COMPOSTOS

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS) é uma doença infectocontagiosa causada pelo Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV). Para o tratamento da AIDS são utilizados fármacos antirretrovirais, bem como . suas combinações. No entanto, o uso continuado da terapia empregando essas drogas acarretou o desenvolvimento de mecanismos de resistência, sendo necessárias pesquisas com a finalidade de encontrar novas opções terapêuticas para o tratamento da doença.

[002] Assim, a presente invenção se refere a compostos inibidores do HIV consistindo de derivados de isatina de fórmulas I, II ou III, conforme representados a seguir,

onde nas fórmulas I, II e III:

R ₁ é selecionado dentre H, CH3 ou Cl

R ₂ é selecionado dentre um dos seguintes radicais: zidovudina, amprenavir ou uma cadeia fosfonato acíclica, representados a seguir:

[003] Ou seja, a presente invenção consiste de compostos inibidores do HIV, obtidos através da hibridização molecular de derivados de isatina com zidovudina, amprenavir e cadeias fosfonatas acíclicas, onde essas cadeias são semelhantes aquelas contidas na estrutura do tenofovir. Estes novos compostos híbridos contém o anel 1 ,2,3-triazol.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[004] Em 1981 , ocorreu o primeiro relato clínico da Síndrome da Imunodeficiência Humana (AIDS, do inglês, "Acquired Immunodeficiency Syndrome"). Após a constatação de que o retrovírus HIV (do inglês, "Human Immunodeficiency Virus") compreendia o agente etiológico desta patologia, várias pesquisas se concentraram na busca pela cura dessa síndrome; no entanto, até o momento, não foi identificado nenhum princípio ativo capaz de erradicar o vírus do organismo.

[005] Contudo, grandes avanços foram alcançados no tratamento da AIDS através do desenvolvimento de novos compostos antirretrovirais. Atualmente, o arsenal terapêutico conta com 28 medicamentos, divididos em seis diferentes classes. A partir de 1996, a terapia passou a empregar a combinação de fármacos de diferentes classes antirretrovirais em um "coquetel" e se tornou um tratamento padrão, sendo esta estratégia comumente chamada de Terapia Antirretroviral Combinada de Alta Potência (HAART, do inglês, "Highly Active Antiretroviral Therapy). A introdução desse esquema terapêutico minimizou o desenvolvimento de cepas virais resistentes.

[006] O Brasil foi um dos países pioneiros no âmbito da distribuição e acesso gratuito à HARRT. Os medicamentos passaram a ser disponibilizados aos pacientes soropositivos pelo Sistema Único de Saúde (SUS), através da política de medicamentos do Programa Nacional de Doenças Sexualmente Transmissíveis e Aids (DST/AIDS), fundamentada pela Lei Federal 9.313/96. Atualmente, o país é produtor de medicamentos genéricos antirretrovirais.

[007] A AIDS ainda permanece como um problema de saúde mundial que desafia a comunidade científica. Em 2014, somente no Brasil, de acordo com o último boletim epidemiológico divulgado pelo Ministério da Saúde, estima-se que 734 mil pessoas estavam vivendo com o HIV/AIDS. O acesso à HAART tem aumentado significativamente a sobrevida desses pacientes, levando à diminuição dos casos de óbito. No ano de 2011 , em todo o mundo, 1 ,7 milhão de pessoas morreram devido a essa doença, e esse número representa uma redução de 24%, quando comparado aos registros no ano de 2005 que na ocasião chegavam a cerca de 2,3 milhões casos.

[008] O agente etiológico responsável pela transmissão da doença é o HIV, um retrovírus que apresenta dois sorotipos principais: o HIV-1 e o HiV-2. O HIV-1 é o mais disseminado, sendo o causador da maioria dos casos de AIDS. O HIV-2 está mais restrito à África Ocidental, e possui menores taxas de mutação, virulência e transmissibilidade, sendo a sua replicação no organismo humano de forma mais lenta.

[009] O objetivo da terapia consiste em promover a redução da replicação virai efetiva. Para atingir tal propósito, o emprego da HAART é a melhor estratégia, visto que o uso de uma combinação de diferentes fármacos, inibindo várias etapas do ciclo de replicação, diminuiu consideravelmente a carga virai no organismo. As associações podem ser feitas através do uso de coquetéis (diferentes medicamentos ingeridos simultaneamente) ou de formulações em dose fixa combinada (DFC). Nos últimos anos, o uso das DFCs tem aumentado devido à vantagem económica que propiciam às indústrias farmacêuticas, além de melhorar a adesão ao tratamento dos pacientes soropositivos.

[010] Os fármacos aprovados para o tratamento da AIDS estão divididos em seis classes, de acordo com o ponto de inibição da replicação virai. São eles: os inibidores de entrada (IE); os inibidores de fusão (IF); os inibidores nucleosídeos da transcriptase reversa (ITRN); os inibidores não nucleosídeos da transcriptase reversa (ITRNN); os inibidores de integrase (II) e os inibidores de protease (IP).

[011] O tenofovir (TDF) e a zidovudina (AZT) são os ITRN mais utilizados na terapia antirretrovirai. Com relação aos IP, o amprenavir (APV) é o que apresenta meia vida mais longa no organismo, além de possuir uma alta solubilidade em água e boa lipoficilidade. Contudo, em 2003, após a aprovação do fosamprenavir, o APV teve seu uso descontinuado.

[012] Atualmente, apesar da existência de todo o arsenal terapêutico, muitos desafios permanecem, ou seja:

• A longa duração do regime posológico;

• Os efeitos colaterais cardiometabólicos e outras toxicidades que ocorrem a longo prazo; • A diversidade genética do vírus e o surgimento de resistência aos fármacos;

• Novas transmissões provenientes de reservatórios retrovirais em macacos;

• A elevada taxa de transmissibilidade, incluindo as cepas resistentes aos fármacos disponíveis, em ritmo contínuo, em várias partes do mundo.

[013] Todos esses fatores elevaram o número de pesquisas nessa área, na tentativa de obter novos compostos, com mecanismos de ação reconhecidos ou inovadores. Uma estratégia para obter novas opções terapêuticas com maior rapidez é a síntese de moléculas que já contenham em sua estrutura uma unidade com atividade antirretroviral reconhecida. As isatinas e os triazóis são núcleos heterocíclicos considerados bons protótipos na busca de substâncias com potencial atividade antirretroviral.

[014] De acordo com MORPHY, R.; RANKOVIC, Z. (Designed multiple ligands. An emerging drug discovery paradigm. Journal of Medicinal Chemistry, v. 48, 21 , p. 6523-6543, 2005) a síntese de moléculas híbridas tem sido utilizada com o objetivo de pesquisar novos fármacos. Os compostos híbridos podem ser obtidos através do acoplamento ("docking") de substâncias com atividade farmacológica e toxicidade estabelecidas e, muito frequentemente, os sistemas resultantes possuem características bioquímicas melhoradas, relativamente aos seus compostos anteriores.

[015] Não existe na literatura qualquer descrição dos compostos derivados da isatina de fórmula I utilizados como antirretrovirais, sendo descritos somente alguns derivados iminicos obtidos a partir deste sistema, tais como:

^• Substâncias obtidas a partir da reação com a lamivudina como pró- fármacos (SRIRAM, D.; YOGEESWARI, P.; GOPAL, G. Synthesis, anti-HIV and antitubercular activities of lamivudine prodrugs. European Journal of Medicinai Chemistry, v. 40, p. 1373-1376, 2005); •Compostos obtidos a partir da reação com a sulfonamidas como inibidores de integrase (II) (SELVAM, P.; MURUGESH, N.; CHANDRAMOHAN, M.; DEBYSER, Z.; WITVROUW, M. Design, synthesis and anti-HIV activity of novel isatina-sulphonamides. Indian Journal Pharmaceutical Sciences, v. 70, 6, p. 779-782, 2008. SELVAM, P.; MURUGESH, N.; CHANDRAMOHAN, M.; HOMBROUCK, A.; VERCAMMEN, J.; ENGELBORGHS, Y.; DEBYSER, Z.; WITRROUW, M. Inhibition of HIV replication and integrase activity by 4-[{1 ,2- dihydro-2-oxo-3H-indol-3-ylidene)amino]-N-(4,6-dimethyl-2-py rtmidinyl)- benzenesulphonamide and derivatives. International Journal of Drug Design and Discovery, v. 1 , 2, p. 161-168, 2010);

• Estruturas químicas sintetizadas a partir da reação com a tiossemicarbazida como inibidores da transcriptase reversa (ITR) (TEITZ, Y.; BARKO, N.; ABRAMOFF, M.; RONEN, D. Relationships between structure and antiretroviral activity of thiosemicarbazone derivatives. Chemotherapy, v. 40, 3, p. 195-200, 1994).

[016] A literatura descreve que o uso do derivado 3-(ciclopropiletinil)-3- hidroxi-índolin-2-ona como inibidor da TR, de fórmula II, ao ser substituído por grupamentos volumosos na posição N-1 do anel indolin-2-ona ocasionou a perda de atividade na TR, (BOECHAT, N.; KOVER, W. B.; BONGERTZ, V.; BASTOS, M. M.; ROMEIRO, N. C; AZEVEDO, M. L. G.; WOLLINGER, W. Design, synthesis and pharmacologicai evaluation of H1V-1 reverse transcriptase inhibition of new indolin-2-ones. Medicinal Chemistry, v. 3, n. 6, p. 533-542, 2007). Nos compostos de fórmula II foi verificado que a inserção de grupos volumosos em N-1 não prejudica a atividade inibitória da TR.

[017] Não há relatos na literatura em relação à utilização como antirretroviral do derivado 3,3-difluoro-indolin-2-ona, composto de fórmula III, obtido a partir da reação com a isatina. O mesmo apresenta as atividades anti- inflamatória, analgésica, anticonvulsivante, anti-alzheimer, antidepressivas, antipsicóticas, ansiolíticas e antiparkinsoniana (BOECHAT, N.; KOVER, W. B.; BONGERTZ, V.; BASTOS, M. M., ROMEIRO, N. C; AZEVEDO, M. L. G.; WOLLINGER, W. Design, synthesis and pharmacoiogical evaluation of HIV-1 reverse transcriptase inhibition of new indolin-2-ones. Medicinal Chemistry, v. 3, n 6, p 533-542, 2007; WO2006008067, 2006; e WO2015012400, 2015)

[018] A presente invenção compreende o desenvolvimento de compostos multialvos que, além de serem ativos, não apresentam os mesmos problemas observados nos fármacos já utilizados na terapia atual da doença. Além disso, estes compostos agirão como inibidores do vírus da hepatite B (HBV), uma das principais coinfecções diagnosticadas em pacientes soropositivos.

[019] O vírus da Hepatite B (HBV) infecta cronicamente mais de 350 milhões de pessoas, e permanece sendo uma ameaça à saúde pública global (EL-SERAG, H. B. Epidemiology of virat hepatitis and hepatocellular carcinoma. Gastroenterology, v. 142, p. 1264-1273, 2012; SEEGER, C; MASON, W. S.; ZOULIM, F.; Hepadnaviruses. In: KNIPE, D. M.; HOWLEY, P. M. (eds). Fields Virology, Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins, p. 2977-3029, 2007). O HBV é um membro da família hepadnaviridae (SEEGER, C; MASON, W. S.; ZOULIM, F.; Hepadnaviruses. In: KNIPE, D. M.; HOWLEY, P. M. (eds). Fields Virology, Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins, p. 2977-3029, 2007). Seu genoma virai apresenta 3.2-kb e depende de uma polimerase codificada por este genoma para se replicar. Esta polimerase virai é uma transcriptase reversa especializada (TR). Assim como a TR do HIV, a TR do HBV usa o RNA pregenomico (pgRNA) como um molde para sintetizar uma fita negativa de DNA virai (SEEGER, C; MASON, W. S.; ZOULIM, F.; Hepadnaviruses. In: KNIPE, D. M.; HOWLEY, P. M. (eds). Fields Virology, Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins, p. 2977-3029, 2007; HU, J.; SEEGER, C. Expression and characterization of hepadnavirus reverse transcriptases. Methods Énzymoly, v. 275, p. 195-208, 1996). A fita negativa de DNA é usada para síntese de uma fita positiva de DNA. A TR dos hepadnavirus é composta por quarto domínios. O domínio catalítico, localizado no C-terminal, apresenta homologia de 78% com a TR do HIV. Assim, é justificado o fato dos novos inibidores da TR do HIV também apresentar atividade contra a TR do HBV (LANFORD, R. E.; NOTVALL, L; LEE, H.; BEAMES, B. Transcomplementation of nucleotide priming and reverse transcription between independently expressed TP and RT domains of the hepatitis B virus reverse transcriptase. Journal of Virology, v. 71 , 2996-3004, 1997; SEEGER, C; MASON, W. S.; ZOULIM, F.; Hepadnaviruses. In: KNIPE, D. M.; HOWLEY, P. M. (eds). Fields Virology, Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins, p. 2977-3029, 2007; HU, J.; SEEGER, C. Expression and characterization of hepadnavirus reverse transcriptases. Methods Enzymoly, v. 275, p. 195-208, 1996).

