文中で特に断らない限り、本明細書で用� ��るすべての技術用語及び科学用語は、本発� ��が属する技術分野の当業者に一般に理解さ� ��るのと同じ意味をもつ。本明細書に記載さ� ��たものと同様又は同等の任意の方法及び材� ��は、本発明の実施又は試験において使用す� ��ことができるが、好ましい方法及び材料を� ��下に記載する。本明細書で言及したすべて� ��刊行物及び特許は、例えば、記載された発� ��に関連して使用されうる刊行物に記載され� ��いる、構築物及び方法論を記載及び開示す� ��目的で、参照として本明細書に組み入れら� ��る。

 本明細書中で使用するIL-17RBに対する抗体 ならびに本発明のIL-17RBを特異的に認識する� �ノクローナル抗体(以下、便宜上両者をあわ� ��て本発明の抗体とも称する)は、本発明の抗 体がIL-17RB分子のみが有するエピトープと免� �学的に交差反応し、他のファミリーのタン� �ク質と交差反応しないことを意味する。こ� �ようなエピトープは、例えばIL-17RBのアミノ� ��配列と他のタンパク質のアミノ酸配列とを� ��列比較することによって、本質的に異なる� ��列部分(連続する少なくとも5アミノ酸、好� �しくは少なくとも8アミノ酸、さらに好まし� ��は少なくとも15アミノ酸)を選択することに� ��って決定できる。

 目的の抗体を得るための抗原エピトープ� ��、IL-17RBのアミノ酸配列(推定アミノ酸配列� �配列番号2に、塩基配列を配列番号1に示す)� �おいて抗原性の高い領域、表在性がある領� �、二次構造をとらない可能性のある領域、� �のタンパク質(特にIL-17RBが属するファミリー の他のタンパク質)と相同性がないか又は低� �領域から選択されうる。ここで「相同性」� �いう用語は、2つ以上のアミノ酸配列または� ��基配列間での配列の同一性または類似性を� ��味し、配列は例えば対角線図形法や頻度分� ��法等を含む慣用的方法で比較しうる。抗原� ��の高い領域は、Parkerらの方法[Biochemistry、25� ��、5425-5432頁(1986年)]によって推定可能である 。表在性がある領域は、例えばハイドロパシ ーインデックスを計算しプロットすることに よって推定可能である。二次構造をとらない 可能性のある領域は、例えば、ChouとFasmanの� �法[Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol.、47巻 45- 148頁(1978年)]によって推定可能である。さら� �、特にIL-17RBが属する他のタンパク質とホモ� ��ジーがないか又は低い領域は、IL-17RBのアミ ノ酸配列と他のタンパク質のアミノ酸配列と の相同性比較によって推定可能である。

 上記の手法で推定された抗原エピトープ� ��して機能し得るIL-17RBの部分アミノ酸配列を 基に、ペプチド合成法を利用することによっ て該アミノ酸配列からなるペプチドを合成す ることができる。目的のペプチドは、例えば 、R.B. Merrifield[Science、232巻、341-347頁(1986年)]� ��よって開発された固相ペプチド合成に基い� ��市販のペプチド合成機を使用して合成し、� ��護基を脱離後、イオン交換クロマトグラフ� ��ー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相ク� ��マトグラフィー等を単独もしくは組み合わ� ��た方法により精製する。得られた精製ペプ� ��ドはキーホールリンペットヘモシアニン(KLH )やアルブミン等のキャリアタンパク質と結� �し免疫原として使用することができる。

 さらに、遺伝子組換えIL-17RB(以下、便宜� �IL-17RB組換え体とも称する)を免疫原として用 い、IL-17RBに対するポリクローナル抗体ある� �はモノクローナル抗体を公知の手法により� �製することもできる。この場合、IL-17RB、モ� ��クローナル抗体、ポリクローナル抗体、ま� ��は他のタンパク質に関して用いられる「組� ��え」という用語は、これらのタンパク質が� ��主細胞内で組換えDNAによって生産されたも� ��であることを意味する。当該組換え体は、� ��記した目的の抗体を得るための抗原エピト� ��プ部分、すなわちIL-17RBの部分アミノ酸配列 をコードするものであってもよいし、該配列 を含む限りIL-17RB全長のアミノ酸配列あるい� �任意の部分アミノ酸配列をコードするもの� �あってもよい。組換えDNAは適当なベクター� �に挿入して使用することができる。本発明� �用いるベクターの種類は特に限定されず、� �えば、自立的に複製するベクター(例えばプ� ��スミド等)でもよいし、あるいは、宿主細胞 に導入された際に宿主細胞のゲノムに組み込 まれ、組み込まれた染色体と共に複製される ものであってもよい。

 好ましくは、本発明で用いるベクターは� ��現ベクターである。発現ベクターにおいてI L-17RB組換え体をコードする遺伝子は、適当な 転写/翻訳調節配列(例えば、プロモーター等) に機能的に連結されている。発現ベクターの 種類としては、例えばプラスミド、ファージ 、コスミド、ウイルス等が挙げられる。プロ モーターは宿主細胞において転写活性を示す DNA配列であり、宿主の種類に応じて適宜選択 することができる。

