第1の態様において本発明は、スタチンを 生体適合性ナノ粒子の内部に封入してなるス タチン封入ナノ粒子を含む医薬組成物を提供 する。

 スタチンには、HMG-CoA(3-ヒドロキシ-3-メチ ルグルタリル-コエンザイムA)還元酵素阻害剤 として知られるあらゆる化合物を含有し、例 えばU. S. Patent No. 5,622,985; U. S. Patent No.  5,135,935; U. S. Patent No. 5,356,896; U. S. Patent� �No. 4,920,109; U. S. Patent No. 5,286,895; U. S. P atent No. 5,262,435; U. S. Patent No. 5,260,332; U.� �S. Patent No. 5,317,031; U. S. Patent No. 5,283,256 ; U. S. Patent No. 5,256,689; U. S. Patent No. 5,1 82,298; U. S. Patent No. 5, 369, 125; U. S. Patent  No. 5,302,604; U. S. Patent No. 5,166,171; U. S.  Patent No. 5,202,327; U. S. Patent No. 5,276,021; U.  S. Patent No. 5,196,440; U. S. Patent No. 5,091,38 6 ; U. S. Patent No. 5,091,378; U. S. Patent No.  4,904,646; U. S. Patent No. 5,385,932; U. S. Patent� �No. 5,250,435; U. S. Patent No. 5,132,312; U. S. P atent No. 5,130,306; U. S. Patent No. 5,116,870; U.� �S. Patent No. 5,112,857; U. S. Patent No. 5,102,911 ; U. S. Patent No. 5,098,931; U. S. Patent No. 5,0 81,136; U. S. Patent No. 5,025,000; U. S. Patent No . 5,021,453; U. S. Patent No. 5,017,716; U. S. Pate nt No. 5,001,144; U. S. Patent No. 5,001,128; U. S.  Patent No. 4,997, 837; U. S. Patent No. 4,996,234;  U. S. Patent No. 4,994,494; U. S. Patent No. 4,99 2,429; U. S. Patent No. 4,970,231; U. S. Patent No.  4,968,693; U. S. Patent No. 4,963,538; U. S. Paten t No. 4,957,940; U. S. Patent No. 4,950,675; U. S.� �Patent No. 4,946,864; U. S. Patent No. 4,946,860; U . S. Patent No. 4,940,800; U. S. Patent No. 4,940,7 27; U. S. Patent No. 4,939,143; U. S. Patent No. 4 ,929,620; U. S. Patent No. 4,923,861; U. S. Patent  No. 4,906,657; U. S. Patent No. 4,906,624; and U. S . Patent No. 4,897,402に記載のものが含まれ得� �が、特にプラバスタチン(U. S. Patent No. 4,34 6,227)、シンバスタチン(U. S. Patent No. 4,444,78 4)、フルバスタチン(U. S. Patent No. 4,739, 073) 、アトルバスタチン(U. S. Patent No. 5,273,995)� ��ピタバスタチン、ロスバスタチン(U. S. Pate nt No. 4,231,938)およびリピトール、とりわけ� �タバスタチンおよびアトルバスタチンが好� �しい。これらの文献を出典明示により本願� �細書の一部とする。

 本発明のナノ粒子には、1種またはそれ以 上のスタチンを封入することができる。ある いは、1種またはそれ以上のスタチンとその� �の薬剤を封入することもできる。スタチン� �共に封入され得るその他の薬剤には、新血� �形成効果を有する薬剤、抗生物質、抗炎症� �、ビタミン、あるいはスタチンと併用する� �とが望ましくない薬剤以外のものを使用す� �ことができる。

 本発明の生体適合性ナノ粒子は、生体適� ��性ポリマー、例えば生体適合性ポリエステ� ��から製造することができる。「生体適合性� ��リエステル」なる用語は、本発明において� ��例えばD,L-ラクチド、D-ラクチド、L-ラクチ� �、D,L-乳酸、D-乳酸、L-乳酸、グリコリド、グ リコール酸、ε-カプロラクトン、ε-ヒドロキ シヘキサン酸、γ-ブチロラクトン、γ-ヒドロ キシ酪酸、δ-バレロラクトン、δ-ヒドロキシ 吉草酸、ヒドロキシ酪酸、リンゴ酸などから 選択される一種またはそれ以上のモノマーを 重合することにより合成される、任意のポリ エステルを意味する。好ましい態様において 、生体適合性ポリマーは、ポリ乳酸、ポリグ リコール酸、乳酸・グリコール酸共重合体、 または乳酸・アスパラギン酸共重合体、とり わけPLGAまたはPEG/CS-PLGA(ポリエチレングリコ� �ル/キトサン修飾-PLGA)である。

