本发明涉及一种抗癌药物的偶合物， 特别是涉及紫杉醇或多西紫杉醇 的一种多肽偶合物。

背景技术

紫杉醇 （Paclitaxd, PTAX) 是从红豆杉属 （Taxus) 植物的树皮中分 离提取的二萜类天然产物， 为近二十年来所研发上市的最有效的化学抗癌 药物之一。 通过特异性结合到细胞微管小管的 β位， 使微管聚合为团块或 束状， 紫杉醇可有效抑制微管网的正常重组， 使细胞的分裂， 繁殖及生长 受到阻碍并停滞在 G ₂ 期和 M期。 作为国际上广泛认可的高效化学抗癌药 物， 紫杉醇已被众多国家批准用于临床， 以治疗包括乳腺癌， 卵巢癌， 结 肠癌， 食管癌， 非小细胞肺癌， 膀胱癌、 前列腺癌， 黑素瘤（Melanoma) , 淋巴瘤， 白血球过多症 （Leukemias) 及胃癌等多种癌症"。

紫杉醇的结构复杂， 目前难以通过化学合成方法制备， 因天然资源有 限， 使其价格极为昂贵。紫杉醇具有高效细胞毒性 ， 但却缺乏细胞选择性。 在体内除肿瘤组织外， 也可分布于正常组织中， 除导致生物利用度明显降 低外， 也使得紫杉醇在杀灭癌细胞的同时， 对正常细胞及组织造成伤害。 紫杉醇细胞选择性差也导致了临床应用中产生 严重毒副作用， 包括中性白 细胞减少， 骨髓抑制， 血管性水肿， 低血压， 过敏性反应， 全身性荨麻疹， 感觉及中枢神经病变， 触觉异常， 感觉减退， 位置感觉缺失等， 常使需要 长期用药的癌症患者难以承受。 此外， 紫杉醇水溶性极差 （〜0.4 ug/ml)， 在剂型及给药方式上受到诸多限制。 临床制剂中将紫杉醇加入聚氧乙烯蓖 麻油 （Cremphor EL) ： 无水乙醇 （V:V = 1 : 1 ) 中， 再以生理盐水稀释后 通过静脉输液给药， 除给患者带来不便外， 聚氧乙烯蓖麻油还可引起人体 的过敏反应。 对一些需要增加剂量才能获得较好疗效的病例 ， 紫杉醇也因 其水溶性极差而难以有效使用 ² ， ⁴ — ⁷ 。

多西紫杉醇 （Docetaxel, DTAX) 是以从紫杉树叶中提取的、 含有紫 杉醇基本母核结构的去乙酰浆果赤霉素 III ( 10-Deacetyl baccatin lll)为原 料，通过在其 3'位的氨基进行叔丁氧酰化后得到的半合成紫� ��醇类似物 ⁸ ， ⁹ 。 通过与紫杉醇相同的作用机制， 多西紫杉醇在临床上也用作有效的化学抗 癌药物。 但多西紫杉醇在应用中同样显示出细胞选择性 差的弱点， 在抑制 肿瘤细胞的同时， 对正常细胞及组织造成伤害， 导致各种与紫杉醇类似的 毒副作用 ^{1( 1} 。

紫杉醇与多西紫杉醇具有如下结构：

当为紫杉醇时， ！^为 ^ -， 为 0¾ 0-； 当为多西紫杉醇时， 为 （CH ₃ ) ₃ CO -， R ₂ 为 H -。

近十年来引起高度关注的的分子靶向抗癌药物 研发策略， 为从根本上 克服化学抗癌药物细胞选择性差的弱点提供了 科学有效的解决方案。 众多 研究结果表明， 某些肿瘤细胞能够高密度地表达正常细胞不具 有的特殊受 体， 而某些抗体或内源性多肽可选择性结合于这类 受体， 使得肿瘤细胞的 DNA复制受到抑制， 肿瘤的生长， 繁殖及转移受到干扰和阻止。针对肿瘤 细胞的特殊受体及相应的抗体及靶向多肽开展 研究， 正成为新型高效低毒 抗癌药物研发领域的热点 ¹² — ¹⁷ 。

