5 g) 投于反应瓶中， 然后加入无水 THF (80 mL) , 冰浴、 氮气保护下缓慢滴加正丁基锂（20 mL) ， 滴完， 反应 l h， 再缓慢加入硼酸三甲 酯 （5. 5 mL) ， 室温搅拌 3h， TCL监测， 停止反应。 反应液用 18 %的盐酸调至 pH值至 1， 然后加入乙酸乙酯 （200 mL) ，饱和氯化钠水溶液， 有机层水洗 3次， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 浓缩得到标题化合物， 白色固体， 粗产品可直接 用于下一步反应。

1. 2 -氟 2-甲氧基 -2' -硝基联苯的制备

将 5-氟 -2-甲氧基苯硼酸（500 mg)， 1-溴 -2-硝基苯（591 mg)， [1， -双（二 苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲垸络合物 (215 mg)， 碳酸钾 (811 mg)投于反应瓶 中， 再加入 1， 4-二氧六环 20 mL和水 4 mL, 氮气保护下加热至 90°C搅拌 1. 5 h， TCL监测，停止反应。反应液加入乙酸乙酯（100 mL)，饱和氯化钠水溶液（50 mL)， 用分液漏斗来萃取， 有机层水洗 3次， 合并有机相， 无水硫酸钠来干燥， 浓缩得 到粗品， 粗品经柱层析纯化（石油醚： 乙酸乙酯 =100 : 1-50 : 1 )得到标题化合物， 淡黄色固体。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 7. 99-8. 01 (d, 1H)， 7. 76-7. 79 (m, 1H)， 7. 63-7. 65 (m, 1H)， 7. 50-7. 53 (m, 1H)， 7. 23-7. 28 (m, 2H)， 7. 03-7. 07 (m, 1H)， 3. 60 (s， 3H)。

1. 3 1- - 4-甲氧基 咔唑的制备

将 5-氟 2-甲氧基 -2' -硝基联苯（1 g)，投入反应瓶中，再加入三苯基膦 （2. 1 g)， 1， 2-二氯苯（10 mL) , 氮气保护下搅拌加热至 190°C过夜。 TLC 监测， 停止 反应。将反应液浓缩得到粗品，粗品经柱层析 (石油醚： 乙酸乙酯= 80 : 1 到 30 : 1) 纯化得到标题化合物， 白色固体。

LC-MS m/z : [M+H] ⁺ =216。

1. 4 1- - 4-羟基- 9 咔唑的制备

在反应瓶中， 将 1-氟 -4-甲氧基 -9 /-咔唑（250 mg)溶解在二氯甲垸（5 mL)， 在干冰丙酮浴及氮气保护下， 慢慢滴加 BBr ₃ (0. 22 mL) , 滴毕， 升至室温搅拌至 TLC显示反应结束。 用水（1 mL)淬灭， 加入二氯甲垸 (20 mL)， 有机相依次用水、 饱和食盐水洗， 干燥二氯甲垸， 减压蒸去有机相得到粗产品， 经柱层析分离 (PET： EA=5： 1 )纯化后得到标题化合物， 白色固体。

LC-MS m/z : [M+H] ⁺ =202。 步骤 2、 2S) -2- ( ( (1-氟 - 咔唑- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰 基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 1-氟 -4-羟基 -9 /-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯酚 和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得标题化 合物， 白色固体。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.96-11.96 (m, 1H)， 11.60 (s, 1H)， 8.26-8.29 (d, 1H)， 7.51-7.61 (m, 3H)， 7.15-7.33 (m, 3H)， 6.32-6.38 (m, 1H)， 5.96-5.98 (m, 2H)， 5.34 (m, 1H)， 4.90-4.93 (m, 1H)， 4.38-4.54 (m, 2H), 4.11-4.14 (m， 1H)， 3.91-3.92 (m， 2H) , 1.05—1.14 (m， 12H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 637。

实 施 例 16 (2S)-2-(((l- 氟 - 9- 甲 基 -9H~ 咔 唑 - 4- 基 氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)-5-(2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯

1-氟- 4-羟基- 9-甲基- 9 咔唑的制备

-氟 -4-甲氧基 -9-甲基 -9i?"咔唑的制备

将 1-氟 -4-甲氧基 -9 /-咔唑（200 mg)， 投于反应瓶中， 冰浴搅拌下缓慢加入 氢化钠 （45 mg)， 加完， 继续反应 30 分钟， 然后再加入碘甲垸 (0.15 mL)， 于 室温下反应 lh。TLC监测，停止反应。反应液加水淬灭，然� ��加入乙酸乙酯（80 mL), 饱和氯化钠水溶液 50 mL， 分层， 有机层水洗 3次， 合并有机相， 无水硫酸钠干 燥， 浓缩得到标题化合物， 白色固体。

1.2 备

在反应瓶中， 将 1-氟 -4-甲氧基 -9-甲基 -9 /-咔唑（190 mg)溶解在二氯甲垸 (10 mL)中， 在干冰丙酮浴及氮气保护下， 滴加 BBr ₃ (0.2 mL) , 在 _78°C搅拌 2h 后， 再室温继续搅拌反应 2h， 反应结束， 加入二氯甲垸（10 mL)， 用 lmL饱和的 碳酸氢钠溶液淬灭， 有机相依次用水饱和食盐水洗涤， 干燥有机层， 减压浓缩有 机相得到粗产品， 经硅胶柱纯化 (PE:EA=5:1)得到标题化合物， 白色固体。 LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =216。

步 骤 2 、 (2S)-2-(((l- 氟 - 9- 甲 基 -9H~ 咔 唑 - 4- 基 氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)-5-(2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 1-氟 -4-羟基 -9-甲基 -9 /-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五 氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得 标题化合物。

经 HPLC进一步分离得到异构体 I (白色固体)和异构体 II (白色固体）。

HPLC条件：

仪器： SHIMADZU LC-6A; 色谱柱： Shim-pack PREP-ODS (H) (250*20mm， 10um)； 流速： 12 mL/min; 检测波长： 220/254 nm; 流动相： A相： H ₂ 0(0.1%FA) B相： CH凰

异构体 I： ¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.52 (s， 1H)， 8.24-8.26 (d， 1H)， 7.66-7.68 (d， 1H)， 7· 45- 7· 59 (m， 2H) , 7.12-7.30 (m， 3H)， 6.28-6.35 (m， 1H)， 5.91-6.03 (m， 2H) , 5.21 (s， 1H)， 4.83-4.87 (t， 1H)， 4.31-4.44 (m， 2H), 4.05 (m， 4H)， 3.84—3.89 (m， 2H) , 1.18-1.23 (m， 6H)， 1.12-1.24 (m， 6H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =651 ₀

异构体 II: ¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.53 (s， 1H)， 8.23-8.25 (d, 1H)， 7.65-7.67 (d, 1H)， 7.5—7.56 (m, 2H) , 7.12-7.18 (m, 3H)， 6.33—6.37 (m， 1H)， 5.97 -6.07 (m， 2H) , 5.21 -5.27 (m， 1H)， 4.73 -4.76 (t， 1H)， 4.35-4.36 (m， 2H) , 4.04-4.09 (m， 4H)， 3.85 -3.89 (m， 2H) , 1.20-1.23 (m， 6H)， 0.99 -1.14 (m， 6H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =651 ₀

实施例 17(2S)- 2- (((9-氧代- 9 氧杂蒽 - 2^氧基）（（(2R， 3R， 4R， 5R)- 5- (2， 4- 二氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰

步骤 1、 2-羟基- 9-氧代 -9^氧杂蒽的制备

1.1

在反应瓶中， 将 2-硝基苯甲醛（1.5 g)溶解在甲苯（lOmL)中， 室温下缓慢加 入对甲氧基苯酚（1.24 g)， 氯化铜 (66mg)， 三苯基膦（196 mg)和磷酸钾（4.6 g)， 反应液暴露在空气中， 加热到 110°C搅拌 24h， TLC显示反应结束， 冷却至室温， 过滤， 滤液用乙酸乙酯（150 mL)稀释， 有机相用水及饱和食盐水洗涤， 干燥， 除 ，粗品经硅胶柱（PE:EA=10:1)纯化得到标题化合� ��，淡黄色固体产品。 R (400 MHz, MSO-de) δ ppm: 8.17-8.20 (m, 1H)， 7.83-7.90 (m, 1H)， 7.60-7.65 (m 2H)， 7.53-7· 55 (d， 1H)， 7.44-7· 48 (m， 2H)， 3.87 (s， 3H)。

