DESCRIPTION ET ÉTAT DE LA TECHNIQUE

[-] Le cancer est parmi les maladies les plus répondues dans le monde. Il est provoqué par la multiplication et la propagation anarchique de cellules anormales et qui se développent au-delà de leurs limites habituelles. Cette maladie est considérée comme une cause majeure de décès dans le monde avec environ 10 millions de décès en 2020 [World Health Organization]. Les cancers les plus fréquents selon le nombre de cas détectés sont : les cancers du sein, du poumon, du colorectal, de la prostate, de la peau et de l'estomac [Lancet Glob. Heal. 2016, vol. 4, e609- e616].

Le cancer du sein est le cancer le plus fréquemment diagnostiqué et le plus mortel chez la femme. Il résulte d'un dérèglement de certaines cellules qui se multiplient et forment le plus souvent une masse hétérogène appelée tumeur. En effet, des études sur l'expression génique ont permis d’identifier plusieurs sous-types majeurs de cancer du sein [Nature 2000, vol. 406, 747- 52]. Les cancers triple négatifs constituent l’un de ces groupes. Ce type de cancer est caractérisé par l'absence de récepteurs hormonaux (progestérone et œstrogènes) et de la protéine HER2 à la surface de leurs cellules. Il se caractérisent aussi par une prolifération puissante, un grade histopronostique élevé (architecture tumorale, la forme et la taille du noyau de la cellule et le nombre de cellules qui se divisent) ainsi par un risque d’apparition d’une métastase plus importante surtout au niveau du système nerveux central, poumons et foie [Int J Clin Exp Pathol. 2009, vol. 2, 444-455]

Etant donné que le cancer triple négatif est résistant à des thérapies ciblées HER2 telles que le trastuzumab et aux thérapies hormonales telles que le tamoxifène et les inhibiteurs de l'aromatase, la chimiothérapie reste la solution la plus adaptée du traitement de ce type de cancer [Eur. J. Cancer 2008, vol. 44, 2799-2805]. Au vu de contourner cette résistance, le développement de nouveaux agents spécifiques anticancéreux pour lutter contre cette maladie est nécessaire. De ce fait, une recherche massive de nouveaux agents anticancéreux a été principalement développée par la révélation de nouvelles cibles moléculaires sur lesquelles intervenir, suivie de la découverte de nouvelles classes de composés qui interagissent avec de telles cibles [Curr. Opin. Chem. Biol. (1999), 3, 500-509; Eur. J. Cancer 1996, vol. 6, 912-920; J. Natl. Cancer Inst. 2000, vol. 92, 898-902],

Les sulfamides constituent une classe importante de médicaments possédant des propriétés antibactériennes [Science 2000, vol. 287, 1960-1964], anti-anhydrase carbonique [Exp. Opin. Ther. Patents 2000, vol. 10, 575-600 ; Exp. Opin. Ther. Patents 2002, vol.12, 217-242], diurétiques [Exp. Opin. Ther. Patents 2000, vol. 10, 575-600 ; Med. Res. Rev. 2003, vol. 23, 146-189], hypoglycémiantes [Diabetes 1988, vol. 37, 847-850], antithyroïdienne [Chem. Soc. Rev. 1979, vol. 8, 563-580], ou activité inhibitrice de la protéase entre autres. [Eds. Protease Inhibitors in AIDS Therapy. Marcel Dekker: New York, Basel, 2001; Med. Res. Rev. 2002, vol. 22, 329- 372 ; J. Med. Chem. 2000, vol. 43, 3677-3687]. Au cours des dernières années, un travail approfondi a été réalisé sur la synthèse, la relation structure-activité (SAR) et l'évaluation des activités anticancéreuses de composés contenant des groupements sulfamides [Eur. J. Med. Chem. 2018, vol. 155, 13-23 ; Comput. Biol. Chem. 2018, vol. 74, 294-303 ; J. Med. Chem. 1992, vol. 35, 2496-2497 ; J. Med. Chem. 1999, vol. 42, 3789-3799 ; Bioorg. Med. Chem. 2006, vol. 14, 1078-1088]. Un grand nombre de ces dérivés ont été rapportés comme molécules présentant une activité antitumorale substantielle in vitro et in vivo [J. Med. Chem. 1999, vol. 42, 3789-3799 ; Eur. J. Cancer 2001, vol. 37, 2275-2282 ; Invest. New Drugs 2001, vol. 19, 219-227 ; Mol. Cancer Ther. 2002, vol. 1, 275-286 ; J. Med. Chem. 2002, vol. 45, 4913-4922 ; Ann. Oncol. 2001, 12, 1289-1293]. Plusieurs mécanismes de leur action antitumorale ont été élucidés tels que l'inhibition de l'anhydrase carbonique, la perturbation du cycle cellulaire dans la phase Gl, la perturbation de l'assemblage des microtubules, la suppression fonctionnelle de l'activateur transcriptionnel NF-Y et l'inhibition de l'angiogenèse (matrice métalloprotéinase, MMP) entre autres.