 本明細書において使用される、「PLGA」な る語は、様々な割合の、例えば1:99~99:1、好ま しくは3:1の乳酸またはラクチドと、グリコー ル酸またはグリコライドからなるコポリマー 、すなわちポリラクチドグリコライド共重合 体を意味する。PLGAは任意のモノマーから常� �の方法で合成してもよいし、市販のものを� �用してもよい。市販のPLGAとしては、例えばP LGA7520(乳酸:グリコール酸=75:25、平均重量分子 量20,000、和光純薬)が挙げられる。乳酸およ� �グリコール酸の含有量が25重量%~65重量%であ� ��PLGAは非晶質であり、アセトンなどの有機溶 媒に可溶であるから好ましい。

 ポリマーは様々な平均鎖長をもち、その� ��果、様々な内部粘性およびポリマー特性の� ��異をもたらすが、とりわけ生体への刺激や� ��性が低く、生体適合性で、投与後分解して� ��謝される生体内分解性のものが好ましい。� ��た、生体適合性ポリマーから得られたナノ� ��子は封入するスタチンを持続して放出する� ��とが好ましい。このようなポリマーとして� ��、例えば5,000~200,000の分子量のもの、例えば 15,000~25,000の分子量のものが好ましい。

 また、生体適合性ポリマーの表面をポリ� ��チレングリコール(PEG)で修飾しておくと、� �溶性のスタチンとポリマーの親和性が向上� �、封入が容易になるため好ましい。

 本発明のスタチン含有ナノ粒子は、生体� ��合性ポリマーとスタチンを光散乱法で測定� ��たときに1,000nm未満、例えば2.5~1,000nm、より� ��ましくは約5~500nm、さらに好ましくは25~300nm� ��最も好ましくは約50~200nmの個数平均粒子径� �有する粒子に加工することができる方法で� �ればいかなる方法によっても製造すること� �できるが、好ましくは球形晶析法を使用し� �製造する。球形晶析法は、化合物合成の最� �プロセスにおける結晶の生成・成長プロセ� �を制御することで、球状の結晶粒子を設計� �、その物性を直接制御して加工することが� �きる方法である。この球形晶析法の一つに� �エマルジョン溶媒拡散法(ESD法)がある。

 ESD法は、簡単に説明すると、薬物を封入� ��る基剤ポリマーとなる生体適合性ポリマー� ��を溶解できる良溶媒と、これとは逆に生体� ��合性ポリマーを溶解しない貧溶媒の二種類� ��溶媒を用いる。この良溶媒には、生体適合� ��ポリマーを溶解し、且つ貧溶媒へ混和する� ��機溶媒を用いる。良溶媒および貧溶媒の種� ��は、封入されるスタチンの種類等に応じて� ��定されるものであり特に限定されるもので� ��ないが、本発明のナノ粒子は、人体へ作用� ��せる医薬製剤の原料として用いられるため� ��人体に対して安全性が高く、且つ環境負荷� ��少ないものを用いることが好ましい。

 このような貧溶媒としては、水、或いは� ��面活性剤を添加した水が挙げられるが、例� ��ば界面活性剤としてポリビニルアルコール� ��添加したポリビニルアルコール水溶液が好� ��に用いられる。ポリビニルアルコール以外� ��界面活性剤としては、レシチン、ヒドロキ� ��メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセ� ��ロース等が挙げられる。なお、余剰のポリ� ��ニルアルコールが残存している場合は、溶� ��留去工程の後に、遠心分離等によりポリビ� ��ルアルコールを除去する工程(除去工程)を� �けても良い。

 良溶媒としては、低沸点且つ難水溶性の� ��機溶媒であるハロゲン化アルカン類、アセ� ��ン、メタノール、エタノール、エチルアセ� ��ート、ジエチルエーテル、シクロヘキサン� ��ベンゼン、トルエン等が挙げられるが、例� ��ば環境や人体に対する悪影響が少ないアセ� ��ンのみ、若しくはアセトンとエタノールの� ��合液が好適に用いられる。

 まず、良溶媒中に生体適合性ポリマーを� ��解後、この生体適合性ポリマーが析出しな� ��ように、薬物溶解液を良溶媒中へ添加混合� ��る。このポリマーと薬物を含む混合液を、� ��溶媒中に攪拌下、滴下すると、混合液中の� ��溶媒が貧溶媒中へ急速に拡散移行する。そ� ��結果、貧溶媒中で良溶媒の乳化が起き、サ� ��ミクロンサイズの良溶媒のエマルジョン滴� ��形成される。さらに、良溶媒と貧溶媒の相� ��拡散により、エマルジョン内から有機溶媒� ��貧溶媒へと継続的に拡散していくので、エ� ��ルジョン滴内の生体適合性ポリマー並びに� ��物の溶解度が低下し、最終的に、薬物を包� ��した球形結晶粒子のポリマーナノ粒子が生� ��する。