1.2 2-羟基- 9-氧代- 9 氧杂蒽的制备

在反应瓶中， 将 2-甲氧基 -9-氧代 -9 /-氧杂蒽（200 mg)溶解在二氯甲垸 (5 mL) 中， 干冰丙酮浴及氮气保护下， 滴加 BBr ₃ (437 mg)， 在 _78°C搅拌 2h， 再于室温 继续搅拌 2h， 反应结束， 加入 lmL饱和的碳酸氢钠溶液及二氯甲垸（10 mL)， 有 机相依次用水、 饱和食盐水洗涤， 干燥有机层， 减压浓缩有机相得到粗产品， 经 硅胶柱纯化 (PET:EA = 5:1)后得到标题化合物， 淡黄色固体产品。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 10.00 (s, 1H)， 8.17-8.19 (m, 1H)， 7.83-7.88 (m, 1H)， 7.55-7.66 (m, 2H) , 7.44-7.49 (m, 2H) , 7.31-7.35 (m, 1H)。

步骤 2、 (2S) -2- ( ( (9-氧代- 9 氧杂蒽 -2 ^氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二 氧代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H)-基)- 4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基） 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 2-羟基 -9-氧代 -9 /-氧杂蒽、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯 酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得标题 化合物 （白色固体）。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.54 (s， 1H)， 8.24-8.27 (d， 1H)， 7.93-8.05 (m, 2H)， 7.73-7.82 (m, 3H)， 7.54-7.84 (m, 2H)， 6.27-6.28 (m, 1H)， 5.94-6.13 (m， 2H) , 5.60-5.62 (m， 1H)， 4.86-4.89 (t, 1H)， 4.31-4.49 (m， 2H), 4.07 (m， 1H)， 3.89—3.93 (m， 2H) , 1.28-1.34 (m， 6H)， 1.15-1.20 (m， 6H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =648。

实 施 例 18(2S)- 2- (((9- 甲 基 -2,3,4,9- 四 氢 - 1H-咔 唑 - 6-基 氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯

步骤 1、 6-羟基- 9-甲基- 2， 3， 4， 9- ^ ^"四氢咔唑的制备 6-甲氧基 -9-甲基- 2， 3, 4, 9- 四氢咔唑的制备

在反应瓶中， 加入 6-甲氧基 -2，3，4，9-1 /-四氢咔唑（2.5 g， 12 mmol) 及 THF(20 mL)， 溶解后冷却至 _1(TC， 缓慢加入 NaH(l.5 g， 36 mmol), 加毕， 搅 拌 30分钟后， 再加碘甲垸 2.5mL， 加毕， 至室温反应 30分钟， 再加热到 50°C， 反应 1.5小时， 反应结束， 冷却至室温， 加水淬灭， 乙酸乙酯萃取， 干燥， 浓缩， 制备色谱纯化， PET: EA= 得到标题化合物， 白色固体。

1.2 备

在反应瓶中， 加入上述步骤 1.1 制得的化合物 6-甲氧基 -9-甲基 -2, 3， 4， 9- 四氢咔唑（0.7g， 3.2mmol)， 40%HBr水溶液和乙酸各 10mL， 加热到 110°C， 反应 6小时， 原料基本反应完全， 冷却到室温， 加水和乙酸乙酯萃取， 浓缩， 制备色谱纯化， PET: EA=10%， 得到标题化合物， 黄色固体。

步 骤 2 、 (2S)-2-(((9- 甲 基 -2,3,4,9- 四 氢 - 1H-咔 唑 - 6-基氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 6-羟基 -9-甲基 -2， 3， 4， 四氢咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐 酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方 法， 制得标题化合物。

¾NMR (500MHz, DMS0) δ ppm:ll.48 (s, 1H)， 7.49-6.90 (m， 4H)， 6.04-5.97 (m, 2H) , 5.90-5.81 (m， 1H)， 5.49-5.41 (m， 1H)， 4.88-4.83 (m， 1H)， 4.38-4.33 (m, 1H)， 4.22-4.20 (m, 1H)， 4.02—3.99 (m, 1H)， 3.82—3.79 (m, 2H)， 3.57 (s， 3H)， 2.69 (m， 4H)， 1.84-1.77 (m， 4H) , 1.27-1.22 (m， 6H)， 1· 19- 1· 13 (m， 6H

ESI -MS m/z: [M+Na] ⁺ =659.2。

实施例 19 (2S) -2- ( ( (9-甲基-^ "咔唑 -2-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二 氧代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H)-基)- 4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯

步骤 1、 2-羟基- 9-甲基-^ "咔唑的制备

1.1 2- -9-甲基- 5 ^

将 2-羟基 -g/-咔唑 （915 mg， 5 mmol)， THF (15 mL)加入反应瓶中， 在 0 °〇条件下， 分批加入 NaH(130 mg， 20 mmol) , 反应 30 min， 再加入碘甲垸 （568 mg， 20 mmol) 的 THF (5 ml) 溶液，于 30°C反应过夜 （约 10 h) 。 TLC监测反应 完毕， 加水淬灭， 乙酸乙酯萃取 （50ml X 3)， 硅胶柱纯化， 得到标题化合物。

1.2 2- - 9-甲基-^ "咔唑的制备

将 2-甲氧基 -9-甲基 -9 /-咔唑 （730 mg) 加入到反应瓶中， 加入 40%HBr水 溶液和冰乙酸， 于 105°C反应 24 h后， TLC监测反应完毕。 将反应液加入 20ml 水， 用二氯甲垸萃取 3次， 硅胶柱纯化。 得到标题化合物。

步骤 2、 (2S) -2- ( ( (9-甲基 咔唑- 2-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 2-羟基 -9-甲基 -9/-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯 酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得标题 化合物。

¾NMR (300MHz, DMSO-c6) δ ppm: 11.45 (s, 1H)， 8.10-8.11 (d， 1H)， 7.95-7.97 (d, 1H)， 7.60-7.61 (m, 1H)， 7.59-7.60 (m, 1H)， 7.56-7.58 (m, 1H)， 7.44-7.45 (m, 1H)， 7.36-7.38 (m, 1H)， 7.19-7.22 (m, 1H)， 7.07-7.09 (m, 1H), 6.05-6.07 (m, 2H) , 5.91 (m, 1H)， 5.26 (s， 1H)， 4.83—4.89 (m, 1H)， 4.31—4.48 (m, 1H)， 3.92—4.14 (m, 1H)， 3.84—3.93 (m, 5H)， 1.25—1.26 (m, 6H)， 1.11-1.14 (m， 6H)。

ESI -MS m/z: [M+H] ⁺ = 633.3。

实施例 20 (2S) -2- ( ( (二苯并 [b, d]呋喃- 3-基氧基） ( ( (2R， 3R， 4R， 5R) -5- (2， 4- 二氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸异

步骤 1、 3-羟基-二苯并 [b,d呋喃的制备

1.1 3-氨基-二苯并 [b,d呋喃的制备

将 3-硝基二苯并呋喃 (4 g)， 还原铁粉 (5.26 g)， 氯化铵 （5 g) 投于反应 瓶中， 加入乙醇（150 mL)， 于 90°C回流， 至 TLC监测原料反应完全， 停止反应。 冷却， 抽滤， 滤液减压浓缩后， 经柱层析分离纯化， 得到标题化合物。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 7.84-7.82 (m, 1H)， 7.71-7.69 (d, 1H)， 7.52-7.50 (m, 1H)， 7.30-7.25 (m, 2H)， 6.75-6.75 (d, 1H)， 6.64-6.62 (m, 1H)， 5.57 (s， 2H)。

IX- MS m/z: [M+H] ⁺ = 184。

1.23-溴-二苯并 [b, 呋喃的制备

将 3-氨基-二苯并 [6, c]呋喃（1 g， 5.46 mmol)溶解于乙腈 （10 mL), 冰浴 条件下缓慢滴加亚硝酸特丁酯（731 mg， 7.10 mmol),然后再慢慢加入溴化铜（ 1.46 g， 6.55 mmol), 加毕， 反应液至 50°C搅拌反应 1个小时， 反应结束， 原料反应 完， 加水 （l mL) 淬灭， 过滤， 滤液加入二氯甲垸 （20mL)， 用水 （40 mL X 2) 洗涤， 无水硫酸钠干燥， 硅胶柱层析纯化得到标题化合物， 白色固体。

¾ NMR (400 MHz, DMS0— c _s ) δ ppm: 8.16 (m， 1H)， 8.11— 8.13 (d， 1H)， 8.02 (s, 1H)， 7.71-7.73 (d， 1H)， 7.56-7.58 (m, 2H) , 7.42-7.45 (m, 1H)。

1.3 -甲酰基-二苯并 [b,d呋喃的制备

将 3-溴-二苯并 [6, c]呋喃（247 mg， 1 mmol)溶于无水四氢呋喃 （3 mL), 于 -78°C缓慢滴加正丁基锂 （0.6mL)， 加毕， 继续低温 _78°C下搅拌 30分钟， 然后 再缓慢滴加 DMF(0.1 mL)， 滴完， 升至室温搅拌 10分钟， 反应结束， 滴加氯化 胺水溶液 （0.2 mL) 淬灭， 硅胶柱纯化得到标题化合物， 黄色固体。

