NOUVEL EXTRAIT D'EUCALYPTUS, SON PROCEDE DE PREPARATION ET SES UTILISATIONS THERAPEUTIQUES.

La présente invention concerne l'utilisation d'un extrait d'Eucalyptus pour la préparation d'un médicament ou d'un complément alimentaire destiné au traitement et/ou à la prévention des affections ou pathologies découlant d'un désordre de la recapture des neuromédiateurs suivants : dopamine, sérotonine et/ou noradrénaline. Préférentiellement ledit extrait est enrichi en au moins 1 des composés de la formule (I) ou l'une quelconque de ses formes diastéréoisomères :

dans laquelle Rl forme avec le carbone auquel il est rattaché un groupement C=CH2, un

^CH ₃ CH _{3 cC} CH ₃ groupement OH , ' O ^w H ^• ou OH et R2 représente un groupement isobutyle, α-isobutyle ou β-isobutyle.

La présente invention concerne également l'utilisation d'au moins 1 des composés de la formule (I) ci-dessus pour la préparation d'un médicament ou d'un complément alimentaire destiné au traitement et/ou à la prévention des affections ou pathologies découlant d'un désordre de la recapture desdits neuromédiateurs.

Il existe de nombreuses espèces d'Eucalyptus (plus de 600), la plupart native d'Australie et de Tasmanie, un petit nombre de la Nouvelle Guinée et de l'Est de la

Malaisie. Les Eucalyptus appartiennent à la famille des Myrtacées et trouvent l'origine de leur nom dans la forme caractéristique de leurs fleurs. En effet, le mot Eucalyptus signifie « bien couvert » faisant allusion à l'opercule (formés des pétales soudés) coiffant les étamines des fleurs. Ce sont généralement de beaux et grands arbres pouvant atteindre 80 à 100 m de hauteur dans leur pays d'origine (Australie), de 3 à 20 m sous des climats plus tempérés. Leur écorce, lisse, se détache en de longues bandes de couleur pâle à grisâtre. Ils sont généralement caractérisés par un dimorphisme foliaire. Dans le cas de l'Eucalyptus globulus Labill, les jeunes feuilles sont ovales-oblongues, vert glauque,

cerclées de bleu, embrassantes et sessiles tandis que les feuilles âgées sont falciformes, vert-grisâtre, pendantes, à pétiole tordu et orientées verticalement (équivalence des deux faces). Les boutons floraux sont formés d'un calice, en forme de pyramide quadrangulaire, coiffé d'un opercule qui se soulève lors de la floraison laissant apparaître de nombreuses étamines à longs filets blancs et à anthères jaunes. Les fruits sont des capsules de 2 à 2,5 cm de diamètre renfermant des graines noires ou brunâtres. En phytothérapie, trois espèces sont principalement utilisées dans la pharmacopée européenne : l'Eucalyptus globulus Labill, YE. polybractea R.T. Baker et YEucalyptus smithii R.T. Baker. On utilise les feuilles des rameaux les plus âgés (falciformes et pétiolées), l'huile essentielle et l'eucalyptol qui est issu de cette dernière.

Les feuilles d'Eucalyptus sont traditionnellement utilisées par voies orale et locale pour traiter les affections du système respiratoire (bronchite, inflammation de la gorge, nez bouché, rhume...) ou en application pour soigner les blessures, les ulcères de la peau ... L'huile essentielle d'Eucalyptus et l'eucalyptol (ou 1,8-cinéole) entrent dans de nombreuses préparations destinées à traiter les affections des voies respiratoires en raison de leurs activités antiseptique, mucolytique et expectorante. L'huile essentielle est utilisée comme répellent et en médecine vétérinaire.

Les propriétés pharmacologiques connues de l'huile essentielle d'Eucalyptus sont à ce jour : les propriétés antimicrobienne, expectorante et béchique (WICHTL M. et ANTON R., 1999 - Plantes thérapeutiques - 177-179), anti-inflammatoire et anti-asthmatique (JUERGENS et al, 2003 - Anti-inflammatory activity of 1,8-cineol (eucalyptol) in bronchial asthma : a double-bind placebo controlled trial - Respir. Med., 97 (3), 250- 256), anti-diabétique (SWANSTON et al, 1990 - Traditional plant treatments for diabètes. Studies in normal and streptozotocin diabetics rats - Diabetologia, 33 (8), 462- 464), anti-histaminique (IKAWATI Z. and al., 2001 - Screening of several Indonesian medecinal plants for their inhibitory effect on histamine release from RBL-2H3cells - J. EthnopharmacoL, 75 (2-3), 248-256), anticancéreuse (TAKASAKI et al, 2000 - Cancer chemopreventive activity of euglobal-Gl from leaves of Eucalyptus grandis - Cancer LetL, 155 (1) : 61-65), antivirale (TAKASAKI et al, 1990 - Structures of euglobal-Gl, - G2 and G3 from Eucalyptus grandis, three new inhibitors of Epstein virus activation — Chem. Pharm. Bull. 38 (5), 1444-1446) et anti-VIH (WICHTL M. et ANTON R., 1999 - Plantes thérapeutiques - 177-179).

De façon inattendue et surprenante, la demanderesse a mis en évidence l'utilisation d'un extrait d'Eucalyptus pour la préparation d'un médicament ou complément alimentaire destiné au traitement et/ou à la prévention des affections ou pathologies découlant d'un désordre de la recapture de neuromédiateurs. Le domaine de la présente invention est donc un extrait d'Eucalyptus pour lequel des propriétés pharmacologiques intéressantes ont été observées et ainsi de nouvelles utilisations en thérapeutique envisagées. La présente invention ne concerne pas l'huile essentielle d'Eucalyptus en tant que telle, pour laquelle une bibliographie abondante avait été relevée. De façon avantageuse, le médicament ou complément alimentaire est destiné à traiter et/ou prévenir des pathologies, découlant d'un désordre de la recapture de neuromédiateurs, choisies dans le groupe :

- des maladies, affections ou troubles neurologiques,

- des maladies, affections ou troubles psychiatriques, - des troubles de la mémoire, de l'attention et de la vigilance associés aux maladies, affections ou troubles neurologiques et psychiatriques, des troubles somatiques fonctionnels,

- la dépendance aux substances addictives.