生长抑素受体 （Somatostatin receptors, STTRs) 是一类含有 7个跨膜 区段的糖蛋白，属 G蛋白偶联受体家族。 自 1992年 SSTR1和 SSTR2被克 隆至今， 已成功克隆并确定了 5 种不同的 STTRs 分子亚型 （STTR1 - STTR5), 它们与细胞的内摄作用及细胞生物信息传递密 切相关。大多数神 经内分泌肿瘤， 如前列腺癌， 乳腺癌， 小细胞肺癌， 非小细胞肺癌都表达 了高密度的 STTRs。 而含 14 个氨基酸的内源性多肽生长抑素 ( Somatostatin) ， 与高密度表达 STTRs 的肿瘤细胞具有良好的亲和性及 选择性 ¹⁵ ， ¹⁸ 。

奥曲肽（Octreotide)是在对生长抑素进行结构修� ��及序列调整的基础 上， 通过化学合成而研发的高效靶向多肽药物。 奥曲肽仅含 8个氨基酸但 却具有更强的 STTRs 亲和能力和稳定性， 体内代谢半衰期是生长抑素的 50倍。 其序列为： D-Phe-c[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-ol。 除临床上 用于癌症手术后患者的康复及抑制癌细胞转移 外， 奥曲肽对于研发针对类 癌瘤及小细胞肺癌的靶向抗癌制剂也具有重要 作用 ¹⁶ _ ¹⁸ 。 将奥曲肽氨基酸 序列中的 3 位苯丙氨酸 （Phe ³ ) 用酪氨酸 （Tyr) 取代后得到奥曲肽 -Tyr ³ ( Tyr ³ -Octreotide ) ， 除保持奥曲肽的生物活性及靶向性外， 其序列中的 Tyr ³ 易于进行放射性 ¹³¹ 1标记， 在肿瘤放射性治疗中具有重要用途 ¹⁹ 。

参考文献

1. R. M. Straubinger, Biopharmaceutics of paclitaxel (taxol): formulation, activity and pharmacokinetics, in: M. Suffness (Ed.), Taxol: Science and Applications, CRC Press, New York, pp. 237-54 (1995).

2. C. M. Spencer, D. Faulds, Drugs 48:794-847 (1994).

3. J. D. Adams, K. Flora, B. R. Goldspiel, J. W. Wilson, R. Finley, J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 15: 141-7 (1993) .

4. M. Marone er al.， Exp. Cell Res. 270: 1-12 (2001).

5. H. Xiao et al.， PNAS. 103: 10166-73 (2006).

6. T.Kii et al, Gan To Kagaku Ryoho. 33:621-4 (2006)

7. Y. Kodera et al, Int. J. Clin. Oncol. 1 1 :449-53 (2006).

8. K. A. Lyseng-Williamson, C. Fenton, Drugs 65(17):2513-31(2005).

9. S. J. Clarke, L. P. ivory, Clin. Pharmacokinet. 36(2):99- l 14 (1999).

10. J. P. Snyder, J. H. Nettles, B. Cornett, K. H. Downing, E. Nogales, PNAS. 98(9):5312-16 (2001).

1 1. H. P. Rang, M. M. Dale, J. M. Ritter, P. K. Moore. Pharmacology. 5th ed. London: Churchill Livingstone; pp. 694-8 (2003).

12. H. Varmus, Science, 312: 1 162-5 (2006).

13. M. C. Garnett, Adv. Drug. Del. Rev. 53: 171-216 (2001).

14. J. Baselga, Science, 312: 1 175-8 (2006).

15. J. C. Reubl, Endocrine Reviews 24:389-427 (2003).

16. O. H. Ainal , T. C. Sroka, M. Chen, K. S. Lam, Biopolymers 66: 184-99 (2002).

17. F. Hudecz, Z. Banoczi, G. Csik, Medicinal Research Reviews. 25:679-736 (2005).

18. A. V. Schally, A. Nagy, Life Sciences, 72:2305-20 (2003).

19. M. Ginj et al, PNAS. 103(44): 16436-41 (2006). 发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足， 提供一种同时具备优异抗癌活 性与癌细胞选择性， 以及具有良好水溶性的紫杉醇或多西紫杉醇的 多肽偶 合物。