¾ 匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 10.15 (s, 1H)， 8.38-8.40 (d, 1H)， 8.300 (m, 1H)， 8.24 (s， 1H)， 7.98-7· 98 (m, 1H)， 7.79-7· 82 (d， 1H)， 7.65-7.66 (m, 1H)， 7.47-7.49 (m, 1H)。

1.4 3-甲酰氧基-二苯并 [b,d呋喃的制备

将 3-甲酰基-二苯并 [6, c]呋喃（160 mg， 0.81 mmol)溶解于无水二氯甲垸（4 mL) 中， 然后室温条件下慢慢加入间氯过氧苯甲酸 (m-CPBA)， 加毕， 反应液在室 温下搅拌过夜至反应结束。 然后加入水 （2 mL), 饱和碳酸氢钠水溶液 （4 mL), 二氯甲垸 （20 mL), 萃取， 过滤干燥， 浓缩得标题化合物， 黄色固体。

1.5 3-羟基-二苯并 [b,d呋喃的制备

将 3-甲酰氧基-二苯并 [6, c]呋喃（130 mg， 0.6 mmol)溶解于甲醇 （3 mL) 中， 然后缓慢加入 5%氢氧化钠水溶液 （3 mL)， 加毕， 于室温反应 30分钟， 反 应结束， 用 2N的盐酸调节 pH值至 2， 用二氯甲垸萃取， 水洗， 无水硫酸钠干燥， 柱层析 （石油醚： 乙酸乙酯 =50: 1) 得到标题化合物， 白色固体。

¾ NMR (400 MHz, DMSO- c _s ) δ ppm: 9.94 (s， 1H)， 7.95-7.98 (m, 1H)， 7.88-7.90 (m, 1H)， 7.58-7.60 (d, 1H)， 7.32-7.34 (m, 2H) , 7.01-7.02 (d, 1H)， 6.83—6.86 (m, 1H)。

步骤 2、 (2S) -2- ( ( (二苯并 [b, d]呋喃- 3-基氧基） ( ( (2R， 3R， 4R， 5R) -5- (2， 4-二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 3-羟基-二苯并 ¾iJ呋喃、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯 酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得标题 化合物。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.51 (s, 1H)， 8.11-8.15 (m, 2H) , 7.68-7.71 (d， 1H)， 7.60-7.61 (m， 2H) , 7.51 (m， 1H)， 7.39 (m， 1H)， 7.28 (m， 1H)， 6.17-6.18 (m， 1H)， 5.89 (m， 1H)， 5.88 (m， 1H)， 5.56-5.59 (d， 1H)， 4.81-4.85 (m, 1H)， 4.40 (m, 1H)， 4.28 (m, 1H)， 4.03 (m, 1H)， 3.85—3.88 (m， 2H), 1.23-1.29 (m， 6H)， 1.09-1.12 (m， 6H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 620。

实 施 例 21(2S)- 2- ((( 螺 [ 环 丙 烷 -1,9' - 芴 ]-2' - 基 氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-

步骤 1、 2' -羟基螺 [环丙烷- 1,9' -芴]的制备

1.1

在反应瓶中， 将 2-溴芴（2 g)溶解在 THF (10 mL)中， 于 _78°C缓慢加入 LiHMDS (六甲基二硅基胺基锂） （9.8 mL)， 加完并搅拌 1 h， 然后至 0°C。 将上 述混合物缓慢加入到 1， 2-二溴乙垸 （10.5 g) 的 THF (10 mL) 溶液中， 反应混 合物在 0°C下继续反应 lh， TLC显示反应结束， 用甲醇（lmL) 淬灭， 除去溶剂， 粗品经硅胶柱色谱 （PE: EA=100:1) 纯化得到标题化合物， 黄色固体产品。

¾匪 R (400 MHz, MSO-de) δ ppm: 7.83-7.91 (m, 3H)， 7.57-7.65 (m, 2H) , 7.37-7.41 (m, 2H) , 4.16 (m, 1H)， 3.40-3.44 (m, 2H) , 2.43-2.50 (m, 2H)。

1.2

在反应瓶中， 将2-溴-9-(2-溴乙基）-9 /-芴（l. l g) 溶解在 DMF (5 mL) 中， 于 0°C缓慢加入 NaH (248 mg) , 然后至室温下反应 12 h。 TLC显示反应结束， 用 饱和 NH ₄ C1 (1 mL) 溶液淬灭， 加入 EA (20 mL) 稀释， 并依次用 10% 的 LiCl 溶液 （5 mL X3)、 饱和食盐水 （5 mL) 洗， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 过 滤， 减压除去乙酸乙酯， 粗品经硅胶柱色谱 （PE: EA=50:1) 纯化得到标题化合 物， 黄色固体。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 7.87-7.95 (m, 2H) , 7.51-7.53 (m, 1H)， 7.46 (s， 1H)， 7.31-7.38 (m, 2H) , 7.19-7.21 (m, 1H)， 1.80-1.86 (m, 2H) , 1.74-1.79 (m， 2H)。

1.3 ' -甲酰基螺 [环丙烷- 1,9' -芴]的制备

在反应瓶中， 将 2' -溴螺 [环丙垸 -1， 9' -芴] (500 mg) 溶解在 THF (5 mL) 中，在 -78°C与氮气保护下， 缓慢加入正丁基锂 （0.86 mL)， 维持此温度下反应 1 h _; 然后加入 DMF (0.5 mL), 停止冷却， 自然升温至室温， 并 TLC显示反应结 束， 用饱和 NH ₄ C1 (1 mL) 溶液淬灭， 加入 EA (20 mL) 稀释， 并依次用 10% 的 LiCl 溶液 （5 mL X 2)， 饱和食盐水 （5 mL) 洗涤， 合并有机相， 无水硫酸钠 干燥， 过滤， 减压除去溶剂， 粗品用硅胶柱色谱 （PET: EA= 30:1) 纯化得到标 题化合物， 黄色固体。

¾ 匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 10.03 (s， 1H)， 8.16-8.18 (d， 1H)， 8.06-8.09 (m, 1H)， 7.92-7.94 (m, 1H)， 7.766 (s, 1H)， 7.41-7.43 (m, 2H) , 7.27-7.30 (m, 1H)， 1.90-1.94 (m, 2H) , 1.81-1.84 (m, 2H)。

1.4 ' -甲酰氧基螺 [环丙烷- 1,9' -芴]的制备

在反应瓶中， 将 2' -甲酰基螺 [环丙垸 -1， 9' -芴] (210 mg) 溶解在 DCM (二氯甲垸） （10 mL) 中， 室温下缓慢加入 m-CPBA (328 mg) (间氯过氧苯甲 酸）， 然后在 25°C下反应 3h， 至 TLC显示反应结束。 再加入 DCM (20 mL) 稀释， 并依次用饱和的 NaHC0 ₃ 溶液 （5 mL X 2)， 饱和食盐水 （5 mL) 洗涤， 合并有 机相， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压除去 DCM， 得到标题化合物， 黄色固体， 直 接用于下一步反应。

1.5 2' -羟基螺 [环丙烷- 1,9' -芴]的制备 在反应瓶中， 将 2' -甲酰氧基螺 [环丙垸 _1，9' -芴] (260 mg) 溶解在 MeOH/ 0 (3 mL/1 mL)中， 室温下缓慢加入 K ₂ C0 ₃ (303 mg)， 然后在 50°C下反应 1.5 h, 至 TLC显示反应结束。 减压除去甲醇， 用 EA (20 mL) 稀释， 并依次用 ¾0 (5 mLX 2)， 饱和食盐水 （5 mL) 洗， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 过 滤， 减压除去 EA， 粗品经硅胶柱色谱 （PE: EA= 15 :1) 纯化得到标题化合物， 淡黄色固体。

¾ NMR (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 9.48 (s， 1H)， 7.67-7.74 (m, 2H) , 7.08-7.29 (m, 3H)， 6.74—6.77 (m, 1H)， 6.52—6.53 (m, 1H)， 1.67—1.71 (m, 2H), 1.60-1.63 (m， 2H)。

步 骤 2 、 (2S)-2-((( 螺 [ 环 丙 烷 -1,9' - 芴 ]-2' - 基 氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 2' -羟基螺 [环丙垸 -1， 9' -芴]、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五 氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得 标题化合物。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.44 (s, 1H)， 7.88-7.91 (s, 2H) , 7.57-7.59 (m, 1H)， 7.17-7.36 (m, 4H)， 7.07 (s, 1H)， 6.07-6.13 (m, 2H) , 5.93 (br, 1H)， 5.56—5.58 (m, 1H)， 4.83—4.87 (m, 1H)， 4.37—4.41 (m, 1H)， 4.25-4.27 (m， 1H)， 4.0—4.04 (m， 1H)， 3.80—3.87 (m， 2H) , 1.69—1.78 (m， 4H)， 1.23-1.28 (m， 6H)， 1.13-1.15 (m， 6H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 644。

