Titre : Levure Saccharomyces cerevisiae et son utilisation pour améliorer la santé intestinale des animaux de compagnie.

Domaine technique

[0001] La présente demande relève du domaine de la nutrition animale et de la santé intestinale des animaux de compagnie. Elle concerne notamment une levure Saccharomyces cerevisiae pour son utilisation dans l’amélioration de la santé intestinale des animaux de compagnie.

Technique antérieure

[0002] L’utilisation de micro-organismes probiotiques, comme par exemple des levures ou des bactéries, pour le renforcement de la santé intestinale des animaux de compagnie est connue de l’art antérieur. Plusieurs documents décrivent ainsi l’encapsulation ou la microencapsulation de micro-organismes afin d’assurer notamment leur survie dans le tractus gastro-intestinal et de pouvoir ainsi exercer leur bénéfice santé. Le document JP2008013534 décrit plus particulièrement l’encapsulation de bactéries lactiques et de levure dans un polymère comprenant un mélange de xanthane et de chitosan. Le probiotique encapsulé ainsi obtenu est utilisé pour améliorer les troubles gastro-intestinaux chez les animaux de compagnie. L’article de Bruna M. Rodrigues et al. décrit une technique de micro-encapsulation par lyophilisation de souches probiotiques dans le but de maintenir la viabilité des probiotiques pendant leur stockage et d’évaluer leur résistance dans le tractus gastro-intestinal. Les résultats expérimentaux chez le chat montrent que la prise de probiotiques ou de probiotiques encapsulés (avec des fructooligosaccharides) permet de moduler le microbiote intestinal.

[0003] L’utilisation de micro-organismes probiotiques dans des produits alimentaires pour animaux de compagnie est également connue de l’art antérieur. Lorsqu’un micro-organisme ou un mélange de micro-organismes est intégré dans un produit alimentaire telle qu’une croquette enrobée par ledit micro-organisme, il est impératif que le micro-organisme survive non seulement à la phase d’enrobage autour de la croquette, mais également que ledit micro-organisme soit viable jusqu’à la date de péremption de la croquette afin qu’il soit en mesure d’exercer ses effets bénéfiques sur la santé de l’animal. Le document PCT/US2009/056292 décrit l’utilisation de probiotiques (plus particulièrement des bifidobactéries) dans un enrobage de croquettes pour animaux de compagnie. Ce document ne mentionne cependant pas une souche de levure ou une levure qui serait enrobée autour de la croquette et qui présenterait une durée de vie suffisamment longue dans ladite croquette afin d’être efficace sur la santé intestinale d’un animal de compagnie. [0004] Il subsiste à ce jour le besoin de trouver de nouveaux probiotiques qui soient efficaces pour le renforcement de la santé intestinale des animaux de compagnie et qui puissent être intégrés dans un produit alimentaire pour animaux de compagnie tout en présentant une durée de vie suffisamment longue au sein dudit produit alimentaire. Une durée de vie suffisamment longue est notamment une durée de vie allant jusqu’à la date de péremption du produit alimentaire.

[0005] De manière inattendue les Inventeurs ont mis au point une levure sèche active qui s’est révélée particulièrement efficace dans le renforcement de la santé intestinale des animaux de compagnie et qui présente en outre une durée de vie particulièrement longue lorsqu’elle est intégrée au sein d’un produit alimentaire pour animaux de compagnie. Une durée de vie particulièrement longue est une durée allant de 12 à 24 mois.

Résumé

[0006] Selon un premier aspect, la présente invention a pour objet une levure Saccharomyces cerevisiae obtenue par culture de la souche Saccharomyces cerevisiae déposée le 03 mars 2021 auprès de la CNCM sous le numéro I-5660, qui est une levure sèche active présentant les caractéristiques suivantes :

- une teneur en matières sèches supérieure à 95% en poids et pouvant aller jusqu’à 97% en poids ;

- une activité de l’eau allant de 0,1 à 0,3 ;

- une forme de sphérule ;

- une granulométrie caractérisée par une courbe gaussienne de distribution de la taille montrant qu’au moins 90% des sphérules présentent un diamètre allant de 0,3 à 0,7mm ;

- une stabilité, dans un emballage sous-vide et à une température de 15 à 25°C, allant de 24 à 36 mois.

