La formulation de ces microémulsions nutrientes a constitué par le passé une avancée importante pour la mise sur le marché d'additifs utilisables comme accélérateurs de biodégradation. Par exemple, les brevets français 2.490.672 et 2.512.057 décrivent de tels accélérateurs constitués par une phase interne formée d'une solution aqueuse de composés azotés et phosphores, de préférence des tensio-actifs phosphores, cette phase étant dispersée dans une phase externe hydrophobe constituée d'une source de carbone assimilable. Dans ces microémulsions, les composés azotés utilisés sont par exemple des aminoacides, des protéines ou de l'urée et les composés phosphores des tensioactifs de type ester phosphorique d'alkyle ou d'alkényle. La phase externe hydrophobe est constituée par une source de carbone assimilable par les microorganismes comme les huiles végétales ou animales et les acides gras choisis afin d'être compatibles avec les produits à dégrader.

L'efficacité de ces émulsions comme accélérateur de biodégradation a été clairement démontrée dans de nombreuses applications industrielles, notamment le traitement des effets de pollutions marines dues à des déversements accidentels d'hydrocarbures et les procédés de traitement visant la réhabilitation des sols contaminés par des polluants hydrophobes tels que décrits par exemple dans le brevet WO 95/06715.

En dépit des qualités de ces microémulsions nutrientes, leur utilisation reste limitée compte tenu de leur mise en oeuvre difficile, en particulier à basse température, à moins de 10°C.

Les microémulsions décrites dans t'état de la technique sont généralement appliquées par pulvérisation des zones contaminées ou mise en mélange avec des sols pollués. Elles doivent donc présenter une certaine fluidité et une certaine stabilité favorisant de telles applications. Or, ces microémulsions présentent l'inconvénient de se séparer en deux phases non miscibles au voisinage

de 0°C En outre, dès qu'on atteint une température ambiante inférieure à 20°C, ces microémulsions deviennent très visqueuses (plus de 1.000 mPa. s) ce qui rend leur utilisation sur le terrain très délicate voir impossible dans certaines applications comme la pulvérisation.

On a bien entendu tenté de remédier à cet inconvénient majeur par I'adjonction de composés organiques comme les alcools et les éthers de glycol pour diminuer la viscosité de ces microémulsions à ces températures, comme il est également mentionné dans la demande WO 98/07508. Ainsi, en rajoutant de 10 à 15 % de butyléther d'éthylèneglycol, on observe une diminution de la viscosité jusqu'à environ 200 mPa. s à 20° C ce qui permet la pulvérisation du produit avec du matériel conventionnel ci cette température ou un épandage plus facile. Cependant, pour appliquer ces microémulsions à plus basse température, en particulier à moins de 10°C, il convient actuellement soit de la stocker à 20°C pour la pulvériser à cette température, soit de la réchauffer sur site pour que la microémulsion se reforme et/ou redevienne fluide. C'est un inconvénient majeur pour l'utilisateur qui comme le produit s'est transformé, n'est plus sûr de la qualité de son produit. On comprend donc pourquoi l'utilisation de cet accélérateur de biodégradation par ailleurs remarquable par son efficacité n'a pu être largement étendue à toutes les applications de biodégradation marines ou terrestres, en particulier dans les pays froids.

La présente invention vise à remédier aux inconvénients rencontrés lors de la mise en oeuvre des microémulsions décrites précédemment. En particulier, la présente invention vise des microémulsions non toxiques, qui sont stables jusqu'à des températures comprises entre-10°C et +50°C et dont la fluidité à + 5°C est suffisante pour qu'il n'y ait aucun problème d'utilisation.

La présente invention a donc pour objet un accélérateur de biodégradation sous forme d'une microémulsion contenant des composés azotés comme par exemple des aminoacides, des protéines ou de l'urée et ses dérivés, des composés phosphores tensioactifs de type ester phosphorique d'alkyle ou d'alkényle, et des composés choisis dans le groupe des huiles végétales ou animales, ou des acides gras, et d'un fluidifiant, la dite microémulsion étant caractérisée en ce qu'elle comprend de 10 à 35 % en poids d'un tensioactif ester phosphorique mono et/ou dialkylé, ou mono et/ou diatkényté comprenant un nombre d'atomes de carbone par chaîne alkyle ou alkényle, inférieur à 12, de préférence

variant de 3 à 10 Je dit ester comprenant en outre de 1 à 10 radicaux alkoxylés, de préférence éthoxylés et/ou propoxylés, avec de 5 à 20 % en poids d'au moins un co-tensioactif, et en ce qu'elle présente une viscosité à 5°C inférieure ou égale à 200 mPa. s.