实 施 例 22 (2S)-2-((( 吡 啶 并 [1,2- a] 苯 并 咪 唑 - 7- 基 氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)-5-(2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基

4-甲氧基 -2-硝基苯胺 （1.68 g)溶解于乙腈 （30 mL) 中， 然后在冰浴温度 下慢慢滴加亚硝酸叔丁酯 （1.34 g) ， 再将溴化铜 （2.67 g) 慢慢加入到反应瓶 中， 反应液在氮气保护下加热到 80°C反应 2小时， 反应结束， 减压浓缩， 经硅 胶柱色谱纯化 （PE: EA=20:1) 得标题化合物， 黄色固体。

1.2 2-溴- 5-甲氧基苯胺的制备 o'

将 1-溴 4-甲氧基 -2-硝基苯（2.1 g)溶解于甲醇（10mL)，然后加入铁粉（1.5 g) ，再向反应液中加入浓盐酸 （2 mL)， 反应液回流 2 h后， 冷却到室温， 加入 碳酸钠固体直到没有气泡冒出， 用 EA萃取， EA层用饱和食盐水洗， 干燥， 过滤， 减压除去溶剂， 粗产品经硅胶柱色谱分离（PE: EA=20:1)纯化得到标题化合物， 淡黄色的油状物。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 202。

1.3 N- 2-溴- 5-甲氧基苯基)吡啶基 -2-胺的制备

将 2-溴 -5-甲氧基苯胺（1.2 g)溶解于无水二氧六环 （6 mL)， 加入 2-溴吡 啶（0.68 mL)，三（二亚苄基丙酮）二钯（Pd2 (dba) 3， 100 mg)， 4， 5-双二苯基膦 -9， 9- 二甲基氧杂蒽 (Xant-phos, 50 mg) 和碳酸铯 （2.87 g)， 加毕， 反应液在氮气保 护下加热到 100°C搅拌反应 3小时， 反应结束， 减压除去溶剂， 直接硅胶柱色谱 分离 （PET: EA=30:1) 得到标题化合物， 淡黄色油状产品。

LC-MS m/z: [M+H] + = 280。

1.4 7- -吡啶并 [1， 2a]苯并咪唑的制备

将 N-(2-溴 -5-甲氧基苯基)吡啶基 -2-胺（l g)溶解于无水乙腈（10mL) 中， 然后加入碳酸钾 （590mg)， Ν，Ν'-二甲基乙二胺 （315 mg) 和碘化亚铜 （68mg)， 反应液在氮气保护下加热到 80°C反应过夜， 反应结束， 过滤， 将滤液减压浓缩， 浓缩液直接硅胶柱色谱分离得到标题化合物， 黄色固体。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 9.06-9.08 (d, 1H)， 8.23-8.25 (d, 1H), 7.66-7.68 (d, 1H)， 7.56-7.58 (m, 1H)， 7.31-7.32 (d, 1H)， 7.01-7.05 (m， 1H)， 3.91 (s， 3H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 199。

1.5 -羟基-吡啶并 [1， 2a]苯并咪唑的制备

将 7-甲氧基-吡啶并 [1， 2a]苯并咪唑（210 mg)溶解于二氯甲垸（10mL) 中， 冷却到 -78°C， 然后慢慢加入三溴化硼 （550 mg), 加毕， 在室温条件下反应 1 小时， 反应结束后， 用冰水淬灭， 然后加入甲醇 （5 mL)， 用饱和的碳酸氢钠水 溶液洗涤， 用乙酸乙酯 （30mLX3) 萃取， 无水硫酸钠干燥， 浓缩得到标题化合 物， 淡黄色固体。 ¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 9.55 (br, 1H)， 8.95-8.97 (d， 1H)， 8.07-8.09 (d, 1H)， 7.45-7.57 (m, 2H) , 7.05-7.06 (d, 1H)， 6.91-6.94 (m, 1H)， 6.84-6.86 (m, 1H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 185。

步 骤 2 、 (2S)-2-((( 吡 啶 并 [1,2- a] 苯 并 咪 唑 - 7- 基 氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)-5-(2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 7-羟基-吡啶并 [1， 2a]苯并咪唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制 得标题化合物。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.51 (br, 1H)， 9.07-9.09 (d, 1H)， 8.30-8.32 (d, 1H)， 7.55-7.68 (m, 4H)， 7.22-7.25 (m, 1H)， 7.01-7.04 (m, 1H)， 5.92-6.14 (m, 3H)， 5.51—5.57 (m, 1H)， 4.82—4.85 (m, 1H)， 4.28—4.38 (m， 2H), 4.02-4.04 (m， 1H)， 3.80—3.89 (m， 2H) , 1.19-1.28 (m， 6H)， 1.12-1.15 (m， 6H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 620。

实 施 例 23 (2S)-2-((( 吡 啶 并 [1,2- a] 苯 并 咪 唑 - 8- 基 氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)-5-(2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲 基)丙酸异丙酯

步骤 1、 8-羟基-吡啶并 [1， 2a]苯并咪唑的制备

1.1 -溴 4-甲氧基 -1-硝基苯的制备

将 5-甲氧基 -2-硝基苯胺 （3 g)溶解于乙腈 （30 mL) 中， 然后在冰浴温度 下缓慢滴加亚硝酸叔丁酯 （2.78 mL), 再将溴化铜 （4.7 g) 缓慢加入到反应瓶 中， 反应液在氮气保护下加热到 65°C反应 2小时， 反应结束， 直接减压蒸除溶 剂， 经柱层析分离纯化得到标题化合物。

1.2 -溴- 4-甲氧基苯胺的制备

将 2-溴 4-甲氧基 -1-硝基苯 (4.3 g)溶解于乙醇 （15mL)， 然后加入铁粉 （4 g) 和氯化铵 （7.8 g)， 最后加入水 （15 mL) ， 反应液置于 90°C反应 3个小时， 反应结束， 将反应液冷却到室温， 滤出固体， 并用二氯甲垸洗涤滤饼， 滤液用二 氯甲垸萃取， 饱和食盐水洗涤， 干燥， 经柱层析分离纯化得到标题化合物， 棕色 油状物。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 6.69-6.96 (m, 1H)， 6.67-6.74 (m, 2H) , 4.08 (s， 2H), 3.64 (s， 3H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 202。

制备

将 2-溴 -4-甲氧基苯胺（1.2 g)溶解于无水二氧六环 （6mL)， 加入 2-溴吡啶 (0.68 mL), 三（二亚苄基丙酮）二钯 （100mg)， 4， 5-双二苯基膦 -9， 9-二甲基氧 杂蒽（50 mg)和碳酸铯 （2.87 g)， 加毕， 反应液在氮气保护下加热到 10(TC搅拌 反应 3小时， 反应结束， 减压浓缩。 残留物直接经硅胶柱分离得到标题化合物， 黄色固体。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 8.13 (s, 1H)， 7.99-8.00 (m, 1H)， 7.46-7.54 (m, 1H)， 7.22 (m, 1H)， 6.93-6.94 (m, 1H)， 6.63-6.66 (m, 2H)， 3.76 (s， 3H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 280。

1.4

将 N-(2-溴 -4-甲氧基苯基)吡啶基 -2-胺（l g)溶解于无水乙腈（10mL) 中， 然后加入碳酸钾 （590mg)， Ν，Ν'-二甲基乙二胺 （315 mg) 和碘化亚铜 （68mg)， 反应液在氮气保护下加热到 80°C反应过夜， 反应结束， 滤出固体， 滤液减压浓 缩， 浓缩液直接经硅胶柱分离得到标题化合物， 黄色固体。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 8.98-9.00 (d， 1H)， 7.90 (s， 1H)， 7.68-7.71 (d, 1H)， 7.58-7.60 (m， 1H)， 7.42-7.44 (m， 1H)， 7· 11- 7· 14 (m， 1H)， 6.92-6.95 (m, 1H)， 3.88 (s, 3H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 199。

1.5 -羟基-吡啶并 [1， 2a]苯并咪唑的制备

将 8-甲氧基-吡啶并 [1， 2a]苯并咪唑（100 mg)溶解于二氯甲垸 (3 mL) 中， 冷却到 -78°C， 然后慢慢加入三溴化硼 （0.096 mL)， 加毕， 在室温条件下反应 1 小时， 反应结束后， 用冰水淬灭， 然后加入甲醇 （5 mL), 用饱和的碳酸氢钠水 溶液洗涤， 用乙酸乙酯 （30 mLX 2) 萃取， 无水硫酸钠干燥， 浓缩得到标题化 合物， 淡黄色固体。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 9.54 (s， 1H)， 8.84-8.86 (d， 1H)， 7.60-7.62 (d, 1H)， 7.54-7.55 (m, 2H) , 7.38-7.40 (m, 1H) , 7.01-7.04 (d, 1H), 6.85-6.88 (m， 1H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 185。