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

[020] A presente invenção tem como objetivo principal os compostos derivados de isatina, também conhecidos como derivados indolínicos, de fórmulas I, II ou III

onde nas fórmulas I, II e III:

R ₁ é selecionado dentre H, CH ₃ ou Cl

R ₂ é selecionado dentre um dos seguintes radicais: zidovudina, amprenavir ou uma cadeia fosfonato acíclica, representados a seguir.

[021] Outro objetivo da invenção se refere ao uso dos compostos de fórmulas I, II e III no tratamento de AIDS, do HBV e da coinfecção HIV-HBV.

[022] Também consiste um outro objetivo da invenção o método de tratamento usando os compostos de fórmulas I, II e III.

[023] Quando cada uma das fórmulas I, II e III de compostos derivados de isatina são substituídas pelos radicais R ₁ e R ₂ , são obtidos 9 compostos. Assim, ao substituir I, ii e III pelos radicais e R ₂ são obtidos ao todo 27 compostos. Para um melhor entendimento da presente invenção, denominou- se os 9 compostos com as letras do alfabeto de a-i. Portanto, as moléculas obtidas a partir da fórmula I recebem a denominação de l(a-i), as da fórmula II de ll(a-i) e as da fórmula III de lll(a-i) [024] As moléculas l(a-i), ll(a-i) e lll(a-i) são compostos inovadores, com elevado percentual de inibição da transcriptase reversa (TR) do HIV-1 e baixa toxicidade, que podem ser utilizadas como novas opções para o tratamento de pacientes soropositivos.

[025] Nos últimos anos, a síntese de moléculas híbridas tem sido utilizada como estratégia na descoberta de novos fármacos. Os híbridos podem ser obtidos através do acoplamento ("docking") de substâncias com atividade farmacológica e toxicidade estabelecidas e, muito frequentemente, os sistemas resultantes possuem características bioquímicas melhoradas, relativamente aos seus compostos anteriores. No entanto, os novos compostos podem ter mecanismos de ação totalmente distintos dos seus compostos de origem.

[026] Os compostos da presente invenção compreendem duas partes, sendo que a primeira parte das novas moléculas híbridas, derivadas da isatina de fórmulas l(a-i), ll(a-i) e lll(a-i), e os mesmos não apresentam relatos na literatura do seu uso como antirretroviral.

[027] Portanto, para o composto l(a-i) foi utilizada a isatina, para o composto ll(a-i) foi empregado o derivado 3-(ciciopropiletinil)-3-hidroxi-indolin- 2-ona e para o composto Hl(a-i) foi usado o derivado 3,3-difluoro-indolin-2-ona, sendo que os compostos composto ll(a-i) e lll(a-i) foram obtidos a partir da reação com a isatina.

[028] A segunda parte das estruturas químicas das novas moléculas híbridas l(a-i), ll(a-i) e lll(a-i) pode ser formada pelos radicais R ₂ que compreende a zidovudina (AZT), amprenavir (APV) ou por uma cadeia fosfonato acíclica, similar a contida na estrutura do fumarato de tenofovir desoproxila (TDF).

[029] O AZT e o TDF são representantes da classe dos inibidores da transcriptase reversa nucleosídeos (ITRN) e nucleotídeos (ITRNt), e o APV é um representante dos inibidores de protease (IP). O AZT e o APV foram inseridos integralmente nas estruturas químicas derivadas da isatina de fórmulas I, II e III; no entanto, o diferencial inovador dos novos compostos l(a-i), ll(a-i) e lll(a-i) consiste da inibição de diferentes enzimas envolvidas no ciclo da replicação virai, o que não ocorre com os compostos de origem. Em relação à cadeia fosfonato acíciica similar contida no TDF, vale ressaltar que, nas novas moléculas híbridas, foi retirada da parte do carboidrato acíclico, que no fármaco de origem é essencial para a atividade biológica.

[030] Destaca-se que na presente invenção o composto l(a-i) foi obtido a partir da reação com a isatiria, tendo sido empregado como antirretroviral.

[031 ] O composto ll(a-i), derivado do 3-(ciclopropiletinil)-3-hidroxi-indolin- 2-ona, foi obtido a partir da reação com a isatina, e é empregado como inibidor da TR, e o diferencial inovador destes compostos consiste na substituição por grupamentos volumosos na posição N-1 do anel indoiin-2-ona mantendo a atividade na TR.

[032] Para o composto lll(a-i) tem-se que seu derivado 3,3-difluoro- indolin-2-ona, obtido a partir da reação com a isatina, foi utilizado pela primeira vez como antirretroviral.

[033] Apesar dos compostos l(a-i), ll(a-i) e lll(a-i) apresentarem em sua estrutura a AZT, o APV e uma cadeia fosfonato acíciica similar ao do TDF, eles apresentam como maior diferencial de inovação a inibição de outras enzimas envolvidas no ciclo de replicação virai e da TR do HBV, tornando-os substâncias multialvos. Este fato é de extrema relevância, visto que o uso destes compostos pode eliminar os problemas decorrentes do uso das combinações de inibidores de diferentes classes que, em geral, é realizado através das associações via uso de coquetéis (diferentes medicamentos ingeridos simultaneamente) ou de formulações em dose fixa combinada (DFC).

[034] Os compostos de fórmula l de acordo com a IUPAC recebem a seguinte nomenclatura:

. 1 -((1 -(2-(hidroximetil)-5-(5-metil-2,4-dioxo-3,4-diidropirimidin- 1(2H)- il)tetraidrofuran-3-il)-1 H-1 ,2,3-triazol-4-il)metil)indolina-2,3-diona; • 1-((1-(2-(hidroximetil)-5-(5-metil-2,4-dioxo-3,4-diidropirim idin-1(2H il)tetraidrofuran-3-il)-1 H-1 ,2,3-triazol-4-il)m

• 5-cloro-1 -((1 -(2-(hidroximetil)-5-(5-metil-2,4-dioxo-3,4-diidropirimidin-

1 (2H)-il)tetraidrofuran-3-il)-1 H-1 ,2,3-triazol-4-il)metil)indolina-2,3-diona;

• tetraidrofuran-3-il ((2S ₎ 3R)-4-(4-(4-((2,3-dioxoindolin-1-il)metil)-1 H-1 ,2,3- tria2ol-1-il)-N-isobuttlfenitssulfonamida)-3-hidroxi-1-fenil butan-2- il)carbamato;

• tetraidrofuran-3-il ((2S,3R)-3-hidroxi-4-(N-isobutil-4-(4-((5-metil-2,3- dioxoindolin-1 -il)metil)-1 H-1 ,2,3-triazol-1 -ii)fenilssulfonamida)-1 - fenilbutan-2-ii) carbamato;

• tetraidrofuran-3-il ((2S _l 3R)-4-(4-(4-((5-cloro-2,3-dioxoindolin-1 -il)metil)- 1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)-N-isobutilfenilssuffonamida)-3-hidroxi-1 -fenilbutan-2- il) carbamato;

• dietil ((4-((2,3-dioxoindolin-1-ii)methyl)-1H-1 ,2,3-triazoi-1-il)metil) fosfonato;

• dietil ((4-((5-metil-2,3-dioxoindolin-1-il)metil)-1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)metil) fosfonato;

• dietil ((4-((5-cloro-2,3-dioxoindolin-1-il)metil)-1H-1 ,2,3-triazol-1-il)metil) fosfonato.

[035] Os compostos de fórmula tl de acordo com a IUPAC recebem a seguinte nomenclatura:

• 1 -(4-(4-((3-(ciclopropiletinil)-3-hidroxi-2-oxoindolin-1 -il)metil)-1 H-1 ,2,3- triazol-1-il)-5-(hidroximetil)tetraidrofuran-2-il)-5-metilpi rimidina-

2,4(1 H,3H)-diona;

• 1 -(4-(4-((3-(ciclopropiletinil)-3-hidroxi-5-metil-2-oxoindoli n-1 -il)metil)-1 H- 1 ,2,3-triazol-1-il)-5-(hidroximetil)tetraidrofuran-2-il)-5-me tilpirimidina- 2,4(1 H,3H)-diona; • 1 -(4-(4-((5-cloro-3-(ciclopropiletinil)-3-hidroxi-2-oxoindoli n-1 -il)metil)-1 H- 1 ,2,3-triazol-1-il)-5-(hidroximetil)tetraidrofuran-2-il)-5-me tilpiri

2,4(1 H,3H)-diona;

• tetraidrofuran-3-il ((2S,3R)-4-(4-(4-((3-(ciclopropiletinil)-3-hidroxi-2- oxoindolin-1 -il)metil)-1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)-N-isobutiifenilssulfonamida)-3- hidroxi-1 -fenilbutan-2-il)carbamato;

• tetraidrofuran-3-il ((2S,3R)-4-(4-(4-((3-(ciclopropiletinil)-3-hidroxi-5-metil-

2- oxoindolin-1 -il)metil)-1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)-N-isobutilfenilssulfonamida)-

3- hidroxi-1 -fenilbutan-2-il)carbamato;

• tetraidrofuran-3-il ((2S,3R)-4-(4-(4-((5-cloro-3-(ciclopropiletinil)-3-hidroxi-

2- oxoindolin-1 -il)metil)-1 H-1 ,2,3-triazol-l -il)-N-isobutilfenilssulfonamida)-

3- hidroxi-1-fenilbutan-2-il) carbamato;

• dietil ((4-((3-(ciclopropiletinil)-3-hidroxi-2-oxoindolin-1-il)meti l)-1H-1 ,2,3- triazol-1-il)metil) fosfonato;

• dietil ((4-((3-(ciclopropiletinil)-3-hidroxi-5-metil-2-oxoindolin-1 -il)meti H- 1 ,2,3-triazol-l -il)metil) fosfonato;

• dietil ((4-((5-cloro-3-(ciclopropiletinil)-3-hidroxi-2-oxoindolin-1 -il)metil)-1 H- 1 ,2,3-triazol-1-il)metil) fosfonato.

[036] Os compostos de fórmula III de acordo com a IUPAC recebem a seguinte nomenclatura:

• 1 -(4-(4-((3,3-difluor-2-oxoindolin-1 -il)metil)-1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)-5- (hidroximetil)tetraidrofuran-2-il)-5-metilpirimidina-2,4(1 H,3H)-diona;

. 1 -(4-(4-((3,3-difluor-5-metil-2-oxoindolin-1-il)metil)-1H-1,2 ,3-triazol-1-il)-5- (hidroximetil)tetraidrofuran-2-il)~5-metilpirimidina-2,4(1 H,3H)-diona;

• 1 -(4-(4-((5-cloro-3,3-difluor-2-oxoindolin-1 -il)metil)-1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)-5- (hidroximetil)tetraidrofuran-2-il)-5-metilpirimidina-2,4(1 H,3H)-diona,

• tetraidrofuran-3-il ((2S _l 3R)-4-(4-(4-((3,3-difluor-2-oxoindolin-1 -il)metil)- 1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)-N-isobutilfenilssulfonamida)-3-hidroxi-1 -fenilbutan-2- il) carbamato; • tetraidrofuran-3-il ((2S,3R)-4-(4-(4-((3,3-difIuor-5-metil-2-oxoindolin-1 - il)metH)-1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)-N-isobutilfenilssulfonamida)-3-hidroxi-1 - fenilbutan-2-il) carbamato;

• tetraidrofuran-3-il ((2S,3R)-4-(4-(4-((5-cIoro-3,3-difluor-2-oxoindotin-1 - il)metil)-1 H-1 ,2,3-triazol-1 -il)-N-isobutilfenilssulfonamida)-3-hidroxi-1 - fenilbutan-2-il) carbamato;

• dietil ((4-((3,3-difluor-2-oxoindolin-1-il)metil)-1 H-1 ,2,3-triazol-1-il)metil) fosfonato;

• dietil ((4-((3,3-difluor-5-metil-2-oxoindolin-1-ii)metil)-1 H-1,2,3-triazol-1- il)metil) fosfonato;

• dietil ((4-((5-cloro-3,3-difluor-2-oxoindolin-1-il)metil)-1 H-1,2,3-triazol-1- il)metil) fosfonato.