 転写/翻訳調節配列には、使用する宿主/� �クター系に応じて選択されたプロモーター� �よびエンハンサーを含めることができる。� �た、上記組換えDNAは必要に応じて、適切な� �ーミネーターに機能的に結合されてもよい� �さらに当該組換えベクターは更に、ポリア� �ニレーションシグナル(例えばSV40またはアデ ノウイルス5E1b領域由来のもの)、転写エンハ� ��サー配列(例えばSV40エンハンサー)等の要素� ��有していてもよい。さらに、形質転換細胞� ��択のための選択マーカー遺伝子(テトラサイ クリン、アンピシリン、カナマイシン、ハイ グロマイシン、ホスフィノスリシン等の薬剤 に対する抵抗性を付与する遺伝子、栄養要求 性変異を相補する遺伝子等)をさらに含むこ� �もできる。

 当該組換えDNAあるいは組換えベクターを適� ��な宿主に導入することによってIL-17RB組換え 体を発現する形質転換体を作製することがで きる。DNAまたはベクターを導入される宿主細 胞は、IL-17RB組換え体を発現できれば任意の� �胞を使用できる。宿主細胞としては、原核� �胞、酵母類、動物細胞、真菌細胞、昆虫細� �又は植物細胞等が使用可能である。
 原核細胞の形質転換は、プロトプラスト法� ��または公知の方法でコンピテント細胞を用� ��ることにより行なうことができる。酵母宿� ��へのベクターの導入方法としては、例えば� ��エレクトロポレーション法、スフェロプラ� ��ト法、酢酸リチウム法等を挙げることがで� ��る。動物細胞へのベクターの導入方法とし� ��は、例えば、エレクトロポレーション法、� ��ン酸カルシウム法、リポフェクション法等� ��用いることができる。宿主細胞として糸状� ��を用いる場合、DNA構築物を宿主染色体に組� ��込んで組換え宿主細胞を得ることにより形� ��転換を行うことができる。DNA構築物の宿主� ��色体への組み込みは、公知の方法に従い、� ��えば相同組換えまたは異種組換えにより行� ��ことができる。昆虫細胞を宿主として用い� ��場合には、組換え遺伝子導入ベクターおよ� ��バキュロウイルスを昆虫細胞に共導入して� ��虫細胞培養上清中に組換えウイルスを得た� ��、さらに組換えウイルスを昆虫細胞に感染� ��せ、タンパク質を発現させることができる� ��

 形質転換またはトランスフェクトされた� ��主細胞は適当な培養培地中で培養されて目� ��遺伝子を発現させ、産生したIL-17RB組換え体 を培地中から、または宿主細胞中から回収す る。細胞から回収する場合には、培養終了後 、細胞を遠心分離等により分離し、水性緩衝 液に懸濁し、音波処理、フレンチプレス、ダ イノミル等により細胞を破砕し、無細胞抽出 液を得る。膜分子の単離精製は、タンパク質 の精製に用いられる一般的方法、例えばゲル 濾過、イオン交換クロマトグラフィー、アフ ィニティクロマトグラフィー、疎水性クロマ トグラフィー等のクロマトグラフィー、HPLC� �電気泳動法、脱塩法、有機溶媒沈殿法等を� �意に組み合わせて行うことができる。

 本発明の「抗体」はペプチド抗体、ポリ� ��ローナル抗体、モノクローナル抗体のいず� ��でもよい。「抗体」は、マウスまたは他の� ��した宿主動物を免疫に用いられたタンパク� ��に特異的に結合するであろう抗体を産生す� ��か、産生するであろうリンパ球又は脾臓細� ��を引き出すために、皮下、腹腔内、または� ��肉内の経路によって、抗原あるいは抗原発� ��細胞により免疫化することによって得られ� ��。抗原としては上記目的の抗体を得るため� ��抗原エピトープや該エピトープを含む部分� ��ミノ酸配列が挙げられ、抗原発現細胞とし� ��は、上記目的の抗体を得るための抗原エピ� ��ープや該エピトープを含む部分アミノ酸配� ��をコードする組換えDNAで形質転換またはト� ��ンスフェクトされた宿主細胞が挙げられる� ��さらに宿主動物としてはヒト抗体遺伝子の� ��パートリーを有するトランスジェニック動� ��に抗原または抗原発現細胞を投与し、所望� ��ヒト抗体を取得してもよい[Proc. Natl. Acad.  Sci. USA、97巻、722-727頁(2000年)、国際公開WO96/3 3735、WO97/07671、WO97/13852、WO98/37757参照]。その� ��わりに、リンパ球をin vitroで免疫化しても� ��い。宿主動物から得られた血清から、抗原� ��結合する画分を集め、精製することにより� ��ポリクローナル抗体を取得することができ� ��。また、ハイブリドーマ細胞を形成するた� ��に、ポリエチレングリコールのような適当� ��融合試薬を用いて、リンパ球又は脾臓細胞� ��ミエローマ細胞株と融合させることにより� ��モノクローナル抗体を作製することができ� ��(Goding, Monoclonal Antibodies: Principals and Practi ce、59-103頁、Academic press、1986年)。例えば本� �明のモノクローナル抗体は、ハイブリドー� �法[Nature、256巻、495頁(1975年)]を用いても、組 換えDNA法(Cabillyら、米国特許第4816567号)を用� �ても作製することができる。