步 骤 2 、 (2S)-2-((( 吡 啶 并 [1,2- a] 苯 并 咪 唑 - 7- 基 氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)-5-(2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以 8-羟基-吡啶并 [1， 2a]苯并咪唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制 得标题化合物。

¾匪 R (400 MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.50 (s， 1H)， 8.98-8.99 (d， 1H)，

8.19 (s， 1H)， 7.77-7.80 (m, 1H)， 7.64 (m, 1H)， 7.54 (m, 2H)，

7.40-7.43 (m， 1H)， 6.97-6.99 (m, 1H)， 6.07-6.13 (m, 2H) , 5.91 (m, 1H)， 5.51—5.55 (m, 1H)， 4.80—4.84 (m， 1H)， 4.41—4.44 (m, 1H)， 4.31 (m, 1H)， 3.88-4.02 (m, 1H)， 3.82-3.86 (m, 2H) , 1.21-1.26 (m, 6H)， 1.08-1.11 (m, 6H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 620。

实施例 24 (2S) -2- ( ( (9-甲基 咔唑- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4- 二氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸乙酯

以实施例 2步骤 1制备的 4-羟基 -9-甲基 -9H-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸乙 酯盐酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1 的方法， 制得目标化合物。

¾匪 R (300MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.46 (s, 1H)， 8.20-8.23 (d, 1H)， 7.61-7.63 (m, 1H)， 7.40-7.50 (m, 4H)， 7.17-7.24 (m, 2H) , 6.24-6.32 (m, 1H)， 5.90-6.05 (m, 2H) , 5.15 (s， 1H)， 4.83-4.89 (m, 1H)， 4.32 (m, 1H)， 4.04 (m, 1H)， 3.92-3.93 (m, 2H) , 3.84-3.92 (m, 5H)， 1.05-1.22 (m, 6H) , 1.01-1.02

(m， 3H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 619。

实施例 25 (2S) -2- ( ( (9-甲基 咔唑- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4- 二氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸环戊酯

步骤 1、 L-丙氨酸环戊酯盐酸盐的合成

称取 L-丙氨酸（8.9g， lOOmmol)投入 250mL圆底烧瓶中， 加入环戊醇 20ml， 在冰浴条件下， 缓慢加入二氯亚砜（11.9g， lOOmmol) , 缓慢升温至室温， 在室温 下反应过夜， 浓缩， 加入异丙醚， 在 -io°c条件下打浆， 析出大量白色固体， 过 滤， 得到标题化合物。

步骤 2、 (2S) -2- ( ( (9-甲基- ^"咔唑- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H)-基)- 4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基)甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸苄酯

以实施例 2步骤 1制备的 4-羟基 -9-甲基 -9H-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸环 戊酯盐酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得目标化合物。

¾匪 R (300MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.15 (s, 1H)， 8.21-8.24 (d, 1H)， 7.59-7.62

(m, 1H)， 7.41-7.50 (m, 4H)， 7.16-7.21 (m, 2H) , 6.22-6.26 (m, 1H)，

6.04-6.18 (m, 2H) , 5.19 (s， 1H)， 5.02-5.17 (m, 1H)， 4.44-4.45 (m, 1H)，

4.42 (m, 1H)， 4.01—4.02 (m, 1H)， 3.88—3.92 (m, 5H)， 1.25— 1.28 (m， 6H)，

1.21-122 (m， 8H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 659。

实施例 26 (2S) -2- ( ( (9-甲基- ^"咔唑- 4-基氧基）（（ (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二 氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸苄酯

以实施例 2步骤 1制备的 4-羟基 -9-甲基 -9H-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸苄 酯盐酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1 的方法， 制得目标化合物。

¾ NMR (300MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.508 (s， 1H)， 8.22-8.25 (d, 1H)， 7.59-7.62 (m, 1H)， 7.47-7.50 (m, 3H)， 7.38-7.41 (m, 4H)， 7.13-7.18 (m, 3H)， 6.36-6.40 (m, 1H)， 5.90—6.04 (m， 2H) , 4.83—5.15 (m, 3H)， 4.33—4.44 (m， 2H), 4.04 (m， 2H) , 3.88 (m， 3H)， 3.55 (m， 2H) , 1.24-1.26 (m， 6H)。 LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 681。

实施例 27 (2S) -2- ( ( (9-甲基- ^"咔唑- 4-基氧基）（（ (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二 氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸新戊

步骤 1、 L-丙氨酸新戊酯盐酸盐的合成

以 L-丙氨酸和新戊醇为原料，同实施例 25步骤 1的方法，制得标题化合物。 步骤 2、 (2S) -2- ( ( (9-甲基- ^"咔唑- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H)-基)- 4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基)甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸新戊酯

以实施例 2步骤 1制备的 4-羟基 -9-甲基 -9H-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸新 戊酯盐酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得目标化合物。

¾匪 R (300MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.48 (s, 1H)， 8.22-8.24 (d, 1H)， 7.59-7.62 (m, 1H)， 7.45-7.48 (m, 4H)， 7.15-7.22 (m, 2H) , 6.29-6.33 (m, 1H)， 5.91-5.98 (m, 1H)， 5.20-5.22 (s， 1H)， 4.46-4.47 (m, 1H)， 4.32 (m, 1H)， 4.29-4.31 (m, 1H)， 4.06-4.12 (m， 1H)， 3.96-3.99 (m， 1H)， 3.84-3.92 (m， 4H)， 3.80-3.87 (m， 2H) , 1.24-1.28 (m， 6H)， 1.22-1.23 (m， 9H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 661。

实 施 例 28 (2S)-2-(((9, 9- 二 甲 基 -5 ^ 芴 - 4- 基 氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)-5-(2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲 丙酯

步骤 1、 2'-甲基联苯- 2-

称取 2-甲基苯硼酸（lg， 7.35mmol) , 邻碘苯甲酸甲酯（1.75g， 6.7mmol) , Pd(dppf)Cl ₂ (0.47g, 0.67mmol) , 碳酸铯（2.8g， 20mmol)投于 250mL的茄形瓶 中， 然后加入 1， 4-二氧六环 50 mL和水 5 mL， 氮气保护下 90 °C反应 1.5 h， 反 应结束后， 加入乙酸乙酯（100 mL), 饱和氯化钠水溶液（50 mL), 用分液漏斗来 萃取， 水洗 3遍， 然后收集有机相， 用无水硫酸钠来干燥， 过滤、 浓缩， 柱层析 纯化得标题化合物。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =227

步骤 2 4-甲基- 9-芴酮的合成

称取步骤 1所得物 2'-甲基联苯 -2-羧酸甲酯（lg 4.42mmol) , 投于 lOOmL 的茄形瓶中， 然后加入浓硫酸 2ml， 室温搅拌 1.5 h， 停止反应， 将反应液倒入 冰水中， 加入饱和碳酸钠溶液， 调节 1¾值至中性， 加入乙酸乙酯（100 mL)， 用 分液漏斗来萃取， 水洗 3遍， 然后收集有机相， 用无水硫酸钠来干燥， 过滤， 浓 缩， 柱层析纯化得标题化合物。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =195

步骤 3 4 9 9—三甲基—9—芴的合成

在 50ml 的单口瓶中， 氩气置换 3 次， 量取二甲基锌甲苯溶液 (30ml 30mmol -50°C的条件下加四氯化钛 （3.5ml 60mmol) 搅拌 1小时， 再 将步骤 2所得物 4-甲基 -9-芴酮 （1.94g lOmmol) 加到 2ml 二氯甲垸中， 缓慢 滴入单口瓶中， 反应完全后， 倒入冰水中淬灭， 加入乙酸乙酯（500mL)， 用分液 漏斗来萃取， 水洗 3遍， 然后收集有机相， 用无水硫酸钠来干燥， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得标题化合物。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =209

步骤 4 9,9-二甲基 -4-羟甲基 -9

在 lOOmL的单口瓶中，加入步骤 3所得物 4 9 9-三甲基 -9-芴（1. lg 5 1) 四氯化碳 5ml NBS (lg 5.6mmol) 和偶氮二异丁腈（ΑΙΒΝ, 700mg 4.2mmol) , 加热回流过夜， 加入乙酸乙酯（500mL)， 用分液漏斗来萃取， 水洗 3遍， 然后收 集有机相， 用无水硫酸钠来干燥， 浓缩得到粗品。将所得粗品投入 250mL的单口 瓶中， 加入碳酸钾（910mg 6.6mmol)、 水 20ml禾 P 1 4-二氧六环 50ml， 加热到 90°C， 反应 3小时， 反应完全， 加入乙酸乙酯（500mL)， 用分液漏斗来萃取， 水 洗 3遍， 然后收集有机相， 用无水硫酸钠来干燥， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得标 题化合物。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =225

