藤黄精酸衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种抗肿瘤药物、及其制备方法和 应用，尤其涉及一种藤黄精酸 衍生物、 及其制备方法和应用。 背景技术

随着人们寿命的延长、 以及生活饮食习惯的改变， 癌症患者逐年增多。 据 WHO资料表明， 癌症已成为人类主要的致死性疾病之一， 并且癌症患者将持续增 加； 癌症作为死亡原因， 2008年占 13. 8%， 预计 2015年将占 15%以上。

目前，临床上对恶性肿瘤治疗的主要手段是手 术、放疗、化疗的单用或组合。 而近年来， 恶性肿瘤化疗取得的进展使肿瘤患者生存时间 明显延长， 但是面对肿 瘤细胞的高变异性和多药耐药性的产生，现有 的抗肿瘤药物仍然不能满足临床需 要。细胞毒类药物作为化疗药物主要组成部分 ，在肿瘤治疗中发挥了非常重要的 作用； 目前为止， 这类药物仍占据抗肿瘤药物的主要市场， 这其中包括天然产物 得到的化疗药物， 如紫杉醇类药物等， 因其治疗效果明确而成为临床常用的抗癌 药物。

但是， 长期使用细胞毒类化疗药物会引发肿瘤的多药 耐药性， 使得这类药物 的疗效大幅度降低， 医生也只能靠增加药物的投入剂量， 来提高疗效， 从而降低 了药物使用的安全性； 这是因为， 细胞毒类药物在抑制杀伤肿瘤细胞的同时， 也 会抑制杀伤正常细胞， 而出现不良反应。所有细胞毒药物通常在药效 剂量下， 就 会导致患者出现不良反应， 且随着投入药物剂量的增加， 不良反应成倍加重； 因 此， 化疗药物使用的最大剂量是有严格限制的； 换而言之， 如果一种细胞毒化疗 药物产生化疗耐药性后，靠增加投入剂量提高 疗效是不可行的， 唯一可行的方法 是更换另一种有效的化疗药物。这就需要研究 开发更多的有效化疗药物供临床医 生选用， 但遗憾的是到目前为止， 有效的恶性肿瘤化疗药物。

研究和开发新型、有效抗肿瘤药物无疑是恶性 肿瘤基础和临床研究领域最迫 切的任务之一。

藤黄（Gamboge )为藤黄树的黄色树脂， 产于 印度、 越南等地， 国内产地在 云南， 湖南、 湖北一带， 可作绘画用的黄色颜料。 明代李时珍著《本草纲目 ·草 七 ·藤黄》中记载： "今画家所用藤黄， 皆经煎炼成者。"藤黄是中医药中具有抑 制肿瘤生长， 抑制难治性痈生长功能的一种中药。 藤黄精酸 （结构式 （X所示）， 数字代表碳位置顺序编号）是藤黄中有效成分 之一。 已有研究报道藤黄精酸能在 体外和体内抑制恶性肿瘤生长，诱导肿瘤细胞 凋亡，对多种肿瘤显示出较强的抗 肿瘤活性， 其具 。

(X)

1991年曲宝玺等 （中国肿瘤临床， 1991年第 18卷第 1期， 第 50页） 通过 实验研究表明， 藤黄精酸具有抗癌谱广而毒性较低的特点， 对 S180、 ARS腹水癌、 白血病 P388、 Lewis肺癌和肺腺癌 La795 等实体癌具有较好的抑制作用， 对癌症 的转移也有明显的抑制效果。 并且与藤黄酸 （藤黄中提取的另一种抗肿瘤成分） 相比， 藤黄精酸对小鼠白血病 L1210 的抑制作用更强， 最高生存期延长率可达 292%， 而藤黄酸最高只达到 119%。藤黄精酸对 L1210白血病细胞周期影响的研究 结果表明， 藤黄精酸 （静脉滴注， 10mg/kg)可使 S期细胞减少， ^期细胞增多说 明藤黄精酸可抑制 期细胞的进行。

程卉等 （中草药， 2008年， 第 39卷第 2期， 第 236页）采用 MTT方法观察 了藤黄精酸对多种恶性肿瘤细胞的增殖抑制作 用， 结果显示， 藤黄精酸对人结肠 癌细胞 （HCT-8)、 人肝癌细胞 （BEL-7402)、 人胃癌细胞 （BGC_823)、 人非小细 胞肺癌细胞 （A549 ) 和人卵巢癌细胞 （A2780 ) 的增殖具有明显抑制作用。

藤黄精酸作为一种常见中药藤黄的有效成分， 它在自然界有丰富的来源， 提 取工艺简单、成本低廉，这些因素使得开发藤 黄精酸成为抗肿瘤治疗药物有着广 阔前景。 专利 CN1718183A公开的藤黄精酸制剂， 对人肝癌 BEL_7402、 人肝癌 7721、 人乳腺癌 MCF-7和人宫颈癌 Hela细胞均有抑制作用， 其中， 人肝癌细胞最为敏 感； 专利 CN1718184A公开的藤黄精酸复合物， 将藤黄精酸与吗啉胍、 金刚烷胺、 阿糖胞苷、 苦参碱等抗肿瘤药物联合使用， 在治疗肝癌、 肠癌、 肺癌等肿瘤方面 效果更为突出， 剌激性和毒性都有减小； 专利 CN101947204A公开的藤黄精酸固 体脂质纳米颗粒， 将藤黄精酸制成固体纳米颗粒， 提高了生物利用度、 降低剌激 性、 延长了药效时间。

相比于当前临床使用的药物，天然产物藤黄精 酸尚存在产物活性不够强， 安 全剂量窗口较小等缺点， 而限制了它的开发和应用。 因此， 十分有必要对藤黄精 酸进行结构改造和修饰， 以提高其活性， 增强成药性。 发明内容

针对天然产物藤黄精酸活性不够强， 本发明提供了一种藤黄精酸衍生物， 具 有更好的抗肿瘤活性，从而为寻找抗肿瘤药物 研究的先导化合物或抗肿瘤药物提 供新的候选化合物。

本发明的第一个方面是提供一种藤黄精酸衍生 物，所述藤黄精酸衍生物具有 结构式 （I ) ( II ) 中任意一个所示的分子结构：

( I )

