ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изменение цвета зубов (дисколорит) является достаточно частой причиной наруше- ния эстетики улыбки. Распространенность данного состояния в структуре стоматологиче- ской патологии составляет около 15%. По данным Горюновой М.В. [1] приобретенные дис- колориты встречаются в 3,2 раза чаще, чем врожденные. В структуре приобретенных дис- колоритов преобладает среднее окрашивание (48,55%), а в структуре врожденных - силь- ное (62,5%).

Причинами диско лорита могут быть воздействия внутренних факторов: окрашива- ние зубов при наследственных поражениях, системных поражениях, при приеме некоторых медикаментов в период одонтогенеза, при поражениях пульпы зуба, под влиянием ятроген- ных факторов и др. [2].

Также выделяют широкий спектр внешних факторов, влияющих на цвет эмали.

Дисколорит эмали может проявляться из-за жизнедеятельности различных бакте- рий. Так, S.Mutans образуют биопленку зубного налета, к которому уже прикрепляются раз- личные хромофоры. Actinomycetes в свою очередь продуцируют сульфид водорода, кото- рый после реакции с катионами железа, находящимися в слюне, образует нерастворимый осадок сульфида железа черного цвета. Serratia marcescens, Flavobacterium lutescens явля- ются менее распространенными, они присутствуют в ротовой полости лишь у 3% населе- ния, приводя к образованию налета оранжевого цвета [19].

Также эмаль может приобретать оттенок вследствие проникновения в пелликулу различных металлов. Так, присутствие меди приводит к зеленоватому оттенку эмали [20].

Использование продуктов, богатых эфирными маслами, а также ополаскивателей для полости рта, содержащих значительное количество эфирных масел приводит к окраши- ванию эмали в желтый цвет [20]. Аналогичным образом появляется фиолетовое окрашива- ние, вызванное присутствием перманганата калия в жидкостях для полоскания рта [21].

Антибактериальные компоненты, широко распространенные в стоматологической практике, также приводят к изменению цвета эмали. Так, использование хлоргексидина и триклозана приводит к сильному потемнению эмали вследствие протекания химических реакций [22]. Поверхностное окрашивание зуба происходит также при проникновении хромоге- нов в пелликулу зуба. Основными видами пищевых продуктов, вызывающих прямое окра- шивание, являются табак, чай, кофе, содержащие полифенольные и другие пигменты [3-5]. Химическая природа самих пигментов крайне разнообразна. Например, наиболее извест- ными являются танины, которые содержатся в большом количестве в красном вине.

Наиболее сложными по своей природе являются пигменты, которые образуются в результате реакции Маяйра. К таким реакциям относится взаимодействие аминокислот и сахаров при нагревании, например, в процессе обжаривания кофейных зерен. В результате образуются продукты темного цвета, свидетельствующие о протекании реакции Майяра.

[27]. Эти продукты называются меланоидинами и имеют сложную чаще всего разветвлен- ную полисахаридную структуру, для разрушения которой требуется комплексный подход с использованием разнообразных подходов. Кроме того, пищевые белки и углеводы (поли- сахариды) также могут вступать в реакции конденсации и полимеризации в пелликуле, вследствие чего образуется ряд веществ, имеющих окраску [6]. Трудность в разрушении таких молекул состоит в том, что они образуют сложные структуры, состоящие из частей разных молекул, которые отличаются по своей химической природе, поэтому для осветле- ния меланоидинов необходимо разрабатывать комплексные подходы с ипользованием не- скольких ферментов. Таким образом, основными группами хромогенов, вызывающих окра- шивание эмали, являются бактерии, полифенольные соединения, меланоидины, танины, та- бачные смолы, прочие вещества (хлоргексидин, триклозан).

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Существующие на рынке продукты позволяют в той или иной мере решить проблему отбеливания, однако каждый из них не лишен недостатков.

Самыми популярными являются продукты, которые обеспечивают осветление эмали, в первую очередь, за счет механического удаления налета. Недостатком этого ме- тода является возможность повреждения пелликулы и собственно эмали зуба (как в случае с использование угля в качестве абразива [7-11]). При этом не всегда удается добиться же- лаемого отбеливающего эффекта, поскольку низкомолекулярные пигменты проникают вглубь эмали, способствуя образованию стойких окрашивающих пятен, которые невоз- можно удалить с использованием только механического воздействия. Механические спо- собы в больше степени направлены на удаление бактериальной биопленки, но только на ранних стадиях образования. В случае формирования более стойких отложений, необхо- димо использовать профессиональные методы отбеливания эмали. Более эффективно в этом отношении работают системы отбеливания с применением активных форм кислорода (перекись водорода и ее производные), однако возможности их применения в зубных пастах и ополаскивателях ограничены, поскольку они приводят к об- разованию эрозированных зон на поверхности эмали. Это, в свою очередь, приводит к по- вышению чувствительности и образованию кариеса [12]. Другим способом преодоления дисколорита является применение альфа-гидроксикислот (АНА-кислоты). Вместе с тем, эффективность кислотного отбеливания до сих пор не доказана [13], а воздействие кислот приводит к растворению эмали, и, как следствие, повышению чувствительности зубов, де- минерализации, эрозии и кариесу. [14-16].