[037] Os estudos de acoplamento molecular destes novos compostos foram cruciais para a determinação dos possíveis pontos de inibição enzimática no ciclo de replicação virai. Os resultados de docking das moléculas sintetizadas foram baseados nas avaliações e classificações das funções de pontuações, grid score, fundamentadas nos termos não ligados do campo de força, e a função internal energy, que tem a finalidade de medir a ocorrência de colisões internas durante a otimização de torção. Esta última possui sempre um valor positivo, que indica uma penalidade decorrente das colisões em cada pose.

[038] Estas funções são baseadas em componentes de campo de força, sendo energias de interação aproximadas, compostas por termos de van der Waals e componentes eletrostáticos. A pontuação final dos compostos é dada pela soma dos valores de grid score e internal energy. O resultado deve ser o menor possível, visto que valores baixos indicam um sistema estável, com menores energias entre o complexo ligante-receptor e uma provável interação.

[039] A TR é uma enzima virai com extrema importância na replicação do HIV, sendo responsável por codificar a molécula de DNA do vírus a partir do seu RNA. A enzima deriva de uma poliproteína codificada peio vírus, sendo processada pela protease viral.

[040] A estrutura de código PDB 1T05 (TUSKE, S.; SARAFIANOS, S. G.; CLARK, J. R. A. D.; DING, J.; NAEGER, L K.; WHITE, K. L.; MILLER, M. D.; GIBBS, C S., BOYER, P. L; CLARK, P.; WANG, G.; GAFFNEY, B. L; JONES, R. A.; JERINA, D. M.; HUGHES, S. H.; ARNOLD, E. Structures of HtV-1 RTDNA complexes before and after incorporation of the antiaids drug tenofovir. Nature Structurai & Molecular Biology, v. 11 , p. 469-474, 2004), complexada com o tenofovir, foi escolhida por proporcionar uma conformação favorável para o docking de moléculas no sítio ativo da TR. Antes da realização das simulações de docking, foi feito o redocking, que consiste num processo de docagem do ligante no receptor nativo. Ele é utilizado para avaliar a reprodutibilidade do programa de docking.

[041] Para um melhor entendimento da presente invenção, representou- se a seguir o código de cada molécula sintetizada e a definição de cada um dos radicais R ₁ e R2.

[042] Os resultados do docking das moléculas finais na estrutura 1T05 (TR com o tenofovir) estão descritos na Tabela 1.

Tabela 1 - Resultados do docking das moléculas finais na estrutura 1T05.

[043] Posteriormente, foram realizados os acoplamentos com a estrutura PDB 4G1 Q (rilpivirina) (KURODA, D. G.; BAUM AN, J. D.; CHALLA, J. R.; PATEL, D.; TROXLER, T.; DAS, K.; ARNOLD, E.; HOCHSTRASSER, R. M. Snapshot of the equilibrium dynamics of a drug bound to HIV-1. Nature Chemístry, v. 5, p. 174-181, 2013), que representa o sítio alostérico da TR. Antes de iniciar as simulações foi feito o redocking com a rilpivirina PDB (T27) (http://wwwTcsb.org/pdb/ligand/ligandsummarv.do?hetld=T27). um inibidor não- nucleosídeo da TR. Este, ao ligar-se ao sítio alostérico da TR, causa uma mudança conformacional na estrutura da enzima, e como consequência, ocorre a diminuição da afinidade pelos nucleotídeos naturais. Os resultados do docking de todas as moléculas sintetizadas finais na estrutura 4G1Q encontram-se descritos na Tabela 2.

[044] As últimas análises de docking foram realizadas na estrutura PDB 3NU3 (SHEN, C. H.; WANG, Y. F.; KOVALEVSKY, A. Y.; HARRISON, R. W.; WEBER, I. T. Amprenavír complexes with HIV1 protease and its drugresistant mutants altering hydrophobic clusters. Febs Journal, v. 277, p. 3699-3714, 2010) que representa a protease. O redocking da estrutura 3NU3 (amprenavír) foi realizado retirando-se as moléculas de água presente na estrutura cristalográfica da protease, com objetivo de simplificar o procedimento de docking. A pose do redocking apresentou RMSD satisfatório, menor que 1 ,0 A, com grid score de -81 ,54 e internaíjenergy de 19,25. A protease do HIV-1 é um homodímero que contém um sítio catalítico com a presença da tríade ASP- THR-GLY, característica das aspartil-proteases. A pose cristalográfica apresentou interações com os resíduos ASP25, ASP30, ASP125, GLY127, ASP130; já a pose do redocking apresentou interações com os resíduos ASP25, ASP30, ASP124, GLY126, ASP129. Os resultados do docking de todas as moléculas finais na estrutura PDB 3NU3 encontram-se descritos na Tabela 3.

[045] A análise do estudo teórico de todos os compostos sintetizados mostrou que os melhores resultados de score, os maiores números de interações com resíduos de aminoácidos e com íons foram obtidos nas estruturas PDB 3NU3 (protease) e PDB 1T05 (transcriptase reversa). Os resultados de score no sítio ativo da protease foram os mais promissores, mostrando um número de interações de hidrogénio superiores, quando comparados aos outros dois sítios em estudo. Desta forma, é possível considerar que as substâncias sintetizadas agem como moléculas multialvos, uma vez que poderão atuar em dois sítios enzimáticos virais distintos.

[046] Foram planejados, sintetizados e avaliados biologicamente os 27 novos híbridos de fórmulas l(a-i), ll(a-i) e lll(a-i) a partir das isatinas IV(a-c) e derivados V, VII e IX(a-c) com a zidovudina (X), o amprenavir (XI) e uma cadeia fosfonato acíclica (XII), similar a contida na estrutura do TDF. Estes novos híbridos contém o anel 1 ,2,3-triazol em sua estrutura, obtidos a partir da "click chemistry", e foram avaliados quanto à sua potencial atividade inibitória frente à TR do HIV-1. Os compostos IV, V, VII, IX, X, XI e XII são mostrados no Esquema I adiante.

[047] A metodologia sintética para a preparação do composto com fórmula l(a-i) e lll(a-i) iniciou-se com a preparação dos derivados /V-alquilados da isatina V e Vll(a-c), seguida da reação de "click chemistry para a obtenção do anel triazólico, como mostrado no Esquema 1. Para a obtenção dos produtos lll(a-i) será realizada uma etapa adicional, que consiste na reação de gem-difluoração das isatinas Vl(a-c), utilizando DAST como agente de fluoração.

[048] Para a preparação dos análogos com fórmulas I(d-f), ll(d-f) e lll(d- f), a partir das isatinas, se inicia com a obtenção da azida do fármaco XI. A metodologia empregada consiste em uma reação de substituição nucleofílica aromática, via formação do sal diazônio (Esquema 2).

[049] Inicialmente, para a síntese dos análogos com fórmulas l(g-i), ll(g- i) e lll(g-i) será realizada a preparação da azida fosfonato XII, a partir do dietil- p-toluenossulfoniloximetil fosfonato (XIV), através da reação de substituição nucleofílica bimolecular (Esquema 3).

[050] A preparação das moléculas ll(a-i) se inicia através da reação de adição do cliclopropilacetileno à carbonila C-3 das isatinas IV(a-c). Posteriormente, será realizada a N-alquilação dos derivados Vllf(a-c) para a obtenção dos intermediários IX(a-c). Estes serão submetidos à reação de cicloadição para a obtenção das substâncias finais planejadas ll(a-i) (Esquema 4).

[051] Todos os novos compostos com fórmulas l(a-i), ll(a-i) e lll(a-i) foram caracterizados por ressonância magnética nuclear (RMN) para os núcleos de ¹ H, ¹³ C, ¹⁹ F e ³¹ P, infravermelho (IV), espectrometria de massas por ionização por electrospray (EM-IES) e espectrometria de massas de alta resolução (EMAR). Para as avaliações de pureza dos novos produtos foram realizadas análises de cromatografia líquida de alta eficiência.

EXEMPLOS

EXEMPLO 1 - AVALIAÇÃO ANTIRRETROVIRAL

Preparação das células e do vírus

[052] A linhagem celular linfócito-T (Suptl ) foi cultivada em meio RPMI 1640 (GIBICO). Os cultivos foram suplementados com 10% de Soro Fetal Bovino (SFB; HyClone, Logan, UT, USA), 100U/mL de penicilina e 100μL/mL de estreptomicina, e incubados à 37°C, em atmosfera de 5% de CO ₂ . Os estoques de vírus foram preparados utilizando a metodologia descrita por Souza e Denizot (SOUZA, T. M. L; RODRIGUES, D. Q.; FERREIRA, V. F.; MARQUES, I. P.; DE SOUZA, M. C. B. V.; FRUGULHETTI, I. C. P. P.; BOU- HABIB, D. C; FONTES, C. F. L. Characterization of HIV-1 enzyme reverse transcriptase inhibition by the compound 6-chloro-1 ,4-dihydro-4-oxo-1 -(β-D- ribofuranosyl) quinoline-3-carboxylic acid through kinetic and in silico studies. Current HIV Research, v. 7, n. 3, p. 327-335, 2009. DENIZOT, F.; LANG, R. Rapid colorimetric assay for ceií growth and survival. Modifications to the tetrazolium dye procedure giving improved sensitivity and reliability. The Joumal of Immunological Methods, v. 89, n. 2, p. 271-277, 1986).

Ensaio de citotoxicidade

[053] Em microplaca de 96 poços (1x104/poço), as células Suptl foram tratadas com diferentes concentrações das substâncias, por 72 horas. Em seguida, foram submetidas ao ensaio MTT (3-(4,5-dimetilazol-2-il)-2,5-difenil brometo de tetrazolio) para análise da indução de inviabilidade celular. O MTT é um método colorimétrico que mede a atividade da desidrogenase mitocondrial, baseado na capacidade das células vivas de reduzirem o sal 3- (4,5-di-metilazol-2-il)-2,5-difenil brometo de tetrazolio no produto. Desta forma, 50pL de solução de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil brometo de tetrazolio (1mg/mL) (MTT, Sigma) foi adicionado às células, mantidas em DMEM sem soro. O MTT foi removido após 3 horas, e após adição de 50pL de isopropanol ácido (0.04N HCI em isopropanol), a densidade óptica (DO) foi determinada, utilizando uma faixa de comprimento de onda de 570 a 690nm de acordo com KUO et al (KUO, Y. C; CHEN, C. C; TSA, W. J.; HO, Y. H. Regulation of herpes simplex virus type 1 replication in Vero cells by Psychotriaserpens: relationship to gene expression, DNA replication, and protein synthesis. Antiviral Research, v. 51 , n. 2, p. 95-109, 2001). A coloração obtida possui densidades ópticas diferentes, de acordo com o metabolismo mitocondrial, após o tratamento das células com as diferentes concentrações dos novos derivados ou na ausência destes. A concentração citotóxica de 50% (CC50) foi calculada por análise de regressão linear, a partir da curva dose-resposta obtidas dos dados experimentais. Atividade Inibitória de Transcriptase reversa

[054] A atividade inibitória das substâncias sobre a RTHXB2 DNA polimerase dependente de RNA (RDDP) foi avaliada utilizando enzima recombinante purificada HIV-1, conforme descrito por Souza e colaboradores (SOUZA, T. M. L; RODRIGUES, D. Q.; FERREIRA, V. F.; MARQUES, I. P.; DE SOUZA, M. C. B. V.; FRUGULHETTI, I. C. P. P.; BOU-HABIB, D. C; FONTES, C. F. L Characterization of HIV-1 enzyme reverse transcriptase inhibition by the compound 6-chloro-1 ,4-dihydro-4-oxo-1-(P-D-ribofuranosyl) quinoiine-3- carboxylic acid through kinetic and in silico studies. Current HIV Research, v. 7, n. 3, p. 327-335, 2009). A atividade de RDDP foi determinada em 50mM Tris HCI (pH 7,8), 6mM MgCl ₂ , 1 mM ditioteritol, 50mM KCI, 5μΜ dTTP, 80Mg/mL poli (rA) oligo (dT) molde de primer (Pharmacia, Pscataway, NJ, USA) e 3U de enzima (uma unidade é a concentração de enzima que incorpora 1 mol de dTTP por minuto por mg de enzima, à 37 °C, em condições padrões). As diluições isotópicas para as reações foram preparadas na razão de 2μCi [3H]dTTP(49Ci/mmol)/2,7μ dTTP. A reação foi iniciada à 37°C, incubada por 30 minutos e interrompida com 0,5M de EDTA. O precipitado foi coletado em papel de filtro Whatman DE 81 e lavado com fosfato de sódio 0,1 M. A medição dos nucleotídeos incorporados foi realizada por cintilação líquida. A concentração inibitória de 50% (Ciso) foi determinada por análise de regressão linear, a partir de curva dose-resposta, obtida dos dados experimentais. A reação de polimerização foi realizada na presença e ausência das substâncias teste, assim como na presença e ausência dos padrões.