( I D

其中：

A为 -CO-或者 -HC (OH) -。

R ¹ 选自：

1 ) -OR ⁴ ; 其中， R ⁴ 选自下列基团中的任意一个： 氢； 直链或支链的 。的烷基， 或含有氧基、 卤素、 。烷氧基、 烷酰氧基、 。烷氧酰基、 芳香氧基在内的 任意 1至 3个取代基的烷基； C ₃ -C ₈ 的环烷基； 由 1、 2或 3个杂原子取代的^-^。 的烷基;芳香烷基:包括被芳香基取代的 。烷基以及被含有包括酰基、-0CH ₂ 0-、 卤素、 卤代烷基、 芳基、 （： ₃ -(： ₈ 环烷基、 -Cw焼基、 羟基、 酰氧基、 （^-(。烷氧基 在内的任意 1至 3个取代基的芳香基取代的 (^-(。烷基； 芳杂烷基： 包括被芳杂 基取代的^-^。烷基以及被含有包括芳杂基、 （^-^。烷基、 芳烷基、 （： ₃ -(： ₈ 环烷基、

。烷氧羰基、 氨甲酰基、 芳香基和 (^和(： ₆ 胺酰基在内的任意一个取代基的芳杂 基取代的^-^。烷基； 直链或支链的 。的链烯基或含有包括氧基、 卤素、 芳香 环基、 芳烷基、 （^-(。烷氧基、 烷酰氧基、 酰胺基、 酰基、 （^-^。烷氧酰基、 芳香氧基及含 1、 2或 3个杂原子的 (^-(。杂烷基在内的任意 1至 3个取代基的烯 基； 。的环烯基； 。的链炔基或含有包括氧基、 卤素、 芳香环基、 芳烷基、

( -^。烷氧基、 烷酰氧基、 酰胺基、 酰基、 （ -^。烷氧酰基、 芳香氧基及含

1、 2或 3个杂原子的 (^-(。杂烷基在内的任意 1至 3个取代基的炔基；

2 ) -NR¾ ⁶ ，

其中， R ⁵ 和 R ⁶ 可以相同或不同， 并分别选自下列取代基中的任意一种： 氢； 直链 或支链的直链或支链的^-^。的烷基或含有包括 氧基、 卤素、 （^-(。烷氧基、 烷酰 氧基、 (^-(。烷氧酰基、芳香氧基在内的任意 1至 3个取代基的 (^-(。烷基； ₃ - s^ 环烷基； 由 1、 2或 3个杂原子取代的^-^。的烷基； 芳香烷基， 包括被芳香基取 代的 (^-(。烷基以及被含有包括酰基、 -0CH ₂ 0-、 卤素、 卤代烷基、 羟基、 芳基、 (： ₃ _(： ₈ 环烷基、 （^-^。焼基、 羟基、 酰氧基、 （^-(。烷氧基在内的任意 1至 3个取代 基的芳香基取代的 。烷基； 芳杂烷基： 包括被芳杂基取代的 。烷基以及被 含有包括芳杂基、 （ 烷基、 芳烷基、 （： ₃ -(： ₈ 环烷基、 。烷氧羰基、 氨甲酰基、 芳香基 安酰基在内的任意一个取代基的芳杂基取代的 。烷基； 直链或 支链的 ( ^。的链烯基或含有包括氧基、 卤素、 芳香环基、 芳烷基、 。烷氧基、 烷酰氧基、 酰胺基、 安酰基、 。烷氧酰基、 芳香氧基及含 1、 2或 3个杂 原子的 ( -^。杂烷基在内的任意 1至 3个取代基的烯基； 。的环烯基； c.-c^ 链炔基或含有包括氧基、 卤素、 芳香环基、 芳烷基、 （ -^。烷氧基、 烷酰氧基、 酰胺基、 酰基、 （^-(。烷氧酰基、 芳香氧基及含 1、 2或 3个杂原子的 杂烷基在内的任意 1至 3个取代基的炔基；

其中， s、 t均为正整数， 并且 s与 t之和为 2至 10的自然数；

m为 0或 1或 2或 3， 代表环上 R ⁷ 取代基的数量；

n为 0、 1、 2或 3， 代表环上 B的数量； B为碳、 氮或氧；

R ⁷ 、 R ⁸ 所取的基团同 R ⁵ 、 或羰基、 亚氨基、 肸基、 肪基； 或者当 B为叔氮时，

R ⁸ 为氧， 从而与 B形成氮氧化物。

R ² 选自下列取代基中的任意一种： 氢； 直链或支链的 (^-(。的烷基； C ₃ -C ₈ 的环 烷基； 芳香基或^-^。烷基取代芳香基； 芳杂基； （^-(。烷基取代酰基或芳香基取 代酰基。

R ³ 选自下列取代基中的任意一种：氢; (^-(。烷基取代酰基或芳香基取代酰基。

R选自下列取代基中的任意一种： 氢； 直链或支链的 (^-(。的烷基； C ₃ -C ₈ 的环 烷基；直链或支链的 。的链烯基或 。的环烯基；苯基或 (^-(。烷基取代苯基； C ₂ _C ₆ 的链炔基； 含仲胺基的亲核试剂： 包括直链或支链烷胺基、直链或支链烯胺 基； 芳香或芳香烷胺基、 链炔胺基与 α、 β _不饱和酮加成得到的胺。

但是结构式 （I ) 中， R、 R ² 、 R ³ 、 R ⁴ 不同时为氢。 根据本发明上述的藤黄精酸衍生物的一种优选 实施方式，其中， 所述藤黄精 酸衍生物具有结构式 （III) (V) 中任意一个所示的分子结构：

(V)

本发明上述的藤黄精酸衍生物的另一种优选实 施方式，其中， 所述藤黄精酸 衍生物具有结构式 （VI) 所示的分子结构：

( VI )

本发明上述的藤黄精酸衍生物结构式中， R ¹ 优选为选自如下结构中的任意一 种：

1 ) -0-R ⁴ ,

其中， R ⁴ 选自下列基团中的任意一个： 氢； 甲基； 乙基； 丙基； 异丙基； 丁基； 异丁基； 叔丁基； 己基； 辛基； 含有包括氧基、 素、 （ 。烷氧基、 烷酰氧基、