步骤 5 9,9-二甲基 -4-甲酰基 -9H-芴

将步骤 4所得物 9， 9-二甲基 -4-羟甲基 -9H-芴（400mg， 1.7mmol)投入 50mL的 单口瓶中，加入二氯甲垸 15ml，冰浴条件下加吡啶氯铬酸盐（PCC， 1.2g， 6mmol)， 反应完全后， 加入乙酸乙酯（200mL)， 用分液漏斗来萃取， 水洗 3遍， 然后收集 有机相， 用无水硫酸钠来干燥， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得标题化合物。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =223。

步骤 6、 4—羟基— 9,9—二甲基—9—

将步骤 5所得物 9，9-二甲基-4-甲酰基-911-芴（20011^， 0.95mmol)投入 50mL 的单口瓶中， 加入二氯甲垸 15ml， 冰浴下， 加间氯过氧苯甲酸 （mCPBA, 500mg, 3mmol), 升至室温， 室温搅拌过夜， 反应完全后， 加入乙酸乙酯（200 mL)， 用分 液漏斗来萃取， 有机相加 10%硫代硫酸钠水溶液洗 3遍， 用无水硫酸钠来干燥， 过滤， 浓缩干燥后， 加入 15ml 甲醇， K0H(56mg， lmmol) , 常温反应， 反应完全 后， 加入乙酸乙酯（200 mL), 用分液漏斗来萃取， 水洗 3遍， 然后收集有机相， 用无水硫酸钠来干燥， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得标题化合物。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ =211。

步骤 7、 (2S) -2- ( ( (9, 9-二甲基 芴- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二 氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基） 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯

以步骤 6所得物 4-羟基 -9， 9-二甲基 -9-芴、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐 酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方 法， 制得目标化合物。

¾匪 R (300MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.46 (s, 1H)， 8.20-8.23 (d, 1H)， 7.66-7.69 (m, 1H)， 7.38-7.47 (m, 4H)， 7.19-7.21 (m, 2H) , 6.23-6.27 (m, 1H)， 6.02-6.19 (m, 1H)， 5.86-5.95 (m, 1H)， 5.08 (s, 1H)， 4.88-4.90 (m, 1H)， 4.45-47 (m, 1H)， 4.30—41 (m, 1H)， 4.28—4.31 (m, 1H)， 3.92—3.94 (m, 2H) , 1.05-1.22 (m， 18H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 659。

实施例 29 (2S) -2- ( ( (9-环丙基 咔唑- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4- 二氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯 步骤 1、 4-甲氧基 -9H-咔

称取 4-羟基咔唑 (9. lg， 50励1)， 碳酸钾 (6. 9g， 50励1) 投入 500ml的 三颈瓶中， 加入 250ml 丙酮， 在冰浴条件下， 缓慢加入硫酸二甲酯（4. 8ml， 50mmol) , 室温下反应 2h， 反应结束后， 加入乙酸乙酯（100 mL)稀释， 有机相依 次用水，饱和食盐水洗， 干燥， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得标题化合物。

LC-MS m/z : [M+H] ⁺ = 198。

步骤 2、 9-环丙基 -4-甲氧基 -9H-

称取步骤 1 所得物 4-甲氧基 -9H-咔唑（3. 96g， 20mmol)、 醋酸铜（4. 0g， 20mmol)、 环丙基硼酸（3. 44g， 40mmol)和 DMAP (7. 32g， 60mmol)投入 500ml的茄 形瓶中，加入 200ml甲苯和 20ml二（三甲基硅基）氨基钠（NaHMDS) , 95°C反应 4h， 反应完全后， 加入乙酸乙酯（500 mL)稀释， 有机相依次用水，饱和食盐水洗， 干 燥， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得标题化合物。

LC-MS m/z : [M+H] ⁺ = 238。

步骤 3、 9-环丙基 -4-羟基- 9H-

称取步骤 2所得物 9-环丙基 -4-甲氧基 -9H-咔唑（1. 19g， 5mmol)投入 250ml 的茄形瓶中， 加入 100ml 二氯甲垸， 在 -50 °C条件下， 缓慢加入 BBr ₃ (7ml， 7. 5励1)，加毕， -20°C反应 4h， 反应完全后，缓慢加入 200ml水， 乙酸乙酯（500 mL)萃取， 有机相依次用水， 饱和食盐水洗， 干燥， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得 标题化合物。 LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 224。

步骤 4、 (2S) -2- ( ( (9-环丙基-^ "咔唑 -4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二 氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基） 磷酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以步骤 3所得物 9-环丙基 -4-羟基 -9H-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐 酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方 法， 制得目标化合物。

¾匪 R (300MHz, DMS0-c _e ) δ ppm: 11.45 (s, 1H)， 7.97-7.98 (d, 1H)， 7.53-7.56 (m, 2H)， 7.36-7.38 (m, 2H)， 7.27-7.30 (m, 3H)， 6.20-6.22 (m, 1H)， 6.18-6.20 (m, 1H)， 6.00-6.05 (m, 1H)， 5.31 (s， 1H)， 4.86-4.89 (m, 1H)， 4.45-4.47 (m, 1H)， 4.32- 4.33 (m， 1H)， 4.29-4.31 (m, 1H)， 3.87- 3.89 (m, 2H) , 2.42 (m， 1H)， 1.42-1.43 (m， 6H)， 1.32 (m， 2H) , 1.28 (m， 2H) , 1.23-1.24 (m， 6H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 659。

实施例 30 (2S) -2- ( ( (二苯并 [b， d]呋喃- 1-基氧基） ( ( (2R， 3R， 4R， 5R) -5- (2， 4- 二氧代 -3， 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸异

步骤 1、 3， 4， 6， 7， 8， 9-六氢二苯 - 1 (2H)-酮的制备

在 250mL 的三口瓶中， 加入 1， 3-环已二酮 （llg，0. lmol) ，环已酮 (10g, 0. lmol), 二甲苯 100ml, 对甲苯磺酸 0.45g (0. Olmol)， 加分水器， 170 °C回流 5h， 反应完全后， 冷却到室温， 浓缩， 柱层析纯化得标题化合物。

步骤 2、 1-羟基二苯并 [b， d]呋

在 250mL的单口瓶中， 加入步骤 1所得物 3， 4， 6， 7， 8， 9-六氢二苯并 [b， d]呋 喃 -1(2H)_酮 5.2g(0.027mmol)、 对异丙基甲苯 80mL， 10%Pa/C3g， 氮气保护下， 170°C回流 18小时， 反应完全后， 降温， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得标题化合物。 步骤 3、 (2S) -2- ( ( (二苯并 [b， d]呋喃- 1-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2， 4-二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸异丙酯的制备

以步骤 2所得物 1-羟基二苯并 [b，d]呋喃、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸 盐、五氟苯酚和（2'R) -2' -脱氧 -2' -氟 -2' -甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得目标化合物。

¾NMR( (300MHz, DMSO- d ₆ ) δ ppm: 11.49 (s, 1H)， 8.43 (m, 1H) , 8.16 (d, 1H) , 7.74 (d, 1H)， 7.53-7.38 (m, 5H)， 6.34 (m, 1H)， 6.05 (m, 1H)， 5.89 (m, 1H)， 5.37 (m, 1H) , 5.19 (m, 1H) , 4, 84 (m, 1H) , 4.45 (m， 1H)， 4.04 (m, 1H) , 3.91 (m， 2H), 1， 26-1· 10 (m， 12H)。

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 620。

实施例 31 (2S)- 2- (((5-甲基 - 6-氧代 - 5,6-二氢菲啶 - 10-基氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-

步骤 1、 3-羟基- N- (2-

将间羟基苯甲酸 （lg，7.25mmol) 溶于 20ML N， N_二甲基乙酰胺中， 0_4°C下 滴加二氯亚砜（1.3g， 10.9mmol)，加毕，室温反应 0.5h后，滴加邻碘苯胺（1.6g， 7.25mmol), 加毕， 室温下继续反应 3h， 反应完全后， 加水和乙酸乙酯萃取， 干 燥， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得标题化合物。

步骤 2、 3-甲氧基 -N- (2- 甲酰胺的制备

在 lOOmL的单口瓶中， 加入步骤 1所得物 3-羟基 -N- (2-碘苯基)苯甲酰胺 (0· 5g， 1· 47mmol)溶于 DMF， 冰浴下， 力 B NaH(0.2g， 4· 42mmol)， 搅拌 0.5h后， 加 硫酸二甲酯 1.33g(10.5mml)， 加毕， 室温反应 2h， 反应完全， 冰浴下加水淬灭， 乙酸乙酯和水萃取， 干燥， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得标题化合物。

