La présente invention concerne un procédé d'extrac¬ tion et de purification de saponines hémolytiques à partir d'un mélange saponosidique.

Les mélanges saponosidiques du commerce comprennent environ une quarantaine de molécules saponosidiques, dont certaines seulement sont à action hémolytique, accompagnées d'impuretés polaires notamment des oses, des tanins, des sels et des molécules parasites diverses.

Le pouvoir hémolytique de ces mélanges saponosidi¬ ques est faible et est affecté entre autres par la présence des oses qui faussent les résultats d'analyse. Il est nécessaire pour obtenir un produit efficace dans sa fonction hémolytique d'isoler les saponines des impuretés polaires et apolaires.

L'isolement des saponines triterpéniques a été traité dans l'ouvrage "Les Triterpénoîdes en physiologie végétale ou animale" de Messieurs BOITEAU, PASICH et RAKOTA RATSIMAMANGA.

Cet ouvrage enseigne que pour l'extraction, on effectue la purification du mélange avec de l'éther de pétrole et que l'on utilise ensuite 1'éthanol à 50% ou 90 % ou le méthanol. Les extraits obtenus sont ensuite concentrés par évaporation et introduits goutte à goutte dans l'éther ethylique refroidi ou 1 'acétone.

Selon ce procédé, on lave la saponine précipitée dans l'éther jusqu'à trois fois ; puis on dissout la saponi

ne ainsi purifiée dans l'eau avec addition de chloroforme, on soumet la solution à électrodialyse ; ensuite, on l'évaporé et l'on dissout le résidu dans le méthanol pour précipiter la saponine finalement avec l'éther. II est évident que la technique d'extraction énon¬ cée par cet ouvrage est une technique de Laboratoire sans application pratique pour l'extraction de saponines hémolytiques.

D'une part, cette technique est complexe et coûteuse ; d'au- tre part, elle fait appel à des produits, méthanol, éther, chloroforme qui laissent des traces dans les molécules de saponines et dont 1 'usage est interdit pour la production de produits à usage médicinal ou d'analyse.

La présente invention vise à obvier à ces inconvé- nients en permettant la production de saponines hémolytiques exemptes d'impuretés.

Le procédé selon 1 'invention consiste à plonger le mélange saponosidique dans un bain d'éthanol absolu, avec agitation, à la température de 40° à 60° celsius. Cela provoque la dissolution des saponines et l'isolement des impuretés polaires dont les oses.

Le bain est ensuite soumis à une filtration rapide à chaud (40° à 60° ).

A titre d'exemple, par filtration rapide, on entend une fil- tration d'un litre à la seconde.

Le filtre utilisé peut être un filtre en verre fritte de po¬ rosité trois à cinq. • Cette filtration sépare les saponines dissoutes des impure¬ tés polaires.

Le filtrat est ensuite précipité par refroidisse¬ ment à une température pouvant aller jusqu'à moins 40° celsius. Le précipité est ensuite soumis à une filtration sur un filtre du même type de porosité 3 à 5 ; la solution est éli¬ minée et le précipité est séché en evaporateur rotatif à basse pression ou à l'étuve sous vide ou lyophilisé ou toute autre forme de séchage à une température inférieure à 40° Celsius. Les essais réalisés ont montré que 10 grammes d'un mélange saponosidique du type Saponin Q/RS (RN - DAB 9) mélangés à 150 millilitres d'éthanol absolu permettaient d'obtenir jusqu'à 2 grammes de saponines hémolytiques. Les meilleurs résultats ont été obtenus à partir du mélange saponosidique de l'espèce Quillaja saponaria Molina ou Quillaja smegmadermos.