La levure sèche active de l’invention présente en outre avantageusement une durée de vie allant de 12 à 24 mois lorsqu’elle est intégrée au sein d’une composition, ladite composition étant conservée à une température de 15 à 25°C.

Une telle composition pourra être par exemple un facteur d’appétence solide ou une croquette pour animaux de compagnie, ladite croquette comprenant par exemple ledit facteur d’appétence.

[0007] Selon un deuxième aspect, l’invention concerne la levure telle que définie ci-dessus, pour son utilisation, chez les animaux de compagnie :

- dans l’amélioration du système immunitaire intestinal,

- dans le rétablissement d’un microbiote intestinal normal,

- dans la diminution du pH fécal, - dans la diminution de la production de catabolites putréfactifs dans les fèces (tels que l’ammoniaque ou les amines biogènes).

[0008] Selon un autre aspect, l’invention a pour objet une composition pour animaux de compagnie qui comprend la levure sèche active telle que définie ci-dessus, ladite levure présentant une durée de vie allant de 12 à 24 mois au sein de ladite composition. Une telle composition pour animaux de compagnie pourra être un facteur d’appétence solide ou une croquette comprenant par exemple ledit facteur d’appétence.

[0009] L’invention concerne également une composition telle que définie ci-dessus, pour son utilisation, chez les animaux de compagnie :

- dans l’amélioration du système immunitaire intestinal,

- dans le rétablissement d’un microbiote intestinal normal,

- dans la diminution du pH fécal, et/ou

- dans la diminution de la production de catabolites putréfactifs dans les fèces (tels que l’ammoniaque et/ou les amines biogènes).

Brève description des dessins

[0010] D’autres caractéristiques, détails et avantages apparaîtront à la lecture de la description détaillée ci-après, et à l’analyse des dessins annexés.

Les figures 1 à 6 comprennent, juste au-dessus des barres juxtaposées dans les histogrammes, des lettres a et b (en caractère minuscule) et/ou des lettres A et B (en caractère majuscule). Les lettres a et b indiquent si les valeurs observées entre les deux groupes sont statistiquement différentes (p < 0,05) ou non (p > 0,1). Les lettres A et B indiquent qu’une tendance statistique est observée (p = 0,05 - 0,1).

Les lettres A et B en majuscule au-dessus des barres des histogrammes n’ont évidemment aucun rapport avec les lettres A, B, C ou D données pour différentier les différents schémas au sein d’une même figure.

Les flèches verticales dans les figures 1 à 6 symbolisent un changement brutal de régime alimentaire chez les chiens qui a lieu au jour J22, dénommé « transition alimentaire » dans ce qui suit.

La levure sèche active de l’invention est représentée par « Sc50 » dans les figures 1 à 6 ci- après.

Fig. 1

[0011] [Fig. 1] illustre les valeurs du pH fécal (voir A) et de la concentration en ammoniaque (pourcentage de matières sèches) (voir B) dans des fèces de chiens de race Beagle avant et après une transition alimentaire qui a lieu au jour 22 (J22) (comme indiqué ci-avant la transition alimentaire est signifiée par une flèche verticale). Le groupe contrôle (histogrammes noirs) a été soumis à un régime alimentaire 1 avant la transition alimentaire et à un régime alimentaire 2 après la transition alimentaire.

Le groupe « Sc50 » (histogrammes blancs) a été soumis à un régime alimentaire 1 supplémenté en levure sèche active Sc50 avant la transition alimentaire et à un régime alimentaire 2 supplémenté en levure sèche active Sc50 après la transition alimentaire.

Fig. 2

[0012] [Fig. 2] illustre la teneur en bactéries Blautia (voir A), Bifidobacterium (voir B), Lactobacillus (voir C) et en Faecalibacterium (voir D) dans des fèces de chiens de race Beagle avant et après la transition alimentaire à J22. Les groupes testés sont les mêmes que ceux décrits pour la figure 1 .

Fig. 3

[0013] [Fig. 3] illustre la teneur en E. coli dans des fèces de chiens de race Beagle avant et après la transition alimentaire à J22. Les groupes testés sont les mêmes que ceux décrits pour la figure 1 .