Не так давно были продемонстрированы подходы к оптическому отбеливанию, ос- нованные на использовании синего пигмента Covarine Blue (Cl 74160, Phthalocyanine Blue BN и т.п.), однако он специфичен только к слабоокрашенной эмали, и для большинства людей, имеющих сильный пигментированный налет, не дает желаемой силы отбеливания [17].

Методы ферментативного отбеливания обладают существенным преимуществом, так как являются безопасными для эмали и не приводят к ее разрушению, но оптимального состава ферментов в продуктах, известных на рынке, пока не существует. Из ферментатив- ных способов, которые относятся к типу бережного отбеливания эмали, известно несколько изобретений для ухода за полостью рта. Однако большинство данных разработок направ- лены на расщепление белкового налета или на защиту от кариеса. Как таковых отбеливаю- щих систем, основным действующим компонентом которых являлись бы ферменты, не су- ществует. Например, папаин и бромелаин расщепляют белковый налет, но они не обесцве- чивают пигменты, проникающие вглубь эмали, что приводит к необходимости использова- ния других отбеливающих веществ, например, пероксидов. Также, большинство компози- ций направлены на комплексное расщепление налета и зубного камня в совокупности с от- беливающим действием, что приводит к необходимости использования несовместимых компонентов. Например, одновременное использование протеолитических ферментов и любых компонентов белковой природы, например ферментов амилазы, целлюлазы, ксила- назы, приводит к деструкции последних, так как протеолитические ферменты расщепляют белки до коротких пептидов и аминокислотных остатков. Соответственно, все разработки, направленные на одновременное расщепление белкового и полисахаридного налета, ока- зываются малоэффективными, так как ферменты, расщепляющие полисахаридный налет, имеют белковую природу. Более того, изобретения, которые направлены на достижение от- беливающего эффекта, действуют за счет расщепления бактериального налета, который мо- жет вновь образовываться, что нивелирует эффект отбеливания. Кроме того, некоторые из запатентованных комплексов содержат в себе компоненты, несовместимые с компонентами зубных паст. Например, одновременное введение загустителя карбоксиметилцеллюлозы и фермента целлюлазы приводит к разрушению загустителя, так как данный фермент имеет субстратную специфичность по отношению к целлюлозам. Это может привести к сниже- нию активности фермента в готовом продукте, так как часть его будет расходоваться на химическую реакцию с загустителем.

В патенте РФ RU2300366C2 (опубл. 10.06.2007) раскрыта двухкомпонентная компо- зиция средства для чистки зубов, имеющая повышенную антибактериальную эффектив- ность. Ферменты, которые можно применять при осуществлении раскрытой композиции, включают ферменты, экстрагированные из естественных плодовых продуктов, таких как хорошо известные белковые вещества в пределах класса протеаз, которые разрушают или гидролизуют белки. Протеолитические ферменты получают из естественных источников или действием микроорганизмов, имеющих источник азота и источник углерода. Примеры протеолитических ферментов, которые можно применять при осуществлении настоящего изобретения, включают естественно встречающиеся ферменты папаин (из папайи), броме- лаин (из ананаса), а также протеазы серина, такие как химотрипсин. Дополнительные фер- менты включают фицин и алкал азу. Папаин, полученный из млечного сока дерева папайи, представляет собой протеолитический фермент, предпочтительный для применения в рас- крытой композиции. Ферменты, которые можно использовать в комбинации с протеолити- ческими ферментами, включают карбогидразы, такие как глюкоамилаза, альфа-амилаза, бета-амилаза, декстраназа и мутаназа, танназа, и липазы, такие как растительная липаза, желудочная липаза и панкреатическая липаза. Однако недостатком данного изобретения является использование протеолитических ферментов совместно с ферментами класса кар- богидраз. Протеолитические ферменты разрушают практически все белки, в том числе и ферменты, которые являются веществами белковой природы. Таким образом, данное изоб- ретение содержит в себе компоненты, которые ингибируют действие друг друга, что при- водит к снижению или полному отсутствию эффективности использования данной компо- зиции. Более того, в патенте предлагается использование фермента глюкоамилазы, которая не обладает свойством расщепления молекул полисахаридов, так как для этих целей необ- ходимо использовать альфа-амилазу. Также предлагается использовать в композиции соли олова, в частности фторид олова, а он обладает окрашивающим действием на эмаль. В европейской публикации ЕР2298904А1 (опубл. 23.03.2011) раскрыты ксиланазы и возможность их применения в средствах для ухода за зубами, таких как зубные пасты, зуб- ные кремы, гели или зубные порошки, средства для омывания полости рта, жевательные резинки, леденцы или конфеты. Однако использование только одного фермента является недостаточным для получения эффекта отбеливания, так как налет имеет более сложную полисахаридную природу. Расщепление только одного полисахарида не приведет к желае- мому эффекту отбеливания, поскольку для удаления пигментированного налета необхо- димо разрушить структуру всех молекул.