EXEMPLO 2 - SÍNTESE DOS COMPOSTOS DE FÓRMULA I(a-i)

[055] Antes de apresentar a síntese dos compostos de fórmula l(a-i) torna-se necessária a descrição das sínteses dos intermediários V(a-c) que deram origem aos mesmos.

Síntese dos compostos V(a-c)

[056] Em um balão monotubulado, de 50 mL, foram adicionados 6,8 mmol das isatinas correspondentes IV(a-c) (1 eq), 11 mmol de brometo de propargila (1,63 eq), 12,92 mmol de carbonato de potássio (1 ,9 eq), 2,1 mmol de iodeto de sódio (0,32 eq) e 0,2 mmol de 18-crown-6 (0,04 eq) em 6 mL de DMF anidro. O meio foi mantido sob agitação magnética, à temperatura ambiente, por 2 horas. O término da reação foi evidenciado por CCF, utilizando o sistema de eluição hexano: acetato de etila (7:3). Para o isolamento do produto, a mistura reacional foi lavada com 30 mL de DMF e filtrada à vácuo. O líquido resultante foi evaporado, obtendo-se um óleo marrom. Este foi extraído com clorofórmio (50 mL) e lavado com água (3 x 25 mL). A fase orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro e o solvente foi removido por evaporação, obtendo-se o produto como um sólido avermelhado.

Composto Va:

[057] Rendimento: 85%

P.F.: 144-146 °C (lit. 157-158 °C) (JORDAN, C. A.; WIECZERZAK, K. B.; KNiSLEY, K. J.; KETCHA, D. M. Expedited microwave-assisted N-alkylation of isatins utilizing DBU. Archive for Organic Chemistry, v. 2014, n. 4, p. 183-192, 2014)

CG/EM (70 eV, m/z, %): 129 (100); 185 (91 ); 102 (54); 90 (44); 128 (39)

Composto Vb:

[058] Rendimento: 41%

P.F.: 149-151 °C (lit. 163-164 °C) (ZHUNGlETU, G. I.; ZORIN, L. M.; REKHTER, M. A. Recyclization of N-acetonylisatins to 2-acetylindole-3- carboxylic acids. Izvestiya Akademii Nauk Moldavskoi SSR, Bioiogicheskie i Khimicheskie Nauki, v. 2, p. 57-65, 1981)

CG/EM (70 eV, m/z, %): 142 (100); 141 (92); 114 (71); 198 (62); 76 (53)

Composto Vc:

[059] Rendimento: 80%

P.F.: 158-159 °C (lit. 155-156 °C) (ZHUNGIETU, G. I., ZORJN, L. M.; REKHTER, M. A. Recyclization of N-acetonylisatins to 2-acetylindole-3- carboxylic acids. Izvestiya Akademii Nauk Moldavskoi SSR, Biologicheskie i

Khimicheskie Nauki, v. 2, p. 57-65, 1981 )

CG/EM (70 eV, m/z, %): 162 (100); 123 (76); 218 (58); 74 (51)

Síntese dos compostos l(a-i)

[060] Em um balão monotubulado, de 50 mL, foram adicionados 2,3 mmol dos acetilenos correspondentes V(a-c) (1 ,3 eq), 1,8 mmol das azidas X, XI ou XII (1 eq), 0,1 mmol de ascorbato de sódio (0,1 eq), 0,1 mmol de sulfato de cobre (0,06 eq) e 5 mL da mistura THF e água (8:2). A reação mantida sob agitação magnética, à temperatura ambiente, por 5 horas. O término foi evidenciado por CCF, no sistema de eluição hexano: acetato de etila (3:7). Ao final da reação, foram adicionados 30 mL de água, e o meio foi extraído com CHCb (3 x 50 mL). A fase orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. A purificação dos produtos finais foi feita através de coluna cromatográfica, utilizando como sistema de eluição hexano: acetato de etila (3:7).

Produto la:

[061] Rendimento: 70 %

Ponto de fusão: 157-159 °C

IV (cm ^-1 ): 3411 (O-H); 1736 (C=0 cetona); 1682 (C=0 amida); 1611 (C=0 uréia); 1175 (C-N)

EM-IES ([M+Na] ⁺ m/z, %): 475 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; DMSO-d, δ, ppm): 1 ,79 (d, J= 1,0Hz, 3H, CH ₃ ); 2,59- 2,70 (m, 2H, H-4"); 3,56-3,68 (m, 2H, CH ₂ -OH); 4,15-4,16 (m, 1 H, H-2"); 4,98 (s, 2H, CH2-NI ); 5,27-5,33 (m, 1 H, H-3"); 6,37 (t, J= 6,5Hz, 1 H, H-5"); 7,14 (t, J= 7,4Hz, 1 H, H-5); 7,20 (d, J= 7,9Hz, 1 H, H-7); 7,54 (d, J= 7,3Hz, 1 H, H-4); 7,64 (t, J= 7,7HZ, 1H, H-6); 7,78 (d, J= 1,0Hz, 1H, H-6"'); 8,33 (s, 1H, H-5'); 11 ,31 (s, 1H, NH)

RMN ¹³ C (100 MHz; DMSO-d, δ, ppm): 12,2 (CH ₃ ); 35,0 (CH ₂ -N1 ); 37,0 (C-4"); 59,3 (C-3"); 60,7 (CH ₂ -OH); 83,8 (C-2"); 84,4 (C-5"); 109,6 (C-5"'); 111 ,1 (C-7); 117,5 (C-3a); 123,2 (C-5'); 123,3 (C-5); 124,4 (C-4); 136,1 (C-6); 138,1 (C-6'"); 141 ,7 (C-4'); 150,1 (C-7a); 150,4 (C-2'"); 157,7 (C-2); 163,7 (C-4'''); 183,0 (C-3) EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 452,1444 (C ₂₁ H ₂₀ N ₆ O ₆ )

Valor obtido: 452,1449

UPLC (%, nm): 95,2

Produto lb:

[062] Rendimento: 50%

Ponto de fusão: 150-151 °C

IV (crn ¹ ): 3400 (O-H); 1747 (C=O cetona); 1694 (C=O amida); 1667 (C=O ureia); 1176 (C-N)

EM-IES ([M+Na] ⁺ , m/z, %): 489 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; DMSO-d, δ, ppm): 1,79 (s, 3H, CH ₃ -5); 2,27 (s, 3H, CH ₃ - 5'"); 2,60-2,71 (m, 2H, H-4"); 3,57-3,69 (m, 2H, C£b-OH); 4,15-4,18 (m, 1 H, H- 2"); 4,96 (s, 2H, CH ₂ -N1); 5,29-5,34 (m, 1H, H-3"); 6,37 (t, J= 6,6Hz, 1H, H-5"); 7,08 (d, J= 8,0Hz, 1 H, H-7); 7,39 (s, 1 H, H-4); 7,46 (d, J= 8,0Hz, 1 H, H-6); 7,78 (s, 1H, H-5 ¹ ); 8,32 (s, 1 H, H-6"'); 11 ,31 (s, 1H, NH)

RMN ¹³ C (100 MHz; DMSO-d, δ, ppm): 12,1 (C5"'-Ç_H ₃ ); 20,0 (C5-Ç_H ₃ ); 35,0 (Ç_H ₂ -N1 ); 37,0 (C-4"); 59,2 (C-3"); 60,7 (CH ₂ -OH); 83,8 (C-2"); 84,3 (C-5"); 109,5 (C-5'"); 111 ,0 (C-7); 117,5 (C-3a); 123,1 (C-5'); 124,6 (C-4); 132,7 (C-5); 136,1 (C-6); 138,4 (C-6'"); 141 ,8 (C-4 ^J ); 148,0 (C-7a); 150,3 (C-2'"); 157,8 (C- 2); 163,6 (C^'"); 183,2 (C-3)

EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 466,1601 (C2 ₂ H ₂₂ N ₆ O ₆ )

Valor obtido: 466,1602

UPLC (%, nm): 96,4

Produto Ic:

[063] Rendimento: 50%

Ponto de fusão: 144-146 °C IV (cm ¹ ): 3367 (O-H); 1756 (C=O cetona); 1737 (C=O amida); 1702 (C=O uréia); 1 178 (C-N)

EM-IES ([M+Na] ⁺ , m/z, %): 509 (68)

RMN de ¹ H (400 MHz; DMSO-d, δ, ppm): 1 ,82 (d, J= 1 ,1 Hz, 3H, CH ₃ ); 3,77- 3,82 (m, 2H, H-4"); 3,87-3,92 (m, 2H, CHb-OH); 4,33-4,36 (m, 1 H, H-2"); 4,54 (t, J= 5,1 Hz, 1 H, OH); 5,07 (s, 2H, CH ₂ -N1 ); 5,46-5,51 (m,1 H, H-3"); 6,50 (t, J= 6,6Hz, 1 H, H-5"); 7,33 (d, J= 8,4Hz, H-7); 7,56 (d, J= 2,2Hz, H-4); 7,68 (dd, Jo= 8,4Hz; Jm= 2,2Hz, 1 H, H-6); 7,85 (d, J= 1 ,1Hz, 1 H, H-6"'); 8,20 (s, 1 H, H-5'); 9,98 (s, 1 H, NH)

RMN ¹³ C (100 MHz; DMSO-d, δ, ppm): 12,1 (CH ₃ ); 35,0 (CH ₂ -N); 36,9 (C-4''); 59,2 (C-3"); 60,6 (CH ₂ -OH); 83,7 (C-2"); 84,3 (C-5"); 109,5 (C-5'"); 112,7 (C-7); 118,9 (C-3a); 123,2 (C-5'); 123,8 (C-4); 127,5 (C-5); 136,0 (C-6); 136,8 (C-6"'); 141 ,5 (C-4 ¹ ); 148,5 (C-7a); 150,3 (C~2"'); 157,4 (C-2); 163,6 (C-4"'); 181 ,8 (C-3) EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 486,1055 (C ₂₁ H ₁₉ CIN ₆ O ₆ )

Valor obtido: 486,1046

UPLC (%, nm): 99, 1

Produto Id:

[064] Rendimento: 40%

Ponto de fusão: 121-123°C

IV (cm ^'1 ): 3260 (N-H); 2979 (C-H sp ³ ); 1715 (C=O cetona); 1688 (C=O amida); 1651 (C=O carbamato); 1374 (S=O); 1 172 (C-N)

EM-IES ([M+Na] ⁺ , m/z, %): 739 (35)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 0,90 (m, 8H, 14'-H; 15'-H); 1 ,95 (m, 11 H, 23'-H; 24'-H); 3,00 (m, 5H, 12'-H; 13'-H; 16'-H); 3,76 (m, 8H, 17'-H; 20'-H; 21'-H; 2Z-H); 4,58 (s, 3H, CH2-N; 18'-H); 7,19 (m, 8H, 4-H; 5-H; 7-H; 26'-H; 27'-H; 28'-H; 29' -H, 30'-H); 7,89 (s, 1 H, 5'-H); 7,62 (m, 1 H, 6-H); 8,02 (m, 2H, 7'-H; 8'-H)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD3COCD ₃ , δ, ppm): 20,4 (C-14 ¹ ); 20,6 (C-15'); 24,4 (C- 13'); 30,8 (C-23'); 33,2 (C- 24'); 36,1 (CH ₂ -N); 53,2 (C-18 ¹ ); 57,4 (C-12'); 58,1 (C-16'); 67,9 (C-22'); 73,6 (C-20'); 74,2 (C-17'); 76,3 (C-21 '); 1 10,9 (C-7); 119,4 (C-3a); 121 ,7 (C-8'; C-10'); 124,4 (C-4); 125,8 (C-28'); 127,2 (C-30'; C-26');