Fig. 4

[0014] [Fig. 4] illustre l’indice de dysbiose (voir A) du microbiote intestinal et la teneur en streptocoques (voir B) retrouvée dans les fèces des chiens de race Beagle avant et après la transition alimentaire à J22. Les groupes testés sont les mêmes que ceux décrits pour la figure 1 .

Fig. 5

[0015] [Fig. 5] illustre la teneur en immunoglobuline fécale A (IgA) retrouvée dans les fèces des chiens de race Beagle avant et après la transition alimentaire à J22. Les groupes testés sont les mêmes que ceux décrits pour la figure 1 .

Fig. 6

[0016] [Fig. 6] illustre la quantité d’amines biogènes (en mg/kg de matière sèche) présente dans les fèces des chiens de race Beagle avant et après la transition alimentaire à J22. Plus particulièrement, la figure A illustre la quantité d’amines biogènes totales, la figure B illustre la quantité de putrescine et la figure C illustre la quantité de spermidine dans les fèces des chiens de race Beagle avant et après la transition alimentaire à J22. Les groupes testés sont les mêmes que ceux décrits pour la figure 1 .

Fig. 7

[0017] [Fig. 7] illustre la stabilité de la levure sèche active Sc50 au sein de deux facteurs d’appétence différents pour chiens (voir A) et pour chats (voir B). Fig. 8

[0018] [Fig. 8] illustre différents modes de réalisations possibles pour l’enrobage d’une croquette pour chien ou chat.

Dans la figure A le noyau de la croquette est enrobé par une première couche d’enrobage (représentée en gris) constituée de matières grasses (MG) puis par une deuxième couche d’enrobage (représentée en blanc et délimitée par des traits pointillés) constituée d’un facteur d’appétence liquide.

Dans la figure B le noyau de la croquette est enrobé par une première couche d’enrobage (représentée en gris) constituée de matières grasses (MG) puis par une deuxième couche d’enrobage (représentée par des petits carrés en pointillés) constituée d’un facteur d’appétence solide mélangé avec la levure sèche active Sc50 de l’invention.

Enfin dans la figure C le noyau de la croquette est enrobé par une première couche d’enrobage (représentée en gris) constituée de matières grasses (MG), par une deuxième couche d’enrobage (représentée en blanc et délimitée par des traits pointillés) constituée d’un facteur d’appétence liquide puis par une troisième couche d’enrobage (représentée par des petits carrés en pointillés) constituée d’un facteur d’appétence solide mélangé avec la levure sèche active Sc50.

Fig. 9

[0019] [Fig. 9] illustre la stabilité de la levure sèche active Sc50 lorsque cette dernière est enrobée autour de croquettes pour chiens.

Dans la figure A le trait continu représente la stabilité de la levure dans la croquette enrobée selon le mode d’enrobage : matière grasse puis « facteur d’appétence solide + levure sèche active Sc50 » puis matière grasse puis facteur d’appétence solide. Le trait discontinu représente la stabilité de la levure dans la croquette enrobée selon le mode d’enrobage : matière grasse puis « facteur d’appétence solide + levure sèche active Sc50 ».

Dans la figure B le trait continu représentant la stabilité de la levure dans la croquette enrobée selon le mode d’enrobage : matière grasse puis « facteur d’appétence solide + levure sèche active Sc50 » puis matière grasse puis facteur d’appétence liquide. Le trait discontinu représente la stabilité de la levure dans la croquette enrobée selon le mode d’enrobage : matière grasse puis « facteur d’appétence solide + levure sèche active Sc50 » puis facteur d’appétence liquide.

Fig.10

[0020] [Fig. 10] illustre la stabilité de la levure sèche active Sc50 lorsque cette dernière est enrobée autour de croquettes pour chat. La série représentée à la figure 10 correspond à la moyenne des viabilités obtenues à chaque échéance pour les 4 modes d’enrobage suivants :

- matière grasse puis « facteur d’appétence solide + levure sèche active Sc50 » puis matière grasse puis facteur d’appétence solide ;

- matière grasse puis « facteur d’appétence solide + levure sèche active Sc50 » ;

- matière grasse puis « facteur d’appétence solide + levure sèche active Sc50 » puis matière grasse sous vide ;

- matière grasse puis « facteur d’appétence solide + levure sèche active Sc50 » puis matière grasse sous vide puis facteur d’appétence solide.