De façon préférée, le traitement et/ou la prévention desdites affections ou pathologies consiste en une inhibition de la recapture des neuromédiateurs.

Au sens de la présente invention, on entend par « neuromédiateurs » : la dopamine et/ou la sérotonine et/ou la noradrénaline.

Par « Eucalyptus », on entend au sens de la présente invention les espèces appartenant de préférence aux sous-genres Eudesmia, Symphomyrtus et Corymbia et plus particulièrement les espèces suivantes : Eucalyptus glohulus L., Eucalyptus pulverulenta Sims, Eucalyptus kartzoffiana L. A. S. Johnson 1 Blaxell, Eucalyptus macrocarpa Hook., Eucalyptus cinerea F. Muell.ex Benth., Eucalyptus dorrigoensis (Blakely) L.A.S. Johnson 1 K. D. HiIl, Eucalyptus leptopoda Benth., Eucalyptus occidentalis Endl., Eucalyptus viridis R. T. Baker, Eucalyptus polybractea R.T. Baker et Eucalyptus smithii R.T. Baker. Ces exemples illustrent la présente invention sans toutefois en limiter la portée.

De façon avantageuse, l'extrait d'Eucalyptus est obtenu à partir des feuilles, fleurs, fruits, tiges ou du tronc d'Eucalyptus ; et préférentiellement des feuilles d'Eucalyptus.

Avantageusement, l'extrait d'Eucalyptus utilisé selon la présente invention est caractérisé en ce qu'il comprend au moins un composé de la formule (I) ou l'une quelconque de ses formes diastéréoisomères.

Ladite formule (I) englobe entre autres 4 composés de la famille des macrocarpal ; il s'agit : - du macrocarpal A : (5-((lR)-l-((llS,7R)-7-hydroxy-3,3,7,ll- tetramethyltricyclo(6.3.0.0(2,4))undec-ll-yl)-3-methylbutyl) -2,4,6- trihydroxybenzene-l,3-dicarbaldehyde) dans lequel Rl forme avec le carbone auquel

^CH ₃ il est rattaché le groupement OH et R2 représente un β-isobutyle.

Formule brute : C ₂₈ H ₄ OO ₆

Masse moléculaire : 472 g/mol

Avantageusement, la fraction massique du macrocarpal A dans l'extrait d'Eucalyptus selon la présente invention est supérieur ou égal à 0,1% et strictement inférieur à 3%.

- du macrocarpal B : (5-((lS)-l-((l lS,7R)-7-hydroxy-3 ₃ 3,7,l l- tetramethyltricyclo(6.3.0.0(2,4))undec-ll-yl)-3-methylbutyl) -2,4,6- trihydroxybenzene-l,3-dicarbaldehyde) dans lequel Rl forme avec le carbone auquel

il est rattaché le groupement OH et R2 représente un α-isobutyle.

Formule brute : C ₂₈ H ₄₀ O ₆ Masse moléculaire : 472 g/mol Avantageusement, la fraction massique du macrocarpal B dans l'extrait d'Eucalyptus selon la présente invention est supérieur ou égal à 0,1% et strictement inférieur à 3%.

du macrocarpal C : (5-((lR)-l-((llS)-3,3,l l-trimethyl-7- methylenetricyclo(6.3.0.0(2,4))undec- 11 -yl)-3-methylbutyl)-2 ,4,6- trihydroxybenzene-l,3-dicarbaldehyde) dans lequel Rl forme avec le carbone auquel il est rattaché le groupement C=CH2 et R2 représente un β-isobutyle.

Formule brute : C ₂₈ H ₃₈ O ₅ Masse moléculaire : 454 g/mol

Avantageusement, la fraction massique du macrocarpal C dans l'extrait d'Eucalyptus selon la présente invention est supérieur ou égal à 0,1% et strictement inférieur à 3%.

- du macrocarpal G : (5-(l-(3,3,ll-trimethyl-7-methylenetricyclo(6.3.0.0(2,4))und ec- ll-yl)-3-methylbutyl)-2,4,6-trihydroxybenzene-l,3-dicarbalde hyde) dans lequel Rl forme avec le carbone auquel il est rattaché un groupement C=CH2 et R2 représente un isobutyle

Formule brute : C ₂₈ H ₃₈ O ₅ Masse moléculaire : 454 g/mol Avantageusement, la fraction massique du macrocarpal G dans l'extrait d'Eucalyptus selon la présente invention est supérieur ou égal à 0,1% et strictement inférieur à 5%.

Ledit extrait d'Eucalyptus est obtenu par un procédé d'extraction réalisé à partir d'étapes classiques connues de l'homme du métier. Les feuilles, les fleurs, les fruits, les tiges ou le tronc d'Eucalyptus (Eucalyptus sp.) ou un mélange de ces parties sont broyées puis extraites avec un solvant organique pouvant être un alcane (pentane, hexane, heptane, octane, cyclohexane), un éther oxyde (tétrahydrofurane, dioxane, diéthyl éther), un ester (acétate d'éthyle, acétate d'isopropyle), un alcool (méthanol, éthanol, propanol, isopropanol, butanol, octanol), une cétone (méthyléthylcétone, méthylisobutylcétone), un hydrocarbure halogène (chloroforme, dichlorométhane) ou un mélange d'eau et de solvant(s) organique(s) miscible(s) à l'eau (un mélange hydro-alcoolique par exemple).

L'extraction est réalisée dans un ratio plante/solvant compris entre environ 1/1 et environ 1/20 et peut être renouvelée 2 à 3 fois. La température du solvant d'extraction peut être égale à la température ambiante ou supérieure, pouvant atteindre la température d'ébullition du solvant engagé. Le temps de contact de la plante avec le solvant est compris entre environ 30 min et environ 72 heures.

