L'invention a également pour objet l'utilisation dudit extrait dans ou pour la préparation d'une composition, 1'extrait ou la composition étant destinés à diminuer la transpiration. L'invention a enfin pour objet un procédé de traitement cosmétique pour améliorer t'hygiène corporelle.

Le V. I. P. est un élément chimique polypeptidique élaboré et libéré par une cellule endocrine ou par une fibre nerveuse. Le V. I. P. est composé de 28 acides aminés. II fait partie de la famille de la sécrétine. L'analyse de sa séquence revte une forte homologie avec ce peptide ainsi qu'avec le glucagon et le PACAP (pituitary adenylate cyclase activating polypeptide).

A la périphérie, le V. I. P. est présent dans de nombreux tissus où ses fonctions peuvent tre diverses. II est souvent colocalisé dans les fibres nerveuses parasympathiques avec l'acétylcholine où sa libération potentialise t'affinité de l'acétylcholine pour son récepteur. II intervient également de façon très importante dans les échanges hydriques et électrolytiques. De nombreuses fibres nerveuses contenant-du V. I. P. sont présentes au niveau des glandes salivaires.

Au niveau de la peau, des fibres nerveuses V. I. P. positives sont décrites autour des glandes sudoripares eccrines et autour des glandes sébacées (Br. J. of Dermatol. 1990,65-76-Japanese J. of Physiology 1987, 3, 929-936).

Ainsi, des récepteurs spécifiques du V. I. P. ont été caractérisés sur les cellules sécrétrices des glandes sudoripares eccrines humaines. Une corrélation étroite a été rapportée entre la libération du V. I. P. par les fibres nerveuses autour des glandes sudoripares eccrines et un effet de ce V. I. P. sur la sécrétion sudoripare.

Le V. I. P. se lie à deux récepteurs, V. I. P. 1 et V. I. P. 2 (Sreedharan et al.

Biochemical and Biophysical Research Communications. 1993, vol. 2,546-

553.) qui sont tous deux couplés à une protéine G. La fixation du V. I. P. sur l'un ou l'autre de ses récepteurs active une protéine G qui à son tour active I'adénylate cyclase. Cette dernière transforme l'Adénosine TriPhosphate (ATP) en Adénosine MonoPhosphate cyclique (AMPc) qui provoque ensuite une cascade d'événements biochimiques intracellulaires aboutissant à l'effet physiologique.

Pour qu'une substance soit reconnue comme un antagoniste du V. I. P., elle doit répondre à l'une des caractéristiques suivantes : -la substance antagoniste doit tre capable d'inhiber la formation d'adénosine 3' : 5'-cyclic monophosphate (AMPc) induite par la fixation du V. I. P. sur son récepteur dans des cellules en culture (comme des kératinocytes) -la substance antagoniste doit tre capable de diminuer la libération d'histamine induite par le V. I. P. lors de la dégranulation des mastocytes.

A la connaissance de la demanderesse, aucun document de I'art antérieur n'envisage ni ne suggère qu'un extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis puisse avoir une activité antagoniste du V. I. P. telle que définie ci-dessus et donc puisse tre notamment utilisé pour traiter les désordres indiqués ci-dessus.

Dans fart antérieur les végétaux de la famille des Composés, genre Bellis sont connus pour tre utilisés dans des compositions destinées à favoriser la pousse des cheveux (SU 488589,-SU1130347 ; RU2066992), dans des compositions antipelliculaires (RU2044538), dans des compositions cosmétiques sous forme de masque pour la peau (RU2038070), sous forme de crème de soin anti- inflammatoire (SU1123696, SU1799593, RU2026669, RU2026667), de crème hydratante (SU1724242, RU2026668). Aucun de ces documents ne décrit les végétaux de la famille des Composés, genre Bellis comme ingrédient actif.

Et, à la connaissance de la demanderesse l'activité antagoniste du V. I. P. que présentent les végétaux de la famille des Composés, genre Bellis n'a jamais été décrite.

La demanderesse a découvert qu'un extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis répond aux caractéristiques définies comme caractérisant un antagoniste du V. I. P. et peut donc tre utilisé comme

antagoniste du V. I. P..

L'invention a donc pour objet l'utilisation dans ou pour la préparation d'une composition d'une quantité efficace d'au moins un extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis en tant qu'antagoniste du V. I. P..

