本発明において用いられる微生物は、乳� ��菌であるラクトバチルス ケフィリ(Lactobacil lus kefiri)、酵母菌であるカザツタニア ツリ� ��ンシス(Kazachstania turicensis)、酵母菌である� �ザツタニア ユニスポラ(Kazachstania unispora)、 及び酵母菌であるクリュイベロミセス マル� ��アヌス(Kluyveromyces marxianus)であり、好まし� �は、ラクトバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus  kefiri P-IF)(受託番号:FERM BP-10896、寄託機関:� ��立行政法人産業技術総合研究所 特許生物� �託センター 茨城県つくば市東1丁目1番地1 � ��央第6) (以下、これを「P-IF菌」ともいう。) と、ラクトバチルス ケフィリP-B1(Lactobacillus� �kefiri P-B1)(受託番号FERM BP-11115、寄託機関:独 立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄� ��センター 茨城県つくば市東1丁目1番地1 中 央第6)(以下、これを「P-B1菌」ともいう。)と� ��カザツタニア ツリセンシスP-Y3(Kazachstania t uricensis P-Y3)(受託番号FERM BP-11116、寄託機関:� ��立行政法人産業技術総合研究所 特許生物� �託センター 茨城県つくば市東1丁目1番地1 � ��央第6)(以下、これを「P-Y3菌」ともいう。)� �、カザツタニア ユニスポラP-Y4(Kazachstania un ispora P-Y4)(受託番号FERM BP-11117、寄託機関:独� ��行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄� �センター 茨城県つくば市東1丁目1番地1 中� ��第6)(以下、これを「P- Y4菌」ともいう。)と 、及びクリュイベロミセス マルシアヌスP-Y5 (Kluyveromyces marxianus P-Y5)(受託番号FERM BP-11118� ��寄託機関:独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センター 茨城県つくば市東1� ��目1番地1 中央第6)(以下、これを「P-Y5菌」� �もいう。)である。

 菌株「P-IF菌」、「P-B1菌」、「P-Y3菌」、� ��P-Y4菌」、及び「P-Y5菌」は、寒天培地上で� �ングルコロニーを釣菌することで、それぞ� �を単離し、菌種を同定するために遺伝子配� �解析を行った。具体的には、菌株「P-IF菌」� ��び「P-B1菌」については、ゲノムDNA上のリボ ゾームRNA遺伝子16SrDNA領域の塩基配列を決定� �、相同解析を行った。また、菌株「P-Y3菌」� ��「P-Y4菌」、及び「P-Y5菌」については、ゲ� �ムDNA上のリボゾームRNA遺伝子26SrDNA-D1/D2領域� ��塩基配列を決定し、相同解析を行った。そ� ��結果、「P-IF菌」はラクトバチルス ケフィ� ��(Lactobacillus kefiri)の配列に99.6%の相同性を示 したことから、「P-IF菌」はラクトバチルス  ケフィリ(Lactobacillus kefiri)に属すると推定さ� ��た。同様に、「P-B1菌」はラクトバチルス � ��フィリ(Lactobacillus kefiri)の配列に99.6%の相同 性を示したことから、「P-B1菌」はラクトバ� �ルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)に属すると� ��定された。また、「P-Y3菌」はカザツタニア  ツリセンシス(Kazachstania turicensis)の配列に10 0%の相同性を示したことから、「P-Y3菌」はカ ザツタニア ツリセンシス(Kazachstania turicensis )に属すると推定された。また、「P-Y4菌」は� ��ザツタニア ユニスポラ(Kazachstania unispora)� �配列に100%の相同性を示したことから、「P-  Y4菌」はカザツタニア ユニスポラ(Kazachstania� �unispora)に属すると推定された。そして、「P- Y5菌」はクリュイベロミセス マルシアヌス(K luyveromyces marxianus)の配列に100%の相同性を示� �たことから、「P-Y5菌」はクリュイベロミセ� �� マルシアヌス(Kluyveromyces marxianus)に属する と推定された。

 以下には、「P-IF菌」の菌学的性質につい て更に詳細に説明する。

 表1には、「P-IF菌」の菌学的性質を示す� �

 また、表2には、「P-IF菌」の資化特性を� �す。

 上述したように「P-IF菌」の16S rDNA の塩� ��配列を決定し、微生物の16S rDNA 塩基配列� �データベースを利用して相同解析したとこ� �、ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefir i)の配列に99.6%の相同性を示したことから、� �P-IF菌」はラクトバチルス ケフィリ(Lactobacil lus kefiri)に属すると推定された。また、上記 菌学的性質や資化特性もラクトバチルス ケ� ��ィリ(Lactobacillus kefiri)の特性と一致してい� �。

 ただし、ガラクトース資化性を有する点� ��おいては、従来のラクトバチルス ケフィ� �(Lactobacillus kefiri)とは異なっていた。また、 試験管で液体培養すると、その試験管に少し の振動を与えるただけで、シャンパンのよう に炭酸ガスが発生した。これも、従来のラク トバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)には� �られない特徴であった。更に、図1に示すよ� ��に、電子顕微鏡下に観察すると、通常では� ��に平面的に分裂して伸びていくのに対して� ��「P-IF菌」では、他の菌と接着して3次元的� �組み合っているという特徴を有していた。� �のことは、菌体表面の糖鎖などの構造が異� �ることを示唆していた。