Les barres d’erreur représentent +/- 1 écart-type.

Fig.11

[0021] [Fig. 11] illustre la stabilité de deux levures sèches actives « levure 1 » et « levure 2 » enrobées autour de croquettes pour chiens. Les modes d’enrobages sont :

- matière grasse puis « facteur d’appétence solide + levure sèche active 1 » (courbe reliée par les carrés) ;

- matière grasse puis « facteur d’appétence solide + levure sèche active 1 » puis facteur d’appétence liquide (courbe reliée par les triangles) ;

- matière grasse puis « facteur d’appétence solide + levure sèche active 2 » (courbe reliée par les ronds) ;

- matière grasse puis « facteur d’appétence solide + levure sèche active 2 » puis facteur d’appétence liquide (courbe reliée par les traits verticaux).

Description détaillée

[0022] Ainsi, la présente invention concerne une levure Saccharomyces cerevisiae obtenue par culture de la souche Saccharomyces cerevisiae déposée le 03 mars 2021 auprès de la CNCM sous le numéro I-5660, qui est une levure sèche active qui présentant les caractéristiques suivantes :

- une teneur en matières sèches supérieure à 95% en poids et pouvant aller jusqu’à 97% en poids ;

- une activité de l’eau allant de 0,1 à 0,3 ;

- une forme de sphérule ;

- une granulométrie caractérisée par une courbe gaussienne de distribution de la taille montrant qu’au moins 90% des sphérules présentent un diamètre allant de 0,3 à 0,7mm ;

- une stabilité, dans un emballage sous-vide et à une température de 15 à 25°C, allant de 24 à 36 mois.

La souche Saccharomyces cerevisiae est une souche de levure. L’expression « souche de levure » désigne une population relativement homogène de cellules de levure. Une souche de levure est obtenue à partir de l’isolement d’un clone, un clone étant une population de cellules obtenue à partir d’une seule cellule de levure. La souche déposée auprès de la CNCM sous le numéro I-5660 est également identifiée sous la référence « Sc50 ». Cette souche peut notamment être désignée « souche Sc I-5660 » « souche I- 5660 » ou « souche Sc50 » dans la présente demande.

La levure Saccharomyces cerevisiae obtenue par culture de la souche I-5660 peut être désignée par « levure Sc I-5660 », « levure I-5660 » ou « levure Sc50 ».

A titre indicatif, la levure I-5660 peut être obtenue par culture de la souche I-5660 dans un milieu de culture, par exemple comme décrit dans le livre de référence « Yeast Technology, 1991 , G. Reed et T.W. Nagodawithana, ISBN 0-442-31892-8 ».

La levure I-5660 peut cependant également être obtenue par un procédé à l’échelle industrielle qui consiste à préparer une crème de levure liquide ou levure liquide qui comprend les étapes suivantes :

- culture de la souche de levure dans un milieu de culture en plusieurs stades, d’abord en semi-anaérobiose, puis en aérobiose,

- séparation par centrifugation de la levure ainsi produite de son milieu de culture, pour obtenir une crème de levure liquide ou levure liquide contenant de 12 à 25% de matière sèche, voire une quantité plus élevée de matière sèche, en particulier si la crème de levure liquide ou levure liquide est mélangée avec des produits osmolytes.

La crème de levure liquide ou levure liquide I-5660 obtenue à l’issue du procédé de culture ci-dessus décrit est ensuite soumise à un procédé de déshydratation et de séchage qui comprend les étapes suivantes :

- mélange de la crème de levure liquide ou levure liquide i-5660 avec une saumure à base de chlorure de sodium pour obtenir un volume de crème de levure comprenant une saumure à base de chlorure de sodium,

- déshydratation du volume de crème de levure comprenant une saumure à base de chlorure de sodium pour obtenir une levure déshydratée,

- extrusion de la levure déshydratée pour obtenir une levure extrudée,

- séchage de la levure extrudée de manière à obtenir une levure sèche ayant un taux de matières sèches supérieur à 95% en poids par rapport au poids total de la levure.