129.2 (C-7'; C-11'); 130,4 (C-27'; C-29'); 130,7 (C-5); 140,2 (C-6); 140,9 (C-6');

141.3 (C-9'); 144,7 (C-4'); 145,1 (C-7a; C-25'); 158,1 (C-2; C-19'); 184,1 (C-3) EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 716,2628 (C ₃₆ H ₄₀ N ₆ O ₈ S)

Valor obtido: 716,2630

CLAE (%, nm): 88,3

Produto te;

[065] Rendimento: 55%

Ponto de fusão: 114-116°C

IV (cm ^-1 ): 3321 (N-H); 2962 (C-H sp ³ ); 1727 (C=0 cetona); 1689 (C=0 amida); 1622 (C=0 carbamato); 1340 (S=0); 1178 (C-N)

EM-JES ([M+Na] ⁺ , m/z, %): 753 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; DMSO-d, δ, ppm): 0,82 (m, 7H, 14'-H; 15'-H); 1 ,74 (m, 2H, 24'-H); 1 ,89 (m, 3H, 13'-H; 23'-H); 2,27 (s, 3H, CH ₃ -5); 2,89 (m, 2H, 12'-H); 2,97 (m, 2H, 16'-H); 3,57 (m, 6H, 17 -H; 20'-H; 21 '-H; 22'-H); 4,90 (m, 1 H, 18'- H); 5,07 (s, 2H, CH ₂ -N); 7,15 (m, 8H, 7-H; 26'-H; 27'-H; 28'-H; 29'-H; 30'-H); 7,44 (m, 2H); 8,02 (m, 4H, 7'-H; 8'-H; 10'-H; 11 '-H)

RMN ¹³ C (100 MHz; DMSO-d, δ, ppm): 19,7 (C-14'); 19,8 (C-15'); 20,0 (CH ₃ -5); 25,9 (C-13'); 32,1 (C-23'); 35,0 (CH ₂ -N); 35,2 (C-24'); 51 ,4 (C-16'); 55,6 C-12'; C-18'); 66,0 (C-22'); 71 ,5 (C-20'); 72,4 (C-21 '); 110,9 (C-7); 117,6 (C-3a); 120,1 (C-8'; C-10'); 124,7 (C-4); 125,7 (C-28'); 127,9 (C-26'; C-30'); 128,9 (C-7'; C- 11 '); 129,0 (C-27'; C-29'); 132,8 (C-5); 138,3 (C-6); 138,9 (C-25 ¹ ); 139,2 (C-9'); 139,3 (C-6'); 143,3 (C^'); 147,8 (C-7a); 155,5 (C-19'); 157,5 (C-2); 183,2 (C-3) EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 730,2785 (C _ay H ₄₂ N ₆ O ₈ S)

Valor obtido: 730,2789 UPLC (%, nm): 89, 1

Produto 11:

[066] Rendimento: 50%

Ponto de fusão: 110-112 °C

IV (cm ¹ ): 2984 (C-H alifático); 1731 (C=0 cetona); 1609 (C=0 amida); 1239 (P=0); 1 176 (C-N)

EM-IES ([M+Naf, m/z, %): 401 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 1 ,19 (t, J= 7,0Hz, 6H, CH ₂ -CH ₃ ); 4,05 (m, 4H, 0-CH ₂ ); 4,92 (d, J= 13,0Hz, 2H, CH ₂ -P); 5,06 (s, 2H, N1 -CH ₂ ); 7,16 (t, J= 7,5Hz, 1 H, 5-H); 7,23 (d, J= 8,0Hz, 1 H, 7-H); 7,56 (d, J= 7,4Hz, 1 H, 4-H); 7,65 (t, J= 7,8Hz, 1 H, 6-H); 8,06 (s, 1 H, 5'-H)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 16,5 (d, J= 5,6Hz, CH ₃ ); 35,9 (CH ₂ -

N1 ); 46,1 (d, J= 152,1 Hz, CH ₂ -P); 63,5 (d, J= 6,2Hz, CH ₂ -0); 112,2 (C-7); 118,6

(C-3a); 124,3 (C-5); 125,0 (C-5'); 125,1 (C-4); 138,9 (C-6); 142,9 (C-4'); 151 ,5

(C-7a); 158,5 (C-2); 184,1 (C-3)

RMN ³¹ P (161 MHz; CD ₃ C0CD ₃ , δ, ppm): 16,1

EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 378,1093 (C ₁₆ H ₁₉ N ₄ O ₅ P)

Valor obtido: 378,1095

UPLC (%, nm): 95,4

Produto Ig:

[067] Rendimento: 54%

IV (cm ¹ ): 2979 (C-H alifático); 1732 (C=0 cetona); 1621 (C=0 amida); 1242 (P=0); 1183 (C-N)

EM-IES ([M+Na] ⁺ , m/z, %): 415 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 1 ,19 (t, J= 7,0Hz, 6H, CH ₂ -CH ₃ ), 2,31 (s, 3H, C5-CH ₃ ); 4,05 (m, 4H, 0-CH ₂ ); 4,92 (d, J= 13,0Hz, 2H, CH ₂ -P); 5,03 (s, 2H, CH2-NI ); 7,1 1 (d, J= 8,0Hz, 1 H, 7-H); 7,38 (s, 1 H, 4-H); 7,47 (d, J= 8,0Hz, 1 H, 6-H); 8,04 (s, 1 H, 5'-H) RMN ¹³ C (100 MHz; CDCI ₃ , δ, ppm): 16,5 (d, J= 5,7Hz, CH ₂ -CH ₃ ); 20,4 (CH ₃ - C5); 35,9 (CH ₂ -N1 ); 46,1 (d, J= 152,2Hz, CH ₂ -P); 63,5 (d, J= 6,4Hz, O-CH ₂ ); 112,0 (C-7); 1 18,7 (C-3a); 125,0 (C-5'); 125,4 (C-4); 134,1 (C-5); 139,3 (C-6); 143,0 (C-4'); 149,4 (C-7a); 158,6 (C-2); 184,3 (C-3)

RMN ³¹ P (161 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 16,1

EMAR (iES ⁺ )

Valor teórico: 392,1250 (C ₁₇ H ₂₁ N ₄ O ₅ P)

Valor obtido: 392,1272

UPLC (%, nm): 99,5

Produto ih:

[068] Rendimento: 30%

Ponto de fusão: 108-110 °C

IV (cm ^-1 ): 2986 (C-H alifático); 1739 (C=O cetona); 1608 (C=O amida); 1243 (P=O); 1174 (C-N)

EM-IES ([M+Na] ⁺ , m/z, %): 435 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₂ CI ₂ , δ, ppm): 1 ,24 (t, J= 7,0Hz, 6H, CH ₂ -CH ₃ ); 4,08 (m, 4H, O-CH ₂ ); 4,71 (d, J= 13,1 Hz, 2H, CH ₂ -P); 5,00 (s, 2H, CH ₂ -N1 ); 7,23 (d, J= 8,0Hz, 1 H, 7-H); 7,55 (d, J= 8,0Hz, 1 H, 6-H); 7,57 (s, 1 H, 4-H), 7,82 (s, 1H, 5'-H)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD ₂ CI ₂ , δ, ppm): 16,6 (d, J= 5,7Hz,CH ₃ ); 36,0 (CH ₂ -N1 ); 46,6 (d, J= 154,0Hz, CH ₂ -P); 64,0 (d, J= 6,8Hz, O-CH ₂ ); 1 13,4 (C-7); 119,0 (C- 3a); 124,5 (C-5'); 125,4 (C-4); 130,1 (C-5); 138,2 (C-6); 149,3 (C-7a); 157,9 (C- 2); 182,8 (C-3)

RMN ³¹ P (161 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 16,1

EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 412,0703 (C ₁₆ H ₁₈ CIN ₄ O5P)

Valor obtido: 412,0706

CLAE (%, nm): 98,0 EXEMPLO 3 - SÍNTESE DOS COMPOSTOS PE FÓRMULA ll(a-f)

[069] Antes de apresentar a síntese dos compostos de fórmula ll(a-f) torna-se necessária a descrição das sínteses dos intermediários Vlll(a-c) que deram origem aos mesmos.

Síntese dos compostos Vlll(a-c)

[070] Em um balão bitubulado, de 100 mL, contendo 10 mL de THF, previamente seco, adicionou-se 40,8 mmol do ciclopropilacetileno (2 eq) e 40,8 mmol do n-BuLi (2 eq) (2,5M). O meio reacional foi inicialmente mantido sob agitação magnética, à temperatura de -5 °C, por 30 minutos. Após esse período, a mistura reacional foi resfriada à temperatura de -78 °C, e foram adicionados 20,4 mmol das isatinas correspondentes IV(a-c) (1 eq), solubilizadas em 35 mL THF anidro. A reação foi mantida sob agitação magnética por uma noite, e o seu término foi evidenciado por CCF, utilizando o sistema de eluição hexano: acetato de etila (1 :1). Após este período, foram adicionados uma solução de ácido cítrico 1M até alcançar pH 7. A fase orgânica foi lavada com água (3 x 10 mL), seca com sulfato de sódio anidro e evaporada para obter os sólidos marrons correspondentes.

Composto Villa:

[071] Rendimento: 63%

Ponto de fusão: 197-199°C (lit.: 198-199 °C) (BOECHAT, N.; KOVER, W. B.; BONGERTZ, V.; BASTOS, M. M.; ROMEIRO, N. O; AZEVEDO, M. L. G.; WOLLINGER, W. Design, synthesis and pharmacological evaluation of HIV-1 reverse transcriptase inhibition of new indolin-2-ones. Medicinal Chemistry, v. 3, n. 6, p. 533-542, 2007)

EM-IES (ÍM+Na]+, m/z, %): 236 (100)

Composto Vlllb:

[072] Rendimento: 37%

Ponto de fusão: 207-208°C (lit.: 207-209 °C) (BOECHAT, N.; KOVER, W. B.; BONGERTZ, V.; BASTOS, M. M.; ROMEIRO, N. C; AZEVEDO, M. L. G.; WOLLINGER, W. Design, synthesis and pharmacological evaluation of HIV-1 reverse transcriptase inhibition of new indolin-2-ones. Medicina/ Chemistry, v. 3, n. 6, p. 533-542, 2007)

EM-IES ([M+Na]+, m/z, %): 250 (100)

Composto Vlllc:

[073] Rendimento: 30%

Ponto de fusão: 223-225°C (lit.: 224-226 °C) (BOECHAT, N.; KOVER, W. B.; BONGERTZ, V.; BASTOS, M. M.; ROMEIRO, N. C; AZEVEDO, M. L. G.; WOLLINGER, W. Design, synthesis and pharmacological evaluation of HIV-1 reverse transcriptase inhibition of new indolin-2-ones. Medicinal Chemistry, v. 3, n. 6, p. 533-542, 2007)

EM-IES ([M+Na]+, m/z, %): 246 (98)

Síntese dos compostos IX(a-c)

[074] Em um balão bitubulado foram adicionados 4,6 mmol dos intermediários VIII(a-c) correspondentes (1 eq), 8,7 mmol de carbonato de potássio (1 ,9 eq), 1 ,4 mmol de iodeto de sódio (0,32 eq) e 0,1 mmol de 18- crown-6 (0,04 eq), brometo de propargila (1 ,63 eq) eM 6 mL de DMF seco. A reação foi mantida sob agitação magnética, à temperatura ambiente, por 22 horas, e seu término foi evidenciado por CCF, utilizando o sistema de eiuição hexano: acetato de etila (1 :1). Em seguida, o meio foi lavado com DMF (20 mL) e filtrado à vácuo. O líquido foi evaporado, obtendo-se um óleo. A este óleo foram adicionados 20 mL de água e extraído com CHCl ₃ (3 x 40 mL). A fase orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, filtrada e o solvente foi evaporado. A purificação do produto foi feita por coluna cromatográfica, utilizando o sistema de eiuição clorofórmio: metanol (9,5: 0,5).