 抗原タンパク質はIL-17RBのタンパク質の全 てまたは部分配列をコードするDNAを、大腸菌 や酵母、昆虫細胞、動物細胞等で発現させる ことにより調製することができる。得られた 抗原タンパク質は、アフィニティクロマトグ ラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、 ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマト グラフィー等を単独もしくは組み合わせた方 法により精製し、この精製標品を免疫原とし て用いる。

 また、本発明の抗体は、無傷の抗体であっ� ��もよいし、あるいは(Fab’) ₂ やFab等の抗体断片であってもよいし、単鎖抗 体等の組換え抗体であってもよい。

 また、定常領域をヒトの定常領域に置き� ��えたキメラ抗体(例えばマウス-ヒトキメラ� �体;Cabillyら、米国特許4816567及びMorrisonら、Pro c. Natl. Acad. Sci. USA、89巻、6851頁 (1984年))、 定常領域および超可変領域(または、Complementa ry-determining region;CDR)を除く全ての可変領域を ヒトの配列に置き換えたヒト化抗体(Carterら,� �Proc. Natl. Acad. Sci. USA、89巻、4285頁、1992年� ��びCarterら、BioTechnology、10巻、163頁、1992年)� �本発明の抗体に含まれる。

 例えば、IL-17RBの細胞外ドメインと考えら れる領域(例えば配列番号2のアミノ酸1位~282� �まで)とヒトIgG1のFc領域を結合させた組換え� ��を免疫原として用いることができる。該組� ��え体のアミノ酸配列を配列番号4に示す。本 発明で用いる組換え体では、細胞表面上に存 在するFcγ受容体に結合しないよう、3箇所の� ��ミノ酸置換を行なった(配列番号4に示すア� �ノ酸配列中302位(Leu→Ala)、303位(Leu→Glu)、469� ��(Val→Asp))。

 また、このようにして得られた本発明の� ��体に対する抗体、すなわち抗イディオタイ� ��抗体もまた本発明に含まれる。

 このようにして得られたIL-17RBに対する各 種抗体は、その特徴を生かすことができる様 々な用途に使用可能である。本抗体を蛍光性 物質(ローダミン、フルオレサミン等)で標識� ��、周知のFACSを用いて目的の、IL-17RBを発現� �ている細胞(IL-17RB陽性細胞)、特にIL-17RB陽性N KT細胞を検出・分離することができる。さら� ��種々の臓器におけるIL-17RB陽性NKT細胞の存在 様式を知ることができる。またビオチンで標 識し、フィコエリスリン等が結合したアビジ ンを用いても同様にIL-17RB陽性NKT細胞を検出� �分離することができる。ここで分離とは、� �の細胞、特にリンパ球系細胞、具体的にはB� ��胞、T細胞、マクロファージ、樹状細胞、NK� ��胞、IL-17RB陰性NKT細胞、好中球、好酸球、好 塩基球等の多型核白血球、マスト細胞等の免 疫担当細胞、等からの分離を意味する。

 IL-17RBの検出に関しては、FACSでの検出に� �どまるものではない。例えばウェスタンブ� �ッティングにおいて本抗体を1次抗体として� ��用させることにより検出可能であることが� ��想されるし、タンパク質レベルでの発現確� ��を行うことができる。また本抗体を固相(ポ リスチレンビーズ、マイクロタイターウエル 表面、ラテックスビーズ等)に結合して不均� �系で、あるいは均一系で、免疫学的反応を� �って検出、定量(蛍光抗体法、ELISA、ラジオ� �ムノアッセイ等の方法を使用)することがで� ��る。この場合、免疫学的反応は競合反応で� ��ってもよいし非競合反応であってもよい。� ��た2つ以上の抗体(モノクローンまたはポリ� �ローン)を用いるサンドイッチ法による反応� ��使用できる。上記における検出、定量のた� ��には、当業界で公知のいずれの免疫学的手� ��も用いることができる。

 IL-17RB陽性NKT細胞においてIL-17RBリガンドの� �激により活性化されTh2細胞様の機能が誘導� �れるようになることは、本発明において得� �れた知見である。
 本発明において、IL-17RB陽性細胞としては、 活性化Th2細胞、活性化好酸球等が挙げられる 。また、定常状態では、IL-17RB陽性細胞とし� �、好ましくはIL-17RB陽性NKT細胞が挙げられる� ��IL-17RB陽性NKT細胞は、NKT細胞の中でも特にCD4 陽性のNKT細胞に見られ、CD4陽性のNKT細胞のう ち約1/3を占める。脾臓や胸腺、肺に多く見ら れる。ここで、「定常状態」とは、生体が健 康な状態、特に喘息や潰瘍性大腸炎等のアレ ルギー疾患を有さない状態を示す。