L'extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis peut tre tout extrait préparé à partir de tout matériel végétal issu d'au moins un végétal de la famille des Composes, genre Bellis.

Ainsi, l'extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis utilisé selon l'invention peut tre obtenu à partir de matériel végétal issu de plante entière ou de partie de plante comme les feuilles, les tiges, les sommités florales (boutons floraux), les fleurs, les pétales, les racines ou encore des cellules indifférenciées.

Par cellules végétales indifférenciées, on entend toute cellule végétale ne présentant aucun des caractères d'une spécialisation particulière et capable de vivre par elle-mme et non en dépendance avec d'autres cellules. Ces cellules végétales indifférenciées sont éventuellement aptes, sous l'effet d'une induction, à toute différenciation conforme à leur génome.

Selon la méthode de culture choisie, et en particulier selon le milieu de culture choisi, il est possible d'obtenir, à partir d'un mme explant, des cellules végétales indifférenciées présentant des caractères différents.

Préférentiellement selon l'invention on utilise les sommités florales.

L'extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis peut tre tout extrait préparé à partir de tout matériel végétal issu d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis cultivé in vivo ou issu de culture in vitro.

Par culture in vivo on entend toute culture de type classique c'est à dire en sol à I'air libre ou en serre, ou encore hors sol.

Par culture in vitro, on entend l'ensemble des techniques connues de I'homme du métier qui permet de manière artificielle l'obtention d'un végétal ou d'une

partie d'un végétal. La pression de sélection imposée par les conditions physico-chimiques lors de la croissance des cellules végétales in vitro permet d'obtenir un matériel végétal standardisé et disponible tout au long de l'année contrairement aux plantes cultivées in vivo.

Préférentiellement selon l'invention on utilise un végétal issu de culture in vivo.

Toute méthode d'extraction connue de l'homme du métier peut tre utilisée pour préparer 1'extrait contenu dans la composition selon l'invention.

On peut en particulier citer les extraits aqueux, alcooliques ou utilisant un solvant organique.

Par solvant aqueux on entend tout solvant constitué totalement ou pour part d'eau. On peut citer ainsi l'eau elle-mme, les solvants hydroalcooliques en toute proportion ou encore les solvants constitués d'eau et d'un composé comme le propylène glycol en toute proportion.

Parmi les solvants alcooliques on peut citer notamment l'éthanoi.

On peut également utiliser un extrait préparé par la méthode décrite dans la demande de brevet français n° 95-02379 déposée par la demanderesse.

Ainsi, dans une première étape on broie le matériel végétal dans une solution aqueuse à froid, dans une deuxième étape les particules en suspension sont éliminées de la solution aqueuse issue de la première étape, et dans une troisième étape on stérilise'la solution aqueuse issue de la deuxième étape.

Cette solution aqueuse correspond à 1'extrait.

D'autre part, la première étape peut avantageusement tre remplacée par une opération de congélation simple des tissus végétaux (par exemple à-20°C), suivie d'une extraction aqueuse reprenant les deuxièmes et troisième étapes ci- dessus décrites.

Quel que soit le mode de préparation utilisé selon l'invention des étapes subséquentes visant à favoriser la conservation et/ou la stabilisation peuvent tre ajoutées sans pour cela modifier la nature mme de 1'extrait. Ainsi, par exemple l'extrait obtenu peut tre lyophilisé par toutes méthodes classiques de lyophilisation. On obtient ainsi une poudre qui peut tre utilisée directement ou bien mélanger dans un solvant approprié avant utilisation.

Préférentiellement, selon l'invention on utilise un extrait aqueux et encore plus préférentiellement un extrait réalisé avec un solvant composé d'eau et de propylène glycol, comme par exemple I'Herbasol0 vendu par la société COSMETOCHEM (Grasse, France).

Ainsi, selon un aspect particulier, l'invention a pour objet l'utilisation dans ou pour la préparation d'une composition d'une quantité efficace d'un extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis, I'extrait ou la composition étant destinés à traiter les désordres cutanés Dans le domaine des désordres cutanés, on a vu précédemment qu'il est connu que des fibres nerveuses V. I. P. positives sont présentes au niveau de la peau autour des glandes sudoripares eccrines et dans une moindre mesure autour des glandes sébacées, quedes récepteurs spécifiques du V. I. P. ont été caractérisés sur les cellules sécrétrices des glandes sudoripares eccrines humaines, qu'il existe une corrélation étroite entre la libération du V. I. P. par les fibres nerveuses autour des glandes sudoripares eccrines et un effet de ce V. I. P. sur la sécrétion sudoripare.