本发明的另一目的在于提供上述紫杉醇或多西 紫杉醇的多肽偶合物 的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述紫杉醇或多西 紫杉醇的多肽偶合物 在制备药物方面的应用。

为实现上述目的， 本发明采用了以下技术方案：

本发明公开了一种紫杉醇或多西紫杉醇的多肽 偶合物， 所述紫杉醇或 多西紫杉醇在 2'位羟基通过连接序列与多肽的氨基相连。

所述连接序列为 -CO-C¾-(X) _n -C¾-CO- ·'

其中， X为 0(CH ₂ CH ₂ OCH ₂ CH ₂ CH ₂ NHCOCH ₂ -) ₂ ， -CO-, -0-， -S-, -CH ₂ -， -CHCH ₃ -或 -C(CH ₃ ) ₂ -; n为 0或 1。

所述多肽为奥曲肽或者奥曲肽的 3位苯丙氨酸（Phe ³ )用酪氨酸（Tyr) 取代后得到奥曲肽 -Tyr ³ 。

所述紫杉醇或多西紫杉醇在 2'位羟基通过连接序列与奥曲肽或奥曲肽 -Tyr ³ 的 N-端氨基和 /或 5位赖氨酸 （Lys ⁵ ) 侧链的 ε-氨基相连接。

本发明还公开了上述紫杉醇或多西紫杉醇的多 肽偶合物的制备方法， 所述方法包括：

将紫杉醇或多西紫杉醇与连接剂反应得到 2'位羟基上连接有连接序列 -CO-CH ₂ -(X) _n -CH ₂ -CO-OH的紫杉醇 -Linker中间体或多西紫杉醇 -Linker中 间体， 其中 X为 0(CH ₂ CH ₂ OCH ₂ CH ₂ CH ₂ NHCOCH ₂ -) ₂ ， -CO-, -0-， -S-, -CH ₂ -， -CHCH ₃ -或 -C(CH ₃ ) ₂ -， n为 0或 1；

将紫杉醇 -Linker 中间体或多西紫杉醇 -Linker 中间体通过固相或液相 合成方法与多肽的氨基相连。

本发明还公开了上述紫杉醇或多西紫杉醇的多 肽偶合物在制备用于预 防和 /或治疗肿瘤的药物方面的应用。

由于采用了以上技术方案， 使本发明具备的有益效果在于：

本发明所合成制备的紫杉醇、 多西紫杉醇的多肽偶合物， 特别是相应 的奥曲肽 /奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物， 由于其中具高效细胞毒性的紫杉醇及多西 紫杉醇与可识别癌细胞表面受体的靶向多肽奥 曲肽及奥曲肽 -Tyr ³ 相互连 接后扬长避短， 优势互补， 显示了良好的细胞选择性及水溶性， 具有优于 母体药物紫杉醇及多西紫杉醇的抗癌活性。 偶合物可显著增强对癌细胞的 选择性， 避免或减少在正常细胞及组织中的分布， 在明显提高生物利用度 的同时， 通过克服紫杉醇及多西紫杉醇细胞选择性差的 弱点， 有效降低母 体抗癌药在体内产生的毒副作用。 此外， 奥曲肽及奥曲肽 -Tyr ³ 特有的高亲 水性， 可使偶合物具有良好的水溶性， 为剂型制备及给药方式的选择提供 方便。 而通过一分子靶向多肽与两分子紫杉醇或多西 紫杉醇相连而制备的 双紫杉醇-奥曲肽偶合物、 双多西紫杉醇-奥曲肽偶合物、 双紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物， 有利于增加肿瘤部位紫 杉醇的浓度， 更有效地提高抗癌效率。 本发明的偶合物在新型高效低毒分 子靶向抗癌药物研发领域具有重要应用前景。