La levure i-5660 obtenue à l’issue de ce procédé de déshydratation et de séchage est dénommée « levure sèche active ». Elle pourra indifféremment être désignée dans la présente demande « levure sèche active Sc I-5660 », « levure sèche active I-5660 », « levure sèche active Sc50 » ou simplement « levure sèche active ».

Le terme « levure active » est synonyme de levure vivante et désigne une population de cellules de levure qui sont métaboliquement actives.

Une « levure sèche active » désigne, au sens de la présente demande, une levure active présentant un taux de matières sèches supérieur à 95% en poids pouvant aller jusqu’à 97% en poids.

Le taux de matières sèches a été évalué selon la méthode de dessication, après passage dans un four pendant 17 heures minimum à une température de 103°C.

L’activité de l’eau a été évaluée selon la technique du point de rosée à miroir refroidi à 25°C, à l’aide d’un instrument AquaLab série 3TE (« Decagon Devices, Pullman, WA, USA »). Il s’agit d’une mesure primaire de l’humidité relative.

La levure sèche active se présente sous la forme de sphérules qui présentent une surface de très faible porosité et une structure interne très densifiée, ce qui confère entre autres auxdites sphérules un effet barrière à l’humidité.

Ces sphérules présentent une granulométrie caractérisée par une courbe gaussienne de distribution de la taille montrant qu’au moins 90% des sphérules présentent un diamètre allant de 0,3 à 0,7mm.

La granulométrie a été évaluée par voie sèche à l’aide d’un granulomètre laser, par une méthode par diffraction laser. La distribution granulométrique de la taille des sphérules a été déterminée à l’aide de la norme ISO 13320 :2020.

Avantageusement selon l’invention, la levure sèche active Sc50 présente, dans un emballage sous-vide et à une température de 15 à 25°C, une stabilité allant de 24 à 36 mois.

La stabilité de la levure sèche active de l’invention est directement reliée à son taux de viabilité, c’est-à-dire au nombre de cellules viables que contient la levure sèche active. Un moyen de mesurer la viabilité des cellules de la levure est de compter le nombre de cellules revivifiables (en UFC/g ou en log UFC/g). Les « cellules revivifiables » sont des cellules viables, capables de se multiplier et capables de former des colonies. Le terme UFC signifie « unité formant colonie ». Un UFC correspond à une colonie. La viabilité des cellules a été mesurée selon la méthode normalisée EN15789.

Au sens de la présente demande, une levure sèche active stable sur une période allant de 24 à 36 mois signifie que son nombre de cellules vivantes et métaboliquement actives (UFC/g) ne diminue pas de plus d’un log UFC/g sur ladite période de 24 à 36 mois. Cela signifie par exemple que si la levure sèche active présente un nombre de cellules vivantes et métaboliquement actives de 1x10 ¹⁰ UFC/g (équivalent à 10 log UFC/g) au temps tO (tO étant le moment d’obtention de la levure sèche active, à savoir le moment où la levure sèche active vient d’être préparée) alors la levure présentera à l’issue d’une période de 24 à 36 mois un nombre de cellules vivantes et métaboliquement actives qui ne sera pas inférieur 1x10 ⁹ UFC/g (équivalent à 9 log UFC/g).

La stabilité de 24 à 36 mois de la levure sèche active objet de l’invention est vérifiée lorsque ladite levure est stockée dans un emballage sous-vide et à une température allant de 15 à 25°C.

Ainsi, au sens de la présente demande, la stabilité de la levure sèche active sur une période allant de 24 à 36 mois signifie que la levure sèche active présente une durée de vie allant de 24 à 36 mois selon les critères indiqués ci-dessus (seuil de perte de viabilité inférieur ou égal à 1 log UFC/g). Cette durée de vie/stabilité est extrêmement avantageuse puisque de cette manière la levure sèche active conserve ses propriétés, à savoir notamment améliorer la santé intestinale des animaux de compagnie.

Ainsi, la levure sèche active Sc50 est encore caractérisée en ce qu’elle présente, dans un emballage sous-vide et à une température de 15 à 25°C, une durée de vie allant de 24 à 36 mois.