Or on sait que certaines personnes présententune hypersécrétion des glandes sudoripares eccrines, ce qui peut entraîner des désagréments (excès de transpiration, mauvaises odeurs, etc.). Ainsi on comprend l'utilité de disposer de composés et/ou compositions ayant une activité antiperspirante.

L'extrait de végétal de la famille des Composés, genre Bellis, du fait de son activité anti-V. I. P. peut dorrc tre utilisé pour combattre l'hypersécrétion des glandes sudoripares.

L'invention concerne donc plus particulièrement l'utilisation dans ou pour la préparation d'une composition d'une quantité efficace d'au moins un extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis, I'extrait ou la composition étant destinés à traiter l'hypersécrétion des glandes sudoripares.

La famille des Composés, genre Bellis comprend 5 espèces à savoir Bellis annua, Bellis perennis, Bellis silvestris, Bellis pumila et Bellis pappulosa.

Ainsi, l'extrait de végétai de la famille des Composés, genre Bellis de l'invention est un extrait préparé à partir de matériel issu d'au moins un végétal appartenant à une espèce choisie parmi Bellis annua, Bellis perennis, Bellis

silvestris, Bellis pumila et Bellis pappulosa.

Préférentiellement selon l'invention le végétal appartient à J'espèce Bellis perennis.

Selon l'invention, la quantité d'extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis utilisée dans la composition est bien entendu fonction de 1'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure.

Pour donner un ordre de grandeur, I'extrait peut tre en une quantité représentant de 0,001% à 20% du poids total de la composition et préférentiellement en une quantité représentant de 0,01% à 10% du poids total de la composition.

La présente invention a également pour objet une composition pour t'hygiène corporelle comprenant une quantité efficace d'au moins un extrait de végétal de la famille des Composées, genre Bellis.

Particulièrement la composition de l'invention est une composition pour diminuer l'hypersécrétion des glandes sudoripares.

La composition de l'invention peut tre une composition cosmétique ou dermatologique.

Préférentiellement la composition de l'invention est une composition cosmétique La présente invention a en outre pour objet un procédé de traitement cosmétique en vue de diminuer l'hypersécrétion des glandes sudoripares, caractérisé par le fait que l'on utilise par application sur la peau, sur les cheveux, et/ou sur les muqueuses, une composition cosmétique comprenant au moins un extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis dans un milieu cosmétiquement acceptable.

Par milieu cosmétiquement acceptable, on entend compatible avec la peau, le cuir chevelu, les muqueuses, les ongles, et les cheveux.

Le procédé de traitement cosmétique de l'invention peut tre mis en oeuvre notamment en appliquant les compositions hygiéniques ou cosmétiques telles

que définies ci-dessus, selon la technique d'utilisation habituelle de ces compositions. Par exemple : application de crèmes, de gels, de sérums, de lotions, de laits de démaquillage ou de compositions anti-solaires sur la peau ou de compositions pour spray.

Quelque soit la forme de la composition selon I'invention, la quantité d'extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis utilisée dans la composition est bien entendu fonction de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure.

Quelque soit la forme de la composition selon l'invention dans laquelle au moins un extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis est utilisé, celle-ci peut tre ingérée ou appliquée sur la peau (sur toute zone cutanée du corps), les cheveux, les ongles ou les muqueuses (buccale, jugale, gingivale, génitale, conjonctive). Selon le mode d'administration, la composition selon l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées.

Pour une application topique sur la peau, la composition peut avoir la forme notamment de solution aqueuse ou huileuse ou de dispersion du type lotion ou sérum, d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), ou de suspensions ou émulsions de consistance molle du type crème ou gel aqueux ou anhydres, ou encore de microcapsules ou microparticules, ou de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles.

Elles peuvent tre également utilisées pour les cheveux sous forme de solutions aqueuses, alcooliques ou hydroalcooliques, ou sous forme de crèmes, de gels, d'émulsions, de mousses ou encore sous forme de compositions pour aérosol comprenant également un agent propulseur sous pression.