 本発明は、IL-17RB陽性NKT細胞、特にリガンド 刺激により活性化されたIL-17RB陽性NKT細胞のTh 2細胞様の機能を測定することを含む、アレ� �ギー性気道炎症及び/又は気道過敏症の治療� ��のスクリーニング方法を提供する。アレル� ��ー性気道炎症とは、アレルギーの原因(例、 ダニやハウスダスト等の環境性抗原)を吸い� �んで気管支粘膜で免疫反応が起こり、ヒス� �ミン、ロイコトリエン、化学伝達物質が遊� �され、マスト細胞、好酸球、好中球、リン� �球によるアレルギー性炎症反応が誘発され� �生じる気道の炎症であり、喘息発作を伴う� �合がある。気道過敏症では、非特異的な種� �の刺激に反応して気管が収縮し、喘息発作� �伴う。わずかな刺激でも気管が過剰に反応� �、冷たい空気を吸ったり、急に走ったりす� �だけでも喘息発作が起こる場合がある。
 本発明において「Th2細胞様の機能」とは、� ��性免疫を制御するIL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13 等のサイトカインを産生し、B細胞の抗体産� �を促進するヘルパーT細胞2型(Th2細胞)と同等� ��機能を意味する。具体的には、活性化したI L-17RB陽性NKT細胞がIL-4、IL-5、IL-13、TARC/CCL17、M DC/CCL22等のサイトカイン・ケモカインを産生� ��る能力、産生された種々のサイトカイン・� ��モカインが発揮し得る種々の作用を意味す� ��。
 さらに、リガンド刺激により活性化されたI L-17RB陽性NKT細胞は、好酸球走化因子(ECF-L)を� �生し、IL-5産生性の好酸球を局所に呼び寄せ� ��機能を有する。
 IL-4(インターロイキン-4)は、活性化されたCD 4陽性T細胞(Th2細胞)、CD8陽性T細胞、マスト細� ��(肥満細胞)、好塩基球、NKT細胞から産生さ� �るサイトカインの1種であり、Th2細胞の増殖� ��分化を促進し、活性化されたB細胞に作用し てIgMから、IgG1、IgEへのクラススイッチを促� �させ、IgG1抗体、IgE抗体の産生を促進する。� ��た、マクロファージの活性化を抑制し、NO� �プロスタグランジン(PGE ₂ )、IFN-γの産生を抑制することが知られてい� �。
 IL-5(インターロイキン-5)は、主として活性� �T細胞および肥満細胞より産生され、B細胞や 好酸球の活性化、増殖・分化に重要な役割を 演じるサイトカインである。また、IL-2共存� �の細胞傷害性T細胞の生成促進や好塩基球の� ��スタミン遊離の増強作用も明らかになって� ��る。アレルギー性鼻炎、喘息、アトピー性� ��膚炎のようなアレルギー疾患とIL-5の関連を 示唆する報告が多い。
 IL-13(インターロイキン-13)は、喘息のエフェ クター分子として作用し、例えば無感作動物 にIL-13を投与するだけで気道過敏性、好酸球� ��炎症,粘膜異形成といったアレルギー性喘息 に特徴的な症状を発現することが報告されて いる。
 TARC/CCL17及びMDC/CCL22は、ともにCCR4の特異的� �ガンドであり、Th2細胞に発現しているケモ� �インである。
 従ってIL-17RB陽性NKT細胞のTh2細胞様の機能の 測定としては、リガンド刺激依存性のTh2サイ トカイン・ケモカイン(IL-4、IL-5、IL-13、TARC/CC L17、MDC/CCL22等)を産生する能力の測定、リガ� �ド刺激依存性の気道抵抗の上昇の有無の測� �(in vivoでの測定)、これに付随して肺胞洗浄� ��中に含まれる免疫担当細胞、特に好酸球の� ��の測定、等が挙げられる。詳細な測定方法� ��測定手順については後述する。

 本スクリーニング方法で用いるIL-17RB陽性 NKT細胞は、NKT細胞を含有する細胞集団から上 記した本発明の抗体を用いてIL-17RBを発現し� �いるNKT細胞を検出・分離して得ることがで� �る。NKT細胞は、その存在割合は少ないが免� �系で制御的な役割を担っているリンパ球の� �種である。NKT細胞はT細胞レセプター(TCR)とNK レセプターの2つの抗原レセプターを有する� �NKT細胞の由来は特に限定されず、ヒトを含� �霊長類、げっ歯類、ウサギ、ネコ、イヌ、� �マ、ウシ、ヒツジ、ヤギ及びブタ等の哺乳� �物の臍帯血、末梢血、肺、骨髄、脾臓、リ� �パ節、胸腺等から回収することができる。� �明細書で用いる「霊長類」という用語は、� �ル、類人猿、及びヒトが含まれるがこれら� �限定されない、哺乳類の群に属する、任意� �動物を意味する。具体的には末梢血や肺、� �臓、胸腺のホモジネートから回収される単� �胞の懸濁液を、NKT細胞に高度に保持されたTC Rに認識され得る、CD1d分子と結合したα-ガラ� ��トシルセラミド(α-GalCer若しくはα-GC)のよう な抗原糖脂質を用いてFACS解析することによ� �て選別、回収し、次いで上記したIL-17RBに対� ��る抗体(好ましくはモノクローナル抗体)を� �いてIL-17RBを発現しているNKT細胞のみを選別� ��回収する。あるいは、IL-17RBが定常状態にあ るNKT細胞の一部に特異的に発現していること から、末梢血や肺、脾臓、胸腺のホモジネー トから回収される単細胞の懸濁液、好ましく は脾臓由来の白血球から直接IL-17RBに対する� �体(好ましくはモノクローナル抗体)を用いて IL-17RB陽性のNKT細胞を選別、回収することも� �きる。