В европейской заявке ЕР2280686А1 (опубл. 23.03.2011) раскрыты a-глюканазы и возможность их применения в средствах для ухода за зубами для предотвращения или уменьшения зубного налета. Применение a-глюканаз приводит к уменьшению зубного налета, но так как многие хромогены проникают вглубь эмали, то недостаточно избавиться только от полисахаридного налета для получения эффекта отбеливания. К недостатку дан- ного изобретения можно отнести целенаправленное расщепление только 1,6-а-глюкозид- ных связей декстрана, а полисахаридный налет состоит из смеси полисахаридов (внутри- клеточные, состоящие преимущественно из резервных полимеров типа гликогена, ами- допектина, и внеклеточные, являющиеся декстринами и леванами), и для эффективного рас- щепления налета необходимо использовать компоненты, которые разрушают все связи по- лисахаридной матрицы.

Известна линейка зубных паст HappyDent (У краина) («Зубные пасты для взрослых без фтора», он-лайн, <URL:http://www.happy- dent.pro/ru/products/toothpastes_without_fluoride>), содержащих Амилолин® - сочетание натурального фермента Амилосубтилина, витаминного комплекса (витамины группы В, С, Е, РР, К, А) и минералов. Натуральный фермент Амилосубтилин представляет собой ком- плекс ферментов (альфа-амилаза, нейтральные и слабощелочные протеиназы, бета-глю- каназа, целлюлаза, ксиланаза), которые препятствуют образованию зубного налета и камня. Ферменты оказывают очищающее действие на ротовую полость, способствуют расщепле- нию белкового налета.

Одновременное сочетание протеаз и гидролаз приводит к разрушению последних из- за их белковой природы, в результате комплекс теряет свою эффективность в рецептуре зубной пасты. Фермент папаин способствует расщеплению белкового налета, но не разру- шает окрашивающие эмаль меланоидины. В связи с чем, даже при тщательном избавлении от белкового и полисахаридного налета, цвет эмали изменяется незначительно. Новый разработанный отбеливающий комплекс, способен в значительной мере пре- одолеть вышеописанные недостатки и направлен на осветление продуктов реакции Майяра, одними из продуктов которой являются меланоидины, придающие стойкую окраску зубной эмали [18].

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к композиции для применения в составе для ухода за полостью рта, содержащей комбинацию ферментов пектиназы, ксиланазы и b-глю- каназы.

В одном аспекте композиция по изобретению может дополнительно содержать наполнитель.

В другом аспекте композиция по изобретению может содержать 0,05-0, 15 % мас.пек- тиназы, 0,05-0,15 % мае. ксиланазы, 0,01-0,05 % мае. бета-глюканазы и до 100 % мае. напол- нителя.

В другом аспекте композиция по изобретению может содержать около 0,2 % мас.пектиназы, около 0,2 % мае. ксиланазы, около 0,1 % мае. бета-глюканазы и до 100 % мае. наполнителя.

В другом аспекте композиция по изобретению может содержать 0,1 -1,0 % мас.пек- тиназы, 0, 1-1, 0 % мае. ксиланазы, 0,05-0,6 % мае. бета-глюканазы и до 100 % мае. наполни- теля.

В еще одном аспекте композиция по изобретению дополнительно содержать фос- фаты: глицерофосфат кальция, пирофосфат кальция, пирофосфат тетракалия, пирофосфат тетранатрия, пирофосфат динатрия, фосфат трикальция, фосфат тримагния, триполифосфат натрия, гексаметафосфат натрия.

В другом аспекте фосфаты содержатся в композиции в количестве 0,5-4, 5 % мае.

В другом аспекте фосфаты содержатся в композиции в количестве 0, 5-3,0 % мае.

В другом аспекте фосфаты содержатся в композиции в количестве 0,5- 1,0 % мае.

Настоящее изобретение также относится к зубной пасте, содержащей композицию по изобретению.

Настоящее изобретение также относится к ополаскивателю для полости рта, содер- жащему композицию по изобретению.

Настоящее изобретение также относится к применению композиции по изобретению для отбеливания зубов. Настоящее изобретение также относится к применению зубной пасты по изобрете- нию для отбеливания зубов.

Настоящее изобретение также относится к применению ополаскивателя по изобре- тению для отбеливания зубов.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Заявленное комплексное средство для отбеливания зубов содержит комбинацию ферментов групп пектин азы, ксиланазы и b-глюканазы.

Пектиназа - общий термин для ферментов, расщепляющих пектин. Включает пекто- лиазу, пектозим и полигалактуроназу. Относится к гетерогенной группе ферментов, ката- лизирующих деградацию пектина. В составе пектиназ можно выделить следующие группы ферментов:

-Пектинэстеразы (класс ферментов 3.1.1.11, пектинметилгидролазы) катализируют отщепление метальных групп пектина с образованием пектиновой кислоты.

-Полигалактуроназы (класс ферментов 3.2.1.15) осуществляют гидролиз а-1,4-гли- козидных связей в цепи пектиновых веществ. Подразделяются на полиметилгалактуроназы (действуют на пектин) и полигалактроназы (действуют на пектиновую кислоту).