具体实施方式

本发明公开了系列双紫杉醇-奥曲肽偶合物、 双多西紫杉醇-奥曲肽偶 合物、 双紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物的 化学结构及它们的合成制备方法。 所涉及的系列偶合物的化学结构如通式 I所示。

通式 I 通式 I中， 可以是 C ₆ ¾-或 (C¾) ₃ CO-;

R ₂ 可以是 C¾-CO-或 H-;

R ₃ 可以是 H- (Phe) 或 HO- (Tyr);

X可以是 0(CH ₂ CH ₂ OCH ₂ CH ₂ CH ₂ NHCOCH ₂ -) ₂ ， -CO-, -0-， -S-, -C¾-， -CHCH ₃ -或 -C(CH ₃ ) ₂ -； n可以是 0或 1。

具体地， 本发明的偶合物是紫杉醇的 2'位羟基及多西紫杉醇的 2'位羟 基分别与不同类型的连接剂反应而形成的紫杉 醇 -Linker 中间体及多西紫 杉醇 -Linker中间体（通式 II )，紫杉醇 -Linker中间体（通式 II中 C ₆ H ₅ -; R ₂ = C¾CO-)通过连接桥 -CO-C¾-(X) _n -C¾-CO-与奥曲肽的 N-端氨基及其 氨基酸序列中 5位赖氨酸 （Lys ⁵ ) 侧链的 ε-氨基相连接而得到双紫杉醇-奥 曲肽偶合物（通式 I中 R ₃ = H-); 与奥曲肽 -Tyr ³ 的 N-端氨基及其氨基酸序 列中 5位赖氨酸 （Lys ⁵ ) 侧链的 ε-氨基相连接而得到双紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物 （通式 I中 R ₃ = HO-); 多西紫杉醇 -Linker中间体 （通式 II中 (CH ₃ ) ₃ CO- _; R ₂ = H-) 通过连接桥 -CO-CH ₂ -(X) _n -C¾-CO- 与奥曲肽的 N- 端氨基及其氨基酸序列中 5 位赖氨酸 （Lys ⁵ ) 侧链的 ε-氨基相连接而得到 双多西紫杉醇-奥曲肽偶合物 （通式 I中 R ₃ = H-); 与奥曲肽 -Tyr ³ 的 N-端 氨基及其氨基酸序列中 5 位赖氨酸 （Lys ⁵ ) 侧链的 ε-氨基相连接而得到双 多西紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物 （通式 I中 R ₃ = HO -)。

通式 II 本发明方法中， 可以选用多种类型的连接剂。 所选择的连接剂需满足 的条件为： 能与紫杉醇及多西紫杉醇的的 2'位羟基反应生成通式 II所表示 的产物。 可用于本发明的连接剂如： 二羟乙酸酐、 丁二酸酐、 戊二酸酐、 3-羰基戊二酸酐、 3-甲基戊二酸酐、 3， V -二甲基戊二酸酐等。 紫杉醇或 多西紫杉醇与连接剂反应时， 对于不同的连接剂， 连接反应的条件基本相 同， 本领域技术人员能够根据连接剂的不同适当调 整反应条件并得到所需

、 以上通式 I也可以表示为如下：

双紫杉醇-奥曲肽偶合物：

Paclitaxel-2'-OCOCH ₂ (X) _n CH ₂ CO-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys[-COCH ₂ (X) _n CH ₂ COO-2'-Pacfe 双紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物：

Paclitaxel-2'-OCOCH ₂ (X) _n CH ₂ CO-D-Phe-C s-Tyr-D-Trp-Lys[-COCH ₂ (X) _n CH ₂ COO-2'-PacUtaxel]-Thr-C s-Threoninol

Docetaxel-2'-OCOCH ₂ (X) _n CH ₂ CO-D-Phe-C^s-Phe-D-Trp-Lys[-COCH ₂ (X) _n CH ₂ COO-2'-Docetaxel]-Thr-Cj¾-Threoninol