 本発明のアレルギー性気道炎症及び/又は気 道過敏症の治療薬のスクリーニング方法の一 態様(態様1)を以下に示す。
態様1
(工程1)IL-17RB陽性NKT細胞にIL-17RBのリガンドの� ��在下、試験化合物を接触させる工程。
 本工程で用いるIL-17RB陽性NKT細胞としては、 上記したIL-17RBに対する抗体(好ましくはモノ� ��ローナル抗体)で検出・分離した細胞が挙げ られる。該NKT細胞は好ましくはAPCで活性化さ れているか、活性化される条件下で用いられ る。具体的にはAPCの共存下で本工程を実施す る。本工程で用いるリガンドとしては、IL-17R B陽性NKT細胞に作用してTh2細胞様の機能を誘� �する、すなわちTh2サイトカインやケモカイ� �を産生させるような物質であれば特に限定� �れないが、IL-17RBのリガンドとして知られて� ��るIL-17E/IL-25を用いることが好ましい。使用� ��るリガンドの濃度は、IL-17RB陽性NKT細胞の増 殖に不利に作用することのない、好ましくは 増殖を促し、Th2サイトカインやケモカインを 産生させることが可能な範囲で適宜設定され るが、反応系の媒体となる培養液や緩衝液中 、通常0.1~10ng/ml、好ましくは1ng/ml程度である� ��ここで、当該リガンドは、リガンドがIL-17RB 陽性NKT細胞に作用してTh2サイトカインやケモ カインを産生させるような状態で反応系に存 在する限り、試験化合物とIL-17RB陽性NKT細胞� �の接触の前に反応系に添加されていても、� �触の後に反応系に添加されていても、ある� �は接触と同時に反応系に添加されるもので� �ってもよい。
 本明細書において「試験化合物」とは、IL-1 7RB陽性NKT細胞に作用してその機能を阻害ある いは除去することができるか否かを調べる目 的で選択あるいは合成された化合物であり、 新規な化合物以外に、既に別の作用を有する ことが報告されている既知化合物をも包含す る。また組成物として用いてもよい。例えば 、核酸(例、ヌクレオシド、オリゴヌクレオ� �ド、ポリヌクレオチド)、糖質(例、単糖、二 糖、オリゴ糖、多糖)、脂質(例、飽和又は不� ��和の直鎖、分岐鎖及び/又は環を含む脂肪酸 )、アミノ酸、タンパク質(例、オリゴペプチ� ��、ポリペプチド)、有機低分子化合物、コン ビナトリアルケミストリー技術を用いて作製 された化合物ライブラリ、固相合成やファー ジディスプレイ法により作製されたランダム ペプチドライブラリ、天然成分(例、微生物� �動植物、海洋生物等由来の成分)、あるいは� ��品、飲料水等が挙げられる。本発明のスク� ��ーニング方法によりIL-17RB陽性NKT細胞の機能 を阻害あるいは除去する作用があると認めら れた化合物は、上述の如くアレルギー性気道 炎症や気道過敏症への適用が期待される。
 IL-17RB陽性NKT細胞の試験化合物との接触は、 該試験化合物が、活性化されたIL-17RB陽性NKT� �胞が有するTh2サイトカイン・ケモカイン産� �能に影響を及ぼすか否かを判定できる限り� �その方法は特に限定されないが、簡便にはIL -17RB陽性NKT細胞及びその活性化物質(例えばリ ガンドや抗原提示細胞)を含有する細胞懸濁� �等の反応系中、リガンドの存在下に所定の� �で添加することによって実施される。試験� �合物の添加量は、細胞の状況に応じて適宜� �定されるが、通常、希釈系列を設定するこ� �が好ましい。接触に要する時間も、所望の� �果が得られる範囲で適宜設定することがで� �る。通常、24~120時間、好ましくは48~72時間程 度である。

(工程2)試験化合物を接触させたIL-17RB陽性NKT� �胞と試験化合物を接触させていないIL-17RB陽� ��NKT細胞との、そのTh2細胞様の機能を測定し� ��較する工程。
 IL-17RB陽性NKT細胞は、抗原提示細胞(APC)等に� ��って活性化されていることが好ましい。か� ��るIL-17RB陽性NKT細胞をIL-17RBのリガンド(例え� ��IL-17E/IL-25)で刺激することによって、Th2細胞 様の機能が誘導される。Th2細胞様の機能とし ては具体的にはTh2サイトカイン・ケモカイン の産生能が挙げられる。Th2サイトカイン・ケ モカインとしては上述の如き、IL-13、IL-4、TAR C/CCL17、MDC/CCL22等が挙げられる。これらサイ� �カイン・ケモカインの産生能は、通常、当� �野で実施される方法、例えば各サイトカイ� �・ケモカインに対する抗体を用いたウェス� �ンブロットやELISA法、プローブを用いたノザ ンブロットやプライマーを用いた定量PCR等に よって測定することができる。各種抗体やプ ローブ、プライマーは、各サイトカイン・ケ モカインのアミノ酸配列や遺伝子配列、ある いは精製方法等の既知の情報に基づいて適宜 調製することができるか、商業的に入手可能 なものである。

(工程3)有意にTh2細胞様の機能を抑制した試験 化合物をアレルギー性気道炎症及び/又は気� �過敏症の治療薬として選抜する工程。
 工程2同様、Th2細胞様の機能としてはTh2サイ トカイン・ケモカインの産生能が挙げられる 。IL-17RB陽性NKT細胞が産生するTh2サイトカイ� �・ケモカインは、気道過敏症あるいは喘息� �増悪に中心的な役割を担っているものと考� �られ、従って、上記工程2で得られた情報に� ��づいて選抜された、有意にTh2細胞様の機能� ��抑制した、特にTh2サイトカイン・ケモカイ� ��産生を抑制した試験化合物は、アレルギー� ��気道炎症及び/又は気道過敏症の治療薬の候 補となり得る。効果の有意性は、通常、当分 野で実施している統計学的処理に基づいて有 意差検定を行なうことにより決定することが できる。