-Пектанлиазы (класс ферментов 4.2.2.10) катализируют негидолитаческое ращепле- ние пектина. Пектолитаческие препараты разделяют на две группы в зависимости от рН- оптимума работы ферментов: кислые и щелочные. Эта свойства определяют возможность применения пектиназ для разных отраслей промышленности. Кислые пектиназы приме- няют в производстве соков и вин, а щелочные - для текстильной промышленности.

В качестве возможных продуцентов пектиназ рассматриваются многие микроорга- низмы: микроскопические грибы, дрожжи, бактерии. Пектиназы, полученные с помощью грибных штаммов продуцентов, активны в кислых значениях pH, в то время как щелочные ферменты производятся бактериальными штаммами. Наиболее распространенной техноло- гией является получение пектиназы из Aspergillus niger с использованием методов глубин- ного и поверхностного культивирования. Отмечается, что применение методов твердофаз- ной ферментации для культивирования грибных штаммов-продуцентов, позволяет полу- чить высокий выход концентрированных пектиназ с меньшими затратами, чем при глубин- ной ферментации. Условия культивирования с использование поверхностного метода куль- тивирования наиболее оптимальны для роста Aspergillus sp. Для получения бактериальных пектиназ применяют оба метода культивирования. Несмотря на то, что для роста бактерий оптимальным является применение глубинного культивирования, сообщается об увеличе- нии выхода пектиназ при применении твердофазной ферментации. При поверхностном культивировании Bacillus sp. DT7 на пшеничных отрубях отмечается более высокий выход щелочной термостабильной пектиназы. [23].

Ксиланаза - общий термин для ферментов, задействованных в деградации гетероген- ного полисахарида - ксилана. Основным является фермент эндо-1,4-ксиланаза (класс фер- ментов 3.2.1.8), который катализирует распад ксилана до ксилоолигосахаридов. Другие ферменты, такие как ксилозидаза, Ь-арабинофуразидаза, глюкуронидаза и эстераза (ксила- нацетилэстераза и ферилоилэстераза), выполняют полный гидролиз ксилоолигосахаридов до мономеров. Ксиланазы представляют собой гликопротеины с молекулярной массой 6-80 кДа. Ферменты активны в диапазоне температур 40-60°С и pH 4, 5-6, 5. [24].

b-Глюканаза (бета-глюканаза) - общий термин для ферментов, расщепляющих некрахмальные полисахариды (НКП) гемицеллюлозы (глюканы). Относится к группе фер- ментов катализирующих расщепление b-глюканов с b-1,2-, b-1,3-, b-1,4- и b- 1,6-связями. Все b-глюканазы являются кислыми белками, содержащими большое количество кар- боксильных и гидроксильных групп. Эти ферменты являются гликопротеидами, они имеют углеводные фрагменты, содержащие остатки маннозы, глюкозы, галактозы [25]. В качестве штаммов продуцентов при производстве бета-глюканазы используют Trichoderma, Asper- gillus, Penicillium, Bacillus и т.д.

Неожиданно было установлено, что соединение пектиназы, ксиланазы и бета-тпю- каназы в составе композиции для полости рта имеет определенные преимущества: эффек- тивное расщепление молекул меланоидинов, безопасное отбеливание. Изобретение позво- ляет безопасно осветлять эмаль зубов путем целенаправленного воздействия на окрашива- ющие эмаль меланоидины. Кроме того, предложенный комплекс способен расщеплять по- лисахаридный неокрашенный налет, тем самым препятствуя образованию кариесогенной биопленки, что является профилактикой предупреждения кариеса. Авторами изобретения также неожиданно обнаружили, что дополнительное использование компонента из групп фосфатов усиливает отбеливающее действие ферментативного комплекса (синергизм). Так, допускается использование компонентов из группы фосфатов, таких как глицерофосфат кальция [28-29], пирофосфат кальция [26], пирофосфат тетракалия и тетранатрия, а также пирофосфат динатрия [30-32], трикальций и тримагний фосфаты [33-37], триполифосфат натрия [38-39], гексаметафосфат натрия [40]. В рамках настоящего раскрытия изобретение относится к композиции для примене- ния в составе для ухода за полостью рта, содержащей комбинацию ферментов пектиназы, ксиланазы и b-глюканазы.

В одном аспекте настоящего раскрытия композиция по изобретению может допол- нительно содержать наполнитель.

В другом аспекте настоящего раскрытия композиция по изобретению может содер- жать 0,05-0,15 % мае. пектиназы, 0,05-0,15 % мае. ксиланазы, 0,01-0,05 % мае. бета-глю- каназы и до 100 % мае. наполнителя. Предпочтительно, композиция по изобретению может содержать около 0,1 % мас.пектиназы, около 0,1 % мае. ксиланазы, около 0,025 %мас. бета- глюканазы и до 100 % мае. наполнителя.