。烷氧酰基、 芳香氧基在内的任意 1至 3个取代基的 。烷基； 环己基； 环 戊基； 环丙基； -CH ₂ CH ₂ 0CH ₂ CH ₃ ; -CH ₂ CH ₂ 0CH ₂ CH ₂ 0CH ₂ CH ₃ ; _C 師 HCH ₃ ; _0CH ₂ 0-、 卤素、 卤代烷基、 羟基、 -CH ₂ CH ₂ N (CH ₂ CH ₃ ) ₂ ; -CH ₂ CH ₂ 0CH ₂ CH ₂ NCH ₃ ; 苄基； 苯乙基； 苯丙基； 四氢吡咯基；哌啶基；吗啉基； -CH ₂ C 0CH ₂ CH ₂ 0CH ₂ NHCH _{3 ;} -CH ₂ CH ₂ NHCH ₂ CH ₃ ; -C (N-乙基四氢吡咯）; -CH ₂ C (CH ₃ ) CH ₂ N (CH ₃ ) _; 含有包括酰基、 芳基、 C ₃ _C ₈ 环烷 基、 （^-^。烷基、 羟基、 酰氧基、 （^-(。烷氧基在内的任意 1至 3个取代基的芳香 基取代的^-^。烷基； 芳杂烷基： 包括被芳杂基取代的 (^-(。烷基以及被含有包括 芳杂基、 烷基、 芳烷基、 （： ₃ -(： ₈ 环烷基、 （^-(。烷氧羰基、 氨甲酰基、 芳香基 和(^-(： ₆ 胺酰基在内的任意一个取代基的芳杂基取 代的 (^-(。烷基； 直链或支链的

。的链烯基或含有包括氧基、 卤素、 芳香环基、 芳烷基、 （^-(。烷氧基、 烷酰 氧基、 酰胺基、 酰基、 （^-(。烷氧酰基、 芳香氧基及含 1、 2或 3个杂原子 的^-^。杂烷基在内的任意 1至 3个取代基的烯基； 。的环烯基； 。的链炔 基或含有包括氧基、 卤素、 芳香环基、 芳烷基、 （^-(。烷氧基、 烷酰氧基、 酰胺 基、 酰基、 （^-(。烷氧酰基、 芳香氧基及含 1、 2或 3个杂原子的 (^-(。杂烷 基在内的任意 1至 3个取代基的 。炔基；

2 ) -NR¾ ⁶ ， 其中， R ⁵ 和 R ⁶ 可以相同或不同， 并分别选自下列取代基中的任意一种： 氢； 甲基； 乙基； 丙基； 异丙基； 丁基； 异丁基； 叔丁基； 己基； 辛基； 包含有羟基、 氧基、 (^-(。烷胺基、 氧基、 ¾素、 （^-(。烷氧基、 烷酰氧基、 （^-(。烷氧酰基、 芳香氧基 在内的任意 1至 3个取代基的 ( 。烷基;环己基;环戊基;环丙基; -CH ₂ CH ₂ 0CH ₂ CH _{3 ;} -CH ₂ CH ₂ 0CH ₂ CH ₂ 0CH ₂ CH ₃ ; -CH ₂ CH ₂ NHCH ₃ ; _C 師（C CH ₃ ) ₂ ; -CH ₂ CH ₂ 0CH ₂ CH ₂ NCH ₃ ; _C (N- 乙基四氢吡咯）； 四氢吡咯基； 哌啶基； 吗啉基； 苄基； -CH ₂ CH ₂ 0CH ₂ CH ₂ 0CH ₂ NHCH _{3 ;} -CH ₂ CH ₂ NHCH ₂ CH ₃ ;苯乙基；苯丙基； _CH ₂ C (CH ₃ ) CH ₂ N (CH ₃ )；含有包括酰基、 _0CH ₂ 0-、 卤素、 卤代烷基、 羟基、 芳基、 （： ₃ -(： ₈ 环烷基、 （ 烷基、羟基、 酰氧基、 。烷 氧基在内的任意 1至 3个取代基的芳香基取代的 (^-(。烷基； 芳杂烷基： 包括被 芳杂基取代的 (^-(。烷基以及被含有包括芳杂基、 （^-^。烷基、 芳烷基、 C ₃ -C ₈ 环烷 基、 （^-(。烷氧羰基、 氨甲酰基、 芳香基和(^-(： ₆ 胺酰基在内的任意一个取代基的 芳杂基取代的 (^-(。烷基； 直链或支链的 (^-(。的链烯基或含有包括氧基、 卤素、 芳香环基、 芳烷基、 。烷氧基、 烷酰氧基、 酰胺基、 酰基、 （^-^。烷氧 酰基、 芳香氧基及含 1、 2或 3个杂原子的 (^-(。杂烷基在内的任意 1至 3个取代 基的烯基； 。的环烯基； 。的链炔基或含有包括氧基、 卤素、 芳香环基、 芳烷基、 （ -^。烷氧基、 烷酰氧基、 酰胺基、 酰基、 （^-^。烷氧酰基、 芳香 氧基及含 1、 2或 3个杂原子的 (^-(。杂烷基在内的任意 1至 3个取代基的 (^-(。炔 基。

R ³ 为下列任意一种取代基： 氢； 甲酰基； 乙酰基； 氨甲酰基； 苯酰基； 苄酰 基； 苯乙酰基。

R ² 为下列任意一种取代基： 氢； 甲基； 乙基； 丙基； 异丙基； 丁基； 异丁基； 叔丁基； 己基； 辛基； 环丙基； 环丁基； 环戊基； 环己基； 环庚基； 苄基； 苯乙 基； 呋喃基； 吡喃基； 2Η-吡咯基； 吡咯基； 咪唑基； 吡唑基； 吡啶基； 甲酰基； 乙酰基； 氨甲酰基； 苯酰基； 苄酰基； 苯乙酰基。

R为下列任意一种取代基： 甲基； 乙基； 丙基； 异丙基； 丁基； 异丁基； 叔 丁基； 己基； 辛基； 环己基； 环戊基； 乙烯基； 丁烯基； 己烯基； 环己烯基； 环 戊烯基； 苯基； 苄基； 苯乙基； 苯丙基； 丁炔基； 己炔基； 吗啉基； 哌啶基； 哌 嗪基。

本发明所述藤黄精酸衍生物的进一步优选实施 方式， 其中， A为 -CO-或 -HC (0H) -<

其中 R ⁷ 为下列基团中的任意- 同 R ⁵ 所定义的取代基团； 羰基； 亚氨基； 肸基；

111、 ：1 为0 或 1 或2 或3 _;

B为碳、 氮或氧；

R ⁸ 所取的基团同 R ⁵ ， 或为氧从而与 X形成氮氧化物 _t

其中， 其中 R ⁷ 为下列基团中的任意一个： 同 R ⁵ 所定义的取代基团； 羰基； 亚 氨基； 肪基；

111 、 ：1为0 或1 或2 或3 _;