On procède ensuite à une séparation solide/liquide, la plante étant séparée du solvant par filtration ou centrifugation. Le filtrat obtenu peut être soit : mis à sec directement par évaporation totale du solvant d'extraction et constituer l'extrait final ; soit plus ou moins concentré. Dans le cas d'un solvant d'extraction mixte (mélange hydro-alcoolique par exemple) la concentration se poursuit jusqu'à

l'évaporation du solvant organique présent. Dans le cas d'un solvant organique, une quantité d'eau est additionnée au concentrât obtenu. Une étape de purification liquide-liquide est réalisée en additionnant à la phase aqueuse un solvant non miscible pouvant être un alcane (de l'hexane par exemple), un éther oxyde (diéthyl éther par exemple), un ester (acétate d'éthyle par exemple), un alcool (butanol par exemple), une cétone (méthyléthylcétone par exemple) ou un hydrocarbure halogène (chloroforme par exemple). Une, deux ou trois extractions liquide-liquide sont réalisées. Les phases organiques réunies peuvent être séchées sur sulfate de sodium avant la mise à sec. Les solutions obtenues sont concentrées sous vide et à une température comprise entre la température ambiante et la température d'ébullition.

Le séchage de l'extrait final est réalisé par lyophilisation ou par des moyens de séchage plus classiques connus de l'homme du métier (nébulisation, étuve ...).

Préférentiellement, les températures de séchage ne dépassent pas 60°C environ. L'extrait peut être stabilisé par addition d'un antioxydant comme par exemple l'acide ascorbique, l'acide citrique à des quantités comprises entre environ 0,05 et environ 1 g pour 100 g d'extrait sec.

Un point tout à fait remarquable de la présente invention réside dans le fait que les propriétés pharmacologiques d'inhibition de la recapture des neuromédiateurs de l'extrait d'Eucalyptus sont d'autant plus intéressantes que ledit extrait est enrichi en au moins 1 des composés de formule (I) ou l'une quelconque de ses formes diastéréoisomères .

Ainsi, ledit extrait d'Eucalyptus est préférentiellement enrichi en au moins 1 composé de la formule (I).

Par « extrait d'Eucalyptus enrichi en macrocarpal A », on entend au sens de la présente invention un extrait d'Eucalyptus dont la fraction massique en macrocarpal A est supérieure ou égale à 3 % et strictement inférieure à 90 %, préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 50 %, plus préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 40 % et encore plus préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 20 %.

Par « extrait d'Eucalyptus enrichi en macrocarpal B », on entend au sens de la présente invention un extrait d'Eucalyptus dont la fraction massique en macrocarpal B supérieure

ou égale à 3 % et strictement inférieure à 90 %, préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 50 %, plus préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 40 % et encore plus préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 20 %.

Par « extrait d'Eucalyptus enrichi en macrocarpal C », on entend au sens de la présente invention un extrait d'Eucalyptus dont la fraction massique en macrocarpal C est supérieure ou égale à 3 % et strictement inférieure à 90 %, préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 50 %, plus préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 40 % et encore plus préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 20 %.

Par « extrait d'Eucalyptus enrichi en macrocarpal G », on entend au sens de la présente invention un extrait d'Eucalyptus dont la fraction massique en macrocarpal G est supérieure ou égale à 5 % et strictement inférieure à 90 %, préférentiellement supérieure ou égale à 5 % et inférieure à 50 %, plus préférentiellement supérieure ou égale à 5 % et inférieure à 40 % et encore plus préférentiellement supérieure ou égale à 5 % et inférieure à 20 %.

La demanderesse a montré l'influence d'un extrait d'Eucalyptus sur la recapture de la dopamine et/ou de la noradrénaline et/ou de la sérotonine.

De par ses propriétés pharmacologiques d'inhibiteur de la recapture de ces neuromédiateurs, ledit extrait est particulièrement utile à la préparation d'un médicament ou complément alimentaire destiné à traiter et/ou à prévenir de nombreuses affections ou pathologies résultant d'un défaut de dopamine et/ou sérotonine et/ou noradrénaline. Parmi les affections ou pathologies pouvant être traitées et/ou prévenues à l'aide d'un extrait d'Eucalyptus selon la présente invention, il convient de citer à titre d'exemples illustratifs et non limitatifs

- les maladies, affections ou troubles neurologiques : telles que les maladies neurodégénératives (maladie d'Alzheimer, Chorée de Huntington, maladie de Parkinson, accidents vasculaires cérébraux, traumatisme crânien), la sclérose latérale amyotrophique, les démences séniles, les démences fronto-temporales, les démences vasculaires, la migraine, les douleurs neuropathiques d'origine centrale ;

- les maladies, affections ou troubles psychiatriques : telles que la dépression (endogène, résistante, réactive ou iatrogène), l'état dépressif, la schizophrénie, le trouble bipolaire, l'anxiété généralisée, les maladies liées au stress, les attaques de panique, les troubles obsessionnels compulsifs, les syndromes de stress post- traumatiques, les troubles de l'attention et de Phyperactivité, les troubles de conduites alimentaires (notamment la boulimie, l'anorexie), la phobie (notamment l'agoraphobie), l'autisme ;

- les troubles de la mémoire, de l'attention et de la vigilance associés aux maladies, affections ou troubles neurologiques et psychiatriques ;

- les troubles somatiques fonctionnels : tels que le syndrome de fatigue chronique, la fibromyalgie, le syndrome du colon irritable, les reflux gastro-oesophagiens, la perte de la libido, les troubles de l'érection, les incontinences urinaires.

- la dépendance aux substances addictives : notamment la nicotine, l'alcool, les opiacées, les cannabinoïdes, les psychostimulants. En effet, le médicament ou le complément alimentaire selon l'invention est avantageusement destiné à induire un sevrage à la nicotine, à l'alcool, aux opiacées, aux cannabinoïdes, aux psychostimulants et à prévenir la rechute chez des sujets abstinents. Le médicament ou le complément alimentaire selon l'invention est avantageusement utilisé comme traitement de substitution aux substances addictives et pour prévenir et/ou traiter le syndrome dépressif associé au sevrage.

L'homme du métier pourra reconnaître d'autres pathologies dont le traitement nécessite une telle inhibition.

La Demanderesse précise ici, de façon non restrictive, quelques références bibliographiques qui rappellent le lien entre des pathologies et leur traitement à l'aide d'un inhibiteur triple de recapture de dopamine et/ou sérotonine et/ou noradrénaline. Un exemple de chaque « groupe » a été relevé.