В другом аспекте настоящего раскрытия композиция по изобретению может содер- жать около 0,2 % мас.пектиназы, около 0,2 % мае. ксиланазы, около 0,1 %мас. бета-глю- каназы и до 100 % мае. наполнителя.

В другом аспекте настоящего раскрытия композиция по изобретению может содер- жать 0, 1-1, 0 % мас.пектиназы, 0,1 -1,0 %мас. ксиланазы, 0,05-0,6 %мас. бета-глюканазы и до 100 % мае. наполнителя. Предпочтительно, композиция по изобретению может содержать 0, 3-0, 8 % мас.пектиназы, 0,3-0, 8 %мас. ксиланазы, 0,2-0, 4 % мае. бета-глюканазы и до 100 % мае. наполнителя. Более предпочтительно, композиция по изобретению может содержать 0,5 % мас.пектиназы, 0,5 % мае. ксиланазы, 0,3 % мае. бета-глюканазы и до 100 % мае. наполнителя.

В еще одном аспекте настоящего раскрытия композиция по изобретению дополни- тельно содержать фосфаты, которые могут быть выбраны из группы: фосфаты: глицеро- фосфат кальция, пирофосфат кальция, пирофосфат тетракалия и тетранатрия, а также пи- рофосфат динатрия, трикальций и тримагний фосфаты, триполифосфат натрия, гексамета- фосфат натрия.

В другом аспекте настоящего раскрытия фосфаты содержатся в композиции в коли- честве 0,5-4, 5 % мае. Предпочтительно, фосфаты могут содержаться в композиции в коли- честве 2, 5-3,0 % мае. Предпочтительно, фосфаты могут содержаться в композиции в коли- честве около 2,75 % мае.

В другом аспекте изобретения фосфаты содержатся в композиции в количестве 0,5- 3,0 % мае. Предпочтительно, фосфаты могут содержаться в композиции в количестве 1,5- 2,5 % мае. Более предпочтительно, фосфаты могут содержаться в композиции в количестве около 2,0 % мае. В другом аспекте настоящего раскрытия фосфаты содержатся в композиции в коли- честве 0,5- 1,0 % мае. Предпочтительно, фосфаты могут содержаться в композиции в коли- честве 0,6-0, 9 % мае. Более предпочтительно, фосфаты могут содержаться в композиции в количестве около 0,75 % мае.

В рамках настоящего раскрытия изобретение также относится к зубной пасте, содер- жащей композицию по изобретению.

В рамках настоящего раскрытия изобретение также относится к ополаскивателю для полости рта, содержащему композицию по изобретению.

В рамках настоящего раскрытия изобретение также относится к применению компо- зиции по изобретению для отбеливания зубов.

В рамках настоящего раскрытия изобретение также относится к применению зубной пасты по изобретению для отбеливания зубов.

В рамках настоящего раскрытия изобретение также относится к применению опо- ласкивателя по изобретению для отбеливания зубов.

ПРИМЕРЫ

Включенные в настоящее описание примеры не являются ограничивающими заяв- ленное изобретение и приведены лишь с целью иллюстрации и подтверждения достижения ожидаемых технических результатов. Эти примеры являются одними из многих экспери- ментальных данных, полученных авторами изобретения, которые подтверждают эффектив- ность средства по изобретению для отбеливания эмали.

Пример 1. Доказательство эффективности компонентов комплекса in vitro. Доказа- тельство эффективности комплекса проводилось на окрашенных образцах, имитирующих эмаль зубов. Первоначально были подготовлены образцы, имитирующие эмаль зубов, за- тем они были искусственно окрашены насыщенным раствором чая и кофе. Для этого 40 г обжаренных кофейных зерен измельчали до порошкообразного состояния, добавляли 50 мл воды, нагретой до 96°С, и перемешивали в течение 10 минут. Затем получившуюся смесь отфильтровывали, и к осадку добавляли 50 мл воды, нагретой до 99°С, перемешивали еще 10 минут. После отф ильтровывания осадка оба фильтрата объединяли. Получали насьпцен- ный раствор кофе, в который помещали образцы (один образец оставляли неокрашенным для контроля) на 24 часа при температуре 25°С. Для получения образцов с чайным налетом в чистый стакан помещали 20 г измельченного черного чая (не ароматизированного) и до- бавляли 100 мл воды, нагретой до 99°С. Оставляли на 20 минут при постоянном перемеши- вании, затем отфильтровывали, и к фильтрату добавляли образцы (один образец оставляли неокрашенным для контроля) для окрашивания в течение 24 часов при температуре 25°С. После проведения окрашивания образцы промывали под проточной водой, высушивали и фотографировали для получения первоначальных значений яркости окрашивания.

Далее был приготовлен буферный раствор с pH = 6,8. Для получения 100 мл буфер- ного раствора смешивали 51 ,0 мл 27,2 г/л раствора калия дигидрофосфата с 49,0 мл 71 ,6 г/л раствора динатрия гидрофосфата. Полученный раствор хранили при температуре от 2 до 8°С.

Для определения отбеливающей способности исследуемых ферментов были приго- товлены буферные растворы ферментов (Таблица 1).