Dans la présente invention, c'est l'effet combiné de ces tensioactifs dérivés d'esters phosphoriques particuliers avec un co-tensioactif ou un mélange de co-tensioactifs qui permet d'assurer la stabilité de la microémulsion jusqu'à une température très basse, au moins-10°C et d'utiliser ces produits sans difficulté dans tout environnement froid.

Les cotensioactifs selon l'invention sont choisis parmi les composés présentant une toxicité orale sur le rat telle que la dose léthale pour 50% des microorganismes soit supérieure à 2g/kg.

Les co-tensioactifs seront de préférence choisis comme présentant un point de fusion inférieur à 0°C, et de préférence inférieur à-20°C et/ou une solubilité dans l'eau supérieure à 2g pour 100g d'eau et de préférence supérieure à 10g pour 100g d'eau, ces deux paramètres pouvant être recherchés indépendamment ou simultanément selon les conditions d'utilisation de la microémulsion. On comprend aisément qu'un homme du métier peut être amené à moduler la composition de la microémulsion selon qu'il s'agisse de pulvériser sur une zone polluée en mer ou de traiter un sol à réhabiliter, et selon la température de mise en oeuvre de ces procédés.

Les co-tensioactifs présentant les caractéristiques requises pour faire partie de la microémulsion selon l'invention, seuls ou en mélange, sont choisis parmi les alcools mono et polyhydroxylés comprenant moins de 10 atomes de carbone et leur dérivés éthers, les composés mono et polycarboxyliques, acides ou esters éventuellement mono ou polyhydroxylés, comprenant des chaînes carbonées de Ci à C7, les cétones linéaires comprenant au plus 5 atomes de carbone, et les lactones.

Parmi les monoalcools utilisés comme co-tensioactifs de l'invention, on préfère les alkanols de C2 à C8, et de préférence de C2 en C4.

Parmi les polyalcools, on préfère les diols, notamment les éthylèneglycols substitués ou leurs oligomères, et leurs dérivés éthers comprenant de 4 à 10 atomes de carbone. En particulier, les dérivés éthers préférés sont le butyléther du diéthylèneglycol, le monoethyléther de t'éthyténegtycot, et le monométhyléther de l'éthylèneglycol.

Parmi les composés monocarboxyliques, éventuellement hydroxylés, sont préférés les acides carboxyliques comprenant de 1 à 4 atomes de carbone et leurs esters dérivant de monoalcools de Ci à C5. Dans un mode préféré de l'invention, ces composés monocarboxyliques sont choisis dans le groupe constitué par les acides formique, acétique, butyrique, lactique et leurs esters alkylés comprenant jusqu'à 6 atomes de carbone, le groupement alkyl, le formiate de n-butyle, et le lactate d'éthyle étant préférés.

Parmi les composés dicarboxyliques, éventuellement hydroxylés, sont préférés les diacides carboxyliques comprenant de 3 à 6 atomes de carbone et leurs esters dérivant de monoalcools de Ci ci C5. Dans un mode préféré de l'invention, ces composés dicarboxyliques sont choisis dans le groupe constitué par les acides malonique et succinique, et leurs esters, de préférence les dialkylmalonates, dont le diéthylmalonate, et les dialkylsuccinates, dont le diméthylsuccinate.

Parmi les cétones de l'invention, on préfère les dialkyles cétones comprenant au plus 6 atomes de carbone et de préférence la méthyléthyl cétone.

Parmi les lactones, la y-butyrolactone est préférée.