La dopamine, la sérotonine et la noradrénaline concourent au développement et à la survie des neurones (Lauder J.M., Trends Neurosci, 1993, 16; 233). Certaines pathologies neurologiques comme la maladie de Parkinson (Hornykiewicz O., Adv

Cytopharmacol. 1971, 1; 369) résulte d'une déficience en dopamine; des inhibiteurs de monoamine oxydases, qui augmentent les taux de dopamine, sérotonine et noradrénaline sont utilisés pour traiter la maladie de Parkinson et d'autres affections neurologiques (Ebadi M., Curr Drug Targets. 2006, 7; 1513). L'extrait d'Eucalyptus selon la présente invention peut donc être avantageusement utilisé dans le traitement de ces maladies neurologiques.

La dépression est une pathologie fréquente de l'humeur, caractérisée par des sentiments de la tristesse intense, de pensées pessimistes, d'auto-dépréciation, souvent accompagnée de la perte d'allant, d'enthousiasme et de libido. L'incapacité de ressentir du plaisir d'expériences normalement agréables, également connue sous le nom d'anhédonie, est également considérée comme un symptôme fréquent dans la dépression. La dépression est actuellement traitée par des inhibiteurs sélectifs de la recapture de sérotonine, tels que fluoxétine, citalopram ou paroxétine, des inhibiteurs sélectifs de la recapture de noradrénaline tels que réboxétine, ou encore des inhibiteurs mixtes de la recapture de sérotonine et noradrénaline tels que milnacipran ou venlafaxine. Cependant, un rôle important a été attribué aux neurones dopaminergiques projetant à une région de cerveau appelée le noyau accumbens, dans le plaisir et la motivation (Koob G.F. Sem. Neurosci. 1992, 4, 139 ; Salamone J.D. Behav. Brain Res. 1994, 61, 117). Les symptômes de la dépression peuvent donc être avantageusement traités par un inhibiteur de la recapture de la dopamine, de la sérotonine et de la noradrénaline tel que l'extrait d'Eucalyptus selon la présente invention.

L'absorption de substances addictives dont la nicotine augmente les taux extracellulaires de dopamine dans le striatum ventral chez l'animal (Di Chiara G et Imperato A., Proc Natl Acad Sci U S A. 1988, 85 ; 5274) et l'homme (Brody et al., Am J Psychiatry, 2004, 161 ; 1211). Le sevrage tabagique peut s'accompagner d'un syndrome dépressif (Wilhelm K et al., Drug Alcohol Rev, 2006, 25 ; 97). L'extrait d'Eucalyptus selon la présente invention peut donc être avantageusement utilisé comme traitement de substitution aux substances addictives, telles que la nicotine, et pour prévenir ou traiter le syndrome dépressif associé au sevrage. Les troubles fonctionnels, encore appelés somatotropes, sont des troubles qui concernent les grandes fonctions physiologiques, et qui ne seraient pas dus à des lésions organiques mais à la manière de fonctionner des organes (foie, coeur...). Les troubles somatiques fonctionnels peuvent être à l'origine d'une maladie qui se déclarera ultérieurement. Parmi ces troubles, la flbromyalgie est un trouble associant douleurs diffuses ou

localisées, fatigue chronique, symptômes dépressifs, troubles de mémoire et de concentration (Rooks DS., Curr Opin Rheumatol. 2007, 19; 111). Les symptômes de la fibromyalgie sont traités par des inhibiteurs de recapture mixtes noradrénaline/sérotonine (Vitton O., Hum Psychopharmacol. 2004, 19 Suppl 1:S27). L'addition d'une composante favorisant le tonus dopaminergique, comme dans l'extrait d'Eucalyptus selon la présente invention est avantageux pour la préparation d'un médicament ou complément alimentaire destiné à traiter et/ou prévenir les troubles somatiques fonctionnels.

De façon avantageuse, ledit médicament se présente sous une forme orale ou injectable.

Avantageusement, la forme orale est choisie parmi le groupe composé de comprimé, gélule, capsule, des préparations liquides telles que des sirops, des solutions buvables ou des poudres pour suspensions buvables.

De façon avantageuse, ledit complément alimentaire (ou nutraceutique ou diététique) est conditionné sous forme de doses, à savoir les formes de présentation telles que les gélules, les pastilles, les comprimés, les pilules et autres formes similaires, ainsi que les sachets de poudre, les ampoules de liquide, les flacons munis d'un compte- gouttes et les autres formes analogues de préparations liquides ou en poudre destinées à être prises en unités mesurées de faible quantité.

Les résultats obtenus à partir d'un extrait d'Eucalyptus enrichi en au moins un composé de formule (I) ou l'une quelconque de ses formes diastéréoisomères selon la présente invention montrent que les bénéfices de la présente invention peuvent être étendus à toute composition à base d'au moins un composé de formule (I) ou l'une quelconque de ses formes diastéréosiomères, que celui-ci soit obtenu par voie chimique, biochimique ou à partir d'un extrait végétal.

La présente invention concerne donc également l'utilisation d'au moins un composé de formule (I) ou l'une quelconque de ses formes diastéréosiomères pour la préparation d'un médicament ou complément alimentaire destiné au traitement et/ou à la prévention des affections ou pathologies neurologiques, psychiatriques et troubles associés, des syndromes somatiques fonctionnels et des dépendances aux substances addictives, découlant d'un désordre de la recapture des neuromédiateurs. De façon préférée, le traitement et/ou prévention desdites affections ou pathologies consiste en une inhibition de la recapture de neuromédiateurs.

De par ses propriétés pharmacologiques d'inhibiteur de la recapture de ces neuromédiateurs, les composés de formule (I) et ses formes diastéréoisomères sont particulièrement utiles à la préparation d'un médicament ou complément alimentaire destiné à traiter et/ou à prévenir de nombreuses affections ou pathologies résultant d'un défaut de dopamine et/ou sérotonine et/ou noradrénaline.