Les composés naturels et synthétiques à base de carbonyle a,P-insaturés, y compris les chalcones, la curcumine et leurs analogues synthétiques, sont identifiés comme des produits présentant des activités antitumorales. L'unité carbonyle a,P-insaturée de ces composés présente un avantage extraordinaire dans le développement de composés biologiquement actifs et thérapeutiquement pertinents en chimie médicinale. Récemment, il a été rapporté qu'un certain nombre de dérivés contenant un groupe carbonyle a, P-insaturé présentent des activités biologiques polyvalentes telles que : des activités antitumorales, des effets antipaludiques et des activités antivirales.

Les activités cytotoxiques in vitro des nouveaux composés préparés ont été évaluées sur la lignée cancer du sein triple négatif MDA-MB-468.

[-] Les inventeurs ont fait la conception et la préparation de nouveaux composés anticancéreux qui répondent mieux aux besoins de la pratique, notamment par la simplicité de leur préparation. Ces composés sont potentiellement utilisables en thérapie humaine.

[-] Ce but est atteint par les composés de formule (I) ou (II) qui sont décrits ci-après et qui constituent le premier objet de l’invention, ces composés étant de puissants anticancéreux. En outre, les composés sont faciles à préparer, généralement en deux à trois étapes. L’ensemble des composés de formules (I) ou (II) sont obtenus de manière très commode en utilisant des réactions chimiques très simples et bien connues dans la littérature.

[-] La présente invention a pour objectif de préparer les composés de formules (I) et (II) dans la figure 1 :

Dans lesquelles :

X est un atome de carbone ou un ou plusieurs atomes d’azote qui remplacent les atomes de carbone du cycle aromatique à cinq et six chaînons, de préférence X est un atome de carbone ou un ou deux atomes d’azote.

V et Y, identiques ou différents et indépendamment les uns aux autres, représentent un atome carbone, d’azote, d’oxygène ou de soufre, de préférence V est un atome d’azote et Y est un atome de carbone ou d’azote.

Z est un hétéroatome, de préférence Z est un atome d’azote ou d’oxygène.

Le cercle représenté par deux cercle bleus est un cycle de 5 ou de 6 chaînons saturé ou non saturé contenant un ou plusieurs hétéroatomes.

Ri et R2, identiques ou différents et indépendamment les uns aux autres, représentent un atome d’hydrogène, un atome d’halogène, un groupe d’hydroxy, un groupe d’alcoxy, un groupe d’alkyle, un groupe d’aryle, un groupe d’héteroaryle, un groupe d’amine, un groupe de carbonitrile. Lesdits groupes alkyles, hydroxy, perfluoroalkyle, alkylthio, aminoalkyle et alcoxy pouvant comprendre de 1 à 10 atomes de carbone

R’3, R3 et R4, identiques ou différents et indépendamment les uns aux autres, représentent un atome d’hydrogène, d’halogène, d’hydroxy, d’alkoxy ou d’amine, de préférence R’3, R3 et R4 sont un atome d’hydrogène, de chlore, de fluor, de brome, de méthoxy ou un hydoxy

R’4 et R’s identiques ou différents et indépendamment les uns aux autres, représentent un atome d’hydrogène, un groupe d’alkyle, un groupe d’aryle ou un groupe d’héteroaryle. Rs, représentent un groupement a,P-insaturée, carbonyle a,P-insaturée, d’hydroxy, d’alkoxy, d’alkyle, d’aryle, d’héteroaryle ou d’amine.

RÔ et R7, identiques ou différents et indépendamment les uns aux autres, représentent un atome d’hydrogène, d’halogène, d’hydroxy, d’alkoxy ou d’amine.

Espaceur, représentent une chaîne alkyle pouvant comprendre de 0 à 10 atomes de carbone, de préférence de 1 à 3 atomes de carbone ou un cycle de 5 ou 6 chaînons saturé ou non saturé contenant un ou plusieurs hétéroatomes.