Docetaxel-2'-OCOCH ₂ (X)nCH ₂ CO-D-Phe-C^-Tyr-D-Trp-Lys[-COCH ₂ (X) _n CH ₂ COO-2'-Docetaxel]-Thr-C s-Threoninol 本发明创建了固相与液相化学合成技术相结合 进行分歩相连的方法， 用不同类型的连接剂与紫杉醇或多西紫杉醇的 2'位羟基相连而得到紫杉醇 -Linker中间体及多西紫杉醇 -Linker中间体后，再分别与连接于固相合成树 脂、 侧链保护但 N-端氨基游离的奥曲肽或奥曲肽 -Tyr ³ 的 N-端氨基通过固 相合成方法相连， 得到紫杉醇-奥曲肽偶合物、紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物、 多西紫杉醇-奥曲肽偶合物或多西紫杉醇-奥曲� �� -Tyr ³ 偶合物；；再用液相合 成方法将紫杉醇 -Linker或多西紫杉醇 -Linker与从固相合成树脂上切下的 紫杉醇-奥曲肽偶合物、 紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物、 多西紫杉醇-奥曲肽偶 合物或多西紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物的氨基酸序列中 5位赖氨酸 （Lys ⁵ ) 侧链的 ε-氨基相连而合成制备系列双紫杉醇-奥曲肽� �合物、双紫杉醇 -奥曲 肽 -Tyr ³ 偶合物、 双多西紫杉醇 -奥曲肽偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物。 具体歩骤为：

( 1 )将通式 II表示的紫杉醇 -Linker中间体及多西紫杉醇 -Linker中间 体分别与与连接在固相合成树脂上的奥曲肽衍 生物及奥曲肽 -Tyr ³ 衍生物 的 N-端氨基通过固相合成方法相连接，从而分别� ��到与树脂相连的紫杉醇 -奥曲肽偶合物衍生物、 多西紫杉醇-奥曲肽偶合物衍生物、 紫杉醇-奥曲肽

-Tyr ³ 偶合物衍生物及多西紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物衍生物；

(2)将上述衍生物分别从树脂上切下，经纯化后 得到通式 III表示的紫 杉醇-奥曲肽偶合物、 多西紫杉醇-奥曲肽偶合物、 紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合 物及多西紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物；

(3 ) 将通式 II表示的紫杉醇 -Linker中间体、 多西紫杉醇 -Linker中间 体在液相合成条件下分别与通式 III表示的紫杉醇-奥曲肽偶合物、多西紫杉 醇-奥曲肽偶合物、 紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物及多西紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物中多肽氨基酸序列中 5 位赖氨酸 （Lys ⁵ ) 侧链的 ε-氨基相连接， 从 而得到通式 I所表示的双紫杉醇-奥曲肽偶合物、双多西紫� ��醇 -奥曲肽偶合 物、 双紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物。

通式 III 通式 II和通式 III中， 可以是 C ₆ ¾-或 (CH ₃ ) ₃ C-0-; R ₂ 可以是 CH ₃ -CO- 或 H-; X可以是 0(CH ₂ CH ₂ OCH ₂ CH ₂ CH ₂ NHCOC¾-) ₂ ， -CO-, -0-， -S-, -CH ₂ -， -CHC¾-或 -C(CH ₃ ) ₂ -; n可以是 0或 1。

发明中同时创建了采用液相化学合成进行同歩 相连的方法， 将紫杉醇 (多西紫杉醇） -Linker中间体在液相合成条件下， 与奥曲肽和奥曲肽 -Tyr ³ 的 N-端氨基及它们氨基酸序列中的 5位赖氨酸侧链的 ε-氨基同时连接， 从 而合成制备系列双紫杉醇（多西紫杉醇） -奥曲肽偶合物及双紫杉醇（多西 紫杉醇） -奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物。 具体歩骤为：