B为碳、 氮或氧；

R ⁸ 所取的基团同 R ⁵ ， 或为氧从而与 X形成氮氧化物。

本发明第二个方面是提供一种上述藤黄精酸衍 生物的盐， 所述盐可以是 1 ) 与无机酸形成的盐， 如盐酸盐、 碳酸盐、 硫酸盐； 2) 与有机碱形成的盐； 或 3) 与无机碱形成的盐； 4) 与有机酸形成的盐。

本发明的第三个方面是提供一种制备藤黄精酸 衍生物的方法，藤黄精酸或 结构式（VI ) 的藤黄精酸衍生物引入 R ² 和 R ³ 制备结构式（VII )所示藤黄精酸衍生 物， 其中， 弓 I入 R ² 和 R ³ 的顺序可以变化。

其中， R ³ 通过与酰卤 R¾或酸酐 (R ³ ) ₂ 0进行缩合引入； X为 Cl、 Br或 I。

当 R ² 为烷基取代酰基、 芳香基取代酰基时， 采用与 R3相同的方式引入； 当 R2 为烷基、 环烷基或芳杂基时， 通过与 R ² 的卤代物醚化反应引入。

然后， 将(： ₆ 位碳上的羰基还原制备得到结构式 （VIII )所示的藤黄精酸衍生 物， 和 /或与 R ⁴ 0H、 （III) 所示藤黄精酸衍生物。

其中， R ² 和 /或 R ³ 的缩合反应溶剂可以是氯代甲烷 （如二氯甲烷、 氯仿）、 氯 代乙烷、四氢呋喃等，反应温度优选为 2(T40°C。根据需要还可以加入缚酸剂（如 三乙胺、 吡啶）， 还可以加入催化剂 （如 DMAP)。 R ² 和 R ³ 不同的情况下， 酰卤或酸 酐与藤黄精酸的摩尔比 5:1。

R ² 的卤代物可以是 R¾r、 R ² I， 反应条件优选为在碳酸钠、 碳酸钾或碳酸铯等 碳酸盐或碳酸氢盐存在条件下进行， 反应溶剂优选为 DMA、 DMF等极性溶剂。

C ₆ 位碳上的羰基还原反应可用的还原剂包括 硼氢化钠、硼氢化锂等可用溶剂 包括 crc ₅ 的

(VIII)

本发明第四个方面是提供第二种制备藤黄精酸 衍生物的方法， 以藤黄精酸、 或结构式 （VII) 所示藤黄精酸衍生物、 或结构式 （VIII) 所示藤黄精酸衍生物 为原料， 在碱性条件下， 过氧化剂反应， 将^和^。位碳之间的双键进行氧化， 生 成结构式 （II) 所示的藤黄精酸衍生物。 其中， 所示过氧化氢浓度优选为 30%。 反应溶剂优选为水， 所示碱为可溶于 水的氢氧化物， 如 NaOH、 K0H等。

本发明的第五个方面是提供第三种制备藤黄精 酸衍生物的方法，有机铜试剂 RCu对藤黄精酸、 或结构式 （VII )所示藤黄精酸衍生物、 或结构式 （VIII )所示 藤黄精酸衍生物的 (^和^。位碳之间的双键进行 1, 4-加成， 生成结构式 （I ) 所示 的藤黄精酸衍生物。

其中， 所示加成反应溶剂优选为四氢呋喃、 二氯化碳等， 反应温度优选为 -1(T-50°C， 优选为 -20°C。

本发明的另一方面是提供一种上述藤黄精酸衍 生物在抗肿瘤药物中的应用。 所述藤黄精酸抗肿瘤药物可以是注射剂、 粉针剂等剂型。

所述肿瘤包括人皮肤癌、 人甲状腺癌、 人乳腺癌、 人胃癌、 人结直肠癌、 人 肝癌、 人肺癌、 人卵巢癌、 人头颈癌、 人肾癌、 人膀胱癌、 人肉瘤 （骨、 软骨、 横纹肌等）、 人恶性淋巴瘤、 人白血病、 人前列腺癌、 人恶性胶质瘤、 人宫颈癌、 人食道癌、 人睾丸癌、 人恶性畸胎瘤等。

通过实验验证， 可以看出， 本发明提供的藤黄精酸衍生物， 相比于藤黄精酸 具有更好的抗肿瘤活性， 安全性更好； 并且制备简单。 附图说明

图 1为本发明一种实施例中藤黄精酸衍生物的制� �流程；

图 2为本发明另一种实施例中藤黄精酸衍生物的� �备流程；

图 3为本发明第三种实施例中藤黄精酸衍生物的� �备流程；

图 4为本发明第四种实施例中藤黄精酸衍生物的� �备流程；

图 5为本发明第五种实施例中藤黄精酸衍生物的� �备流程。 具体实施方式

本发明提供了一种藤黄精酸衍生物、所述藤黄 精酸衍生物的盐、 以及所述藤 黄精酸衍生物的制备方法和应用。

本发明所述的藤黄精酸衍生物结构如结构式（ I )和 /或（Π )所示， 并优选 为结构式 （III ) (VI ) 中的任意一种。 本发明制备所述藤黄精酸衍生物的方法的第一 种实施例流程如图 1所示，以 藤黄精酸为原料， 引入 R ² 和 R ³ ， 其中， 引入 R ² 和 R ³ 的顺序可以调整。

本发明制备所述藤黄精酸衍生物的方法的第二 种实施例流程如图 2所示，以 藤黄精酸、 或者第一种实施例制备的藤黄精酸衍生物为原 料， 将(： ₆ 位碳的羰基还 原为羟基。

本发明制备所述藤黄精酸衍生物的方法的第三 种实施例流程如图 3所示，以 藤黄精酸、 第一种实施例或第二种实施例制备的藤黄精酸 衍生物为原料， 与 R ⁴ 0H

进行酯化， 。

本发明制备所述藤黄精酸衍生物的方法的第四 种实施例流程如图 4所示，以 藤黄精酸、 或结构式 （VII ) 所示藤黄精酸衍生物、 或结构式 （VIII ) 所示藤黄 精酸衍生物为原料， 将(： ₈ 和(： ₉ 位碳之间的双键进行氧化， 制备藤黄精酸衍生物。

本发明制备所述藤黄精酸衍生物的方法的第五 种实施例流程如图 5所示，以 藤黄精酸、 或结构式 （VII ) 所示藤黄精酸衍生物、 或结构式 （VIII ) 所示藤黄 精酸衍生物为原料， 有机铜试剂 1对(： ₈ 和(： ₉ 位碳之间的双键进行 1, 4-加成， 生 成结构式 （I ) 所示的藤黄精酸衍生物。