[-] Selon la présente invention :

Alkyle : désigne un groupe hydrocarboné saturé ou non saturé, linéaire ou ramifié, ayant 1 à 10 carbones, de préférence de 1 à 2 atomes de carbone. Le terme « ramifié » signifie qu’au moins un groupe alkyle inférieur tel qu’un méthyle ou un éthyle est porté par une chaîne alkyle linéaire (alkyle supérieur). Le terme alkyle « inférieur » désigne un alkyle ayant 1 ou 2 atomes de carbone ; le terme alkyle « supérieur » désigne un groupe alkyle linéaire ou ramifié ayant de 3 à 10 atomes de carbone. A titre d’exemple de groupe alkyle, on peut citer les groupes méthyle, éthyle, n-propyle, isobutyle, tert-butyle, n- butyle et n-pentyle.

Atome d’halogène : désigne un atome de brome, de chlore, d’iode et de fluor.

Alcoxy : désigne un groupe O-alkyle dans lequel le groupe alkyle peut prendre la même signification que celle indiquée ci-dessus. A titre d’exemple de groupe alcoxy, on peut citer les groupes méthoxy, éthoxy, n-propoxy, iso-propoxy, n-butoxy et pentoxy ;

Alkylthio : désigne un groupe alkyl-S dans lequel le groupe alkyle peut prendre la même signification que celle indiquée ci-dessus. A titre d’exemple de groupe alkylthio, on peut citer les groupes méthylthio, éthylthio, propylthio, isopropylthio, butylthio, pentylamino ;

Aminoalkyle : désigne un groupe alkyle-N dans lequel le groupe alkyle peut prendre la même signification que celle indiquée ci-dessus. A titre d’exemples de groupe aminoalkyl, on peut citer les groupes aminométhyl, aminoéthyl, iso-propylamino, butylamino et pentylamino ;

Aryle : désigne un groupe aromatique hydrocarboné insaturé, cyclique, ayant 4 à 6 carbones, de préférence de 5 à 6 atomes de carbone.

Hétéroaryle : désigne un aryle tel que défini ci-dessus dans lequel un ou plusieurs atomes de carbone ont été remplacés par des atomes d’azote, d’oxygène ou de soufre. A titre d’exemple de groupe hétéroaryle, on peut citer les groupes pyridine, pyrimidine, thiophène, furane, imidazole, pyrole et triazole.

[-] Conformément à une forme de réalisation préférée de l’invention, les composés de formules formules (I) ou (II) sont choisis parmi ceux dans lesquels Ri, R2 et R’ 3 représentent un hydrogène, un hétéroatome, un alkyle, un hydroxy, un alkoxy, un carbonitrile et un alkylamine, de préférence un hydrogène, un chlore, un méthyle, un méthoxy, un cyano et un hydroxy

[-] Conformément à une forme de réalisation préférée de l’invention, les composés de formules formules (I) ou (II) sont choisis parmi ceux dans lesquels R3 et R4 représentent un halogène et un alkoxy, de préférence un chlore, un méthoxy et un hydroxy.

[-] Conformément à une forme de réalisation préférée de l’invention, les composés de formules formules (I) ou (II) sont choisis parmi ceux dans lesquels R’4 et R’s représentent un hydrogène, un groupe d’alkyle, un groupe d’aryle ou un groupe d’héteroaryle, de préférence un hydrogène, un méthyl, un éthyl et un aryl.

[-] Conformément à une forme de réalisation préférée de l’invention, les composés de formules formules (I) ou (II) sont choisis parmi ceux dans lequel R5, représentent un groupement a,P- insaturée, carbonyle a,P-insaturée, d’hydroxy, d’alkoxy, d’alkyle, d’aryle, d’héteroaryle, d’amine, de préférence un carbonyle a,P-insaturée

[-] Conformément à une forme de réalisation préférée de l’invention, les composés de formules formules (I) ou (II) sont choisis parmi ceux dans lesquels RÔ et R7 représentent un atome d’hydrogène, d’halogène, d’hydroxy, d’alkoxy ou d’amine, de préférence des atomes d’hydrogène

[-] Conformément à une forme de réalisation préférée de l’invention, les composés de formules formules (I) ou (II) sont choisis parmi ceux dans lesquels l’espaceur représentent un cycle de 5 ou 6 chaînons saturé ou insaturé contenant un ou plusieurs hétéroatomes, de préférence piperazine, 4-aminopiperidine, pyrrolidin-3-amine ou 4-(2-aminoethyl)aniline.