 また、「P-IF菌」はMRS液体培地における発 酵過程においてpH4.3の低いpHに達し、生育を� �けることが明らかとなっており、このこと� �ら胃酸に耐性をもち、腸管まで生きたまま� �する可能性が示唆された。

 以上から、「P-IF菌」は、ラクトバチルス  ケフィリ(Lactobacillus kefiri)に属する微生物� �あるが、形態的に独特の特徴を有する新菌� �であることが明らかであった。

 なお、「P-B1菌」、「P-Y3菌」、「P-Y4菌」� ��及び「P-Y5菌」の菌学的性質については、そ れぞれ同種の微生物と同様の菌学的性質を有 していた。

 単離された「P-IF菌」、「P-B1菌」、「P-Y3� ��」、「P-Y4菌」、及び「P-Y5菌」はいずれも� �公知の方法に準じて培養を行うことができ� �例えば、乳酸菌である「P-IF菌」及び「P-B1菌 」の場合には、市販のMRS培地「Lactobacilli MRS� �Broth」(商品名、Difco社製品)用いて、嫌気静� �培養することができる。また、酵母菌であ� �「P-Y3菌」、「P-Y4菌」、及び「P-Y5菌」の場� �には、例えば、市販のYM培地「グルコース1%� ��ペプトン0.5%、麦芽エキス0.3%、酵母エキス0. 3%、寒天2%」(Difco社製品)用いて、嫌気静置培� ��することができる。

 本発明の乳発酵物は、乳原料を、(1)ラク� ��バチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)と、(2) カザツタニア ツリセンシス(Kazachstania turicen sis)、カザツタニア ユニスポラ(Kazachstania uni spora)、及びクリュイベロミセス マルシアヌ� ��(Kluyveromyces marxianus)からなる群から選ばれ� �少なくとも1種とを含む複合微生物群で発酵� ��て得られる。前記ラクトバチルス ケフィ� �(Lactobacillus kefiri)としては、好ましくはラク トバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus kefiri P-I F)(受託番号FERM BP-10896)を用いる。

 また、更に好ましくは、乳原料を、ラク� ��バチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus kefiri P-IF )(受託番号FERM BP-10896)、ラクトバチルス ケ� �ィリP-B1(Lactobacillus kefiri P-B1)(受託番号FERM B P-11115)、カザツタニア ツリセンシスP-Y3(Kazach stania turicensis P-Y3)(受託番号FERM BP-11116)、カ� ��ツタニア ユニスポラP-Y4(Kazachstania unispora  P-Y4)(受託番号FERM BP-11117)、及びクリュイベロ ミセス マルシアヌスP-Y5(Kluyveromyces marxianus  P-Y5)(受託番号FERM BP-11118) を少なくとも含む� ��合微生物群で発酵して得られる。

 乳原料としては、例えば、牛乳、乳清、� ��酵乳、乳酸菌飲料、脱脂乳、脱脂粉乳、調� ��粉乳、全脂粉乳、濃縮乳、脱脂濃縮乳、練� ��、脱脂練乳、加糖練乳、加糖脱脂練乳等が� ��げられる。

 本発明において、乳原料の発酵は、例え� ��、上記複合微生物群からなるスターターが� ��種された乳原料を、公知の発酵・培養条件� ��曝すことにより行うことができるが、好ま� ��くは、まず24~26℃、20~28時間の発酵で、次い で20~22℃、20~28時間、それ以降10~12℃に温度を 低下させ42~54時間の熟成を行う方法である。� ��るいは、別の培養方法としては、初発の培� ��を24~26℃で開始した後、20~28時間の中で直線 的に20~22℃までその培養温度を低下させる。� ��に20~22℃、20~28時間追発酵を行った後、10~12� ��で42~54時間保持して熟成させる方法がある� �これによれば、上記複合微生物群に含まれ� �各々の微生物が共生的に培養されて有効成� �を産生し易くなる。

 本発明においては、上記のようにして発� ��が進んだ乳発酵物をそのまま殺菌処理しな� ��で用いることもでき、殺菌処理して用いる� ��ともできる。もしくは、上記のようにして� ��酵が進んだ乳発酵物から遠心分離やろ過等� ��よって菌体部分を分離除去した溶液部分を� ��本発明の乳発酵物とすることもできる。あ� ��いは、その他の乳発酵物としての態様が制� ��されるものではない。

 本発明の乳発酵物を経口的に摂取する場� ��、その1日当りの摂取量に特に制限はないが 、固形分換算で0.01(mg/kg体重)~10(g/kg体重)であ� ��ことが好ましく、0.05(mg/kg体重)~1(g/kg体重)で あることがより好ましい。

 本発明の乳発酵物は、医薬品、健康食品� ��加工食品等の各種分野で用いることができ� ��。そして、製剤的形態に特に制限はなく、� ��宜公知の方法で、液剤、シロップ剤、ゼリ� ��剤、カプセル剤、散剤、錠剤、顆粒剤、ト� ��ーチ剤等に製剤して使用することができる� ��また、本発明の乳発酵物は、各種飲食品に� ��合して用いることもできる。

 本発明の乳発酵物は、後述の実施例で示� ��、その抗菌作用により、抗菌剤の有効成分� ��して有用である。また、特に、腸内細菌の� ��気性菌叢であり悪玉菌と言われているクロ� ��トリジウム属微生物等に対して強い抗菌効� ��を示すことから、腸内環境改善剤の有効成� ��として有用である。