Selon la présente invention, les combinaisons préférées de tensioactifs et de co-tensioactifs sont obtenues par combinaison d'un ester phosphorique d'alkyle, le radical d'alkyle comprenant au plus 6 atomes de carbone, et présentant au plus trois groupements éthoxylés avec des combinaisons d'au moins deux co-tensioactifs Dans un premier mode de réalisation, ces combinaisons sont obtenues en mélangeant un acide carboxylique avec un composé du groupe constitué par les autres acides carboxyliques éventuellement hydroxylés, leurs esters, les mono et polyalcools et leurs dérivés éthers, les cétones et les lactones. Les combinaisons préférées sont les combinaisons acide acétique-acide butanoique, acide acétique- lactate d'éthyle, acide acétique-éthanol, acide acétique-butyléther de l'éthylèneglycol, acide acétique méthyléthylcétone et acide acétique- y-butyrolactone, Dans un second mode de réalisation, ces combinaisons sont obtenues en mélangeant au moins un éther de t'éthytènegtycot ou de ses oligomères, de préférence le butyléther du diéthylèneglycol, avec un alcanol, une cétone comme la méthyléthylcétone ou un ester d'acide monocarboxylique comme le formiate de butyle.

Dans un troisième mode de réalisation, ces combinaisons sont obtenues en mélangeant au moins un ester de diacide carboxylique tel que les alkylsuccinates ou alkylmalonates avec un alcanol ou une cétone. Les combinaisons préférées sont les combinaisons diméthylsuccinate-éthanol et diméthylsuccinate- méthyléthylcétone.

Bien entendu les autres composés de la microémulsion sont choisis pour les composés azotés parmi les aminoacides, t'urée et ses dérivés et pour la phase organique parmi les huiles animales ou végétales et les acides gras, I'acide oléique étant préférée.

Dans la suite de la présente description, des exemples sont donnés pour illustrer l'invention sans en limiter sa portée.

EXEMPLE I Le présent exemple vise à montrer que selon les combinaisons tensio- actifs/co-tensioactifs disponibles sur le marché seules les combinaisons synergiques selon l'invention permettent l'obtention de microémulsions stables dans l'intervalle variant de-10°C à +50°C, et fluides à 5°C.

On opère avec trois formules A, B et C dont la composition est donnée dans le tableau I ci-après en pour-cent poids par rapport à l'émulsion.

TABLEAU I Composants Formule A Formule B Formule C Tensioactif 23. 7 23. 4 22. 4 Co-tensioactif 10. 8 12 16 eau 23. 6 23. 3 22. 3 Urée 15. 7 15. 4 14. 4 Acide oléique 26. 2 25. 9 24.9 Dans un deuxième tableau, le tableau 11 ci-après, on va étudier l'influence du couple tensioactif/co-tensioactifs en faisant varier essentiellement la nature du tensioactif, c'est-à-dire en faisant varier la longueur de chaîne alkyle et le nombre de groupements éthoxylés dans l'ester phosphorique. Pour cela, on utilise six tensioactifs différents qu'on caractérise par la longueur de leur chaîne alkyle Ci et par leur nombre de groupement éthoxylés (EO). On examinera la combinaison de ces esters phosphoniques d'alkyles pour les trois formules A, B et C avec des co- tensioactifs dont la nature sera précisée. Les échantillons selon l'invention sont appelés xi et ceux donnés comme échantillons comparatifs sont appelés Ti.

TABLEAU ICI

Echantilon Formule tensioactif Co-tensioactif Température en °C Viscosité à 5°C +5 20 50 (mPa. s) C12-C14BEGMMM#1000T1A 4EO T2 A MMM#1000BDG 4EO BDGMMM#1000CC12-C14 4EO C12-C14LactateéthyleMM2##1000T4C 4EO XCCe 3EOBDGMMM156 C63EOLactateéthyleMMM162X2C C10-C14BDGMMM#1000T5C 4EO C2C10-C14LactateéthyleMMM#1000T6C 4EO BDGMMM#1000CC12-C14 3EO LactateéthyleM2#M#1000CC12-C14 3EO Ts Cr36EO BDG >1000 C136EOLactateM2#M#1000T10C d'éthyle C10-C14BDGMMM#1000T11C 10EO C10-C14LactateM2#M#1000T12C 1 OEO d'ethyle C10-C14BDGMMM#1000T13C 6EO LactateM2#M#1000CC10-C14 6EO d'éthyle C12-C14BDG/LactateMMM#1000T15C 4EO éthyle 9.6/6.4 C12-C14BDG/LactateMMM#1000T16C 8/84EOéthyle BEG = Butyléther de I'éthyleneglycol BDG = Butylether du diéthyleneglycol di/mono)#(70/30 # monophasique= ) 2 =diphasique, phase huile en excès