Les quantités des différents constituants des compositions selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés.

Ces compositions constituent notamment des crèmes de nettoyage, de

protection, de traitement ou de soin pour le visage, pour les mains, pour les pieds, pour les grands plis anatomiques ou pour le corps, (par exemple crèmes de jour, crèmes de nuit, crèmes démaquillantes, crèmes de fond de teint, crèmes anti-solaires), des fonds de teint fluides, des laits de démaquillage, des laits corporels de protection ou de soin, des laits anti-solaires, des lotions, gels ou mousses pour le soin de la peau, comme des lotions de nettoyage, des lotions anti-solaires, des lotions de bronzage artificiel, des compositions pour le bain, des compositions désodorisantes comprenant un agent bactéricide, des gels ou lotions après-rasage, des crèmes épilatoires, des compositions contre les piqûres d'insectes.

Les compositions selon l'invention peuvent également consister en des préparations solides constituant des savons ou des pains de nettoyage.

Les compositions peuvent aussi tre conditionnées sous forme de composition pour aérosol comprenant également un agent propulseur sous pression.

La composition selon l'invention peut aussi tre une composition pour soins capillaires, et notamment un shampooing, une lotion de mise en plis, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant, une composition de teintures (notamment teintures d'oxydation) éventuellement sous forme de shampooings colorants, des lotions restructurantes pour les cheveux, une composition de permanente (notamment une composition pour le premier temps d'une permanente), une lotion ou un gel antichute, un shampooing antiparasitaire, etc.

Lorsque la composition est une émulsion, la proportion de la phase grasse peut aller de 5 % à 80 % en poids, et de préférence de 5 % à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les huiles, les cires, les émulsionnants et les coémulsionnants utilisés dans la composition sous forme d'émulsion sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine cosmétique.

L'émulsionnant et le coémulsionnant sont présents, dans la composition, en une proportion allant de 0,3 % à 30 % en poids, et de préférence de 0,5 à 20 % en poids par rapport au poids total de la composition. L'émulsion peut, en outre, contenir des vésicules lipidiques.

Lorsque la composition est une solution ou un gel huileux, la phase grasse peut représenter plus de 90 % du poids total de la composition.

De façon connue, la composition cosmétique peut contenir également des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les additifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans le domaine cosmétique, et par exemple de 0,01 % à 10 % du poids total de la composition.

Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent tre introduits dans la phase grasse, dans la phase aqueuse et/ou dans les sphérules lipidiques.

Comme huiles ou cires utilisables dans l'invention, on peut citer les huiles minérales (huile de vaseline), les huiles végétales (fraction liquide du beurre de karité, huile de tournesol), les huiles animales (perhydrosqualène), les huiles de synthèse (huile de Purcellin), les huiles ou cires siliconées (cyclométhicone) et les huiles fluorées (perfluoropolyéthers), les cires d'abeille, de carnauba ou paraffine. On peut ajouter à ces huiles des alcools gras et des acides gras (acide stéarique).

Comme émulsionnants utilisables dans l'invention, on peut citer par exemple le stéarate de glycérol, le polysorbate 60 et le mélange de PEG-6/PEG-32/Glycol Stéarate vendu sous la dénomination de TefoseR 63 par la société Gattefosse.

Comme solvants utilisables dans l'invention, on peut citer les alcools inférieurs, notamment t'éthanot et l'isopropanol, le propylène glycol.

Comme gélifiants hydrophiles utilisables dans l'invention, on peut citer les polymères carboxyvinyliques (carbomer), les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides tels que I'hydroxypropylcellulose, les gommes naturelles et les argiles, et, comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras comme les stéarates d'aluminium et la silice hydrophobe, éthylcellulose, polyéthylène.

La composition peut contenir d'autres actifs hydrophiles comme les protéines ou les hydrolysats de protéine, les acides aminés, les polyols, I'urée, I'allantoïne, les sucres et les dérivés de sucre, les vitamines hydrosolubles, les extraits végétaux et les hydroxy-acides.

Comme actifs lipophiles, on peut utiliser le rétinol (vitamine A) et ses dérivés, le tocophérol (vitamine E) et ses dérivés, les acides gras essentiels, les céramides, les huiles essentielles, I'acide salicylique et ses dérivés.