步骤 3、 10-甲氧基 -5-甲基菲啶- 6 5H)-酮的制备

在 lOOmL的单口瓶中， 加步骤 2所得物 3-甲氧基 -N (2-碘苯基) 甲基苯 甲酰胺（0.5g 1.36 1)， 溶于 DMF20ml , 加 Pd (OAc) ₂ (50mg , 0.22mmol), PPh ₃ (70mg 0.267mmol), K ₂ C0 ₃ (0.4g, 2.9mmol) , 氮气置换三次， 160°C回流 3h 反应完全后降温， 加水和乙酸乙酯萃取， 干燥， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得标题 化合物

步 4, 10-羟基- 5-甲基菲啶- 6 ( -酮的制备

在 lOOmL的单口瓶中， 加步骤 3所得物 10-甲氧基 -5-甲基菲啶 -6 (5H)-酮 (0.15g 0.6mmol) , HBr/H ₂ 0 (40%, 5ml)， 乙酸 5mL 110°C反应， 反应完全后， 加水和乙酸乙酯萃取， 干燥， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得标题化合物。

步骤 5 (2S)-2-(((5- 甲 基 - 6-氧代 - 5,6-二氢菲啶 -10-基氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯

以步骤 4所得物 10-羟基 -5-甲基菲啶 -6 (5H)-酮、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙 酯盐酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1 的方法， 制得目标化合物。

¾ 匪 R (500MHz, DMS0-d ₆ ) δ ppm: 11.47 (s, 1H) 9· 04 (d 1H 8.30 (d, 1H) , 7.8-7.3 (m, 6H) 6.39-6.30 (m, 1H) 5.80-6.06 (m, 2H) 5.20 (m, 1H) 4.80 (m 2H), 4.40 -4.25 (m, 2H) , 3.91 (m, 2H) , 3.78 (s, 3H) , 1.05-1.25 (m 12H) LC-MS m/z: [M+H] + = 661

实施例 32 (2S) -2- ( ( (9-甲基 咔唑- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4- 二氧代 -3 4-二氢嘧啶 -1 (2H)-基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基) 磷酰基)氨基)丙酸甲酯

以实施例 2步骤 1所得物 4-羟基 -9-甲基 -9H-咔唑、 三氯氧磷、 L-丙氨酸甲 酯盐酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1 的方法， 制得目标化合物。

¾ 匪 R (300MHz, DMS0-d ₆ ) δ ppm: 11.47 (s, 1H) 8.23 (d, 1H) 7.61-7.63 (d, 1H 7.40-7.50 (m, 4H) 7.17-7.24 (m, 2H) , 6.24-6.32 (m, 1H) 5.90-6.05 (m, 2H) , 5.15 (s 1H) 4.83-4.89 (m, 1H) 4.32 (m, 1H) 4.04 (m 1H 3.92-3.93 (m 5H) 3.60 (s 3H) 1.05-1.25 (m 6H)

LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 605

实施例 33 (2S) -2- ( ( (9H-芴- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧代 -3 4- 二氢嘧啶 -1(2H)_基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨 基)丙酸异丙酯 步骤 1、 4-羟基- 9H-

以实施例 28步骤 2所得物 4-甲基 -9-芴酮为原料， 同实施例 28步骤 3、 4、 5和 6的方法制得标题化合物。

步骤 2、 4-羟基- 9H-芴的制

在 lOOmL 的单口瓶中， 加入步骤 1 所得物 4-羟基 -9H-芴 -9-酮（200mg， 1. 02mmol) , 溶于甲醇 20ml， 力 B 10%钯碳 20mg， 氢气分为下室温反应过夜， 反应 完全后， 过滤， 浓缩， 得标题化合物。

步骤 3、 (2S) -2- ( ( (9H-芴- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二 氢嘧啶 -1 (2H) -基) -4-氟 -3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基) 丙酸甲酯

以步骤 2所得物 4-羟基 -9H-芴、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯盐酸盐、 五氟苯 酚和（2' R) -2' -脱氧 -2' -氟 -2' -甲基尿苷为原料， 同实施例 1的方法， 制得目标 化合物。

¾匪 R (300MHz, DMSO— d ₆ ) δ ppm: 11. 46 (s， 1H)， 8. 23 (d, 1H)， 7. 61-7. 20 (m， 7H)， 6. 24-6. 32 (m, 1H)， 5. 85-6. 05 (m, 2H)， 5. 20 (s， 1H)， 4. 83 (m, 1H)， 4. 30 (m, 1H)， 4. 14 (m, 1H)， 3. 90 (m, 1H) , 3. 80 (d, 2H) , 3. 62 (m, 2H) , 1. 05-1. 25

(m， 12H)。

LC-MS m/z : [M+H] + = 618· 2。

实施例 34 (2S) -2- ( ( (9-氧代- 9H-芴- 4-基氧基） ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4-二氧 代- 3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基) -4-氟- 3-羟基- 4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷 酰基)氨基)丙酸异丙

以实施例 33步骤 1所得物 4-羟基 -9H-芴 -9-酮、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯 盐酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的 方法， 制得目标化合物。

¾匪 R (300MHz, DMSO— d ₆ ) δ ppm: 11.46 (s， 1H)， 8.23 (d, 1H)， 7.61-7.20 (m， 7H)， 6.24-6.32 (m, 1H)， 5.85-6.05 (m, 2H)， 5.20 (s， 1H)， 4.83 (m, 1H)， 4.30 (m, 1H)， 4.14 (m, 1H)， 3.90 (m, 1H) , 3.80 (d, 2H) , 1.05-1.25 (m, 12H)。 LC-MS m/z: [M+H] ⁺ = 632。

实施例 35 (2S)-2-(((5- 甲基 - 6-氧代 - 5,6-二氢菲啶 - 1-基氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基

步骤 1、 N- (3-羟基苯

于 500ml的单口瓶中， 加入间氨基苯酚 5g(45.9mmol)， 溶于 80ml THF中， 加入邻碘苯甲酸 14g(56.5mmol),EDCI13g(67.8mmol)和 DMAP1.3g(10.6mmol)，室 温搅拌过夜， 反应完全后， 浓缩， 加入乙酸乙酯和水萃取， 干燥， 过滤， 浓缩， 柱层析纯化得标题化合物。

步骤 2、 1-羟基- 5-甲基菲啶- 6 -酮的制备

以步骤 1所得物 N- (3-羟基苯基) 2-碘苯甲酷胺为原料， 按照实施例 31步骤 2、 3和 4的方法制得标题化合物。

步骤 3 、 (2S)-2-(((5- 甲 基 - 6-氧代 - 5,6-二氢菲 啶 - 1-基氧 基） (((2R, 3R, 4R, 5R)- 5- (2, 4-二氧代 -3， 4-二氢嘧啶- 1 (2H) -基）- 4-氟- 3-羟基 -4-甲基四氢呋喃 -2-基）甲氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯

以步骤 2所得物 1-羟基 -5-甲基菲啶 -6 (5H)-酮、 三氯氧磷、 L-丙氨酸异丙酯 盐酸盐、 五氟苯酚和（2' R) -2'-脱氧 -2'-氟 -2'-甲基尿苷为原料， 同实施例 1的 方法， 制得目标化合物。

¾匪 R (300MHz, DMSO— d ₆ ) δ ppm: 11.50 (s, 1H) , 9.0 (d, 1H) 8.23 (d, 1H)， 7.8-7.20 (m, 5H)， 6.40-6.30 (m, 1H)， 5.82-6.06 (m, 2H)， 5.20 (m, 1H)， 4.80 (m, 2H), 4.40 -4.25 (m, 2H) , 4.12 (m， 1H)， 3.91 (m, 1H) , 3.80 (m, 1H) , 3.65 (s， 3H)， 1.05-1.25 (m， 12H)。 LC-MS m/z : [M+H] + = 661。 实验例 1药理活性研究:

1. 实验材料

1. 1 试剂：

表 1. 试剂列表

试剂名称 供.、Ί

DMEM细胞培养基 Invitrogen 胎牛血清 (FBS) Gibco

L-谷氨酰胺 Invitrogen 青霉素 -链霉素溶液 Invitrogen

DPBS/Modified Hyclone

胰蛋白酶 /EDTA Invitrogen 二甲基亚砜（DMS0) Sigma

Bright - Glo Promega

细胞生长荧光滴定检测试

Promega

剂

1. 2 Huh7 lb细胞系：

Huh7 lb细胞系由上海药明康德新药开发有限公司提� ��， 为包含带有稳定的 荧光素酶 (Luc)报告子的 HCV lb复制子的 Huh7细胞系。 其通过基因重组技术将 HCV非结构蛋白基因、 neo (G418抗性） 及荧光素酶报告基因克隆入 pBR载体构 建。然后将携带有 HCV复制子的载体转染入 huh7细胞，通过 G418抗性筛选， HCV 复制子可稳定复制且相关蛋白和荧光素酶在 huh7细胞内稳定表达。 该细胞模型 用于抗 HCV化合物体外筛选。 通过检查荧光素酶的表达水平而测定化合物的 抗 HCV 的活性。 参见 Lohmann V, et al. 1999. Repl ication of subgenomic hepatitis C virus RNAs in a hepatoma cel l l ine. Science. 285 (5424)： 110-113.