上述的附图广 5、 以及结构式 （I ) (VIII ) 中：

A为 -CO-或者 -HC (OH) -。

R ¹ 选自：

1 ) -OR ⁴ ; 其中， R ⁴ 选自下列基团中的任意一个： 氢； 直链或支链的 (^-(。的烷基， 或含有氧基、 卤素、 （^-(。烷氧基、 烷酰氧基、 （^-(。烷氧酰基、 芳香氧基在内的 任意 1至 3个取代基的烷基； C ₃ -C ₈ 的环烷基； 由 1、 2或 3个杂原子取代的^-^。 的烷基;芳香烷基:包括被芳香基取代的 (^-(。烷基以及被含有包括酰基、-0CH ₂ 0-、 卤素、 卤代烷基、 芳基、 （： ₃ -(： ₈ 环烷基、 -Cw焼基、 羟基、 酰氧基、 （^-(。烷氧基 在内的任意 1至 3个取代基的芳香基取代的 (^-(。烷基； 芳杂烷基： 包括被芳杂 基取代的^-^。烷基以及被含有包括芳杂基、 （^-^。烷基、 芳烷基、 （： ₃ -(： ₈ 环烷基、

。烷氧羰基、 氨甲酰基、 芳香基和 (^和(： ₆ 胺酰基在内的任意一个取代基的芳杂 基取代的^-^。烷基； 直链或支链的 。的链烯基或含有包括氧基、 卤素、 芳香 环基、 芳烷基、 （^-(。烷氧基、 烷酰氧基、 酰胺基、 酰基、 （^-^。烷氧酰基、 芳香氧基及含 1、 2或 3个杂原子的 (^-(。杂烷基在内的任意 1至 3个取代基的烯 基； 。的环烯基； 。的链炔基或含有包括氧基、 卤素、 芳香环基、 芳烷基、

( 。烷氧基、 烷酰氧基、 酰胺基、 酰基、 。烷氧酰基、 芳香氧基及含

1、 2或 3个杂原子的 。杂烷基在内的任意 1至 3个取代基的炔基；

2 ) -NR¾ ⁶ ，

其中， R ⁵ 和 R ⁶ 可以相同或不同， 并分别选自下列取代基中的任意一种： 氢； 直链 或支链的直链或支链的^-^。的烷基或含有包括 氧基、 卤素、 。烷氧基、 烷酰 氧基、 (^-(。烷氧酰基、芳香氧基在内的任意 1至 3个取代基的 (^-(。烷基；（： ₃ _(： ₈ 的 环烷基； 由 1、 2或 3个杂原子取代的^-^。的烷基； 芳香烷基， 包括被芳香基取 代的 (^-(。烷基以及被含有包括酰基、 -0CH ₂ 0-、 卤素、 卤代烷基、 羟基、 芳基、 (： ₃ _(： ₈ 环烷基、 （^-^。焼基、 羟基、 酰氧基、 （^-(。烷氧基在内的任意 1至 3个取代 基的芳香基取代的 (^-(。烷基； 芳杂烷基： 包括被芳杂基取代的 (^-(。烷基以及被 含有包括芳杂基、 （^-^。烷基、 芳烷基、 （： ₃ -(： ₈ 环烷基、 （^-(。烷氧羰基、 氨甲酰基、 芳香基和(^-(： ₆ 胺酰基在内的任意一个取代基的芳杂基取 代的 (^-(。烷基； 直链或 支链的 。的链烯基或含有包括氧基、 卤素、 芳香环基、 芳烷基、 （ -^。烷氧基、 烷酰氧基、 酰胺基、 酰基、 （^-(。烷氧酰基、 芳香氧基及含 1、 2或 3个杂 原子的 ( -^。杂烷基在内的任意 1至 3个取代基的烯基； 。的环烯基； c.-c^ 链炔基或含有包括氧基、 卤素、 芳香环基、 芳烷基、 （ -^。烷氧基、 烷酰氧基、 酰胺基、 酰基、 （^-(。烷氧酰基、 芳香氧基及含 1、 2或 3个杂原子的 杂烷基在内的任意 1至 3个取代基的炔基；

其中， s、 t均为正整数， 并且 s与 t之和为 2至 10的自然数；

m为 0或 1或 2或 3， 代表环上 R ⁷ 取代基的数量；

n为 0、 1、 2或 3， 代表环上 B的数量； B为碳、 氮或氧；

R ⁷ 、 R ⁸ 所取的基团同 R ⁵ 、 或羰基、 亚氨基、 肸基、 肪基； 或者当 B为叔氮时， R ⁸ 为氧， 从而与 B形成氮氧化物。 R ² 选自下列取代基中的任意一种： 氢； 直链或支链的 (^-(。的烷基； C ₃ -C ₈ 的环 烷基； 芳香基或^-^。烷基取代芳香基； 芳杂基； （^-(。烷基取代酰基或芳香基取 代酰基。

R ³ 选自下列取代基中的任意一种：氢; 。烷基取代酰基或芳香基取代酰基。 R选自下列取代基中的任意一种： 氢； 直链或支链的 。的烷基； （： ₃ -(： ₈ 的环 烷基；直链或支链的 ( ^。的链烯基或 ( ^。的环烯基；苯基或 。烷基取代苯基； C ₂ _C ₆ 的链炔基； 含仲胺基的亲核试剂： 包括直链或支链烷胺基、直链或支链烯胺 基； 芳香或芳香烷胺基、 链炔胺基与 α、 β _不饱和酮加成得到的胺。

但是结构式 （I ) 中， R、 R ² 、 R ³ 、 R ⁴ 不同时为氢。 下面通过具体实施例对本发明所述的藤黄精酸 衍生物、及其制备方法和应用 进行详细的介绍和描述， 以便更好地理解本发明， 但提醒注意的是， 下述实施例 并不限制本发明范围。

实施例 1， 藤黄精酸甲酯的制备

结构式 （VI ) 中， R ¹ 为甲基。

参照图 3， 10ml反应瓶中， 依次加入藤黄精酸 20mg、 碳酸氢钠 6. 5mg、 DMA (Ν, Ν-二甲基乙酰胺） lml、 碘甲烷 15 μ 1。

室温下避光反应， TLC跟踪反应完成程度，反应完毕后，将反应液 导倒入 50ml 水中， 乙醚萃取， 食盐水洗涤、 无水硫酸钠干燥， 层析分离（洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚， 体积比 1 : 12)， 得到 9mg橙黄色胶状物。