[0023] Les Inventeurs ont pu déterminer que les caractéristiques physico-chimiques de la levure sèche active de l’invention, à savoir la teneur en matières sèches, l’activité de l’eau, la forme de sphérule ou encore la granulométrie, étaient importantes quant à la durée de vie présentée par la levure, notamment lorsque cette dernière est intégrée dans une composition pour animaux de compagnie telle qu’une croquette. Ils ont également pu déterminer que ces caractéristiques étaient importantes pour une bonne adhésion de la levure aux croquettes.

En effet, ils ont pu observer que si la levure sèche active présentait une teneur en matières sèches inférieure à 95%, à savoir par exemple 94 ou 93%, alors la durée de vie de ladite levure au sein d’une composition telle qu’une croquette pour animaux de compagnie n’excédait pas 8 mois, voire même 5 mois.

Les Inventeurs ont également constaté que lorsque la levure de l’invention se présente sous forme de sphérules d’un diamètre allant de 0,3 à 0,7 mm cela permettait une bonne adhésion de la levure autour d’une composition telle qu’une croquette pour animaux de compagnie. En effet lorsque les sphérules de la levure ont un diamètre inférieur à 0,3 mm ou supérieur à 0,7 mm alors l’adhésion de la levure est moins bonne. L’adhésion de la levure autour de la croquette est notamment caractérisée par le pourcentage de « fines » générées après un test de durabilité/friabilité. On entend par « fines » la matière qui s’est détachée de la croquette enrobée et qui est passée au travers des mailles d’un tamis dont la taille de maille est préalablement ajustée.

[0024] L’invention a également pour objet la levure sèche active Sc50 telle que ci-dessus définie pour son utilisation :

- dans l’amélioration du système immunitaire intestinal chez les animaux de compagnie,

- dans le rétablissement d’un microbiote intestinal normal chez les animaux de compagnie,

- dans la diminution du pH fécal chez les animaux de compagnie, et/ou

- dans la diminution de la production de catabolites putréfactifs dans les fèces des animaux de compagnie.

Les animaux de compagnie désignent des animaux domestiques comme notamment des chiens, chats, lapins, oiseaux, hamsters etc. A titre d’exemples plus particuliers d’animaux de compagnie on pourra citer les chiens et les chats.

Chez l’homme comme chez l’animal de compagnie, un grand nombre des cellules immunitaires se situent dans l’intestin, ce qui illustre bien l’importance du système immunitaire intestinal. Le tube digestif est en permanence agressé par une multitude d’antigènes et de pathogènes, c’est pourquoi celui-ci dispose d’un système immunitaire complexe et très développé.

Selon un mode de réalisation avantageux de l’invention, l’administration de la levure sèche active Sc50 chez les animaux de compagnie permet d’augmenter de façon significative la production des immunoglobulines A fécales.

L’augmentation significative de la production des immunoglobines A fécales permet ainsi d’améliorer le système immunitaire intestinal chez les animaux de compagnie.

Le microbiote intestinal, qui désigne l’ensemble des micro-organismes qui vivent dans le tube digestif, joue un rôle essentiel dans le maintien de la bonne santé intestinale. Il participe d’ailleurs pleinement au fonctionnement du système immunitaire intestinal.

La dysbiose est une modification de la composition et/ou de la diversité microbienne du tube digestif. Elle peut entraîner une surpopulation de bactéries pathogènes, une réaction inflammatoire aiguë ainsi que des diarrhées. Toute altération de l’environnement intestinal peut provoquer un changement dans le microbiote et donc causer une dysbiose. L’indice de dysbiose du microbiote propose notamment un aperçu de la santé intestinale globale et établit généralement la présence ou non d’une dysbiose. Les Inventeurs ont analysé l’indice de dysbiose suivant une méthodologie de PCR (polymerase-chain-reaction) quantitative publiée dans le journal FEMS Microbiology Ecology (AlShawaqfeh et al., 2017). On parle de dysbiose du microbiote fécal lorsque l’indice de dysbiose est supérieur à 2. Un indice de dysbiose allant de 0 à 2 indique une altération modérée dans le microbiote fécal. On parle de microbiote normal quand l’indice de dysbiose est négatif. Ainsi, une amélioration de l’indice de dysbiose signifie une diminution statistiquement significative de l’indice de dysbiose.