 さらに、本発明が提供するスクリーニング� ��法の別態様(態様2)を以下に示す。
態様2
(工程1)IL-17RB陽性NKT細胞を有するヒト以外の� �乳動物にIL-17RBのリガンドの存在下、試験化� ��物を投与する工程(工程1)。
 本工程で用いる、IL-17RB陽性NKT細胞を有する ヒト以外の哺乳動物としては、IL-17RBのリガ� �ド刺激依存性のTh2サイトカイン・ケモカイ� �の産生や、気道抵抗の上昇等の作用が認め� �れるヒト以外の哺乳動物であれば特に限定� �れず、ヒト以外の霊長類、げっ歯類、ウサ� �、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ� �びブタ等の哺乳動物が挙げられる。それら� �中でも特にTh2優位であることが望ましい。� �えばマウスであれば、Th1優位として知られ� �C57BL/6やC3H/HeN系統よりは、Th2優位として知ら れるBalb/cやDBA/2cr系統のマウスが好ましく用� �られる(実施例4参照)。IL-17RBのリガンド及び� ��験化合物としては、上記した本発明のスク� ��ーニング方法の態様1で用いられるものと同 様なものが挙げられる。
 IL-17RBのリガンドの投与量は、ヒト以外の哺 乳動物の体内に存在するIL-17RB陽性NKT細胞(好� ��しくは活性化された状態)に対して、リガン ド刺激依存的にTh2細胞様の機能を誘導する、 すなわち、Th2サイトカイン・ケモカイン(IL-13 、IL-4、TARC/CCL17、MDC/CCL22等)を産生させる、及 び/又は気道収縮物質(メタコリン等)刺激によ る気道抵抗の上昇をもたらすような量であれ ば特に限定されないが、通常体重1kgあたり1~1 00mg、好ましくは1~10mg程度である。上記したIL -17RB陽性NKT細胞のTh2細胞様の機能が誘導され� ��該機能への試験化合物の影響が測定できれ� ��、試験化合物及びリガンドを、ヒト以外の� ��乳動物へ投与する順序は、特に制限されず� ��試験化合物の投与はリガンドの投与前であ� ��ても、リガンド投与後であっても構わない� ��また、アレルギー性気道炎症及び/又は気道 過敏症の治療薬、特に喘息の治療薬として所 望される作用点に応じて、適宜投与するタイ ミングが検討され得る。

(工程2)試験化合物を投与した哺乳動物と、試 験化合物を投与していない哺乳動物との、そ のTh2細胞様の機能を測定し、その結果を比較 する工程。
 本工程において「Th2細胞様の機能」として� ��、上記本発明のスクリーニング方法の態様1 で述べたものと同様なものが挙げられる。具 体的にはリガンド刺激依存性のTh2サイトカイ ン・ケモカイン(IL-4、IL-5、IL-13、TARC/CCL17、MDC /CCL22等)を産生する能力の測定、リガンド刺� �依存性の気道抵抗の上昇の有無の測定、こ� �に付随して肺胞洗浄液中に含まれる免疫担� �細胞(特に好酸球)の数の測定等が挙げられる 。リガンド刺激依存性のTh2サイトカイン・ケ モカインを産生する能力の測定は、上記本発 明のスクリーニング方法の態様1で述べたも� �と同様な方法によって実施される。リガン� �刺激依存性の気道抵抗の上昇の有無は、卵� �アルブミン(OVA)誘導性の気道炎症モデル(喘� �モデル)を用いて測定することができる。OVA� ��用いた気道炎症モデルは、OVA-alumで免疫後� �OVAを吸入させて気道炎症を起こすものであ� �。本発明では、このモデルを用いてIL-17RB陽� ��NKT細胞のTh2細胞様機能を測定することを目� ��とするのでIL-17RB陽性NKT細胞のTh2細胞様機能 の誘導にはIL-17RBのリガンドを用いる。該誘� �により気管支周囲や血管周囲に好酸球性の� �潤が認められる。メタコリン等により気道� �縮を起こしたときに非常に強く反応し、気� �抵抗が上昇する。IL-17RB陽性NKT細胞のTh2細胞� ��の機能はこの気道抵抗の上昇の程度に基づ� ��て測定される。試験化合物がこの気道抵抗� ��上昇を抑制するか否かを測定することによ� ��て、試験化合物のアレルギー性気道炎症及� ��/又は気道過敏症の治療薬としての有用性を 確認することができる。肺胞洗浄液中に含ま れる免疫担当細胞(特に好酸球)の数の測定は� ��通常臨床試験の分野で実施されている方法� ��用いて行なうことができる。例えば好酸球� ��ギムザ染色法により鑑別可能であり、肺胞� ��浄液中の好酸球の数を測定し得る。あるい� ��好酸球特異的表面分子であるCCR3に注目し、 CCR3陽性の細胞を数えることで測定しうる。� �験化合物が、例えば肺胞洗浄液中の好酸球� �の増加を抑制するか否かを測定することに� �って、試験化合物のアレルギー性気道炎症� �び/又は気道過敏症の治療薬としての有用性� ��確認することができる。