Таблица 1. Процентное содержание ферментов в исследуемых образцах

По 5 образцов чайного и кофейного налета помещали в растворы а 1-5, и оставляли на 6 часов при 37°С. Затем образцы промывали под проточной водой, фотографировали и определяли разницу в яркости образцов до и после с использованием программного обес- печения ImageJ. Чем выше был показатель разницы в яркости, тем сильнее отбеливающий эффект (Таблица 2).

Таблица 2. Результаты отбеливающей способности исследуемых образцов

Таким образом, авторами была доказана сверхсуммарная (синергетическая) эффек- тивность предлагаемой композиции и показано, что предлагаемые компоненты комплекса, взятые по отдельности, не обладают отбеливающим действием. Видимый и значимый от- беливающий эффект достигается только при совместном использовании ферментов.

Пример 2. Исследование сравнительной эффективности in vitro ферментативного комплекса с известными отбеливающими системами. Выбранные компоненты комплекса обладают совместным отбеливающим эффектом, поэтому авторами было проведено срав- нение разработанного отбеливающего комплекса с пероксидными системами, обладаю- щими высокой эффективностью отбеливания. В Таблице 3 приведены группы для сравне- ния отбеливающей активности.

Таблица 3. Состав и описание групп исследования

Окрашивание образцов, приготовление буферного раствора, раствора ферментов проводилось аналогичным способом, описанным в Примере 1.

Один образец с кофейным налетом С) помещали в 30 мл буферного раствора IV, в другой стакан с 30 мл буферного раствора IV помещали один образец с чайным налетом ( Т ). По три образца (С и Т) помещали разные стаканы в 100 мл 3% раствора III и в разные стаканы в 100 мл раствора III так, чтобы образцы не соприкасались друг с другом. Анало- гично, по 3 образца разного типа окрашивания помещались в 100 мл раствора фермента- тивного комплекса I. Стаканы накрывали фильтровальной бумагой или стеклом, чтобы предотвратить попадание пыли и прочих загрязнителей. По три образца помещали в сус- пензию зубной пасты II (по три образца С и 7), плотно закрывали крышкой для предотвра- щения пересыхания зубной пасты. Все образцы инкубировали при температуре 37°С в те- чение 6 часов. Доставали образцы из растворов, промывали проточной водой и высуши- вали. С образцов Ш смывали зубную пасту проточной водой, не протирая поверхность, и также высушивали. Осветленные образцы фотографировали, анализировали изменение об- щей интенсивности окраски образцов до и после с использованием программного обеспе- чения ImageJ в монохромном режиме. Результаты представлены в Таблице 4. Таблица 4. Результаты сравнительной отбеливающей способности ферментативного комплекса

Таким образом, была показана сравнительная эффективность ферментативной си- стемы отбеливания, а также самой сильной на сегодняшний день, пероксидной. Результаты эксперимента показывают, что при использовании ферментативного комплекса достига- ется видимый эффект отбеливания. Сильный отбеливающий эффект пероксидной системы нивелируется ее негативным воздействием на эмаль, что приводит к деминерализации и появлению кариеса [12]. Данный ферментативный комплекс пролонгированного действия и при длительном использовании дает безопасный и видимый результат отбеливания, не оказывая вреда состоянию полости рта.

Пример 3. Доказательство отбеливающей эффективности ферментативного ком- плекса in vitro в композициях по уходу за полостью рта. Для доказательства эффективности отбеливания была разработана рецептура зубной пасты с ферментативным комплексом (1), рецептура с ферментативным комплексом и пирофосфатом кальция (2), базовая рецептура, не содержащая отбеливающих компонентов (3). Окрашивание образцов производили ана- логично примеру 1 (Таблицы 5-7).

Таблица 5. Состав исследуемой композиции по уходу за полостью рта, содержащей фер- ментативный комплекс

Таблица 6. Состав исследуемой композиции по уходу за полостью рта, содержащей фер- ментативный комплекс и пирофосфат кальция

Таблица 7. Состав базовой композиции исследуемой композиции по уходу за полостью рта, не содержащей активные отбеливающие компоненты

Один окрашенный образец из каждой группы окрашивания (чай и кофе) был остав- лен в качестве контрольного, 5 образцов чистили щеткой и композицией (1), 5 образцов чистили щеткой и композицией (2), 5 образцов числили щеткой и композицией (3), 5 образ- цов чистили щеткой и водой. Для получения достоверных результатов был сделан прибор, имитирующий чистку зубов. После чистки образцы промывались под проточной водой и высушивались. Осветленные образцы фотографировали, анализировали изменение общей интенсивности окраски образцов до и после с использованием программного обеспечения ImageJ в монохромном режиме. Результаты приведены в Таблице 8. Таблица 8. Результаты сравнительной отбеливающей способности композиций для ухода за полостью рта

В результате эксперимента было доказано, что разработанный комплекс эффективно осветляет чайный и кофейный налет. При добавлении пирофосфата кальция появляется усиление отбеливающего эффекта (синергетическое действие).