Un microbiote intestinal « normal » est un microbiote sain, ne présentant pas de modification de la composition et/ou de la diversité microbienne du tube digestif.

L’administration de la levure sèche active Sc50 chez les animaux de compagnie présentant un microbiote intestinal altéré permet de rétablir un microbiote intestinal normal. En effet, selon un mode de réalisation avantageux de l’invention, l’administration de la levure sèche active Sc50 chez les animaux de compagnie présentant un microbiote intestinal altéré permet : - une diminution significative de la teneur en streptocoques fécaux et de Escherichia Coli fécal,

- un effet significatif sur l’amélioration de l’indice de dysbiose, et/ou

- une augmentation significative de la teneur des bactéries Blautia, Bifidobacterium, Lactobacillus et Faecalibacterium.

Les bactéries Blautia, Bifidobacterium, Lactobacillus et Faecalibacterium sont des bactéries bénéfiques au maintien de la bonne santé intestinale.

Ainsi, la diminution de la teneur des streptocoques fécaux et de E. coli, l’amélioration de l’indice de dysbiose et/ou l’augmentation de la teneur des bactéries susmentionnées permet de rétablir un microbiote intestinal normal chez les animaux de compagnie.

Selon un autre mode de réalisation avantageux de l’invention, l’administration de la levure sèche active Sc50 chez les animaux de compagnie permet de diminuer le pH fécal.

Le pH fécal peut être considéré comme un marqueur de l’activité fermentative du microbiote intestinal, avec un pH important associé au métabolisme protéolytique. Ainsi, la diminution du pH fécal permet de contribuer au maintien de la fonction intestinale par inhibition de la prolifération de bactéries potentiellement pathogéniques. Dans la publication de Lin et Visek il est reporté que la diminution du pH fécal chez le rat est corrélée à une diminution des cellules prolifératrices dans la muqueuse du colon.

Selon encore un autre mode de réalisation avantageux, l’administration de la levure sèche active Sc50 de l’invention permet de diminuer la production de catabolites putréfactifs dans les fèces des animaux de compagnie, ce qui représente un bénéfice pour leur santé intestinale. A titre d’exemple de « catabolites putréfactifs » on pourra citer l’ammoniaque, les amines biogènes telles que la spermidine et la putrescine.

Dans la publication de Celi et al. il est notamment décrit qu’une production excessive d’ammoniaque est associée à une activité fermentaire excessive des bactéries du microbiote intestinal. Il est également décrit que l’ammoniaque peut avoir des effets toxiques sur les entérocytes.

Quant aux amines biogènes, une concentration trop importante de ces dernières dans les fèces des animaux de compagnie peut être délétère pour la muqueuse intestinale et favoriser la survie de bactéries potentiellement pathogéniques.

Ainsi, la diminution du pH fécal, la diminution de la production de catabolites putréfactifs (tels que l’ammoniaque et/ou les amines biogènes) permet avantageusement d’améliorer les caractéristiques fécales des animaux de compagnie et de contribuer à améliorer la santé intestinale des animaux de compagnie.

Outre les bénéfices sur la santé, la réduction des catabolites putréfactifs dans les fèces des animaux de compagnie permet également de contribuer à la réduction des mauvaises odeurs de leurs selles, ce qui représente un avantage non négligeable étant donné que les mauvaises odeurs des selles constituent une réelle nuisance pour les propriétaires des animaux de compagnie.

[0025] Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l’invention, la levure sèche active Sc50, pour une des utilisations telles que ci-dessus définie, est utilisée à une dose quotidienne allant de 1x10 ⁸ à 1 ,5x10 ⁸ UFC/animal.

[0026] L’invention a encore pour objet un probiotique ou complément alimentaire pour animaux de compagnie, caractérisé en ce qu’il comprend la levure sèche active Sc50.

Les termes « probiotique » et « complément alimentaire » employés ci-dessus signifient que la levure sèche active Sc50 joue le rôle d’un probiotique ou d’un complément alimentaire. La levure sèche active de l’invention peut encore être appelée « levure probiotique ».

En 2001 , les probiotiques ont été définis par l’OMS (Organisation Mondiale de la Santé) comme des « micro-organismes vivants qui, lorsqu’ils sont ingérés en quantité suffisante, exercent des effets positifs sur la santé, au-delà des effets nutritionnels traditionnels ».