(工程3)有意にTh2細胞様の機能を抑制した試験 化合物をアレルギー性気道炎症及び/又は気� �過敏症の治療薬として選抜する工程。
 本工程は、上記本発明のスクリーニング方� ��の態様1の工程3と同様にして実施すること� �できる。

 本発明のスクリーニング方法では、好まし� ��は、陽性の対照化合物を用いることができ� ��。陽性の対照化合物とは、IL-17RB陽性NKT細胞 のTh2細胞様の機能、すなわちリガンドでの刺 激によりTh2サイトカインやケモカインを産生 する能力を抑制することがあらかじめわかっ ている化合物である。具体的には、IL-17RBに� �するアンタゴニスティック抗体並びに低分� �阻害剤、IL-17E/IL-25に対する抗体あるいはIL-17 RBの可溶型分子等が挙げられる。
 IL-17RBに対するアンタゴニスティック抗体は 、ターゲット抗原であるIL-17RBに対してアン� �ゴニスティックに作用し、また、IL-17RBとそ� ��リガンドとの結合を阻害することによって� ��IL-17E/IL-25に対する抗体は、IL-17RBとそのリガ ンドとの結合を阻害することによって、IL-17R B陽性NKT細胞の機能を阻害あるいは除去する� �IL-17RBに対する低分子阻害剤としては、IL-17RB とそのリガンドとの相互作用を調節してIL-17R B陽性NKT細胞のTh2細胞様の機能を阻害あるい� �除去できる低分子物質やIL-17RBとそのリガン� ��に関わる細胞内シグナル経路を調節してIL-1 7RB陽性NKT細胞のTh2細胞様の機能を阻害あるい は除去できる低分子物質が挙げられる。さら にはIL-17RBの可溶化型分子(すなわち、細胞外� ��域に相当する分子)は、競合的にリガンドと 結合することによって、IL-17RB陽性NKT細胞の� �能を阻害あるいは除去する。陽性の対照化� �物の使用濃度は、IL-17RB陽性NKT細胞の機能を� ��害あるいは除去する作用が確認される濃度� ��あれば特に限定されず、用いる化合物の種� ��によっても異なるが、例えばIL-17RBに対する アンタゴニスティック抗体を用いる場合であ れば、通常体重1kgあたり1~100mg、好ましくは1~ 10mg程度である。
 IL-17RBに対するアンタゴニスティック抗体並 びに低分子阻害剤、IL-17E/IL-25に対する抗体及 びIL-17RBの可溶型分子としては、それぞれ、� �述のアレルギー性気道炎症及び/又は気道過� ��症の治療薬に含められる、IL-17RB陽性NKT細胞 のTh2細胞様の機能を阻害又は除去し得る物質 と同様なものが用いられる。

 本発明は、また、IL-17RB陽性NKT細胞のTh2細 胞様の機能を阻害又は除去する物質を有効成 分として含有するアレルギー性気道炎症及び /又は気道過敏症の治療薬を提供する。IL-17RB� ��性NKT細胞のTh2細胞様の機能を阻害又は除去� ��る物質としては、例えばIL-17RBに対するアン タゴニスティック抗体並びに低分子阻害剤、 IL-17E/IL-25に対する抗体及びIL-17RBの可溶型分� �等が挙げられる。さらにNKT細胞においてIL-17 RBが発現するのを阻害する様な物質、例えば� ��ンチセンス核酸(例、DNA、RNA、又は修飾ヌク レオチド、あるいはそれらのキメラ分子)、� �ボザイム、RNAi誘導性核酸(細胞内に導入され ることによりRNAi効果を誘導し得るポリヌク� �オチド、好ましくはRNA:例、siRNA)、アプタマ� ��、並びにこれらをコードする核酸を含む発� ��ベクターが挙げられる。

 IL-17RBに対するアンタゴニスティック抗体と しては、上記したIL-17RB陽性NKT細胞を検出・� �離するのに用いられる抗体のうち、IL-17RBに� ��してアンタゴニスティックに作用する抗体� ��挙げられる。作用の確認はリガンド刺激に� ��って誘導されるIL-17RB陽性NKT細胞のTh2細胞様 の機能に対する影響を調べることによって行 なうことができる。低分子阻害剤は、IL-17RB� �制発現細胞(例えばIL-17RB強制発現293T細胞)を� ��いたり可溶化型組換え体への結合性を測定� ��たりすることによってスクリーニングされ� ��ものを用いることができる。本発明におい� ��用いられるIL-17E/IL-25に対する抗体について� ��IL-17RBに対する抗体と同様、周知の免疫学的 手法により、そのポリクローナル抗体、モノ クローナル抗体として調製することができる 。又、抗体のフラグメント(例、Fab、F(ab’) ₂ )、組換え抗体(例、単鎖抗体)であってもよい 。IL-17RB陽性NKT細胞のTh2細胞様の機能を阻害� �は除去し得る物質としてIL-17RB可溶化型分子� ��用いることができる。IL-17RB可溶化型分子と は、IL-17RBの細胞外領域を含む部分アミノ酸� �列を含むタンパク質分子であり、具体的に� �配列番号2中1位~282位のアミノ酸配列を有す� �。