实施例 2， 6-甲氧基藤黄精酸甲酯

结构式 （ΠΙ ) 中 R ¹ 为甲基、 R ² 为甲基、 R3为 H。

参照图 1， 25ml反应瓶中， 依次加入实施例 1制备的藤黄精酸甲酯 20mg、 碳酸钾 12mg、 DMA lml , 碘甲烷 15 μ 1。

室温下避光反应， 反应完毕后， 将反应液导倒入 50ml水中， 乙醚萃取， 水 洗、 干燥， 层析分离 （洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚， 体积比 1 : 12)， 得到 12mg橙 黄色胶状物。

实施例 3， 藤黄精酸乙酯

结构式 （VI ) 中， R ¹ 为乙基。 参照 3， 10ml反应瓶中，依次加入藤黄精酸 20mg、碳酸氢钠 6.5mg、 DMA 1ml、 溴乙烷 15 μ 1。

室温下避光反应， 反应完毕后， 将反应液导倒入 50ml水中， 乙醚萃取， 层 析分离 （洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚， 体积比 1:12)， 得到 9mg橙黄色胶状物。 实施例 4， 6-乙氧基藤黄精酸乙酯

结构式 （ΠΙ) 中 R ¹ 为乙基、 R ² 为乙基、 R3为 H。

参照图 1， 25ml反应瓶中， 依次加入实施例 1制备的藤黄精酸乙酯 20mg、 碳酸钾 6mg、 DMA (Ν,Ν-二甲基乙酰胺） lml、 溴乙烷 15μ 1。

室温下避光反应， 反应完毕后， 将反应液导倒入 50ml水中， 乙醚萃取， 水 洗、 干燥， 层析分离 （洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚， 体积比 1:12)， 得到 9mg橙 黄色胶状物。

实施例 5， 藤黄精酰哌啶 结构式 （VI) 中， R ¹ 为

参照图 3， 在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 15.6mg、 二氯甲烷 0.5ml， 冰 浴冷却到 0°C， 滴加 1- (3 -二甲氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺盐酸盐 （EDCI) 6mg、 1-羟基苯并三氮唑 （H0BT) 3.6mg 、 无水哌啶 4.8 μ 1及二氯甲烷 0.4ml配成的 溶液。

自然升温至室温后搅拌反应。 反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚 /二氯甲烷（体积比 1:4:1)， 洗脱得 5mg黄色胶状体。 实施例 6， 藤黄精酰二乙胺

R ¹ 为-咖 ₂ CH ₃ ) ₂ 。

参照图 3， 在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、 二氯甲烷 0.5ml， 冰浴 冷却到 0°C， 滴加 EDCI 6mg、 HOBT 3.6mg 、 乙二胺 10 μ 1及二氯甲烷 0.5ml配 成的溶液。

自然升温至室温后搅拌反应。 反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、 饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚 /二氯甲烷（体积比 1:4:1)， 洗脱得 7mg黄色胶状体。 实施例 7， 藤黄精酰吗啡啉

— N O

R ¹ 为 \ _ / 。

参照图 3， 在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 15. 6mg、 二氯甲烷 0. 5ml， 冰 浴冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 HOBT 6mg 、 吗啡啉 5 μ 1及二氯甲烷 0. 4ml配 成的溶液。

自然升温至室温后搅拌反应， 补加 HOBT 3mg、 吗啡啉 5 μ 1继续反应。 反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0. 5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为氯仿 /乙酸乙酯 （体 积比 8： 1 )， 洗脱得 5mg橙黄色胶状体。

实施例 8， 12-羟基藤黄精酸

参照图 2， 在 10ml 反应瓶中加入藤黄精酸 20mg、 4ml 甲醇， 冰盐浴冷却到 -5°C 。 投入硼氢化钠 44mg。 干燥环境下反应 lh， 自然升至室温， 3h后反应完 成。

加入 3M盐酸水溶液淬灭反应， 以 50ml乙酸乙酯稀释反应液， 以 0. 5M盐酸 水溶液、 饱和食盐水洗涤， 以无水硫酸钠干燥后蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为 乙酸乙酯 /二氯甲烷 （体积比 1 : 4)， 洗脱得 9mg 橙黄色胶状物。

实施例 9， 8， 9-环氧藤黄精酸

8, 9-环氧藤黄精酸结构式如下：

参照图 4，在 10ml 反应瓶中加入藤黄精酸， 50mg、2M氢氧化钠水溶液 0.5ml, 双氧水 0.2ml,

室温反应， 反应结束后， 乙酸乙酯萃取， 以 1.0M盐酸水溶液、 饱和食盐水 洗涤， 以无水硫酸钠干燥后蒸去溶剂，层析分离，洗 脱剂为乙酸乙酯 /石油醚（体 积比 1:3)， 洗脱得 12mg 橙黄色胶状物。

实施例 10， 藤黄精酰正丁胺

即结构式 (VI) 中， A为- CO-， R ¹ 为 -NH-(C ) ₃ -CH ₃ 。

在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、 二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C 下滴加 EDCI 10mg、 H0BT 4.5mg、 正丁胺 6 μ 1及 0.5ml 二氯甲烷配成的溶液。 自然升温至室温搅拌反应。

反应停止后， 以 50ml 二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、 饱和食 盐水次洗涤， 以无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 粗品以硅胶柱层析， 洗脱剂为乙酸 乙酯 /石油醚 /二氯甲烷 （体积比 1:8:1)， 洗脱得 7mg 黄色胶状体。

实施例 11， 藤黄精酰十一烷胺

即结构式 (VI) 中， A为- CO-， R ¹ 为 -NH- 在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、 二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C 下滴加 EDCI 10mg、 H0BT 4.5mg、 正 ^一烷胺 6 μ 1及 0.5ml 二氯甲烷配成的溶 液。 自然升温至室温搅拌反应。

反应停止后， 以 50ml 二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、 饱和食 盐水次洗涤， 以无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 粗品以硅胶柱层析， 洗脱剂为乙酸 乙酯 /石油醚 /二氯甲烷 （体积比 1:8:1)， 洗脱得 7mg 黄色胶状体。

实施例 12， 藤黄精酰异丙胺 即结构式 (VI) 中， A为- CO-， R ¹ 为- NH- CH(CH ₃ ) ₂ 。

在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、 二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C 下滴加 EDCI 10mg、 HOBT 4.5mg、 异丙胺 5 μ 1及 0.5ml 二氯甲烷配成的溶液。 自然升温至室温搅拌反应。