Parmi les affections ou pathologies pouvant être traitées et/ou prévenues à l'aide desdits composés selon la présente invention, il convient de citer à titre d'exemples illustratifs et non limitatifs

- les maladies, affections ou troubles neurologiques : telles que les maladies neurodégénératives (maladie d'Alzheimer, Chorée de Huntington, maladie de Parkinson, accidents vasculaires cérébraux, traumatisme crânien), la sclérose latérale amyotrophique, les démences séniles, les démences fronto-temporales, les démences vasculaires, la migraine, les douleurs neuropathiques d'origine centrale.

- les maladies, affections ou troubles psychiatriques : telles que la dépression (endogène, résistante, réactive ou iatrogène), l'état dépressif, la schizophrénie, le trouble bipolaire, l'anxiété généralisée, les maladies liées au stress, les attaques de panique, les troubles obsessionnels compulsifs, les syndromes de stress post- traumatiques, les troubles de l'attention et de l'hyperactivité, les troubles de conduites alimentaires (notamment la boulimie, l'anorexie), la phobie (notamment l'agoraphobie), l'autisme ;

- les troubles de la mémoire, de l'attention et de la vigilance associés aux maladies, affections ou troubles neurologiques et psychiatriques ;

- les troubles somatiques fonctionnels : tels que le syndrome de fatigue chronique, la fibromyalgie, le syndrome du colon irritable, les reflux gastro-oesophagiens, la perte de la libido, les troubles de l'érection, les incontinences urinaires.

- la dépendance aux substances addictives : notamment la nicotine, l'alcool, les opiacées, les cannabinoïdes, les psychostimulants. En effet, le médicament ou le complément alimentaire selon l'invention est avantageusement destiné à induire un sevrage à la nicotine, à l'alcool, aux opiacées, aux cannabinoïdes, aux psychostimulants et à prévenir la rechute chez des sujets abstinents.

Le médicament ou le complément alimentaire selon l'invention est avantageusement utilisé comme traitement de substitution aux substances addictives et pour prévenir et/ou traiter le syndrome dépressif associé au sevrage.

L'homme du métier pourra reconnaître d'autres pathologies dont le traitement nécessite une telle inhibition.

Avantageusement, la présente invention concerne l'utilisation de macrocarpal A, macrocarpal B, macrocarpal C et/ou macrocarpal G pour la préparation d'un médicament ou d'un complément alimentaire destiné au traitement et/ou à la prévention des affections ou pathologies neurologiques, psychiatriques et troubles associés, des syndromes somatiques fonctionnels et des dépendances aux substances addictives, découlant d'un désordre de la recapture de la dopamine et/ou de la sérotonine et/ou de la noradrénaline.

Des tests réalisés avec les composés de formule (I) et ses formes diastéréoisomères ont montré que ces composés agissent sur l'inhibition de la recapture de la dopamine et/ou de la sérotonine et/ou de la noradrénaline.

De façon avantageuse, ledit médicament se présente sous une forme orale ou injectable.

Les composés de formule (I) et ses formes diastéréoisomères selon la présente invention peuvent être obtenus par purification d'un extrait végétal ou par synthèse chimique ou biochimique tel que décrit dans Total Synthesis of (-)-Macrocarpal C. Stereoselective Coupling Reaction with a Novel Hexasubstituted Benzène Cr(CO) ₃ Complex as a Biomimetic Chiral Benzyl Cation Equivalent / Tanaka, Tetsuaki ; Mikamiyama, Hidenori ; Maeda, Kimiya ; Iwata, Chuzo ; In, Yasuko ; Ishida, Toshimasa / Journal of Organic Chemistry (1998), 63(26), 9782-9793.

Lesdits composés peuvent être isolés de « l'extrait d'eucalyptus » ou de « l'extrait enrichi en au moins un macrocarpal de formule (I) ». Les techniques permettant sa purification sont des techniques chromatographiques classiques pour l'homme de métier. Les extraits sont fractionnés sur colonne préparative ayant pour phase stationnaire une phase inverse, de préférence Symetry Shield ^® , 5μm (Waters) et pour phase mobile, un mélange acétonitrile / eau / acide trifluoroacétique dans les proportions 95 /5 /0,1%. La pureté en composé de formule (I) d'une telle fraction est supérieure ou égale à 90%.

Préférentiellement, la pureté en macrocarpal A, macrocarpal B, macrocarpal C et/ou macrocarpal G d'une telle fraction est supérieure ou égale à 90%.

Selon la présente invention, on peut raisonnablement envisager que le macrocarpal A et/ou le macrocarpal B et/ou le macrocarpal C et/ou le macrocarpal G soient utilisés pour la préparation d'un médicament ou d'un complément alimentaire destiné à traiter et/ou prévenir le surpoids ou l'obésité.

La présente invention concerne également un extrait enrichi d'Eucalyptus caractérisé en ce qu'il contient au moins 1 composé de formule (I) ou l'une quelconque de ses formes diastéréoisomères :

dans laquelle Rl forme avec le carbone auquel il est rattaché un groupement

^CH ₃ ^CH _{3 cC} CH ₃ C=CH2, un groupement ^0H , ^0H ou ^0H et R2 représente un groupement isobutyle, α-isobutyle ou β-isobutyle et en ce que: la fraction massique du macrocarpal A est supérieure ou égale à 3% et strictement inférieure à 90%, préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 50 %, plus préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 40 % et encore plus préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 20 %. la fraction massique du macrocarpal B est supérieure ou égale à 3% et strictement inférieure à 90%, préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 50 %, plus préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 40 % et encore plus préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 20 %. la fraction massique du macrocarpal C est supérieure ou égale à 3% et strictement inférieure à 90%, préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 50 %, plus préférentiellement supérieure ou égale à 3 %

et inférieure à 40 % et encore plus préférentiellement supérieure ou égale à 3 % et inférieure à 20 %. et la fraction massique du macrocarpal G est supérieure ou égale à 5% et strictement inférieure à 90%, préférentiellement supérieure ou égale à 5 % et inférieure à 50 %, plus préférentiellement supérieure ou égale à 5 % et inférieure à 40 % et encore plus préférentiellement supérieure ou égale à 5 % et inférieure à 20 %.