Selon l'invention la composition peut associer au moins un extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis à d'autres agents actifs destinés notamment à la prévention et/ou au traitement des affections cutanées. Parmi ces agents actifs, on peut citer à titre d'exemple : -les agents modulant la différenciation et/ou la prolifération et/ou la pigmentation cutanée tels que I'acide rétinoïque et ses isomères, le rétinol et ses esters, la vitamine D et ses dérivés, les oestrogènes tels que l'oestradiol, I'acide kojique ou I'hydroquinone ; -les antibactériens tels que le phosphate de clindamycine, I'érythromycine ou les antibiotiques de la classe des tétracyclines ; -les antiparasitaires, en particulier le métronidazole, le crotamiton ou les pyréthrinoïdes ; -les antifongiques, en particulier les composés appartenant à la classe des imidazoles tels que t'éconazote, le kétoconazole ou le miconazole ou leurs sels, les composés polyènes, tels que I'amphotéricine B, les composés de la famille des allylamines, tels que la terbinafine, ou encore l'octopirox ; -les agents anti-inflammatoires, particulièrement non-stéroïdiens tels que l'ibuprofène et ses sels, le diclofénac et ses sels, I'acide acétylsalicylique, I'acétaminophène ou l'acide ; glycyrrhétinique ; -les agents kératolytiques tels que les acides alpha-et bta- hydroxycarboxyliques ou bta-cétocarboxyliques, leurs sels, amides ou esters et plus particulièrement les hydroxyacides tels que I'acide glycolique, I'acide lactique, I'acide salicylique, l'acide citrique et de manière générale les acides de fruits, et I'acide n-octanoyl-5-salicylique ; -les agents anti-radicaux fibres, tels que l'alpha-tocophérol ou ses esters, les superoxyde dismutases, certains chélatants de métaux ou I'acide ascorbique et ses esters ; -les antiséborrhéiques ; -les antipelliculaires comme l'octopirox ou la pyrithione de zinc ; -les antiacnéiques comme l'acide rétinoïque ou le peroxyde de benzoyle ; -les extraits végétaux ou d'origine microbienne.

Les exemples et compositions suivants illustrent l'invention sans la limiter aucunement. Dans les compositions les proportions indiquées sont des pourcentages en poids.

Exemple 1 : Préparation d'un extrait de Bellis perennis : 100 g de fleurs séchées de Bellis perennis sont broyées dans un broyeur à fléau, équipé d'un tamis de 1 mm de diamètre. Ces 100 g de broyat sont ensuite mis à macérer dans 1 litre d'eau déminéralisée pendant 15 minutes à 4°C. (bain de glace). La préparation ainsi obtenue est filtrée à 0,22 m (filtration stérilisante).

L'extrait ainsi préparé est conservé à 4°C. L'extrait obtenu peut tre lyophilisé.

Le traitement à froid permet de geler les activités enzymatiques, la filtration stérilisante évite la dégradation des actifs par les micro-organismes de t'environnement. Enfin, le véhicule eau facilite les formulations cosmétiques.

Exemple 2 : Activité biologique d'un extrait de Bellis perennis : 1) Test d'affinité réceptorielle : Ce test est réalisé sur des cellules de la lignée HT-29 (adénocarcinome de colon humain) (Biochem. J., 1985, vol. 231, p 139-143). Les cellules sont ensemencés à 40000 cellules/cm2 en flacon de 25 cm2 en milieu DMEM (vendu par la société Gibco BRL) contenant 10% de sérum de veau foetal et incubées à 37°C en atmosphère C02/air (1 : 9). Les celluies sont récupérées après 4 à 5 jours (en phase exponentielle de croissance) à l'aide d'une solution saline 0.13 M phosphate pH 7,2 contenant 3 mM d'EDTA. Elles sont centrifugées à 2000 g pendant 5 min à 4°C. Le culot est repris par un tampon Hepes 5 mM hypo- osmotique à pH 7,5. Après 15 min. dans la glace, la suspension est homogénéisée. L'homogénat est alors centrifugé à 30000 g pendant 10 min..