将通式 II表示的紫杉醇 -Linker或多西紫杉醇 -Linker中间体分别与奥 曲肽及奥曲肽 -Tyr ³ 在液相合成条件下反应， 使紫杉醇 /多西紫杉醇的 2'-羟 基通过连接桥 -CO-CH ₂ -(X) _n -CH ₂ -CO-与奥曲肽及奥曲肽 -Tyr ³ 的 N-端氨基 及它们的氨基酸序列中 5 位赖氨酸 （Lys ⁵ ) 侧链的 ε-氨基同时相连， 产物 经高效液相仪 （HPLC) 分离纯化后， 得到通式 I所表示的双紫杉醇 -奥曲 肽偶合物及双紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物或双多西紫杉醇-奥曲肽偶合物及 双多西紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物。

本发明的系列偶合物将两分子紫杉醇或多西紫 杉醇与奥曲肽及奥曲肽 -Tyr ³ 中的 N-端氨基及它们氨基酸序列中 5位赖氨酸（Lys ⁵ )侧链的 ε-氨基 相互连接而合成制备的系列双紫杉醇-奥曲肽� �合物、 双多西紫杉醇 -奥曲 肽偶合物、 双紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合 物， 可使具有高效细胞毒性的紫杉醇及多西紫杉醇 与可识别癌细胞表面受 体， 具有良好水溶性奥曲肽及奥曲肽 -Tyr ³ 相互扬长避短， 优势互补。 在保 持紫杉醇及多西紫杉醇抗癌活性的同时，借助 奥曲肽及 Tyr ³ -奥曲肽的靶向 功能， 偶合物可显著增强对癌细胞的选择性， 避免或减少在正常细胞及组 织中的分布， 在明显提高生物利用度的同时， 通过克服紫杉醇及多西紫杉 醇细胞选择性差的弱点， 有效降低母体抗癌药在体内产生的毒副作用。 此 夕卜，奥曲肽及奥曲肽 -Tyr ³ 特有的高亲水性，可使偶合物具有良好的 水溶性， 为剂型制备及给药方式的选择提供方便。 而通过一分子靶向多肽与两分子 紫杉醇或多西紫杉醇相连而制备的双紫杉醇-� �曲肽偶合物、双多西紫杉醇 -奥曲肽偶合物、双紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物及双多西紫杉醇-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物， 有利于增加肿瘤部位紫杉醇或多西紫杉醇的浓 度， 更有效地提高 抗癌效率。 本发明涉及的系列偶合物在新型高效低毒抗分 子靶向癌药物研 发领域具有重要应用前景。 本发明通过以下实施例对各中间体及偶合物的 合成制备方法进行描 述。 实施例不限制本发明， 本发明的保护范围由权利要求限定。

实施例 1： 紫杉醇 -2，-二羟乙酸酯的合成

紫杉醇 （0.854 g, 1.00 mmol) 溶于无水四氢呋喃 （10 ml), 加入无水 砒啶 （0.5 ml), 二羟乙酸酐 （Diglycolic anhydride, 0.139 g, 1.20 mmol), 于 0°C搅拌 24小时后加入乙酸乙酯 （100ml), 并用盐酸 （1.0M) 调至 pH3-4o 乙酸乙酯液依次用水（30 mix 3)， 饱和食盐水（20 mix 2)萃取， 无水硫酸钠干燥， 过滤后减压回收乙酸乙酯。所得残余物用丙酮 -乙醚重结 晶， 得紫杉醇 -2，-二羟乙酸酯纯品 0.801 g， 收率 82.6%。 ESI-MS: 971.3 [M+H] ⁺ (分子量： 969.99)。

实施例 2： 多西紫杉醇 -2'-丁二酸酯的合成

多西紫杉醇 （0.808 g, 1.00 mmol) 溶于无水四氢呋喃 （8ml)， 加入无 水砒啶 （0.5 ml), 丁二酸酐 （Succinic anhydride, 0.121 g, 1.20 mmol), 于 0 °C搅拌 16小时后加入乙酸乙酯 （80 ml),并用盐酸（ 1.0 M)调至 pH 3-4。 乙酸乙酯液依次用水 （30 mix 3)， 饱和食盐水 （20 mix 2) 萃取， 无水硫 酸钠干燥， 过滤后减压回收乙酸乙酯。所得残余物用丙酮 -乙醚重结晶， 得 多西紫杉醇 -2'-丁二酸酯纯品 0.728 g，收率 80.1%。 ESI-MS: 909.2 [M+H] ⁺ (分子量： 907.96)。