On constate d'après ce tableau que l'utilisation de tensio-actifs à chaînes plus courtes (inférieures à C12) permet d'obtenir à la fois des microémulsions stables dans un large domaine de températures, notamment à basses températures, et de à5°C.faiblesviscosités EXEMPLE II Le présent exemple vise à montrer la stabilité des microémulsions selon l'invention lorsqu'on utilise comme tensioactif un ester phosphorique d'alkyle comprenant une longueur de chaîne inférieure à 12, ici 6, et un nombre de groupements éthoxytés inférieur à 10, ici 3 comme dans les échantillons X, et X2 décrits dans le tableau II de l'exemple 1, et que l'on fait varier la nature du ou des co-tensioactifs utilisés.

Comme dans l'exemple 1, le tableau III regroupe les mesures de viscosité et de stabilité de l'émulsion pour des échantillons selon l'invention Xi et des échantillons comparatifs Tj.

TABLEAUIII Echantillon Températuresco-tensioactif en Viscosité mPa. s +20+50à+55C-7+5 BDGMMMM158X1C Lactated'éthyleMMMM139X2C BDGMMMM158X3A Lactated'éthyleMMMM178X4A Xs B BDG/Lactate d'éthyle 8/4 M M M M 162 AcidelactiqueMMMM#1000T17C *6triéthytecitrateMMMM 178 X7 diethylemalonate M M M M 128 diéthyloxalateMMM2##1000T18B diméthylsuccinateMMMM146X8B éthylformjiateMMMM139X9B propylformiate2#MM2#131T19B X, o isopropylformiate M M M M 95 T20 B 2#2#M2# éthanol2#2#M2#T21B isopropanol2#2#M2#T22B isobutanol2#2#M2#T23B terbutanolMMMMX11B Suite TABLEAU III co-tensioactifTempérautresen°CViscositéEchantillonformule mPa.s 2050à+5°C-7+5 T24 B y-butyroiactone M M M M >1000 MEG2#MMM#1000T25B EEGMMMM#1000T26B X12 MEC M M M M 131 AcideéthanoiqueMMMM162X13B AcideButanoiqueMMMM119X14B BDG/MECMMMM148X15B 9.6/2.4 Xie B BDG/éthanol M M M M 106 9/3 X17 B BDG/butylformiate 9/3 M M M M 131 BDG/Ac.acétiqueMMMM151X18B 6/6 Xts BAc. acétique/Ac butanoique M M M M 147 6/6 X20X20B MMM131M 8/4 X Ac. acétique/ethanol M M M M 131 8/4 Ac.acétique/γ-butyrolactoneMMMM200X22B 8.5/3.5 Ac.acétique/MECMMMM131X23B 8/4 X24 B MMM140M 8/4 diméthylsuccinate/MMMM132X25B MEC8/4 MEC/γ-butyrolactoneMMMM#1000T27B 4.2.5/7.8

MEC=méthyléthlcétone EEG=ethylethylene glycol MEG = monoethylèneglycol D'après ce tableau, on constate que seuls les échantillons monophasiques sur la plage de température-7°C à +50°C, et de viscosité mesurable à +5°C suffisamment faible, inférieure à 200 mPa. s pour leur permettre d'être fluide à basse température, sont considérés comme des échantillons Xi. On notera en outre que certains co-tensioactifs utilisés seuls dans certaines formules A, B ou C peuvent ne pas être considérés comme utilisables à basses températures du

fait de leur viscosité excessive, mais peuvent être jugés très intéressants en combinaison avec un autre co-tensioactif selon l'invention.

EXEMPLE III Le présent exemple vise à décrire l'effet accélérateur de biodégradabilité des microémulsions selon l'invention au regard des hydrocarbures sur un pilote de radiorespiromètrie.

On opère à I'aide d'un appareillage de laboratoire dit radiorespiromètre tel que décrit par F. Bruchon, A. Basséres et J. C. Bertrand Biotechnol. Lett. (1996), 18 (1), 111-16. II permet de suivre en continu la minéralisation des hydrocarbures radioactifs, tout en évaluant les pertes abiotiques sur chaque culture ce qui évite d'incuber des témoins stériles.