反应停止后， 以 50ml 二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、 饱和食 盐水次洗涤， 以无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 粗品以硅胶柱层析， 洗脱剂为乙酸 乙酯 /石油醚 /二氯甲烷 （体积比 1:8:1)， 洗脱得 7mg 黄色胶状体。

实施例 13， 藤黄精酰二丙胺

即结构式 （VI) 中， A为 -C0-， R ¹ 为 -NHR¾ ⁶ ， 其中， R ⁵ 和 R ⁶ 均为丙基。

在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、 二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C 下滴加 EDCI 10mg、 HOBT 4.5mg、 二丙胺 8 μ 1及 0.5ml 二氯甲烷配成的溶液。 自然升温至室温搅拌反应。

反应停止后， 以 50ml 二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、 饱和食 盐水次洗涤， 以无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 粗品以硅胶柱层析， 洗脱剂为乙酸 乙酯 /石油醚 /二氯甲烷 （体积比 1:4:1)， 洗脱得 7mg 黄色胶状体。

实施例 14， 藤黄精酰异丁胺

即结构式 (VI) 中， A为- CO-， R ¹ 为 -NH-C (CH ₃ )-C -CH ₃ 。

在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、 二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C 下滴加 EDCI 10mg、 HOBT 4.5mg、 异丁胺 6 μ 1及 0.5ml 二氯甲烷配成的溶液。 自然升温至室温搅拌反应。

反应停止后， 以 50ml 二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、 饱和食 盐水次洗涤， 以无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 粗品以硅胶柱层析， 洗脱剂为乙酸 乙酯 /石油醚 /二氯甲烷 （体积比 1:8:1)， 洗脱得 7mg 黄色胶状体。

实施例 15， （2， 6-二甲基哌啶）

R ¹ 为

参照图 3， 在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、 二氯甲烷 0.5ml， 冰浴 冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 HOBT 4.5mg 、 2, 6_二甲基哌啶 8μ 1及二氯甲烷 0.5ml配成的溶液。

反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /苯 （体积 比 1:8)， 洗脱得 5mg黄色胶状体。

实施例 16， 四氢吡咯

参照图 3， 在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、 二氯甲烷 0.5ml， 冰浴 冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 HOBT 4.5mg 、 吡咯烷 5 μ 1及二氯甲烷 0.5ml配 成的溶液。

反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚（体 积比 1： 4 )， 洗脱得 6mg黄色胶状体。

实施例 17， 己胺

R ¹ 为

参照图 3， 在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、 二氯甲烷 0.5ml， 冰浴 冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 HOBT 4.5mg 、 环己胺 7 μ 1及二氯甲烷 0.5ml配 成的溶液。

反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚 / 二氯甲烷 （体积比 1:4:1)， 洗脱得 7mg黄色胶状体。

实施例 18， 藤黄精酰 （乙氧基乙胺）

R ¹ 为 -NH-(C ) ₂ - 0- C - CH ₃ 。

在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 HOBT 4.5mg 、 乙氧乙胺 5mg及二氯甲烷 0.5ml配成的溶液。

反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚 / 二氯甲烷 （体积比 1:4:1)， 洗脱得 5mg黄色胶状体。

实施例 19， 藤黄精酸苄胺 在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 H0BT 4.5mg 、 苄胺 7 μ 1及二氯甲烷 0.5ml配成的溶液。

反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油 醚 /二氯甲烷 （体积比 1:4:1)， 洗脱得 5mg黄色胶状体。

实施例 20， 藤黄精酰乙氧羰甲胺

R ¹ 为 -NH- C - CO- 0- C - CH _3o

在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 H0BT 4.5mg 、 甘氨酸乙酯 10mg及二氯甲烷 0.5ml配成的溶液。

反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚 / 二氯甲烷 （体积比 1:4:1)， 洗脱得 7mg黄色胶状体。

实施例 21， 藤黄精酰哌嗪

-N NH 在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 HOBT 4.5mg 、 哌嗪 4mg及二氯甲烷 0.5ml配成的溶液。

反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /甲醇 （体 积比 10: 1)， 洗脱得 7mg黄色胶状体。

实施例 22， 藤黄精酰甲基哌嗪及其枸橼酸盐

在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 HOBT 4.5mg 、 甲基哌嗪 7 μ 1及二氯甲烷 0.5ml配成的溶液。 反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚 / 二氯甲烷 （体积比 1:4:1)， 洗脱得 7mg黄色胶状体。

藤黄精酰甲基哌嗪溶于乙醇，滴加枸椽酸的乙 醇溶液，加热使生成的沉淀溶 解， 冷却析出淡黄色沉淀， 过滤、 烘干， 得到藤黄精酰甲基哌嗪枸椽酸盐。 实施例 23， 其枸橼酸盐

在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 H0BT 4.5mg 、 苄基哌嗪 11 μ 1及二氯甲烷 0.5ml配成的溶液。

反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚 / 二氯甲烷 （体积比 1:4:1)， 洗脱得 7mg黄色胶状体。

实施例 24， 藤黄精酰（4-乙酰哌嗪）

_ , O

/ \ II

— N N— C— CH ₃

R ¹ 为 \ _ / 。

在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 H0BT 4.5mg 、 乙酰哌嗪 5mg及二氯甲烷 0.5ml配成的溶液。

反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚 / 二氯甲烷 （体积比 1:4:1)， 洗脱得 7mg黄色胶状体。

实施例 25， 藤黄精酰环丙胺

R ¹ 为

在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、二氯甲烷 0.5ml， 冰浴冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 HOBT 4.5mg 、 环丙胺 5 μ 1及二氯甲烷 0.5ml配成的溶液。

反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0.5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚 / 石油醚 （体积比 1 : 8)， 洗脱得 5mg黄色胶状体。

实施例 26， 藤黄精酸 （3-甲氧基四氢吡咯）

参照图 3， 在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、 二氯甲烷 0. 5ml， 冰浴 冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 H0BT 4. 5mg 、 3_甲氧基四氢吡咯 6mg及二氯甲烷 0. 5ml配成的溶液。

反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0. 5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚 / 二氯甲烷 （体积比 1 : 4 : 1 )， 洗脱得 4mg黄色胶状体。