实施例 3： 紫杉醇 -2，-二羟乙酰-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物的合成

将与固相合成树脂相连， 已形成分子内二硫键， 侧链保护但 N-端氨基 游离的奥曲肽 -Tyr ³ -树脂 （含奥曲肽 -Tyr ³ 0.10 mmol) 置于固相合成反应器 中，用无水二氯甲垸浸洗后抽去溶剂并通人干 燥氮气。将紫杉醇 -2'-二羟乙 酸酯 (0.243 g, 0.25 mmol)溶于无水二氯甲垸 (10 ml), 加入 PyBop (0.156 g, 0.30 mmol), Ν,Ν-二异丙基乙胺（0.039 g, 0.30 mmol)并搅拌 10分钟后， 滴入上述固相合成反应器中并用干燥氮气进行 搅拌。 1小时后将溶剂抽干， 依次用二甲基甲酰胺 （x6)， 二氯甲垸（x5)及乙醚（x3)洗涤树脂并抽 干。 将干燥的树脂加入三氟乙酸 /二氯甲垸 （V:V = 1:5， 20 ml) 溶液中， 搅拌 1小时后过滤， 树脂用二氯甲垸（5mlx3)洗涤并过滤。 滤液合并后 减压抽干， 残余物用乙醚洗涤 （X 3)， 抽滤收集乙醚不溶的固体， 干燥后 得紫杉醇 - ₂ ，-二羟乙酰-奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物粗品 0.192 g， 收率 96.6%。 ESI-MS: 1988.6 [M+H] ⁺ (分子量： 1987.22)。

实施例 4： 多西紫杉醇 -2'-丁二酰-奥曲肽偶合物的合成：

将与固相合成树脂相连， 已形成分子内二硫键， 侧链保护但 N-端氨基 游离的奥曲肽树脂 （含奥曲肽 0.10 mmol) 置于固相合成反应器中， 用无 水二氯甲垸浸洗后抽去溶剂并通人干燥氮气。 将多西紫杉醇 -2'-丁二酸酯 (0.227 g, 0.25 mmol)溶于无水二氯甲垸（ 10 ml)，加入 PyBop(0.156 g, 0.30 mmol) , Ν,Ν-二异丙基乙胺（0.039 g, 0.30 mmol) 并搅拌 10分钟后， 滴入 上述固相合成反应器中并用干燥氮气进行搅拌 。 1 小时后将溶剂抽干， 依 次用二甲基甲酰胺（x 6)， 二氯甲垸（x 5 )及乙醚（x 3 )洗涤树脂并抽干。 将干燥的树脂加入三氟乙酸 /二氯甲垸（V:V = 1 :5， 20 ml)溶液中， 搅拌 1 小时后过滤， 树脂用二氯甲垸（5 mi x 3 )洗涤并过滤。 滤液合并后减压抽 干， 残余物用乙醚洗涤 （X 3 )， 抽滤收集乙醚不溶的固体， 干燥后得多西 紫杉醇 -2'-丁二酰 -奥曲肽偶合物粗品 0.182 g，收率 95.3%。ESI-MS: 1910.6 [M+H] ⁺ (分子量： 1909.19)。

实施例 5： 双 (紫杉醇 -2，-二羟乙酰) -奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物的合成 紫杉醇 -2，-二羟乙酰-奥曲肽 -Tyr ³ 粗品 0.159 g (0.08 mmol) 加入无水 二甲基甲酰胺 ( 5 ml) 。 将紫杉醇 -2，-二羟乙酸酯 (0.088 g, 0.09 mmol) 溶 于无水二氯甲垸 ( 6 ml) , 加入 PyBop ( 0.052 g, 0.10 mmol) , Ν,Ν-二异丙 基乙胺 （0.013 g, 0.10 mmol)搅拌 10分钟后滴入上述溶液。 反应液搅拌 1 小时后减压抽去二氯甲垸， 残余物滴入冰水（60 ml) 中， 抽滤收集水中析 出的固体并用蒸馏水洗涤 （x 3 )。 所得固体用甲醇 -乙酸乙酯重结晶， 得双 (紫杉醇 -2，-二羟乙酰) -奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物纯品 0.218 g， 收率 92.6%。 ESI-MS: 2940.6 [M+H] ⁺ (分子量： MW. 2939.20)。