 活性成分であるIL-17RB陽性NKT細胞のTh2細胞 様の機能を阻害又は除去し得る物質が、核酸 分子又はタンパク質分子である場合、本発明 の治療薬は、核酸分子又はタンパク質分子を コードする核酸分子を含む発現ベクターを有 効成分とすることもできる。当該発現ベクタ ーは、上記の核酸分子をコードするオリゴヌ クレオチドもしくはポリヌクレオチドが、投 与対象である哺乳動物の細胞内でプロモータ ー活性を発揮し得るプロモーターに機能的に 連結されていなければならない。本発明の発 現ベクターが含み得るプロモーターは、その 制御下にある因子の発現を可能とする限り特 に限定されず、因子の種類により適宜選択さ れ得るが、例えば、polIIIプロモーター(例、tR NAプロモーター、U6プロモーター、H1プロモー ター)、哺乳動物用プロモーター(例、CMVプロ� ��ーター、CAGプロモーター、SV40プロモーター )が挙げられる。また、使用されるプロモー� �ーとしては、リンパ球に特異的なプロモー� �ー(例、lckプロモーター、Pmed1プロモーター)� ��用いてもよい。

 発現ベクターは、好ましくは核酸分子を� ��ードするオリゴ(ポリ)ヌクレオチドの下流� �転写終結シグナル、すなわちターミネータ� �領域を含む。さらに、形質転換細胞選択の� �めの選択マーカー遺伝子(テトラサイクリン� ��アンピシリン、カナマイシン、ハイグロマ� ��シン、ホスフィノスリシン等の薬剤に対す� ��抵抗性を付与する遺伝子、栄養要求性変異� ��相補する遺伝子等)をさらに含むこともでき る。

 発現ベクターとして使用される基本骨格� ��ベクターは、プラスミド又はウイルスベク� ��ーであり得るが、ヒト等の哺乳動物への投� ��に好適なベクターとしては、アデノウイル� ��、レトロウイルス、アデノ随伴ウイルス、� ��ルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポ� ��クスウイルス、ポリオウイルス、シンドビ� ��ウイルス、センダイウイルス等のウイルス� ��クターが挙げられる。

 本発明の治療薬は、IL-17RB陽性NKT細胞のTh2 細胞様の機能を阻害又は除去し得る物質に加 え、任意の担体、例えば医薬上許容され得る 担体を含むことができる。医薬上許容され得 る担体としては、例えば、ショ糖、デンプン 、マンニット、ソルビット、乳糖、グルコー ス、セルロース、タルク、リン酸カルシウム 、炭酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、 メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセル ロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン 、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、 ショ糖、デンプン等の結合剤、デンプン、カ ルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロ ピルスターチ、ナトリウム-グリコール-スタ� ��チ、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウ� ��、クエン酸カルシウム等の崩壊剤、ステア� ��ン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、� ��ウリル硫酸ナトリウム等の滑剤、クエン酸� ��メントール、グリシルリシン・アンモニウ� ��塩、グリシン、オレンジ粉等の芳香剤、安� ��香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、� ��チルパラベン、プロピルパラベン等の保存� ��、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等� ��安定剤、メチルセルロース、ポリビニルピ� ��リドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸� ��剤、界面活性剤等の分散剤、水、生理食塩� ��、オレンジジュース等の希釈剤、カカオ脂� ��ポリエチレングリコール、白灯油等のベー� ��ワックス等が挙げられるが、それらに限定� ��れるものではない。

 経口投与に好適な製剤は、水、生理食塩� ��のような希釈液に有効量の物質を溶解させ� ��液剤、有効量の物質を固体や顆粒として含� ��でいるカプセル剤、サッシェ剤又は錠剤、� ��当な分散媒中に有効量の物質を懸濁させた� ��濁液剤、有効量の物質を溶解させた溶液を� ��当な分散媒中に分散させ乳化させた乳剤、� ��るいは散剤、顆粒剤等である。

 非経口的な投与(例、静脈内注射、皮下注 射、筋肉注射、局所注入等)に好適な製剤と� �ては、水性および非水性の等張な無菌の注� �液剤があり、これには抗酸化剤、緩衝液、� �菌剤、等張化剤等が含まれていてもよい。� �た、水性および非水性の無菌の懸濁液剤が� �げられ、これには懸濁剤、可溶化剤、増粘� �、安定化剤、防腐剤等が含まれていてもよ� �。当該製剤は、アンプルやバイアルのよう� �単位投与量あるいは複数回投与量ずつ容器� �封入することができる。また、有効成分お� �び医薬上許容され得る担体を凍結乾燥し、� �用直前に適当な無菌のビヒクルに溶解又は� �濁すればよい状態で保存することもできる� �

 本発明の治療薬の活性成分であるIL-17RB陽 性NKT細胞のTh2細胞様の機能を阻害又は除去し 得る物質の投与法および投与剤型は特に制限 されないが、静脈、動脈内投与、筋内投与、 経口投与、座剤投与等であり、薬学的に許容 可能な賦形剤や希釈剤と組み合わせて経口用 または非経口用に処方することができる。投 与は1日あたり1回かまたは数回に分けて行い� ��投与量は患者の重篤度、年齢、性別、体重� ��の条件に応じて決定され、副作用を併発し� ��い範囲である。