1. 3 阳性对照药：

本发明实验例中使用的对照药结构为:

其为 W0 2008/121634 (PCT/US2008/058183) 实施例 25 的化合物 ， 即 (S) -2- { [ (2R, 3R， 4R， 5R) -5- (2， 4-二氧代 -3， 4-二氢 _2H_嘧啶 -1-基） -4-氟 -3-羟 基 -4-甲基 -四氢 -呋喃 -2-基甲氧基] -苯氧基-磷酰基氨基} -丙酸异丙酯 ( (S) -2- { [ (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2, 4- dioxo- 3， 4- dihydro- 2H- pyrimidin- 1- yl) - 4- f luoro-3-hydroxy-4-methyl-tetrahydro-furan-2-ylmethoxy] -phenoxy-phosp horylamino} -propionic acid isopropyl ester)。

该化合物参照 J. Org. chem， 2011, 76， 8311-8319中描述的方法制得并通过 氢谱和质谱鉴定。

2. 实验步骤： 2.1化合物准备： 用 POD 810全自动微孔板预处理系统 (LabCyte公司， 美国）将 以上实施例制备的本发明的化合物加入到孔板 中， 化合物起始终浓度均为 10 μ Μ， 每个化合物做双复孔， 3倍稀释 10个点， DMS0终浓度 0. 5%;

2.2细胞准备： 分别种 Huh7 lb细胞到 96孔板， 125 μ 1体系， 8 X 10 ³ 个细胞 /孔， 37°C， 5% C0 ₂ 培养箱培养细胞 72小时；

2.3细胞活性检测： 每孔加 30 μ 1细胞生长荧光滴定检测试剂， 37 °C， 5% C0 ₂ 培养箱培养细胞 1小时， 分光光度仪上检测荧光信号值， 所得数据用于化合 物细胞毒性计算；

2.4 Bright-Glo检测： 每孔加 100 μ 1荧光素酶发光底物 Bright-Glo, 5分钟内 用化学发光检测系统 EnVision ( PerkinElmer公司， 美国） 检测荧光信号 值， 所得数据用于化合物效力计算。

2.5数据处理：使用如下公式将所得数据转换为 细胞活力百分比 (Viabi l ity%) :

CPD

Viability % 100

ZPE

CPD: 化合物孔的荧光信号值

ZPE (Zero percent effect) 无效作用对照荧光信号值

使用如下 A、式将原始数据处理为抑制百分数（Inhibition) ：

CPD - HPE

Inhibition % 100

ZPE - HPE

CPD: 化合物孔的荧光信号值

HPE (Hundred percent effect)： 100%有效作用对照荧光信号值

ZPE (Zero percent effect)： 无效作用对照荧光信号值

将抑制百分数导入 GraphPad Prism进一步处理得出对应曲线和 EC ₅ 。值。 数 据见表 2。

表 2

本发明的化合物对 HCV感染模型 （HCVcc) 2a的抗病毒活性检测 1 实验材料

1. 1 化合物

以上实施例 2、 7和 25制备的本发明的化合物及对照化合物， 用 DMS0配制 成 10 mM母液后， 用含 0. 5% DMS0的 DMEM完全培养液稀释至 10 μ Μ， 然后依次 3倍稀释， 共 10个浓度。

1. 2 细胞

Huh 7. 5. 1细胞， 由药明康德 （上海） 新药开发有限公司提供。

1. 3 病毒

HCVcc报告病毒， 即转染了 luciferase和 GFP的 HCV全长突变株， 可以产 生与 JFH-1野生型具有相同感染能力的病毒， 由药明康德（上海）新药开发有限 公司提供。

1. 4试剂

DMEM细胞培养液 （DMEM medium), 购自美国 Invitrogen公司；

胎牛血清 (Fetal bovine serum, FBS)， 购自美国 Sigma公司；

L-谷氨酰胺 ( L (+) -Glutamine ), 购自美国 Invitrogen公司；

青霉素-链霉素 （Pen-Str印）， 购自美国 Invitrogen公司；

磷酸盐缓冲液 （Phosphate buffered sal ine, PBS), 购自美国 Hyclone公 司；

胰酶 （Trypsin), 购自美国 Invitrogen公司；

二甲基亚砜 (Dimethyl sulfoxide, DMS0), 购自美国 Sigma公司； 细胞裂解液 （lysis buffer), 购自美国 Promega公司；

Renillaluciferase检测试剂， 购自美国 Promega公司；

Alamar Blue检测试剂， 购自美国 Invitrogen公司。

1. 4仪器

EnVision多功能酶标仪， 购自美国 Perkin-Elmer公司。

2 实验方法

1) Huh7. 5. 1细胞准备： 收集对数期的 Huh 7. 5. 1细胞， 用 DMEM完全培养液重 悬后， 接种于 96孔板中 （7 X 10 ³ 个细胞 /孔）， 置于 37°C， 5% C0 ₂ 培养箱中培 养过夜；

2) 病毒感染： HCVcc报告病毒用 DMEM完全培养液重悬后， 加入 100 μ 1病毒上 清 （M0I = 0. 2 ) 至上述 96孔板中；

3) 化合物准备： 在 HCVcc报告病毒感染的 Huh7. 5. 1细胞中加入实施例 2、 实施 例 7、 实施例 25的化合物以及上述对照化合物， 每个化合物每个浓度设双复 孔； 同时设立无效作用对照组 （Zero percent effect, ZPE) 和 100%有效作 用对照组 （Hundred percent effect, HPE): ZPE组用含 0. 5% DMSO的完全 培养液代替化合物， HPE组孔为无病毒感染的细胞；

4) 细胞培养： 将 96孔板置于 37°C， 5% C0 ₂ 培养箱中培养 72 hr;

5) 抗 HCV病毒活性检测： 培养结束后， 弃去每孔上清， 向每孔中加入 20 μ ΐ 细胞裂解液和 luciferase检测试剂， 用 EnVision多功能酶标仪读取相对发 光强度 （RLU)， 原始数据用于化合物抗 HCV活性计算， 计算公式为：

Inhibi t ion% = (RLU _ZPE - RLU _CPD ) / (RLU _ZPE - RLU _HPE ) X 100 其中 RLU。 _PD 为测试化合物孔的荧光信号值， 为无效作用对照孔的荧光信号 值， RLU _HPE 为 100%有效作用对照孔的荧光信号值。

6) 细胞活力检测： 在 96孔板中种入相同数量的 Huh 7. 5. 1细胞， 并加入上述浓 度梯度的本发明的化合物处理 72 hr; 同时设立 DMS0溶媒对照组。 培养结束 后， 向每孔中加入 10% Alamar Blue检测试剂， 37°C， 5% C0 ₂ 培养箱培养 2 hr 后， 用 EnVision多功能酶标仪读取相对荧光强度（RFU)， 使用所得数据用于 化合物细胞毒性计算， 计算公式为：

Viabili ty% = RFU _CPD / RFU X 100

7) 数据处理： 将 Inhibition%、 Viabi l ity ^Q /c^别导入 GraphPad Prism软件进行 数据处理，得出化合物对 HCVcc的半数有效浓度 EC ₅ 。和半数细胞毒性浓度 CC ₅ 。， 实验结果见表 3。

表 3

从表 3可以看出， 对于 HCV体外细胞感染模型， 本发明实施例 2、 7和 25 的化合物具有优异的抗病毒活性， 同时对细胞毒性小。

另外， 实验还表明， 使用 HCV体外细胞感染模型， 本发明的实施例制备的其 他化合物如实施例 1、 5、 6、 8、 9、 10-1、 10-11、 11、 12、 13、 14、 15、 16-1、 16—11、 17、 18、 19、 20、 21、 22、 23、 24、 26、 27、 30、 31、 32、 33、 34、 35 等的化合物对 HCVcc GT2a病毒具有低的半数有效浓度 EC ₅ 。以及高的半数细胞毒 性浓度 CC ₅ 。， 显示出良好的抑制活性以及小的细胞毒性。

以上实验结果表明，本发明的化合物具有高效 的抑制 HCV病毒的能力， 与阳 性对照药相比， EC ₅ 。具有相当或更优异的效果，对于治疗 HCV感染具有好的前景。

尽管以上已经对本发明作了详细描述，但是本 领域技术人员理解，在不偏离 本发明的精神和范围的前提下可以对本发明进 行各种修改和改变。本发明的权利 范围并不限于上文所作的详细描述， 而应归属于权利要求书。