Composto IXa:

[075] Rendimento: 97%

Ponto de fusão: 153-154°C

IV (cm ¹ ): 3331 (O-H); 2220 (C≡C), 1705 (C=O) CG/EM (70 eV, m/z, %): 212 (100); 222 (69); 146 (62); 251 (51); 156 (33) RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₃ COCD ₃₎ δ, ppm): 0,56-0,60 (m, 2H, H-11); 0,76-0,80 (m, 2H, H-11'); 1 ,25-1 ,32 (m, 1 H, H-10); 2,81 (t, J= 2,5Hz, 1H, H-3'); 4,53 (d, J= 2,5Hz, 2H, H-1'); 5,85 (s, 1H, OH); 7,13 (m, 2H, H-5, H-7); 7,38 (td, Jo= 7,7Hz; Jm= 1 ,2Hz, 1H, H-6); 7,46 (dd, Jo= 7,3Hz; Jm= 0,7Hz, 1H, H-4)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): -0,003 (C-10); 8,7 (C-11 , C-11 '); 29,3 (C-1 ¹ ); 69,7 (C-8); 73,8 (C-3'); 73,9 (C-2'); 78,1 (C-3); 90,4 (C-9); 110,5 (C-7); 124,2 (C-5); 125,1 (C-4); 130,7 (C-6); 131 ,6 (C-3a); 142,1 (C-7a); 173,5 (C-2) Composto IXb:

[076] Rendimento: 70%

Ponto de fusão: 202-203 °C

IV (cm ^-1 ): 3278 (OH); 2233 (C≡C); 1702 (C=O)

CG/EM (70 eV, m/z, %): 226 (100); 265 (90); 160 (74); 236 (56); 180 (38) RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 0,56-0,60 (m, 2H, H-11 ); 0,76-0,80 (m, 2H, H-11'); 1 ,25-1,32 (m, 1H, H-10); 2,33 (s, 3H, CH ₃ ); 2,80 (t, J= 2,5Hz, 1 H, H-3'); 4,50 (d, J= 2,5 Hz, 2H, H-1'); 5,78 (s, 1H, OH); 6,99 (d, J= 7,9Hz, 1H, H-7); 7,19 (d, J= 7,9Hz, 1H, H-6); 7,29 (s, 1H, H-4)

RMN ¹³ C (100 MHz; CDCl ₃ , δ, ppm): -0,004 (C-10); 8,6 (C-11 , C-11'); 21 ,0 (CH ₃ ); 29,3 (C-1'); 69,8 (C-8); 73,7 (C-2'); 74,0 (C-3'); 78,2 (C-3); 90,2 (C-9); 110,2 (C-7); 125,8 (C-3a); 130,8 (C-6); 131,5 (C-5); 133,7 (C-4); 139,7 (C-7a); 173,5 (C-2)

Composto IXc:

[077] Rendimento: 38%

IV (cm ¹ ): 3331 (O-H); 3286 (C-H sp); -3000 (C-H sp ³ ); 2220 (C≡C); 1705 (C=O)

CG/EM (70 eV, m/z, %): 246 (100); 180 (85); 285 (78); 256 (49); 166 (35) RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₃ COCD _3l δ, ppm): 0,58-0,62 (m, 2H, H-11); 0,77-0,82 (m, 2H, H-11'); 1 ,27-1 ,34 (m, 1 H, H-10); 2,33 (t, J= 2,5Hz, 1H, H-3'); 4,55 (d, J= 2,5Hz, 2H, H-1'); 6,05 (s, 1H, OH); 7,15 (d, J= 8,3Hz, 1H, H-7); 7,43 (dd, Jo= 8,3Hz; Jm= 2,2Hz, 1H, H-6); 7,46 (d, J= 2,2Hz, 1 H, H-4)

RMN ¹³ C (100 MHz; CDCI _3l δ, ppm): -0,07 (C-10); 8,7 (C-11 ; C-11'); 29,3 (C-1 '); 69,6 (C-8); 73,1 (C-2'); 74,1 (C-3'); 77,7 (C-3); 91 ,1 (C-9); 112,0 (C-7); 125,3 (C-4); 128,9 (C-5); 128,9 (C-3a); 130,5 (C-6); 140,9 (C-7a); 173,0 (C-2)

Síntese dos produtos finais ll(a-i)

[078] Em um balão monotubulado, de 50 mL, foram adicionados 2,3 mmol dos acetilenos correspondentes IX(a-c) (1 ,3 eq), 1 ,8 mmol das azidas X, XI ou XII (1 eq), 0,1 mmol de ascorbato de sódio (0,1 eq), 0,1 mmol de sulfato de cobre (0,06 eq) e 5 mL da mistura THF e água (8:2). A reação mantida sob agitação magnética, à temperatura ambiente, por 5 horas. O término foi evidenciado por CCF, no sistema de eluição hexano: acetato de etila (3:7). Ao final da reação, foram adicionados 30 mL de água, e o meio foi extraído com CHCl ₃ (3 x 50 mL). A fase orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. A purificação dos produtos finais foi feita através de coluna cromatográfica, utilizando como sistema de eluição hexano: acetato de etila (3:7).

Produto lia:

[079] Rendimento: 64%

IV (cm ¹ ): 3214 (O-H); 2233 (C≡C); 1682 (C=0 amida); 1612 (C=0 uréia); 1170 (C-N)

EM-IES ([M-Hf, m/z, %): 517 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 0,55-0,59 (m, 2H, H-11 ); 0,76-0,79 (m, 2H, H-11'); 1 ,25-1 ,31 (m, 1 H, H-10); 1,82 (d, J= 1 ,1 Hz, 3H, CH ₃ ); 2,70-2,82 (m, 2H, H-4"); 3,79-3,91 (m, 2H, CH ₂ -OH); 4,35-4,38 (m, 1 H, H-2"); 4,97 (s, 2H, CH ₂ -N); 5,47-5,52 (m, 1H, H-3"); 5,71 (s, 1 H, OH); 6,52 (t, J= 6,6Hz, 1 H, H-5"); 7,08 (td, Jo= 7,5Hz; Jm= 0,8Hz, 1 H, H-5); 7,15 (m, 1H, H-7); 7,31 (td, Jo= 7,7Hz; Jm= 1 ,3Hz, 1H, H-6); 7,42 (dd, Jo= 7,4Hz; Jm= 0,8Hz, 1 H, H-4); 7,88 (d, J= 1 ,1 Hz, 1 H, H-6"'); 8,07 (d, J= 2,0Hz, 1 H, H-5'); 10,04 (s, 1 H, NH)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): -0,01 (G-10); 8,6 (C-11); 8,7 (C-11'); 12,6 (CH ₃ ); 36,0 (CH ₂ -N); 38,7 (C-4"); 60,6 (C-3"); 62,2 (CH ₂ -OH); 69,7 (C-8); 74,0 (C-3); 85,9 (C-2"); 85,9 (C-5"); 90,2 (C-9); 110,7 (C-5'"); 110,9 (C-7); 123,8 (C-5 ¹ ); 123,9 (C-5); 125,0 (C-4); 130,6 (C-6); 131 ,6 (C-3a); 137,2 (C-6"); 142,8 (C-4'); 143,4 (C-7a); 151,4 (C-2'"); 164,3 (C-4'"); 171 ,0 (C-2)

EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 518,1914 (C ₂₆ H ₂₆ N ₆ O ₆ )

Valor obtido: 518,1910

CLAE (%, nm): 78,1

Produto Hb:

[080] Rendimento: 30%

IV (cm ^'1 ): 3375 (0-H); 2232 (C≡C); 1666 (C=0 amida); -1612 (C=0 uréia); -1 170 (C-N)

EM-IES ([M-H] ⁺ , m/z, %): 531 (37)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 0,56-0,60 (m, 2H, H-11 ); 0,75-0,80 (m, 2H, H-1 1'); 1 ,25-1 ,31 (m, 1 H, H-10); 1 ,82 (d, J= 1 ,1 Hz, 3H, CH ₃ -5"'); 2,30 (s, CH ₃ -5); 2,74-2,81 (m, 2H, H-4' ¹ ); 3,88-3,91 (m, 2H, Cf±rOH); 4,33-4,37 (s, 1 H, H-2"); 4,89 (s, 2H, CH2-N); 5,47-5,51 (m, 1H, H-3"); 5,82 (s, 1 H, OH); 6,52 (t, J= 6,6Hz, 1 H, H-5"); 7,02 (d, J= 7,9Hz, 1 H, H-7); 7,10-7,12 (m, 1 H, H-6); 7,24 (s, 1 H, H-4); 7,88 (d, J= 1 ,2Hz, 1 H, H-6'"); 8,04 (d, J= 2,4Hz, 1 H, H-5'); 10,05 (s, 1 H, NH)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 0,01 (C-10); 8,6 (C-1 1 ; C-11 '); 12,6 (ÇH ₃ -5); 21 ,0 (CH ₃ -5"'); 36,1 (CH ₂ -N); 38,7 (C-4"); 60,6 (C-3"); 62,1 (CH ₂ -OH); 69,8 (C-8); 74,2 (C-3); 85,9 (C-2"); 85,9 (C-5"); 90, 1 (C-9); 110,4 (C-5'"); 110,9 (C-7); 123,7 (C-5'); 125,7 (C-4); 130,8 (C-6); 131 ,6 (C-5); 133,4 (C-3a); 137,2 (C-6'"); 140,4 (C-4'); 143,5 (C-7a); 151,4 (C-2 ^''' ); 164,3 (C-4'"); 174,1 (C-2) EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 532,2070 (C ₂₇ H ₂₈ N ₆ O ₆ )

Valor obtido: 532,2073

CLAE (%, nm): 82,5 Produto llc:

[081] Rendimento: 40%

IV (cm ^-1 ): 3500 (O-H); -2230 (C≡C); 1666 (C=0 amida); 1620 (C=0 uréia); 1179 (C-N)

EM-IES ({M+Naf, m/z, %): 575 (58)

RMN de ¹ H (400 MHz; DMSO-d, δ, ppm): 0,58-0,61 (m, 2H, H-11 ); 0,76-0,81 (m, 2H, H-11'); 1 ,32-1 ,39 (m, 1H, H-10); 1 ,80 (d, J= 1 ,0Hz, 3H, CH ₃ ), 2,58-2,72 (m, 2H, H-4"); 3,58-3,69 (m, 2H, CH ₂ -OH); 4,17-4,19 (m, 1 H, H-2"); 4,94 (s, 2H, CH ₂ -N); 5,33-5,37 (m, 1 H, H-3"); 6,41 (t, J= 6,6Hz, 1H, H-5"); 7,17-7,19 (m, 1H, H-7); 7,39-7,41 (m, 2H, 4-H; H-6); 7,80 (d, J= 1 ,0Hz, 1H, H-6"'); 8,28 (s, 1H, H- 5'); 11 ,34 (s, 1H, NH)

RMN ¹³ C (100 MHz; DMSO-d, δ, ppm): 0,8 (C-10); 8,0 (C-11 ; C-11'); 12,2 (CH ₃ ); 35,0 (CH ₂ -N); 37,1 (C-4"); 59,3 (C-3"); 60,7 (CH ₂ -OH); 68,2 (C-8); 72,8 (C-3); 84,4 (C-2"); 84,4 (C-5"); 89,6 (C-9); 109,6 (C-5'"); 111 ,5 (C-7); 123,3 (C- 5'); 123,3 (C-5); 123,9 (C-4); 129,5 (C-6); 132,5 (C-3a); 136,2 (C-6'"); 140,2 (C- 4'); 141,7 (C-7a); 150,4 (C-2'"); 163,7 (C-4'"); 172,4 (C-2)

EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 552,1524 (C ₂₆ H ₂₅ CIN ₆ O ₆ )

Valor obtido: 552,1531

CLAE (%, nm): 98,6

Produto lld:

[082] Rendimento: 20%

EM-IES ([M+Naf, m/z, %): 467 (100)

Produto lIe:

[083] Rendimento: 20%

EM-IES ([M] ⁺ , m/z, %): 481 (100)