Пример 4. Доказательство отбеливающей эффективности ферментативного ком- плекса in vivo в композициях по уходу за полостью рта. Для проведения клинических ис- следований была разработана рецептура продуктов, содержащих ферментативный ком- плекс (Таблица 9).

Таблица 9. Состав исследуемой композиции по уходу за полостью рта, содержащей фер- ментативный комплекс

Было проведено одноцентовое сравнительное рандомизированное проспективное исследование. Отбеливающее действие комплекса определяли по шкале Vitapan спустя 4 недели применения продукта.

В исследовании принимали участие добровольцы мужского и женского пола, давшие информированное согласие, в возрасте от 18 до 65 лет. Количество своих зубов не менее 20.

Предполагаемая длительность участия испытуемых в исследовании 28±3 дня Максимальная продолжительность участия в исследовании для каждого добровольца составляла 31 день. Минимальная продолжительность участия в исследовании для каждого субъекта составляла 25 дней. Добровольцы использовали на визите 1 продукты в течение 2 минут. Далее пациенты использовали исследуемые продукты 2 раза в день в течение 2 минут, утром и вечером, в течение 4 недель с промежуточным визитом к стоматологу на 14 день исследования. До и после применения продукта оценивались 6 верхних передних зубов по шкале Vita (Таблица 10).

Таблица 10. Результаты отбеливающей эффективности ферментативного ком- плекса по результатам исследований in vivo

В ходе исследования выявлен осветляющий эффект, зависящий от изначального цвета эмали. Добровольцы, которые имели цвет эмали темнее Bl, А1 и С1 были включены в исследование (в итоге 30 человек). Выявлено, что осветление эмали на 1,5-2 тона происходило у 70% добровольцев (21 человек), на 1 тон - у 23% (7 человек), 0-0,5 тона - у 7% (2 человека).

Важно отметить, что проводимом исследовании не было выявлено повышения чувствительности эмали ни у одного из добровольцев. Кроме того, у пациентов с чувствительной эмалью не было выявлено жалоб на повышение уровня чувствительности зубов.

Таким образом, в результате клинических испытаний был доказан отбеливающий эффект предлагаемой композиции в составе зубной пасты. Список литературы:

1. Горюнова М.В. Клинико-лабораторное обоснование использования малоинвазивных тех- нологий в коррекции стойких дисколоритов зубов : автореф. дис. ... канд. мед. наук: 14.00.21 /Екатеринбург, 2007. 26с.

2. Вагнер В.Д., Поповкина О. А. Профессиональное отбеливание зубов. Основные положе- ния. //Профилактика сегодня. - 2008, М8. - С. 26-28.

3. Pearson D. The chemical analysis of foods. 7th ed.: ppl-450 London: Churchill Livingstone, 1976.

4. Watts A, Addy M. Tooth discolouration and staining: Tooth discolouration and staining: a re- view of the literature. British Dental Journal, 2001; 190: 309 - 316.

5. Cynthia K. Extrinsic tooth discoloration, an updated review. Dental Tribune, March-April 2015: 6B-10B

6. BerkZ. Non-enzymatic browning. In: Braveman's introduction to the biochemistry of foods pp 149-167. Amsterdam: Elsevier, 1976

7. Bukar M et al. Oral health practices among pregnant women in North Eastern Nigeria. Niger J Clin Pract. 2012 Jul-Sep;15(3):302-5. DOT. 10.4103/1119-3077.100625.

8. Masalu JR et al. Oral health related behaviors among adult Tanzanians: a national pathfinder survey. BMC Oral Health. 2009 Sep 14;9:22. DOT. 10.1186/1472-6831-9-22.

9. YaacobHB, Park AW. Dental abrasion pattern in a selected group of Malaysians. J Nihon Univ Sch Dent. 1990 Sep;32(3):l 75-80.

10. Dicksit DD et al. Over-the-counter Dental Products: Need for Regulation. Indian Journal of Oral Care and Reseacrh. 2015;l(2):44-47. DOI: 10.4103/2393-8692.172020.

11. Ramachandra SS et al. Oral health: Charcoal brushes. British Dental Journal. 2014, 217(3). DOI: 10.1038/sj. bdj.2014.557

12. American Dental Association. Statement on the Safety and Effectiveness of Tooth Whitening

Products. http://www. ada. org/en/about-the-ada/ada-positions-policies-and-statements/t ooth- whitening-safety-and-effectiveness

13. https://link.springer.eom/article/l 0.1007 /s00784-017-2083-5

14. Wegehaupt FJ. et al. Erosive potential of vitamin and vitamin+mineral effervescent tablets. Swiss DentJ. 2016;126(5):457-65.