实施例 6： 双 (多西紫杉醇 -2'-丁二酰) -奥曲肽偶合物的合成

多西紫杉醇 -2'-丁二酰 -奥曲肽粗品 0.153 g (0.08 mmol)加入无水二甲 基甲酰胺 （5 ml) 。 将多西紫杉醇 -2'-丁二酸酯 （0.082 g, 0.09 mmol) 溶于 无水二氯甲垸 ( 6 ml) , 加入 PyBop (0.052 g, 0.10 mmol) , Ν,Ν-二异丙基 乙胺（0.013 g, 0.10 mmol)搅拌 10分钟后滴入上述溶液。 反应液搅拌 1小 时后减压抽去二氯甲垸， 残余物滴入冰水（60 ml) 中， 抽滤收集水中析出 的固体并用蒸馏水洗涤（x 3 )。所得固体用甲醇 -乙酸乙酯重结晶， 得双 (多 西紫杉醇 -2'-丁二酰 )-奥曲肽偶合物纯品 0.204 g， 收率 91.1%。 ESI-MS: 2800.6 [M+H] ⁺ (分子量： MW. 2799.14)。

实施例 7： 液相法合成双 (紫杉醇 -2，-二羟乙酰) -奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物 紫杉醇 -2'-二羟乙酸酯（0.214 g, 0.22 mmol)溶于无水二甲基甲酰胺或 无水二氯甲垸 ( 8 ml) , 加入 PyBop (0.156 g, 0.30 mmol) , Ν,Ν-二异丙基 乙胺 （0.039 g, 0.3 mmol) , 搅拌 10分钟后将反应液加入冷至 0 °C的奥曲 肽 -Tyr ³ (0.104 g, 0.10 mmol) 的无水二甲基甲酰胺（10 ml)溶液中。 在 0 °C搅拌 3小时后， 将反应液滴入冰水 （100 ml) 中， 抽滤收集水中析出的 固体并用蒸馏水洗涤（x 3 )。 所得固体用高效液相仪（HPLC)分离纯化后 得双 (紫杉醇 -2，-二羟乙酰) -奥曲肽 -Tyr ³ 偶合物纯品 0.196 g， 收率 66.6%。 ESI-MS: 2940.6 [M+H] ⁺ (分子量： MW. 2939.20)。

实施例 8： 液相法合成双 (多西紫杉醇 -2'-丁二酰) -奥曲肽偶合物 多西紫杉醇 -2'-丁二酸酯（0.200 g, 0.22 mmol)溶于无水二甲基甲酰胺 无水二氯甲垸 ( 8 ml) , 加入 PyBop (0.156 g, 0.30 mmol) , Ν,Ν-二异丙基 乙胺 （0.039 g, 0.3 mmol) , 搅拌 10分钟后将反应液加入冷至 0 °C的奥曲 肽 （0.102 g， 0.10 mmol) 的无水二甲基甲酰胺 （10 ml) 溶液中。 在 0 °C 搅拌 3小时后， 将反应液滴入冰水 （100 ml) 中， 抽滤收集水中析出的固 体并用蒸馏水洗涤（x 3 )。 所得固体用高效液相仪（HPLC)分离纯化后得 双 (多西紫杉醇 -2'-丁二酰 )-奥曲肽偶合物纯品 0.186 g， 收率 66.4%。 ESI-MS: 2800.6 [M+H] ⁺ (分子量： MW. 2799.14)。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发 明所作的进一歩详细说 明， 不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明 。 对于本发明所属技术 领域的普通技术人员来说， 在不脱离本发明构思的前提下， 还可以做出若 干简单推演或替换， 都应当视为属于本发明的保护范围。