IV (cm ¹ ): 3269 (O-H); 2232 (C≡C); 1719 (C=O); 1228 (P=O)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 0,58 (m, 2H, 11-H ₂ ); 0,77 (m, 1H, 12-H ₂ ); 1 ,19 (t, J= 7,0Hz, 6H, CH ₂ -CH ₃ ); 1 ,28 (m, 1 H, 10-H); 2,29 (s, 3H, C5- CH ₃ ); 4,04 (m, 4H, CH ₂ -O); 4,92 (d, J= 13Hz, 2H, CH ₂ -P); 4,95 (s, 2H, CH ₂ -N1 ); 5,81 (s, 1 H, OH); 6,98 (d, J= 8Hz, 1 H, 6-H); 7,10 (d, J= 8Hz, 1 H, 7-H); 7,24 (s, 1 H, 4-H); 7,88 (s, 1 H, 5'-H)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD ₃ COCD _3l δ, ppm): -0,004 (C-10); 8,6 (C-1 1 ; C-12); 16,6

(d, J= 5,5Hz, ÇH3-CH ₂ ); 20,9 (C5-C_H ₃ ); 36,0 (CH ₂ -N1 ); 46,1 (d, J= 151,8Hz,

CH ₂ -P); 63,7 (d, J= 6,3Hz, O-CH ₂ ); 69,8 (C-8); 74,2 (C-3); 90,0 (C-9); 110,3 (C-

7); 124,7 (C-5'); 125,6 (C-4); 130,7 (C-3a); 131 ,6 (C-6); 133,3 (C-4 ¹ ); 140,3 (C-

5); 143,6 (C-7a); 174,1 (C-2)

RMN ³¹ P (161 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 16,2

EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 458,1719

Valor obtido: 458,1719

CLAE (%, nm): 100,0

Produto Itf:

[084] Rendimento: 30%

EM-IES ([M+Na]\ m/z, %): 501 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 0,60 (m, 2H, 11-H); 0,79 (m, 2H, 12); 1 ,19 (t, J= 7,0Hz, 6H, CH ₃ ); 1,29 (m, 1 H, 10-H); 4,04 (m, 4H, CH ₂ -O); 4,92 (d, J= 13Hz, CH ₂ -P); 4,98 (s, 2H, CH ₂ -N1 ); 6,06 (s, 1 H, OH); 7,15 (d, J= 8,3Hz, 7-H); 7,34 (dd, J= 2,2Hz, 1 H, 6-H); 7,40 (d, J= 2,1 Hz, 1 H, 4-H); 7,92 (s, 1H, 5'- H)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): -0,03 (C-10); 8,6 (C-11 ); 8,7 (C-12); 16,6 (d, J= 5,7Hz, CH ₃ ); 36,1 (CH ₂ -N1 ); 46,2 (d, J= 151 ,8Hz, CH ₂ -P); 63,7 (d, J= 6,3Hz, CH ₂ -O); 69,6 (C-8); 73,3 (C-3); 90,9 (C-9); 112,2 (C-7); 124,9 (C-5'); 125,1 (C-4); 128,6 (C-3a); 130,4 (C-6); 133,5 (C-5); 141 ,5 (C-4'); 143,2 (C-7a); 173,6 (C-2)

RMN ³¹ P (161 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 16,2

CLAE (%, nm): 93,6 EXEMPLO 4 - SÍNTESE DOS PRODUTOS FINAIS Ulfa-i)

[085] Antes de apresentar a síntese dos compostos de fórmula lll(a-i) torna-se necessária a descrição das sínteses dos intermediários Vl(a-c) e Vll(a- c) que deram origem aos mesmos.

Síntese dos compostos Vl(a-c)

[086] Em um balão monotubulado, de 50 ml_, foram adicionados 3,4 mmol das isatinas IV(a-c) correspondentes (1 eq), 17 mmol de DAST (5 eq) e 30 mL de CH2CI2. A mistura reacional foi mantida à temperatura ambiente, sob agitação magnética, por 4 horas e sob atmosfera de nitrogénio. O término da reação foi evidenciado por CCF, utilizando o sistema de eluição hexano: acetato de etila (7:3). O isolamento da reação foi realizado através de uma lavagem do meio reacional com água (3 x 30 mL). A fase orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, e posteriormente, o solvente foi evaporado, obtendo-se um sólido marrom como produtos finais.

Composto Via:

[087] Rendimento: 77%

Ponto de fusão: 136-138 °C (lit. 137-139 °C) (BOECHAT, N. Isatinas: mais uma prova de versatilidade. Fluorodenitração: uma alternativa. 1996. 244f. Tese de Doutorado em Química Orgânica - Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 1996)

CG/EM (70 eV, m/z, %): 141 (100); 114 (99); 169 (93); 75 (13); 126 (11)

Composto Vlb:

[088] Rendimento: 88%

Ponto de fusão: 157-159 °C (lit. 155-157 °C) (TORRES, J. C; GARDEN, S. J.; PINTO, A. C; DA SILVA, F. S. Q.; BOECHAT, N. A synthesis of 3-fluoroindoles and 3,3-difluoroindolines by reduction of 3,3-difluoro-2-oxindoles using a borane tetrahydrofuran complex. Tetrahedron, v. 55, p. 1881-1892, 1999)

CG/EM (70 eV, m/z, %): 183 (100); 155 (76); 127 (35); 154 (23); 128 (14) Composto Vlc:

[089] Rendimento: 68%

Ponto de fusão: 180-182 °C (lit. 183-185 °C) (BOECHAT, N. Isatinas: mais uma prova de versatilidade. Fluorodenitraçâo: uma alternativa. 1996. 244f. Tese de Doutorado em Química Orgânica - Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 1996)

CG/EM (70 eV, m/z, %): 175 (100); 203 (83); 148 (60); 177 (31); 205 (27) Síntese dos compostos \fíl(a-c)

[090] Em um balão monotubulado, de 50 mL, foram adicionados 2,9 mmol dos respectivos intermediários gem-difluorados Vll(a-c) (1 eq), 4,7 mmol de brometo de propargila (1 ,63 eq), 5,5 mmol de carbonato de potássio (1 ,9 eq), 0,9 mmol de iodeto de sódio (0,32 eq) e 0,1 mmol de 18-crown-6 (0,04 eq) em 6 mL de DMF destilado. A reação permaneceu sob agitação magnética, por 24 horas, à temperatura ambiente, sendo evidenciado o seu término através de CCF (hexano: acetato de etila 7:3). A mistura reacional foi lavada com 30 mL de DMF e filtrada a vácuo. O líquido foi evaporado, obtendo-se um óleo marrom. Em seguida, realizou-se uma lavagem do produto, utilizando clorofórmio (CHCl ₃ ) (50 mL) e H ₂ O (3 x 25 mL). A fase orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro e o solvente evaporado, formando o sólido marrom desejado.

Composto VIla:

[091] Rendimento: 62%

Ponto de fusão: 76-78 °C

IV(crrf ¹ ): 3250 (C≡C-H); 2125 (C≡C); 1744 (C=O); 1368 (C-F)

CG/EM (70 eV, m/z, %): 168 (100); 207 (78); 179 (18); 178 (12); 126 (12) RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₂ CI ₂ , δ, ppm): 2,37 (t, J= 2,5Hz, 1 H, H-3'); 4,49 (d, J= 2,5Hz, 2H, H ₂ -1'); 7,15 (d, J= 7,6Hz, 1 H, H-7); 7,23 (t, J= 7,6Hz, 1 H, H-5); 7,54- 7,59 (m, 2H, H-4; H-6)

RMN ¹³ C (100 MHz; CDCI ₃ , δ, ppm): 29,5 (C-1 '); 73,1 (C-3'); 75,4 (C-2'); 110,6 (C-7); 110,9 (t, J= 247,9Hz, C-3); 119,7 (t, J= 23,0Hz, C-3a); 124,2 (t, J= 1 ,8Hz, C-5); 124,6 (C-4), 133,7 (C-6); 142,2 (t, J= 7,0Hz, C-7a); 164,1 (t, J= 30,5Hz, C- 2)

RMN ¹⁹ F (376 MHz; CD ₂ CI ₂ , δ, ppm): -111 ,9

Composto Vfíb:

[092] Rendimento: 77%

Ponto de fusão: 102-104 °C

IV (cm ¹ ): 3248 (C≡C-H): 2126 (C≡C); 2919 (CH ₂ ); 1747 (C=0); 1370 (C-F) CG/EM (70 eV, m/z, %): 221 (100); 182 (100); 192 (16); 222 (13); 178 (13) RMN de ¹ H (400 MHz; CDCb, δ, ppm): 2,29 (t, J= 2,5Hz, 1 H, H-3'); 2,38 (s, 3H, CH ₃ ); 4,47 (d, J= 2,5Hz, 2H, H ₂ -1'); 7,01 (d, J= 8,0Hz, 1 H, H-7); 7,32 (d, J= 8,0Hz, 1H, H-6); 7,39 (m, 1H, H-4)

RMN ¹³ C (100 MHz; CDCb, δ, ppm): 20,9 (CH ₃ ); 29,5 (C-1 '); 73,5 (C-3'); 75,5 (C-2 ^J ); 110,3 (C-7); 110,9 (t, J= 248,6Hz, C-3); 119,9 (t, J= 22,9Hz, C-3a); 125,3 (C-4); 133,8 (C-5); 134,2 (t, J= 1 ,9Hz, C-6); 139,6 (t, J= 7,0Hz, C-7a); 164,3 (t, J= 30,6Hz, C-2)

RMN ¹⁹ F (376 MHz; CDCI3, δ, ppm): -111 ,3

Composto Vllc:

[093] Rendimento: 52%

Ponto de fusão: 87-89 °C

IV (cm ^"1 ): 3259 (C-H sp); 2915 (C-H sp ³ ); 2126 (C≡C); 1754 (C=0); 1365 (C-F) CG/EM (70 eV, m/z, %): 241 (100); 202 (99); 243 (32); 204 (32); 178 (25) RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 2,95 (t, J= 2,5Hz, 1 H, 3'-H); 4,65 (d, J= 2,5Hz, 2H, 1'-H ₂ ); 7,37 (m, 1H, 7-H); 7,71 (m, 1 H, 6-H); 7,80 (q, J= 1 ,8 Hz, 1H, 4-H)

RMN ¹³ C (100 MHz; CDCb, δ, ppm): 71 ,1 (C-1'); 74,8 (C-3'); 76,7 (C-2'); 111 ,3 (t, J= 248,4Hz, C-3); 111,3 (C-7); 121 ,9 (t, J= 23,0Hz, C-3a); 125,7 (C-4); 130,0 (t, J= 2,1Hz, C-5); 134,7 (t, J= 2,1 Hz, C-6); 142,2 (t, J= 7,0Hz, C-7a); 164,3 (t, J= 30,0Hz, C-2) RMN ¹⁹ F (376 MHz; CD3COCD3, 6, ppm): -112,4

Síntese dos produtos finais lll(a-i)

[094] Em um balão monotubulado, de 50 mL, foram adicionados 2,3 mmol dos acetilenos correspondentes Vll(a-c) (1 ,3 eq), 1 ,8 mmol das azidas X, XI ou XII (1 eq), 0,1 mmol de ascorbato de sódio (0,1 eq), 0,1 mmol de sulfato de cobre (0,06 eq) e 5 mL da mistura THF e água (8:2). A reação mantida sob agitação magnética, à temperatura ambiente, por 5 horas. O término foi evidenciado por CCF, no sistema de eluição hexano: acetato de etila (3:7). Ao final da reação, foram adicionados 30 mL de água, e o meio foi extraído com CHCI ₃ (3 x 50 mL). A fase orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. A purificação dos produtos finais foi feita através de coluna cromatográfica, utilizando como sistema de eluição hexano: acetato de etila (3:7).