 好ましくは、薬物封入ナノ粒子には、薬� ��が0.1~99%(w/v)、例えば0.1~30%(w/v)、より好まし� ��は1~10%(w/v)封入される。薬物には1種以上の� �タチン及び所望によりその他の薬剤が含ま� �る。

 上記球形晶析法では、物理化学的な手法� ��ナノ粒子を形成でき、しかも得られるナノ� ��子が略球形であるため触媒や原料化合物の� ��留といった問題を考慮する必要がなく、粒� ��径のばらつきが少ないナノ粒子を、容易に� ��成することができる。その後、良溶媒であ� ��有機溶媒を遠心分離または減圧留去し(溶媒 留去工程)、薬物封入ナノ粒子粉末を得る。� �して、得られた粉末をそのまま、或いは必� �に応じて凍結乾燥等により再分散可能な凝� �粒子に複合化し(複合化工程)、複合粒子とし た後、容器内に充填してスタチン含有ナノ粒 子とする。

 また、ナノ粒子内部へのスタチンの封入� ��を高めるため、貧溶媒にカチオン性高分子� ��添加することが好ましい。カチオン性高分� ��を貧溶媒中に添加した場合は、ナノ粒子表� ��に吸着したカチオン性高分子がエマルショ� ��滴表面に存在するスタチンと相互作用し、� ��溶媒中へのスタチンの漏出を抑制すること� ��できるものと考えられる。

 カチオン性高分子としては、キトサン及� ��キトサン誘導体、セルロースに複数のカチ� ��ン基を結合させたカチオン化セルロース、� ��リエチレンイミン、ポリビニルアミン、ポ� ��アリルアミン等のポリアミノ化合物、ポリ� ��ルニチン、ポリリジン等のポリアミノ酸、� ��リビニルイミダゾール、ポリビニルピリジ� ��ウムクロリド、アルキルアミノメタクリレ� ��ト4級塩重合物(DAM)、アルキルアミノメタク� ��レート4級塩・アクリルアミド共重合物(DAA)� ��が挙げられるが、特にキトサン或いはその� ��導体が好適に用いられる。

 キトサンは、アミノ基を有する糖の1種で あるグルコサミンが多数結合した天然高分子 であり、乳化安定性、保形性、生分解性、生 体適合性、抗菌性等の特徴を有するため、化 粧品や食品、衣料品、医薬品等の原料として 広く用いられている。このキトサンを貧溶媒 中に添加することにより、生体への悪影響が なく、安全性の高いスタチン封入ナノ粒子を 製造することができる。

 また、良溶媒中での核酸化合物の親和性� ��び分散安定性を向上させるため、良溶媒中� ��DOTAP等のカチオン性脂質を添加し、核酸化� �物と複合体を形成させても良い。但し、細� �内において放出されたカチオン性脂質によ� �細胞障害性を示すおそれがあるため、添加� �には注意が必要である。

 以上のようにして得られたナノ粒子は、� ��結乾燥等により粉末化させる際に再分散可� ��な凝集粒子(ナノコンポジット)に複合化で� �る。このとき、有機または無機の物質を再� �散可能に複合化させ、ナノ粒子と共に乾燥� �せることが好ましい。例えば、糖アルコー� �やショ糖を適用することにより、封入率の� �らつきを効果的に防止するとともに、糖ア� �コール等が賦形剤となりナノ粒子の取り扱� �性を高めることができる。糖アルコールと� �ては、マンニトール、トレハロース、ソル� �トール、エリスリトール、マルチトース、� �シリトースなどが挙げられ、この中でも特� �トレハロースが好ましい。

 この複合化により、使用前まではナノ粒� ��が集まった、取り扱いやすい凝集粒子とな� ��ており、使用時に水分に触れることでナノ� ��子に戻って高反応性等の特性を復元する複� ��粒子となる。なお、凍結乾燥法に代えて、� ��動層乾燥造粒法(例えば、ホソカワミクロン (株)製アグロマスタAGMを使用)により複合化し て、再度分離可能な状態で一体化することも できる。