Le culot est lavé trois fois avec un tampon Hepes 60 mM pH7,5. La préparation membranaire ainsi obtenue est conservée à-80°C ; les protéines sont dosées selon la méthode de Bradford (avec la BSA comme standard).

Le test consiste à incuber la préparation membranaire précédente (environ 100 pg/ml) pendant 60 minutes à 30°C en présence de'251-V. I. P. (et autres composés si nécessaire) en tampon Hepes 60 mM pH 7,5 contenant 2% de

sérum albumine bovine et 0,1% de bacitracine. La réaction est stoppée en transférant le milieu d'incubation dans du tampon froid. Le V. I. P. radioactif lié à la préparation membranaire est ensuite séparé par centrifugation à 30000 g pendant 10 min à 4°C puis la radioactivité est mesurée au moyen d'un compteur à scintillation.

La mesure de t'affinité réceptorielle de l'extrait de Bellis perennis pour le récepteur au V. I. P. est mise en évidence en ajoutant dans le milieu d'incubation des doses croissantes de 1'extrait.

Les valeurs décroissantes de radioactivité mesurée sont le reflet d'une compétition sur le récepteur entre le ligand naturel radiomarqu6, 121 I_V. I. P., et l'extrait de Bellis perennis.

L'extrait de t'exempte 1 (à 10% de sommités florales broyées par volume d'eau équivalent) et un extrait commercial dénommé Herbasol0 vendu par la société COSMETOCHEM (à 5% de somités florales broyées par volume de mélange propylèneglycole/eau/phenonix) ont été testés en parallèle.

Les valeurs d'IC50 (concentration inhibant 50% de la liaison spécifique du ligand naturel pour son recepteur) obtenue avec les deux extraits sont présentées dans le tableau ci-dessous IC50 Extrait Herbasol de Bellis perrenis 1, 2 Extrait aqueux de Bellis perrenis 2,8 Ces résultats mettent clairement en évidence une affinité de l'extrait de Bellis perennis, quelque soit sont mode de préparation pour le récepteur au V. I. P.

2) Mesure de l'augmentation du taux d'AMPcyclique (AMPc) induit par le V. I. P.

: effet d'un extrait de Bellis perrenis.

Ce test est réalisé sur des cultures primaires de kératinocytes issus des cellules glandulaires. Les cellules sont cultivées en milieu KGM (Keratinocytes Growth Medium) à 37°C en atmosphère contenant 5% de CO2. Elles sont ensemencées à 20000 cellules/cm2 en plaques de 24 puits et utilisées entre 3 et 7 jours après t'ensemencement.

Le test consiste à incuber les cellules dans le milieu de culture habituel pendant 30 min à 37°C en présence de V. I. P. (et/ou d'autres composés) et d'un agent bloquant la dégradation d'AMPc tel que 1'3-isobutyl-1-méthylxanthine (IBMX).

La réaction est stoppée par addition d'acide perchlorique (70%, 11 N) et I'AMPc produit est mesuré dans le surnageant par une méthode immunoenzymatique (kit Amersham cAMP EIA System RPN 225). Le dosage est basé sur la compétition entre I'AMPc produit par les cellules et une quantité donnée d'AMPc couplé à la peroxydase, pour un nombre limité de sites de liaison AMPc. La quantité d'AMPc couplée à la peroxydase liée aux sites est révélée par addition d'un substrat (tetramethylbenzidine hydrogen peroxyde) et mesurée par lecture spectrophotométrique. La quantité d'AMPc à doser dans le surnageant de culture sera donc inversement proportionnelle à la quantité d'AMPc couplé à la peroxydase ainsi mesurée.

Ce test complémentaire du test d'affinité permet de mettre en évidence non seulement une compétition entre le V. I. P. et l'échantillon à tester pour le récepteur au V. I. P., mais également un effet agoniste ou antagoniste.

L'extrait de l'exemple 1 et un extrait commercial dénommé Herbasol (D vendu par la société COSMETOCHEM's ont été testés dans 2 expériences en parallèle.