15. Beyer M. et al. Acids with an equivalent taste lead to different erosion of human dental enamel. Dent Mater. 2011 Oct;27(10):1017-23. DOI: 10.1016/j.dental.2011.07.001

16. Hughes JA. et al. Effects of pH and concentration of citric, malic and lactic acids on enamel, in vitro. J Dent. 2000 Feb;28(2): 147-52 17. Collins LZ. et al. Instant tooth whitening from a silica toothpaste containing blue covarine. J Dent. 2008;36 Suppl 1.S21-5

18. McKee M. et al. Effect of Commercial Enzymes on Color and Total Polysaccharide Content in Sugarcane and Sugarbeet Juice. Industrial Application of Enzymes on Carbohydrate-Based Material, Chapter 7, pp 88-100 DOT. 10.1021/bk-2007-0972.ch007

19. Hattab FN, Qudeimat MA, al-Rimawi HS. Dental discoloration: an overview. J Esthet Dent 1999; 11 (6): 291 -310.

20. Manuel ST, AbhishekP, Kundabala M. Etiology of tooth discoloration-a review. Nigerian Dent J 2010;18(2):56-63

21. Prathap S, Rajesh H, Boloor VA, Rao AS. Extrinsic stains and management: A new insight j Acad Indus Res 2013;1(8):435

22. Annals of Dental Specialty Vol. 4; Issue 2. Apr— jun 2016

23. http://www. abercade. ru/research/ analysis/ 5724. html

24. http://www. abercade. ru/research/analysis/5623.html

25. http://chemanalytica. com/book/novyy_spravoch- nik_khimika_i_tekhnologa/06_syre_i_produkty _promyshlennosti_organicheskikh_i_neorganich- eskikh_veshchestv_chast_II/5429

26. Abrasion, polishing, and stain removal characteristics of various commercial dentifrices in vitro.; Schemehom BR, Moore Mil, Putt MS; J Clin Dent. 2011;22(l):ll-8

27. https: //pubs. acs. org/doi/pdf/10.1021/bk-l 983-0215. chOOl

28. Calcium glycerophosphate supplemented to soft drinks reduces bovine enamel erosion; Caro- lina Silveira Barbosa; Lia Guimaraes Montagnolli; Melissa Thiemi Kato; Fabio Correia Sam- paio; Marilia Afonso Rabelo Buzalaf; J. Appl. Oral Sci. vol.20 no.4 Bauru July/ Aug. 2012

29. The Cariostatic Effect of Calcium Glycerophosphate in Monkeys; Bowen W.H.; Caries Res 1972;6:43-51 (DOT 10.1159/000259769)

30. Inhibiting effect of a pyrophosphate-dentifrice on calculus formation; Kurbad A, Gangler P, Hoffmann T, Kirchner T, Weinert W; Dtsch ZahnarztlZ. 1991 Apr;46(4):277-80.

31. Anti-calculus effects of dentifrice containing pyrophosphate compared with control; Chikte UM, Rudolph MJ, Reinach SG; Clin Prev Dent. 1992 Jul-Aug; 14(4): 29-33.

32. Growth-inhibitory effect of pyrophosphate on oral bacteria; Drake D, Grigsby B, Krotz Die- leman D; Oral Microbiol Immunol. 1994 Feb;9(l):25-8.

33. New method of treatment for dentin hypersensitivity by precipitation of calcium phosphate in situ; Imai Y, Akimoto T; Dent Mater J. 1990 Dec;9(2): 167-72. 34. Calcium phosphate precipitation method for the treatment of dentin hypersensitivity; Suge T, Ishikawa Kawasaki A, Suzuki K, Matsuo T, Noiri Y, Imazato S, Ebisu S; Am J Dent. 2002 Aug; 15 (4): 220-6.

35. The clinical effect of amorphous calcium phosphate (ACP) on root surface hypersensitivity; Geiger S, Matalon S, Blasbalg J, Tung M, Eichmiller FC; Oper Dent. 2003 Sep-Oct;28(5):496- 500.

36. CharigAJ, Thong S, Flores F, etal. Mechanism of action of a desensitizing fluoride toothpaste delivering calcium and phosphate ingredients in the treatment of dental hypersensitivity. Part II: Comparison with a professional treatment for tooth hypersensitivity. Compend Contin Educ Dent. 2009;30:622-628.

37. Ghassemi A, Hooper W, Winston AE, et al. Effectiveness of a baking soda toothpaste delivering calcium and phosphate in reducing dentinal hypersensitivity. J Clin Dent. 2009;20:203-210.

38. Clinical study of the anti-calculus effect of a dentifrice containing sodium polyphosphate; Hagiwara M, Osada T, Miyake M, Yogo M, Suganuma N Takahashi A; Nihon Shishubyo Gakkai Kaishi. 1989 Sep;31(3):948-59.

39. Effects of sodium polyphosphate on the inhibition of calculus formation in vitro and animal test; Mikio MIYAKE; Masuhiro YOGO; Nobuo SUGANUMA; Fumio OHSATO; Akinori TAKAHASHI; Nihon Shishubyo Gakkai Kaishi (Journal of the Japanese Society of Periodontol- ogy); ISSN: 0385-0110; VOL.30; NO.3; PAGE.860-867; (1988)

40. Pentapati КС et al. Stain Removal Efficacy of Herbal Mouth Rinses Containing Sodium Hex- ametaphosphate. Journal of Research in Medical Education & Ethics 2014;4(2): 165-170).