 このようにして得られる本発明のスタチ� ��含有ナノ粒子は、HMG-CoA還元酵素が関与する 様々な状態、例えば組織の血管新生不全(ま� �はその素因)を特徴とする状態、すなわち組� ��が十分に脈管化される必要のある、新血管� ��成が必要な状態、ならびに(1)糖尿病性潰瘍� ��(2)壊疽、(3)治癒促進のために新血管形成が� ��要な外科または他の創傷、(4)バージャー症� ��群、(5)高血圧(肺高血圧症を含む)、(6)虚血� �患、例えば脳血管虚血、腎虚血、肺虚血、� �虚血、虚血性心筋症、心筋虚血、筋、脳、� �臓および肺等の組織の虚血、高血圧、潰瘍(� ��えば糖尿病性潰瘍)、微小血管の減少を特徴 とする外科創傷または他の状態が含まれる。 好ましい態様において、本発明によって処置 される状態は、治療的血管形成によって処置 される状態、とりわけ虚血である。

 本発明において「処置」とは、状態の処� ��および予防を含む。

 また、本発明のスタチン封入ナノ粒子は� ��内皮細胞、白血球、心筋細胞および繊維芽� ��胞のような他の細胞タイプによって同様に� ��り込まれるため、いくつかの難治疾患処置� ��本発明のスタチン封入ナノ粒子を適用する� ��とができる。したがって、本発明の広い局� ��で、本発明のスタチン封入ナノ粒子はまた� ��重症の家族性高コレステロール血症、肺高� ��圧症、動脈硬化症、大動脈瘤、変性性神経� ��患、アルツハイマー病、脳血管性痴呆、臓� ��線維化、悪性腫瘍の処置に使用できる。

 従って、さらなる局面において、本発明� ��スタチンによって処置される疾患および/ま たは状態の予防および処置のための、本発明 のスタチン封入ナノ粒子を組み込まれた薬剤 送達システムに関する。

 本発明の特定の発見によると、本発明は� ��た、本発明のスタチン封入ナノ粒子の治療� ��有効用量を、スタチンによって処置可能な� ��患および/または状態を有する温血動物(ヒ� �を含む)へと投与する、温血動物の処置法を� ��供する。

 本発明のナノ粒子を含む医薬組成物は、� ��所的、経腸的、例えば経口的もしくは経直� ��的、または非経腸的投与に、とりわけ筋、� ��脈または動脈注射に適しており、そして、� ��機または有機、固体または液体であり得る� ��学的に許容される担体を含み得る。たとえ� ��、経口投与用本発明の医薬組成物は、希釈� ��、例えばラクトース、デキストロース、ス� ��ロース、マンニトール、ソルビトール、セ� ��ロースおよび/またはグリセロール、および /または滑沢剤、例えばケイ酸、タルク、ス� �アリン酸もしくはステアリン酸マグネシウ� �もしくはステアリン酸カルシウムのような� �の塩、および/またはポリエチレングリコー� ��、および/または安定化剤と共に本発明のナ ノ粒子を含み、とりわけ錠剤またはゼラチン カプセルを使用することができる。錠剤はま た結合剤および、所望により、崩壊剤、吸着 剤、染料、香味料および甘味剤を含み得る。 本発明のナノ粒子はまた非経腸的投与用組成 物の形または注入溶液の形で使用できる。か かる溶液は、賦形剤、例えば安定化剤、保存 剤、湿潤剤および/または乳化剤、浸透圧を� �節する塩および/またはバッファーを含む。� ��医薬組成物は、当業者に既知の方法で製造� ��れ、そして約0.1%~99%、とりわけ約1%~約50%、� �ましくは1~20%(%は重量%)の有効成分を含む。

 使用される本発明のナノ粒子の用量範囲� ��、温血動物の種、体重および年齢、投与形� ��、特定の使用される物質および処置される� ��患の状態を含む、当業者に既知の要素に依� ��している。特に記載がない限り、本発明の� ��ノ粒子は、好ましくは1日に1~4回の投与され る。とりわけ好ましい態様において本発明の 医薬組成物は、その長期間の薬剤放出能力の ため(例えば図1参照)、毎日、隔日、1週間に1� ��、隔週、1ヶ月に1回等の様々な投与頻度で� �与することができる。好ましくは、かかる� �度は当業者に既知の要素に依存し、医師等� �より容易に決定される。

 本発明のスタチン封入ナノ粒子によって� ��与されるスタチンは、治療上有効量を投与� ��れる。有効量とは、所望の結果を得るため� ��必要なスタチンの量であり、処置する状態� ��進行の遅延、阻害、予防、逆転または治癒� ��もたらすのに必要な量であり、典型的には� ��約0.01mg/kg~約1000mg/kg、好ましくは約0.1mg/kg~約 200mg/kg、より好ましくは約0.2mg/kg~約20mg/kgであ り、1日に1回、またはそれ以上に分割して投� ��することができる。