[-] A titre de composés de formule formules (I) ou (II) on peut citer :

(Composé PI, figure 2)

(Composé P2, figure 3)

(Composé P3, figure 4)

(Composé P4, figure 5) (Composé P5, figure 6)

(Composé P6, figure 7)

(Composé P7, figure 8)

Protocoles de synthèse et caractérisation de différents composés selon l’invention

Les solvants ont été séchés selon des méthodes standards et distillés sous azote avant utilisation. Tous les réactifs sont utilisés sans purification préalable à partir des sources commerciales classiques. Les spectres de résonance magnétique nucléaire (RMN) du carbone ¹³ C et du proton ’ H ont été enregistrés sur un appareil JEOL AC600 (600 MHz). Les déplacements chimiques (ô) sont enregistrés en ppm par-rapport au pic résiduel de référence TMS. JNM-ECZ500R/S 1 FT NMR SYSTEM (JEOL)

Protocole générale

Les espaceurs sulfonamides aminées utilisées sont préparées généralement en deux étapes selon les références de la littérature [Swama et al., J. Med. Chem. 2002, 45, 3, 740-743 ; Down et al., J. Med. Chem. 2015, 58, 18, 7381-7399 ; Usninn et al., Chem. Commun., 2012,48, 2680- 2682],

Les dérivés aminés de l’indazole sont traités avec différents espaceurs sulfonamides via une réaction de substitution nucléophile selon la procédure décrite dans le schéma 1. Cette séquence a eu lieu en présence de la 4-diméthylaminopyridine (DMAP) dans la pyridine à température ambiante. Les produits désirés sont obtenus avec des rendements satisfaisants après purification sur colonne de gel de silice.

L’acide éthacrynique est traité avec différents espaceurs sulfonamides aminés via une réaction d’amidation menée selon la procédure décrite dans le schéma 1. Cette séquence a eu lieu en présence des agents d’activations tels que le A/.A'-dicyclohcxylcarbodiimidc (DCC), d’hydroxybenzotriazole (HOBt) et de la 4-diméthylaminopyridine (DMAP) dans le DCM à température ambiante. Les produits désirés sont obtenus avec des rendements satisfaisants après purification sur colonne de gel de silice.

La synthèse des composés P3, P4, P5 et P6, donnés à titre d’exemples, s’effectue selon le schéma 1 : Les protocoles expérimentaux

Préparation du composé PI (figure 2)

Etape 1

A une solution de tert-butyl piperidin-4-ylcarbamate (1 équiv.) dans le dichlorométhane (3 ml), la triéthylamine (3 équiv.) est ajoutée sous agitation. Une solution du chlorure de 4- cyanobenzenesulfonyle (1 équiv.) dans le dichlorométhane (4 ml) est ajoutée goutte à goutte. Le mélange est agité à température ambiante pendant 4 heures. Le milieu réactionnel est lavé avec 20 ml d'une solution aqueuse saturée de NaHCOs- La phase organique est extraite trois fois avec le dichlorométhane, séchée sur du sulfate de magnésium et concentrée sous pression réduite. L’intermédiaire obtenu est dissout dans le dioxane puis on ajoute du HCl dans le dioxane (2 ml) à température ambiante pendant une heure pour préparer l’amine déprotégée.

Etape 2

A une solution de DCC (1,1 équiv.), de HOBt (1,1 équiv.), de DMAP (0,005 équiv.) et d'acide éthacrynique (1 équiv.) dans le DCM (5 ml), l'amine 4-((4-aminopiperidin-l- yl)sulfonyl)benzonitrile (1 équiv.) est ajoutée à 0 °C. Le mélange réactionnel est agité pendant 12 heures à température ambiante. Le mélange est extrait avec du dichlorométhane et les phases organiques combinées sont lavées avec du chlorure de sodium aqueux saturé, séchées sur du sulfate de magnésium puis concentrées sous pression. Le résidu brut est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice en éluant avec un mélange (Hex/EtOAc (6:4 (v/v))) pour obtenir le produit attendu PI sous forme d’un solide blanc avec un rendement de 32%. RMN ’ H ((CD ₃ ) ₂ CO, 600 MHz), ’ H RMN (600 MHz, Acétonc-7 ₆ ) ô 8.08 - 8.03 (m, 2H), 7.99 - 7.95 (m, 2H), 7.28 (d, 7 = 8.6 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.02 (t, J = 1.4 Hz, 1H), 5.57 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 4.64 (s, 2H), 3.82 (dddd, J = 10.3, 7.8, 6.2, 4.0 Hz, 1H), 3.61 (dd, J = 12.2, 4.7 Hz, 2H), 2.68 (td, J = 12.1, 11.6, 2.9 Hz, 2H), 2.40 (qdd, 7 = 7.4, 1.5, 0.8 Hz, 2H), 1.97 - 1.91 (m, 2H), 1.62 (tdd, 7 = 10.7, 7.1, 5.3 Hz, 3H), 1.09 (t, 7 = 7.5 Hz, 3H).