De façon préférée, la présente invention concerne l'utilisation dudit extrait enrichi d'Eucalyptus comme médicament ou complément alimentaire.

La présente invention concerne enfin un procédé de préparation d'un tel extrait enrichi d'Eucalyptus.

Le procédé d'obtention dudit extrait consiste en les étapes suivantes : - broyage de feuilles et/ou de fleurs et/ou de fruits et/ou de tiges et/ou de tronc d'Eucalyptus au moins une extraction avec un solvant organique ou un mélange d'eau et de solvant(s) organique(s) miscible(s) à l'eau. L'extraction est réalisée dans un ratio plante/solvant compris entre environ 1/1 et environ 1/20 et peut être renouvelée 2 à 3 fois. La température du solvant d'extraction peut être égale à la température ambiante ou supérieure, pouvant atteindre la température d'ébullition du solvant engagé. Le temps de contact de la plante avec le solvant est compris entre environ 30 min et environ 72 heures. De façon préférée, le solvant est choisi dans le groupe composé un alcane (pentane, hexane, heptane, octane, cyclohexane), un éther oxyde

(tétrahydrofurane, dioxane, diéthyl éther), un ester (acétate d'éthyle, acétate d'isopropyle), un alcool (méthanol, éthanol, propanol, isopropanol, butanol, octanol), une cétone (méthyléthylcétone, méthylisobutylcétone), un hydrocarbure halogène (chloroforme, dichlorométhane) ou un mélange d'eau et de solvants organiques miscibles à l'eau (un mélange hydro-alcoolique par exemple).

Préférentiellement, le solvant d'extraction est du dichlorométhane ou de l'acétate d'isopropyle.

Dans le cas d'un solvant d'extraction miscible avec de l'eau, le filtrat est mis à sec puis dissous dans un solvant non miscible à l'eau.

Dans le cas d'un solvant non miscible avec l'eau, le filtrat est concentré.

Séparation solide/liquide par des techniques connues de l'homme du métier. Dans un mode de réalisation préférée de l'invention, une ou plusieurs extractions liquide- liquide sont réalisées par addition d'une base, préférentiellement du carbonate de sodium (Na ₂ CO ₃ ). Les phases aqueuses basiques réunies sont acidifiées par addition d'acide, préférentiellement l'acide chlorhydrique (HCl) puis extraites par une à plusieurs extractions liquide-liquide réalisées avec un solvant non miscible avec de l'eau. Avantageusement, l'acidification conduit à l'obtention d'un pH environ égal à 1.

Les phases organiques réunies peuvent être séchées sur sulfate de sodium puis concentrées sous vide à une température variant de la température ambiante à celle d'ébullition.

Le concentrât est séché par des moyens de séchage classiques (nébulisation, étuve ...) à des températures ne dépassant pas 6O ⁰ C de préférence et constitue l'extrait enrichi en macrocarpal G. Cet extrait peut être stabilisé par addition d'un, antioxydant comme par exemple l'acide ascorbique ou l'acide citrique à des quantités comprises entre 0,05 à 1 g pour 100 g d'extrait sec.

Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, l'extrait d'eucalyptus ou l'extrait d'Eucalyptus dit « enrichi en au moins un composé de la formule (I) ou l'une quelconque de ses formes diastéréoisomères » est également obtenu par un procédé d'extraction utilisant un fluide supercritique comme solvant d'extraction. Les feuilles, les fleurs, les fruits, les tiges ou le tronc d'Eucalyptus (Eucalyptus sp.) ou un mélange de ces parties sont broyées ou non, puis extraites avec un fluide supercritique pouvant être du dioxyde de carbone.

Une première extraction par du CO2 supercritique, préférentiellement, est réalisée dans les conditions suivantes: - la température du fluide est comprise entre environ 40°C et environ 8O ⁰ C, et préférentiellement entre environ 40°c et environ 60 ⁰ C ; sa pression est comprise entre environ 80 bars et environ 250 bars, et préférentiellement entre environ 100 bars et environ 200 bars ; la durée d'extraction est comprise entre 1 heure environ et 6 heures environ ;

le débit du fluide sera adapté par l'Homme du Métier en fonction de la quantité de matière à extraire et de la taille de l'autoclave utilisé. De façon préférée, le débit de C02 utilisé dans le procédé selon la présente invention est compris entre 2 à 15 kg / heure, avantageusement 8 à 12 kg / heure ; * pour une quantité de plante comprise entre 200 et 1000 grammes, préférentiellement 500 grammes environ, " et pour un autoclave de capacité comprise entre 2 et 10 litres, préférentiellement de capacité de 5 litres environ.

Lors de cette première étape d'extraction, il est possible d'ajouter un co-solvant organique, de la famille des alcools (dont l'éthanol), des éthers oxyde, des esters ou un mélange de deux ou plusieurs de ces solvants.

La plante ainsi extraite peut ensuite être soumise à une deuxième extraction de façon optionnelle. Le fluide d'extraction est, préférentiellement, le CO2 supercritique avec ou sans co-solvant. Les conditions opératoires sont : - la température du fluide est comprise entre environ 40 ⁰ C et environ 80°C, et préférentiellement entre environ 40°c et environ 6O ⁰ C ; sa pression est comprise entre environ 80 bars et environ 250 bars, et préférentiellement entre environ 100 bars et environ 200 bars ; le débit du fluide est compris entre 2 à 15 kg / heure, avantageusement 8 à 12 kg /heure ;

" pour une quantité de plante comprise entre 200 et 1000 grammes, préférentiellement 500 grammes environ, " et pour un autoclave de capacité comprise entre 2 et 10 litres, préférentiellement de capacité de 5 litres environ. Avantageusement, l'extraction est réalisée dans un ratio massique plante/co- solvant compris entre environ 1/0,1 et 1/5.

Cette deuxième étape d'extraction peut être renouvelée si nécessaire. La durée d'extraction est comprise entre environ 1 heure et environ 3 heures par étape d'extraction additionnelle. On procède ensuite à l'évaporation de l'extrait obtenu.

L'Homme du Métier adaptera les conditions opératoires de ce procédé par fluide supercritique pour obtenir un extrait d'Eucalyptus plus ou moins enrichi.