实施例 27， 藤黄精酸 [3- (3-甲氧基四氢吡咯基)丙基]酯

、CH ₃

一〇\ 参照图 3， 在 10ml 反应瓶中， 加入藤黄精酸 20mg、 二氯甲烷 0. 5ml， 冰浴 冷却到 0°C， 滴加 EDCI 10mg、 H0BT 4. 5mg 、 3- ( 3_甲氧基四氢吡咯) 基丙醇 10mg及二氯甲烷 0. 5ml配成的溶液。

反应完毕后， 以 50ml二氯甲烷稀释反应液， 以 0. 5M硫酸水溶液、饱和食盐 水洗涤， 无水硫酸钠干燥， 蒸去溶剂， 层析分离， 洗脱剂为乙酸乙酯 /石油醚 / 二氯甲烷 （体积比 1 : 4 : 1 )， 洗脱得 7mg黄色胶状体。

实施例 28， 10-甲基藤黄精酸

结构式 （V) 中， R ² 和 R ³ 为 H， R为甲基。

参照图 5， 在 5ml 反应瓶中， 加入 24mg镁、 1ml乙醚， 滴加碘甲烷 0. 07ml， 保持体系微沸， 得到澄清的格氏试剂， lOOmg碘化亚铜溶于四氢呋喃， 形成悬浊 液， 冷却至 -40°C加入制备的格式试剂 0. lml， 反应至生成灰色悬浊液。

加入藤黄精酸 （20mg) 的四氢呋喃溶液， -20°C反应。

反应完毕后， 1M盐酸淬灭反应， 乙醚提取， 层析分离得 7mg橙黄色胶状体。 分别用磺酰罗丹明 B 蛋白染色法 （sulfothodalnine B， SRB) 和四氮哇盐 (mieroculture tetrozohuln, MTT) 还原法对本发明合成的化合物进行抗肿瘤 活性的研究 ( Cancer Res.， 1988， 48 (3)： 589 )。

待测化合物： 6-甲氧基藤黄精酸甲酯、藤黄精酸乙酯、 6-乙氧基藤黄精酸乙 酯、 6-乙酰藤黄精酸、 藤黄精酰哌啶、 藤黄精酰二乙胺、 藤黄精酰吗啡啉、 12- 羟基藤黄精酸待测化合物和阳性对照物藤黄精 酸以二甲亚砜稀释， 浓度梯度为 10— ⁴ M 、 10— ⁵ M 、 10— ⁶ M 、 10— ⁷ M、 10— ⁸ M。

下述内容中：

抑制率 = [ (对照组 0D值-给药组 0D值) /对照组 0D值] X 100%

结果评定：

无效： 10— 抑制率 <85 %；

弱效： 10— 抑制率 85%或 10— ⁶ M>50 %；

强效： 10— ⁶ M抑制率 75%或 10— ⁷ M抑制率〉 50%。

一、 对 Cal27肿瘤细胞生长的抑制

人口腔鳞癌细胞 Cal27用含 10%胎牛血清的 DMEM培养， 测定时将对数生长期 的细胞配成细胞悬液， 接种于 96 孔培养板上。 实验组每孔分别加入 10 μ ΐ不同 浓度的待测化合物， 空白对照组加等体积含最高浓度溶剂（即 10— ⁴ Μ的二甲亚砜) 的 DMEM培养液， 在 37 °C， 5%二氧化碳条件下培养 72小时后， 用三氯乙酸固定， 每孔加入 100 μ ΐ SRB液， 洗去未结合的 SRB， 用自动分光光度平板读数计测定 550nm处的 0D值。 以不加药物的肿瘤细胞组为空白对照， 计算药物对该肿瘤细胞 的生长抑制率， 结果见表 1。

表 1， 待测 合物对 Cal27 11 ³ 瘤细胞 长抑制率 浓度 10— ⁴ M 10— ⁵ M 10— ⁶ M 10— ⁷ M 10— ⁸ M 效果 藤黄精酸 100 100 5 0 0 弱效

6-甲氧基藤黄精酸甲酯 100 100 100 0 0 强效 藤黄精酸乙酯 100 100 98 0 0 强效

6-乙氧基藤黄精酸乙酯 100 100 94 0 0 强效

6-乙酰藤黄精酸 100 100 96 0 0 强效 藤黄精酰哌啶 100 100 70 0 0 弱效 藤黄精酰二乙胺 100 100 100 23 0 强效 藤黄精酰吗啡啉 100 100 100 14 0 强效

12-羟基藤黄精酸 100 100 100 0 0 强效

8, 9-环氧藤黄精酸 100 100 100 0 0 强效 表 2， 待测 合物对 MCF-7 11 ³ 瘤细胞 长抑制率 浓度 10— ⁴ M 10— ⁵ M 10— ⁶ M 10— ⁷ M 10— ⁸ M 效果 藤黄精酸 100 100 0 0 0 弱效

6-甲氧基藤黄精酸甲酯 100 100 80 0 0 强效 藤黄精酸乙酯 100 100 96 0 0 强效

6-乙氧基藤黄精酸乙酯 100 100 86 0 0 强效

6-乙酰藤黄精酸 100 100 83 0 0 强效 藤黄精酰哌啶 100 100 67 0 0 弱效 藤黄精酰二乙胺 100 100 84 0 0 强效 藤黄精酰吗啡啉 100 100 78 14 0 强效

12-羟基藤黄精酸 100 100 82 0 0 强效

8, 9-环氧藤黄精酸 100 100 80 0 0 强效 二、 对人乳腺癌 MCF-7肿瘤细胞生长的抑制

人乳腺癌 MCF-7细胞用含 10%胎牛血清的 DMEM培养， 测定时将对数生长期的 细胞配成细胞悬液， 接种于 96孔培养板上。 实验组每孔分别加入不同浓度的待 测化合物， 空白对照组加等体积含最高浓度溶剂 （即 10— ⁴ M 的二甲亚砜） 的 DMEM 培养液， 在 37°C， 5%二氧化碳条件下培养 72小时后， 每孔加入 MTT液至终浓度 lmg/ml孵育 4小时， 吸去上清加入 200 μ 1 DMS0溶解结晶， 用自动分光光度平板 读数计测定 490nm处的 0D值。 以不加药物的肿瘤细胞组为空白对照， 计算药物对 该肿瘤细胞的生长抑制率， 结果见表 2。

通过上述表格可以看出，本发明制备的藤黄精 酸衍生物具有更强的抑制肿瘤 细胞生长的作用。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述， 但其只是作为范例， 本发明并 不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域 技术人员而言， 任何对本发明进行 的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。 因此，在不脱离本发明的精神和范 围下所作的均等变换和修改， 都应涵盖在本发明的范围内,