Produto Illa:

[095] Rendimento: 50%

Ponto de fusão: 127-130 °C

IV (cm ¹ ): 3350 (O-H); 1756 (C=0 amida); 1661 (C=0 uréia); 1372 (C-F); 1190 (C-N)

EM-IES ([M+Na] ⁺ , m/z, %): 497 (66)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₃ COCD _3l δ, ppm): 1 ,83 (d, J= 1 ,1 Hz, 3H, CH ₃ ); 2,75- 2,82 (m, 2H, H-4"); 3,79-3,92 (m, 2H, CH2-OH); 4,35-4,37 (m, 1H, H-2"); 4,61 (s, 1 H, OH), 5,06 (s, 2H, CH ₂ -N1 ); 5,50-5,54 (m, 1H, H-3"); 6,52 (t, J= 6,6Hz, 1 H, H-5"); 7,24 (t, J= 7,6Hz, 1 H, H-5); 7,36 (d, J= 8,0Hz, 1 H, H-7); 7,58 (td, Jo= 7,8Hz; Jm= 1 ,2 Hz, 1 H, H-6); 7,64 (dd, Jo= 7,4Hz; Jm= 1 ,6 Hz, 1 H, H-4); 7,88 (d, J= 1 ,1 Hz, 1H, H-6'"); 8,23 (s, 1 H, H-5'); 10,01 (s, 1 H, NH)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 12,5 (CH ₃ ); 36,1 (CH ₂ -N1 ); 38,6 (C- 4"); 60,7 (C-3"); 62,1 (CH ₂ -OH); 85,9 (C-2"); 86,0 (C-5"); 110,8 (C-5'"); 112,0 (t, J= 246,5Hz, C-3); 112,1 (C-7); 120,4 (t, J= 22,9Hz, C-3a); 124,0 (C-5'); 124,8 (C-5); 125,2 (C-4); 134,8 (C-6); 137,2 (C-6"'); 142,4 (C-4'); 144,2 (t, J- 7,1 Hz, C-7a); 151 ,3 (C-2'"); 164,3 (C-4'"); 165,2 (t, J= 30,1 Hz, C-2)

RMN ¹⁹ F (376 MHz; CD ₃ COCD3, δ, ppm): -112,4

EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 474,1463 (C ₂₁ H ₂₀ F ₂ N ₆ O ₅ )

Valor obtido: 474,1468

UPLC (%, nm): 96,6

Produto Mb:

[096] Rendimento: 40%

Ponto de fusão: 144-145 °G

IV (cm ¹ ): 3367 (O-H); 1752 (C=O amida); 1686 (C=O uréia); 1300 (C-F); 1 178 (C-N)

EM-IES ([M+Naf, m/z, %): 487 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 1 ,82 (d, J= 1 ,1 Hz, 3H, CH3-5'"}; 2,35 (s, 3H, CH ₃ -5); 2,75-2,91 (m, 2H, H-4"); 3,78-3,91 (m, 2H, CH2-OH); 4,35- 4,38 (m, 1 H, H-2"); 4,54 (s, 1H, OH); 5,03 (s, 2H, CH ₂ -N1 ); 5,48-5,53 (m, 1 H, H-3"); 6,51 (t, J= 6,6Hz, 1 H, H-5"); 7,23 (d, J= 8,1 Hz, 1 H, H-7); 7,38 (d, J= 8,1 Hz, 1H, H-6); 7,46 (m, 1 H, H-4); 7,87 (d, J= 1 ,1 Hz, 1 H, H-6'"); 8,20 (s, 1 H, H-5'); 9,98 (s, 1 H, NH)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 12,5 (C5'"-CH ₃ ); 20,7 (C5-Ç_H ₃ ); 36,1 (CH ₂ -NI ); 38,6 (C-4"); 60,7 (C-3"); 62,2 (CH ₂ -OH); 85,8 (C-2"); 86,0 (C-5"); 110,8 (C-5" ^J ); 111 ,9 (C-7); 1 12,2 (t, J= 246,6Hz, C-3); 120,4 (t, J= 22,6Hz, C- 3a); 123,9 (C-5'); 125,6 (C-4); 134,7 (C-5); 134,9 (C-6); 137,1 (C-6"'); 141 ,7 (t, J= 7,0Hz, C-7a); 142,5 (C-4'); 151 ,3 (C-2'"); 164,2 (C-4"'); 165,2 (t, J= 30,0Hz, C-2)

RMN ¹⁹ F (376 MHz; CD ₃ COCD3, δ, ppm): -112,2

EMAR (1ES ⁺ )

Valor teórico: 488,1620 (C ₂₂ H ₂₂ F ₂ N ₆ O ₅ )

Valor obtido: 488,1625

CLAE (%, nm): 100,0 Produto IIIc:

[097] Rendimento: 50%

Ponto de fusão: 242-243 °C

IV (cm ^'1 ): 3500 (OH); 1751 (C=O amida); 1715 (C=O uréia); 1280 (C-F); 1179 (C-N)

EM-IES ([M+Naf, m/z, %): 531 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 1 ,83 (d, J= 1 ,2Hz, 3H, CH ₃ ); 2,76- 2,86 (m, 2H, H-4"); 3,79-3,92 (m, 2H, CH ₂ -OH); 4,35-4,37 (m, 1 H, H-2"); 5,08 (s, 2H, CH2-NI ); 5,49-5,53 (m, 1 H, H-3"); 6,51 (t, J= 6,6Hz, 1 H, H-5"); 7,38- 7,41 (m, 1H, H-7); 7,61-7,64 (m, 1H, H-6); 7,74 (q, J= 1 ,8Hz, 1 H, H-4); 7,87 (d, J= 1 ,2Hz, H-6"'); 8,24 (s, 1 H, 5'-H)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 12,5 (CH ₃ ); 36,2 (CH ₂ -N1); 38,6 (C- 4"); 60,8 (C-3"); 62,1 (CH ₂ -OH); 85,8 (C-2"); 86,0 (C-5"); 110,9 (C-5"'); 111 ,4 (t, J= 247,9Hz, C-3); 113,8 (C-7); 121 ,9 (t, J= 23,1 Hz, C-3a); 124,0 (C-5'); 125,5 (C-4); 129,6 (C-5); 134,6 (C-6); 137,1 (C-6'"); 142,1 (C-4'); 143,0 (t, J= 6,8Hz, C-7a); 151 ,3 (C-2'"); 164,2 (C-4'"); 164,8 (t, J= 29,9Hz, C-2)

RMN ¹⁹ F (376 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): -112,6

EMAR (IES )

Valor teórico: 508,1074

Valor obtido: 508,1072

UPLC (%, nm): 100

Produto Md:

[098] Rendimento: 20%

Ponto de fusão: 103-104 °C

IV (cm ^*1 ): 2984 (C-H alifático); 1744 (C=O amida); 1089 (C-F); 1248 (P=0); 1194 (C-N)

EM-IES ([M+Na] ⁺ , m/z, %): 423 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 1 ,19 (t, J= 7,0Hz, 6H, CH ₃ ); 4,06 (m, 4H, O-CH ₂ ); 4,94 (d, J= 13,0Hz, 2H, CH ₂ -P); 5,07 (s, 2H, CH ₂ -N1 ); 7,24 (t, J= 7,6Hz, 1 H, 5-H); 7,33 (d, J= 8,0Hz, 1H, 7-H); 7,58 (t, J= 8,0Hz, 1 H, 6-H); 7,64 (dd, J= 8,0Hz, 1 H, 4-H); 8,06 (s, 1 H, 5'-H)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 16,5 (d, J= 5,7Hz, CH ₃ ); 36,0 (CH ₂ - N1 ); 46,1 (d, J= 152,0Hz, CH ₂ -P); 63,5 (d, J= 6,3Hz, 0-CH ₂ ); 1 12,0 (t, J= 246,5Hz, C-3); 112,1 (C-7); 120,4 (t, J= 23,0Hz, C-3a); 124,8 (t, J= 1 ,8Hz, C-5');

125.1 (C-5); 125,2 (C-4); 134,7 (C-6); 142,4 (C-4'); 144,1 (t, J= 7, 1 Hz, C-7a);

165.2 (t, J= 30,1 Hz, C-2)

RMN ³¹ P (161 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 16,1

RMN ¹⁹ F (376 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): -112,4

EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 400, 1112 (Ci ₆ H ₁₉ F ₂ N ₄ 0 ₄ P)

Valor obtido: 400,1112

CLAE (%, nm): 100

Produto Me:

[099] Rendimento: 20%

Ponto de fusão: 1 16-118 °C

IV (cm-1 ): 2980 (C-H alifático); 1734 (C=0); 1079 (C-F); 1250 (P=0); 1 187 (C- N)

EM-IES ([M-H] ⁺ , m/z, %): 413 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 1 ,19 (t, J= 7Hz, 6H, CH ₂ -CH ₃ ); 2,34 (s, 3H, C5-CH ₃ ); 4,05 (m, 4H, CH ₂ -0); 4,94 (d, J= 13Hz, 2H, CH ₂ -P); 5,04 (s, 2H, CH2-NI ); 7,20 (d, J= 8,1 Hz, 1 H, 7-H); 7,38 (d, J= 8,1 Hz, 1 H, 6-H); 7,46 (s, 1 H, 4-H); 8,04 (s, 1 H, 5'-H)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 16,5 (d, J= 5,5Hz, CH ₂ -ÇH ₃ ); 20,7 (C5-ÇH ₃ ); 36,0 (CH ₂ -N1 ); 46,1 (d, J= 151 ,8Hz, CH ₂ -P); 63,6 (d, J= 6,2Hz, CH ₂ - 0); 111 ,2 (t, J= 246,6Hz, C-3); 111 ,9 (C-7); 120,4 (t, J= 22,6Hz, C-3a); 125,0 (C-5'); 125,6 (C-4); 134,7 (t, J= 1 ,8Hz, C-5); 134,9 (C-6); 141 ,7 (t, J= 7,2Hz, C- 7a); 142,5 (C-4'); 165,2 (t, J= 30,0Hz, C-2)

RMN ³¹ P (161 MHz; C0 ₃ COCD _3l δ, ppm): 16,1 RMN ¹⁹ F (376 MHz; CD ₃ COCD ₃₎ δ, ppm): -1 12,2

EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 414,1268 (

Valor obtido: 414,1263

CLAE (%, nm): 99,8

Produto IIIf:

[100] Rendimento: 16%

Ponto de fusão: 119-120 °C

IV (cm ¹ ): 2984 (C-H alifático); 1749 (0=0); 1091 (C-F); 1239 (P=O); 1 187 (C- N)

EM-IES ([M+Na] ⁺ , m/z, %): 457 (100)

RMN de ¹ H (400 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 1 ,20 (t, J= 7,0Hz, 6H, CH ₂ -CH ₃ ); 4,07 (m, 4H, O-CH ₂ ); 4,94 (d, J= 13,0Hz, 2H, CH ₂ -P); 5,08 (s, 2H, CH ₂ -N1 ); 7,37 (d, J= 8,5Hz, 1 H, 7-H); 7,62 (d, J= 8,5Hz, 1 H, 6-H); 7,74 (m, 1 H, 4-H); 8,08 (s, 1 H, 5'-H)

RMN ¹³ C (100 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): 16,5 (t, J= 5,5Hz, CH ₂ -Ç_H ₃ ); 36,2 (CH ₂ -N1 ); 46,2 (d, J= 151 ,8Hz, CH ₂ -P); 63,6 (d, J= 6,1 Hz, O-CH ₂ ); 11 1 ,4 (t, J= 248,1 Hz, C-3); 113,8 (C-7); 122,0 (t, J= 23,1Hz, C-3a); 125,2 (C-5'); 125,5 (C- 4); 129,6 (t, J= 1 ,8Hz, C-5); 134,5 (C-6); 142,1 (C-4'); 143,0 (t, J= 7,0Hz, C-7a); 164,8 (t, J= 29, 8Hz, C-2)

RMN ³¹ P (161 MHz; CD ₃ COCD ₃ , δ, ppm): 16,1

RMN ¹⁹ F (376 MHz; CD3COCD3, δ, ppm): -112,6

EMAR (IES ⁺ )

Valor teórico: 434,0722

CLAE (%, nm): 100

EXEMPLO 5 - ATIVIDADE ANTIRRETROVIRAL

[101] Todos os testes foram realizados em três diferentes ocasiões. Três experimentos, no mínimo, independentes, foram realizados e para cada concentração triplicatas foram feitas. Através desse método detectou-se o percentual de inibição enzimática de cada nova molécula e comparou-se com o percentual de redução da viabilidade causada pelo TDF, AZT, efavirenz e nevirapina.

[102] Os resultados mostraram que os novos compostos apresentam atividades similares ou melhores ao TDF e nevirapina. Além disso, as moléculas testadas não causaram atividade citotóxica. Os resultados da avaliação biológica dos novos derivados l(a-i), ll(a-i) e lll(a-i) estão descritos na Tabela 4. Os resultados representam a mediana de três experimentos independentes. Todas as moléculas apresentaram atividade enzimática inibitória, com valores de CI ₅₀ consideravelmente baixos. Com destaque para as moléculas le, Ig, iila, IIic e Iiif que foram mais ativas que os padrões nevirapina e tenofovir.