Le séchage de l'extrait final est réalisé par lyophilisation ou par des moyens de séchage plus classiques connus de l'homme du métier (nébulisation, étuve, ...). Préférentiellement, les températures de séchage ne dépassent pas 60°C environ. L'extrait peut être stabilisé par addition d'un antioxydant comme par exemple l'acide ascorbique, l'acide citrique à des quantités comprises entre environ 0,05 et environ 1 g pour 100 g d'extrait sec.

L'invention sera mieux comprise à l'aide des exemples suivants, qui toutefois n'en limitent pas la portée.

Exemple 1 : Préparation d'un extrait d 'Eucalyptus globulus

Les feuilles d'Eucalyptus globulus sont broyées puis extraites avec 5 volumes d'éthanol à température ambiante. Le temps de contact de la plante avec le solvant est de 48 heures.

La plante est séparée du solvant par filtration.

Le filtrat obtenu est séché sous vide à une température de 60°C. L'extrait ainsi obtenu sera utilisé pour les tests in vitro présentés à l'exemple 5.

L'extrait obtenu contient environ 0,65 g de macrocarpal A, environ 0,7 g de macrocarpal

B, environ 0,4 g de macrocarpal C et environ 1 g de macrocarpal G pour 100g d'extrait sec.

Exemple 2 : Préparation d'un extrait d'Eucalyptus globulus Les feuilles d'Eucalyptus globulus sont broyées puis extraites 3 fois à reflux avec 5 volumes d'éthanol 50% v/v. Le temps de contact de la plante avec le solvant est d' 1 heure environ. La plante est séparée du solvant par filtration. Le filtrat obtenu est concentré jusqu'à 0,5 volume. La purification liquide-liquide est réalisée en additionnant du dichlorométhane. Trois extractions liquide-liquide sont réalisées. Les phases organiques sont réunies et séchées sur sulfate de sodium. Le séchage de l'extrait final est réalisé à 60°C sous vide.

L'extrait obtenu contient environ 1,3 g de macrocarpal A, environ 1,4 g de macrocarpal B, environ 0,8 g de macrocarpal C, et environ 2 g de macrocarpal G pour 100g d'extrait sec.

Exemple 3 : Préparation d'un extrait d'Eucalyptus globulus

Les feuilles d'Eucalyptus globulus sont broyées puis extraites à reflux 2 fois avec 5 volumes du mélange éthanol-eau 50% v/v pendant 1 heure environ.

La plante est séparée du solvant par filtration.

Le filtrat obtenu est concentré puis stabilisé par l'addition de 0,1 g pour 100 g d'extrait sec d'acide citrique.

Le concentrât est congelé puis séché par lyophilisation. L'extrait obtenu contient environ 0,3 g de macrocarpal A, environ 0,35 g de macrocarpal B, environ 0,2 g de macrocarpal C et environ 0,5 g de macrocarpal G pour 100g d'extrait sec.

Exemple 4: 537 g de feuilles d'Eucalyptus sont broyées, puis placées dans un autoclave. Elles sont extraites durant 4 heures par du CO2 supercritique à 40 ⁰ C, 150 bar, avec un débit de 10 kg/h.

Les feuilles ainsi extraites sont soumises à une deuxième extraction par un mélange CO2 supercritique /éthanol à 150 bar, 5O ⁰ C. On engage 1 volume d'éthanol pour 1 poids de plante. On extrait ainsi pendant 2hl5, puis on sèche les feuilles par passage de CO2 seul dans les mêmes conditions opératoires, pendant 30 minutes.

On récupère 273,7 g d'extrait que l'on sèche par évaporation du solvant. On obtient ainsi 27,9g d'un extrait contenant 6,85 g de Macrocarpal G pour 100g d'extrait sec.

Exemple 5 : Evaluation de l'extrait de feuilles d'Eucalyptus globulus sur la recapture de la sérotonine, dopamine et noradrénaline.

Les tests de capture ont été réalisés in vitro sur des synapses de rats. 1) Evaluation de la recapture de la sérotonine (ou 5-HT)

Le protocole utilisé pour cette évaluation est celui décrit dans Perovic , S. and Muller W.E.G., 1995 - Pharmacological profile of hypericum extract : effect on serotonin uptake by postsynaptic receptors, Arzneim-Forsch. Drug Res., 45 : 1145-1148.

Le principe en est le suivant : les synapses issues de cerveaux de rat sont mises à incuber pendant 15 min à 37 ⁰ C avec

0,1 μCi [ ³ H] -sérotonine en présence ou en absence (contrôle) de l'extrait d'Eucalyptus globulus préparé selon l'exemple 1 ou de l'imipramine (référence) dans un tampon contenant 118 mM de NaCl, 5mM de KCl, 2.5 mM MgSO ₄ , 1.2mM de NaH ₂ PO ₄ , 25 mM de NaHCO ₃ , 11 mM de glucose, 10 μM d'EGTA et 50 μM d'acide ascorbique (PH=7.4).

L'activité basale est déterminée en incubant le même mélange pendant 15 min à 37 ⁰ C en présence de 10 μM d'imipramine pour bloquer la recapture.

A la suite de l'incubation, les échantillons sont filtrés rapidement sous vide à travers des filtres en fibre de verre (GB/B, Packard) et rincés deux fois avec du tampon d'incubation glacé pour éliminer la [ ³ H]-sérotonine libre. Les filtres sont séchés et la radioactivité retenue est mesurée par un compteur de scintillation (Topcount, Packard) en utilisant un cocktail de scintillation (Microscint O ₅ Packard).

Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de recapture de la[ H]-sérotonine du contrôle (cf. tableau 1). 2) Evaluation de la recapture de la dopamine (ou DA)

Le protocole utilisé pour cette évaluation est celui décrit dans Janowsky A. Berger P., Vocci F., Labarca R., Skolnick P., and Paul S.M., 1996 - Charcaterization of sodium- dependent [ ³ H]GBR- 12935 binding in brain : a radioligand for sélective labelling of the dopamine transport complex, J. Neurochem., 46, 1272-1276. Le principe en est le suivant : le milieu synaptique (synapses de striatum de rat) est mis à incuber pendant 15 min à 37°C avec 0,1 μCi [ ³ H]-DA en présence ou en absence (contrôle) de l'extrait ^Eucalyptus gïobulus préparé selon l'exemple 1 ou de GBR 12909 (référence) dans la solution tampon (cf. recapture de la sérotonine). L'activité basale est déterminée en incubant le même mélange pendant 15 min à 37°C en présence de 10 μM de GBR 12909 pour bloquer la recapture.