Préparation du composé P2 (figure 3)

Etape 1

A une solution de tert-butyl piperidin-4-ylcarbamate (1 équiv.) dans le dichlorométhane (3ml), la triéthylamine (3 équiv.) est ajoutée sous agitation. Une solution du chlorure 2,5- dimethoxybenzenesulfonyl (1 équiv.) dans le dichlorométhane (4 ml) est ajoutée goutte à goutte. Le mélange est agité à température ambiante pendant 4 heures. Le milieu réactionnel est lavé avec 20 ml d'une solution aqueuse saturée de NaHCCh. La phase organique est extraite trois fois avec le dichlorométhane, séchée sur du sulfate de magnésium et concentrée sous pression réduite. Ensuite, l’intermédiaire obtenu se dissout en dioxane puis on ajoute HCl dans le dioxane (2 ml) à température ambiante pendant une heure pour préparer l’amine déprotégée. Etape 2

A une solution de DCC (1,1 équiv.), de HOBt (1,1 équiv.), de DMAP (0,005 équiv.) et d'acide éthacrynique (1 équiv.) dans le DCM (5 ml), l'amine l-((2,5- diméthoxyphényl)sulfonyl)piperidin-4-amine (1 équiv.) est ajoutée à 0 °C. Le mélange réactionnel est agité pendant 12 heures à température ambiante. Le mélange est extrait avec du dichlorométhane et les phases organiques combinées sont lavées avec du chlorure de sodium aqueux saturé, séchées sur du sulfate de magnésium puis concentrées sous pression. Le résidu brut est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice en éluant avec un mélange (Hex/EtOAc (8:2 (v/v)) pour obtenir le produit attendu P2 sous forme d’un solide blanc avec un rendement de 40%. RMN ’ H (600 MHz, Acétonc-7 ₆ ) ô 7.32 (dd, J = 2.5, 1.1 Hz, 1H), 7.29 (d, 7 = 8.5 Hz, 1H), 7.27 (d, 7 = 8.0 Hz, 1H), 7.16 - 7.11 (m, 3H), 6.02 (t, 7 = 1.5 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 4.66 (s, 2H), 3.86 (s, 4H), 3.78 (s, 3H), 3.72 - 3.65 (m, 2H), 2.87 - 2.77 (m, 2H), 2.44 - 2.37 (m, 2H), 1.89 (dd, 7 = 13.0, 3.8 Hz, 2H), 1.57 - 1.49 (m, 2H), 1.09 (t, 7 = 7.4 Hz, 3H).

Préparation du composé P3 (figure 4 et schéma 1) Préparation du composé P4 (figure 5 et schéma 1) Préparation du composé P5 (figure 6 et schéma 1)

Préparation du composé P6 (figure 7)

A une solution agitée du l/Z-indazol-4-amine (1 équiv.) dans de la pyridine (5 ml) a été ajouté du chlorure de 5-chloro-2-méthoxybenzenesulfonyle (2,76 équiv.) et du 4-(diméthylamino) pyridine (7,72 équiv.). Le mélange a été agité en continu à température ambiante pendant 24 à 48 h et la réaction a été surveillée par CCM. La solution a été diluée avec de l'eau glacée (30 ml). Les cristaux précipités sont filtrés, lavés à l'eau et séchés. Le produit brut était purifié par colonne chromatographique sur gel de silice en éluant avec un mélange (Hex/EtOAc (6:4 (v/v)) pour obtenir le produit attendu P6 sous forme d’un solide blanc avec un rendement de 38%. RMN ’ H (600 MHz, Acétone-7 ₆ ) ô 12.20 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.32 (d, 7 = 1.0 Hz, 1H), 7.68 (d, 7 = 2.6 Hz, 1H), 7.48 (dd, 7 = 8.9, 2.7 Hz, 1H), 7.26 (dt, 7 = 8.3, 0.9 Hz, 1H), 7.19 (dd, 7 = 8.3, 7.4 Hz, 1H), 7.14 (d, 7 = 8.9 Hz, 1H), 7.05 (dd, 7 = 7.5, 0.8 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H).