On introduit 100 ml du milieu réactionnel constitué par de t'eau de mer synthétique, une flore bactérienne et du phénanthrène marqué en 14C, difficilement biodégradable, å 100mg/l, dans des flacons de cultures ou erlenmeyers de 250ml équipés de deux torions latéraux l'un étant raccordé å l'arrivée d'oxygène et I'autre étant connecté à un piège à hydrocarbures constitué par des colonnes de type ORBO-43 vendues par SUPELCO. On ajuste le débit d'aération en oxygène à 5ml/mn, et on maintient le milieu sous agitation avec un agitateur va-et-vient à 80 oscillations par minute. Ces réacteurs ainsi agités sont places à ('obscurité pour incubation à 20°C pendant un mois. Les hydrocarbures évaporés s'absorbent sur les pièges à hydrocarbures. Le flux d'air entraîne le CO2 marqué en 14C issu de la minéralisation du phénanthrène vers un piège à C02 constitué par une solution de soude 4N.

Pendant cette incubation d'un mois, pour mesurer la cinétique de minéralisation, on prélève tous les deux ou trois jours selon les résultats obtenus, trois échantillons aliquotes de 0.5ml de la solution de soude 4N qui sont mis à compter dans 10 mi de Coktail Hionic-Fluor de chez Packard.

La flore bactérienne utilisée pour tester t'efficacité des microémutsions, ou plutôt du couple tensioactif/co-tensioactif (s) est une flore naturelle complexe d'origine marine. Avant de démarrer les essais, on réactive cette flore maintenue à- 80°C sur un bouillon riche Marine Agar 2216 de chez Difco pendant huit heures, puis on la pré-cultive sur une eau de mer synthétique de type Instant Ocean à 33g/l,

enrichie à 50mg/l en pétrole brut Arabe léger pendant deux jours en présence de nutriments azotés et phosphores, de chlorure d'ammonium et d'hydrogènophosphate de potassium en concentrations telles que les rapports C/N/P sont égaux à 106/16/1.

Le phénanthréne marqué utilisé est du 9-'4C phénanthrène, produit Sigma 31,528-1.

Les tests sont effectués sur 9 réacteurs placés en série contenant tous le même milieu réactionnel constitué par l'eau de mer synthétique, le phénanthrène marqué à 100mg/l et la Flore bactérienne activée à 10% v/v, et un tampon pH neutre, le TRIS à 6g/l, ces concentrations étant rapportées au milieu réactionnel. On introduit dans huit de ces réacteurs différentes microémulsions selon l'invention et selon fart antérieur. Les concentrations des microémulsions dans le milieu réactionnel au début des essais sont de 10 mg/l. Ces microémulsions correspondent aux microémulsions décrites dans les exemples I et H. Le détail du contenu de chaque réacteur est donné ci-après.

Réacteur 1 : milieu réactionnel seul = témoin Réacteur 2 : milieu réactionnel + Xis Réacteur 3 : milieu réactionnel + Xie Réacteur 4 : milieu réactionnel + Xie Réacteur 5 : milieu réactionnel + X, g Réacteur 6 : milieu réactionnel + X20 Réacteur 7 : milieu réactionnel + X23 Réacteur 8 : milieu réactionnel + X5 Réacteur 9 : milieu réactionnel + Tr Les résultats chiffrés exprimés en % des taux de minéralisation du phénanthrène en présence de ces différentes microémulsions sont rassemblés dans le tableau IV ci-après.

TABLEAU IV X15X16X18X19X20X23X5T1TauxTémoin minérattsation 0 50.10.80.11.62.191.30.0558jours 14 jours 12. 9 4. 1 43. 7 1. 6 1. 5 51. 2 9. 4 2. 8 29.1 20 jours 18 24. 8 68. 4 1. 8 1. 5 71 44. 2 34. 1 42 22.65576.412.71.678.256.856.45.1925jours

On constate une meilleure minéralisation du phénanthrène en présence des microémulsions Xie et X20. Pour certaines autres formulations selon l'invention, on observe un certain temps de latence avant que la minéralisation ne se produise.

Les microémulsions X18 et Xrs sont moins favorables car plus biodégradables que le phénanthrène par les bactéries : ils sont biodégradés avant le phénanthrène.