A la suite de l'incubation, les échantillons sont filtrés rapidement sous vide à travers des filtres en fibre de verre (GB/B, Packard) et rincés deux fois avec du tampon d'incubation glacé pour éliminer la [ ³ H]-dopamine libre. Les filtres sont séchés et la radioactivité retenue est mesurée par un compteur de scintillation (Topcount, Packard) en utilisant un cocktail de scintillation (Microscint O, Packard).

Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de recapture de la [ ³ H]-dopamine du contrôle (cf. tableau 1).

3) Evaluation de la recapture de la noradrénaline (ou NE) Le protocole utilisé pour cette évaluation est celui décrit dans Perovic , S. and Muller W.E.G., 1995 - Pharmacological profile of hypericum extract : effect on serotonin uptake by postsynaptic receptors, Arzneim-Forsch. Drug Res., 45 : 1145-1148.

Le principe en est le suivant : le milieu synaptique (synapses d'hypothalamus de rat) est mis à incuber pendant 20 min à 37 ⁰ C avec 0,1 μCi [ ³ H]-NE en présence ou en absence (contrôle) de l'extrait d'Eucalyptus gïobuîus préparé selon l'exemple 1 ou de la protriptylline (référence) dans la solution tampon (cf. recapture de la sérotonine).

L'activité basale est déterminée en incubant le même mélange pendant 20 min à 37°C en présence de 10 μM de protriptylline pour bloquer la recapture.

A la suite de l'incubation, les échantillons sont filtrés rapidement sous vide à travers des filtres en fibre de verre (GBfB, Packard) et rincés deux fois avec du tampon d'incubation glacé pour éliminer la [ ³ H]-NE libre. Les filtres sont séchés et la radioactivité retenue est mesurée par un compteur de scintillation (Topcount, Packard) en utilisant un cocktail de scintillation (Microscint O, Packard).

Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de recapture de la [ H]- noradrénaline du contrôle (Cf. tableau 1). 4) Résultats :

Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition de recapture du neuromédiateur évalué (cf. tableau 1).

Tableau 1 : Evaluation de l'extrait de feuilles d'Eucalyptus globulus sur la recapture de la sérotonine, dopamine et noradrénaline.

On observe une inhibition significative de la recapture de la sérotonine et de la dopamine à 10 μg/ml et des trois neurotransmetteurs à 100 μg/ml.

Exemple 6 : Evaluation d'un extrait d'Eucalyptus enrichi en macrocarpal G vs extrait d'Eucalyptus sans macrocarpal G et vs macrocarpal G pur

Les feuilles d'Eucalyptus globulus sont broyées puis extraites par 5 volumes de dichlorométhane. L'extraction est réalisée deux fois à reflux pendant 1 heure. On procède ensuite à une filtration sous vide. Les filtrats réunis sont concentrés jusqu'à 2 volumes.

Trois extractions liquide-liquide sont réalisées par addition d'un volume de carbonate de sodium (Na ₂ CO ₃ )à 0,1 M.

La phase dichlorométhane épuisée est conservée. Après séchage sur sulfate de sodium, concentration et mise à sec sous vide à 60°C, le résidu obtenu constitue « l'extrait appauvri en macrocarpal » (la fraction massique de macrocarpal G étant inférieure à 0,1

%).

Les phases aqueuses basiques réunies sont acidifiées par addition d'acide chlorhydrique

(HCl) 1 M jusqu'à l'obtention d'un pH environ égal à 1 puis extraites par 3 extractions liquide-liquide avec du dichlorométhane. Les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium puis concentrées et mises à sec sous vide à 60 ⁰ C maximum. Le résidu sec obtenu constitue « l'extrait enrichi en macrocarpal G ». Ce dernier renferme une fraction massique de macrocarpal G de 7%.

L'extrait enrichi est fractionné sur une colonne préparative ayant pour phase stationnaire une phase inverse, Symetry Shield ^® , 5μm (Waters) et pour phase mobile, un mélange acétonitrile / eau / acide trifluoroacétique dans les proportions 95 /5 /0,1%.

La pureté en macrocarpal G de la fraction obtenue est d'environ 97%.

Le protocole ensuite utilisé est identique à celui de l'exemple 5 en ce qui concerne l'évaluation de la recapture de la sérotonine. Les résultats obtenus sont répertoriés dans le tableau 2 ci-après.

Tableau 2 : Comparaison de l'activité d'un « extrait enrichi en macrocarpal G », d'un « extrait sans macrocarpal G » et d'une fraction enrichie en macrocarpal G sur la recapture de sérotonine.

On observe que le pourcentage d'inhibition de recapture de la sérotonine est d'autant plus significatif que la teneur en macrocarpal G est élevée.

Exemple 7 : Détermination de la concentration inhibitrice à 50% (CI ₅₀ ) du macrocarpal A, du macrocarpal B, du macrocarpal C et du macrocarpal G sur la recapture des neuromédiateurs comparativement à celle de l'hyperforine.

Les protocoles suivis sont ceux de l'exemple 5. Ils ont été répétés pour différentes concentrations en macrocarpal A, B, C et G et en hyperforine.

Les courbes d'inhibition obtenues ont permis d'obtenir les valeurs CI ₅₀ ci-après :

Tableau 3 : Détermination de la concentration inhibitrice à 50% (CI ₅₀ ) du macrocarpal A, du macrocarpal B, du macrocarpal C et du macrocarpal G et de l'hyperforine sur la recapture de la sérotonine, de la noradrénaline et de la dopamine

Ces résultats ont permis de mettre en évidence que les 4 composés sont porteurs de l'activité d'inhibition de la recapture de neuromédiateurs. De plus, on observe que les niveaux d'activité de ces 4 composés sont d'ordre équivalent.