Préparation du composé P7 (figure 8)

A une solution agitée du l/Z-indazol-7- amine (1 équiv.) dans de la pyridine (5 ml) a été ajouté du chlorure de 5-chloro-2-méthoxybenzenesulfonyle (2,76 équiv.) et du 4-(diméthylamino) pyridine (7,72 équiv.). Le mélange a été agité en continu à température ambiante pendant 24 à 48 h et la réaction a été surveillée par CCM. La solution a été diluée avec de l'eau glacée (30 ml). Les cristaux précipités sont filtrés, lavés à l'eau et séchés. Le produit brut était purifié par colonne chromatographique sur gel de silice en éluant avec un mélange (Hex/EtOAc (6:4 (v/v)) pour obtenir le produit attendu P7 sous forme d’un solide blanc avec un rendement de 24%. RMN ’ H (600 MHz, Acétone-^,) ô 12.06 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.61 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.53 (ddd, J = 8.1, 3.7, 1.8 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 7.4, 1.0 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 8.1, 7.4 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H).

Activités biologiques

La culture cellulaire

La lignée cellulaire humaine MDA-MB-468 du cancer du sein triple négatif a été cultivée dans le milieu de culture RPMI 1640, contenant 5 % de sérum bovin fœtal inactivé par la chaleur, 1 % de pénicilline G-streptomycine et 0,2 % de L-glutamine, dans un incubateur à 37°C sous atmosphère humidifiée contenant 5% de CO2.

Test de cytotoxicité

La viabilité cellulaire a été réalisée en utilisant le test MTT [Molecules 2019, vol. 24, 502]. Brièvement, les cellules ont été lavées deux fois avec du PBS et ensemencées sur des plaques de microtitrage à 96 puits à une densité de 2 x 10 ⁴ cellule s/puits et laissées adhérer pendant une nuit avant la réalisation des tests de cytotoxicité. Ensuite, les cellules ont été traitées avec des concentrations croissantes (0,39-50pM) des composés (P3, P4, P5 et P6) dans 100 pL de milieu de culture pendant 48 h. Le DMSO et le Paclitaxel ont été utilisés comme témoins négatifs et positifs, respectivement. Cependant, la concentration finale de DMSO n'a jamais dépassé 1 %. Après 48 h d'incubation à 37°C sous atmosphère humidifiée à 5% CO2, une solution de 20 pL de MTT (5 mg/ml en PBS) a été ajoutée dans chaque puit et incubée par la suite dans les mêmes conditions. Après 4 h, 150 pL du milieu ont été soigneusement retirés de chaque puit et remplacés par 150 pl d'acide-isopropanol (HCl 0,04 N dans l'isopropanol). La viabilité cellulaire a été mesurée par spectrophotomètre (appareil MultisKan EX (Labsystem)) à une longueur d’onde de 540 nm et exprimée en pourcentage de cellules témoins, selon la formule suivante (Tableau 1 et figure 9) :

% de viabilité cellulaire = 100 x (Ai /AO) Avec AO et Ai sont respectivement la densité optique des cellules témoins et des cellules traitées. L'activité cytotoxique des composés a été comparée en calculant les valeurs des IC50 (concentration conduisant à 50 % d'inhibition cellulaire) (Tableau 2)

Résultats

Les analyses statistiques.

Les données sont exprimées en moyenne ± SD de trois expériences indépendantes. Les différences entre les groupes ont été analysées par une analyse de variance à un facteur (ANOVA). Dans tous les cas, les différences ont été considérées comme statistiquement significatives à p < 0,05. Toutes les analyses ont été effectuées à l'aide du logiciel GraphPad Prism 8 (Tableau 3).

Les études in vitro montre que les composés P3, P4, P5 et P6 inhibent la prolifération des cellules cancéreuses de la lignée cellulaire humaine MDA-MB-468 du cancer du sein triple négatif avec des IC50 de l’ordre du micromolaire.

Les études in vivo montrent également une réduction importante de la taille des tumeurs traitées par les composés P3, P4, P5 et P6. Dans cette étude model de souris de type DBA2/P815 (TLd) a été utilisé.