Les résultats présentés dans le tableau ci-dessous sont exprimés en pourcentage d'inhibition de ta liaison spécifique du ligand naturel. pmole d'AMPc/10000 cellules Milieu de culture 7, 4 V. I. P. (10-6M) 25,6 V. I. P. (10-°M) + Herbasol (E) de Bellis perrenis 5,8 (a 10% de matière sécher pmoled'AMPc/10000 cellules Milieu de culture 1,08 V. l. P. (10-°M) 10 51 V. I. P. (10-6M) + extrait aqueux de Bellis perrenis 4,27 (à 5% de matière sèche) (exemple 1) 1 i

Ces résultats démontrent que l'extrait de Bellis perrenis, quelque soit son mode de préparation, agit comme un antagoniste du V. I. P..

Exemple 3 : Exemples de compositions comprenant au moins un extrait d'au moins un végétal de la famille des Composés, genre Bellis illustrant l'invention. Ces compositions, sauf indication contraire sont obtenues par simple mélange des divers ingrédients : Composition 1 : Crème antitranspirante aqueuse (huile/eau) (nomenclature CTFA) Phase A : grasse -Alcool cétéarylique (corps gras, gélifiant) 4,00 % -Stéaratede glycérol (corpsgras, gélifiant) 2,50 % -Steareth-25 (émulsionnant) 1,05 % -Alcool stéarylique (corps gras, gélifiant) 1,05 % -Cétéareth-33 (émulsionnant) 1,00 % -Diméthicone 1,00 % -Céteth-20 (émulsionnant) 0,40 % -Conservateur qs Phase B : aqueuse -Herbasol0 de Bellis perrenis 5,00 % -Conservateur qs -vEau qsp 100 % Phase C : -Parfum qs -Bactéricide qs Phase D : -Talc 1,00 %

Mode opératoire : Chauffer la phase B à 70-80 °C, sous agitation. Chauffer la phase A à 70-80 °C. Lorsque les deux phases sont bien homogènes, incorporer A dans B, sous agitation forte pendant 10 min. Refroidir sous agitation plus faible. A 45 °C, ajouter la phase C prémélangée. Agiter fortement pendant 5 min. Refroidir sous agitation plus faible. Vers 30 °C, incorporer lentement la phase D. Poursuivre le refroidissement jusqu'à la température ambiante.

On obtient une crème souple et douce, à effet poudré à l'étalement procurant une protection efficace contre la transpiration.

Composition 2 : Crème anhydre antitranspirante (nomenclature CTFA) Phase A : -Stearalkonium hectorite (gélifiant) 4,20 % -Propylène carbonate (agent de mise en suspension) 1,40 % -Caprylic/Capric Triglycerides 29,40 % -Diméthicone 5,00 % -Isohexadecane (solvant) qsp 100 % Phase 8 : -HerbasolO de Bellis perrenis 3,00 % -Talc 1,00 % Phase C : -Parfum qsp Phase D : -Talc 6,00 % Mode opératoire : Mélanger les composés de la phase A à température ambiante. Incorporer ensuite la phase C, toujours à température ambiante.

Lorsque tout est homogène, incorporer B et D lentement.

La crème obtenue est particulièrement douce, non grasse, non collante, et procure par son impact sec, une sensation de plus grande sécurité contre l'humidité axillaire.

Composition 3 : Aérosol (nomenclature CTFA) Phase A :

-Cyclométhicone qsp 100 % -Quaternium-18 bentonite 3,00 % -Triéthylcitrate 7,00 % -Diméthiconol 1,40 % -Isopropyl palmitate 6,00 % Phase B : -Herbasol de Bellis perrenis 5,00 % Phase C : -Talc 1,50 % Mode opératoire : Mélanger les ingrédients de la phase A à froid. Ajouter lentement le chlorohydrate d'aluminium, puis le talc. Mélanger vigoureusement pour obtenir une suspension homogène. Cette dernière peut ensuite tre pressurisée de la façon suivante : 13 % de jus, 87 % de gaz comprimé ou liquéfié.

Le jus délivré laisse un impact doux, poudré sur la peau assurant la protection contre la transpiration.

Composition 4 : Poudre compactée -Chlorure de magnésium (antitranspirant) 5,00 % -Kaolin 10,00 % -Herbasol (E) de Bellis perrenis 5,00 -Parfum 0,30 % -Talc qsp 100 % Composition 5 : Stick déodorant -HerbasolS) de Bellis perrenis 8,00 % -Alcool stéarylique 24,00 % -Distéarate de PEG-400 6,00 % -Cire hydrocarbonnée 4,00 % -Cyclométhicone 46,00 %