D’après la définition donnée par la Directive 2002/46/CE du Parlement européen « les compléments alimentaires sont des denrées alimentaires dont le but est de compléter le régime alimentaire normal et qui constituent une source concentrée de nutriments ou d’autres substances ayant un effet nutritionnel ou physiologique seuls ou combinés, commercialisés sous forme de doses ».

Le probiotique ou le complément alimentaire de l’invention comprend au moins 95% en poids de la levure sèche active Sc50, et de préférence de 96 à 99% en poids. Les autres ingrédients constituant le probiotique ou le complément alimentaire pourront par exemple être de l’amidon, mais également des vitamines, des minéraux alimentaires, des oligoéléments et/ou des enzymes alimentaires.

Selon un mode de réalisation de l’invention, le probiotique ou complément alimentaire pourra se trouver sous une forme adaptée pour une administration par voie orale, comme par exemple des comprimés, des gélules, des granules, des poudres etc.

L’administration du probiotique ou complément alimentaire de l’invention pourra se faire en dehors des repas ou au contraire au moment des repas des animaux de compagnie. Dans ce dernier cas le probiotique ou complément alimentaire pourra par exemple être mélangé avec le repas de l’animal.

Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l’invention, le probiotique ou complément alimentaire est administré en une quantité allant de 9 à 900 mg/jour/animal Selon encore un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation du probiotique ou complément alimentaire tel que ci-dessus défini, dans un aliment pour animaux de compagnie, ledit aliment étant de préférence une croquette pour chiens ou chats.

[0027] La levure sèche active Sc50 de l’invention présente l’avantage de pouvoir être facilement dispersée dans un ingrédient alimentaire, comme par exemple un facteur d’appétence destiné à être intégré dans des produits alimentaires pour animaux de compagnie. En effet, la levure sèche active, lorsqu’elle est mélangée à un ingrédient alimentaire, ne produit pas d’effet de décantation ou d’agglomération au cours du temps, et présente avantageusement une viabilité allant de 12 à 24 mois au sein dudit ingrédient alimentaire. Selon un autre mode de réalisation avantageux, l’invention a pour objet l’utilisation de la levure sèche active Sc50 dans un facteur d’appétence solide pour animaux de compagnie.

Le facteur d’appétence se trouve par exemple sous la forme d’une poudre et a pour objectif d’accroître l’attractivité des animaux de compagnie pour les aliments qui leur sont destinés. L’ajout d’un facteur d’appétence dans un aliment permet d’augmenter de manière significative la consommation de cet aliment par l’animal de compagnie. Les facteurs d’appétence peuvent être considérés comme des arômes ou autres facteurs de goût.

A titre d’exemples de facteurs d’appétence on pourra citer des viscères de volaille (poulet ou dinde par exemple), des foies de porc ou de volaille ou encore des matières grasses (beurre ou fromage par exemple).

[0028] L’invention a encore pour objet une composition pour animaux de compagnie, caractérisée en ce qu’elle comprend une levure sèche active telle que définie ci-dessus, ladite levure présentant une durée de vie allant de 12 à 24 mois au sein de ladite composition. Une telle composition pourra être un facteur d’appétence solide destiné à être intégré dans des aliments pour animaux de compagnie, ou pourra être un aliment pour animaux de compagnie, comme par exemple une croquette.

Les conditions de durée de vie de 12 à 24 mois de la levure sèche active au sein de la composition sont observées lorsque la composition est conservée à une température allant de 15 à 25°C.

[0029] Selon un autre mode de réalisation avantageux de l’invention, la composition telle que définie ci-dessus est plus particulièrement caractérisée en ce qu’il s’agit d’un facteur d’appétence solide et en ce que la levure de l’invention est intégrée dans ledit facteur d’appétence.Selon encore un mode de réalisation avantageux de l’invention, le facteur d’appétence présente une teneur en eau inférieure à 10 %.

La durée de vie de 12 à 24 mois de la levure sèche active au sein du facteur d’appétence signifie qu’elle présente un seuil de perte de viabilité inférieur ou égal à 1 log UFC/g sur une période allant de 12 à 24 mois, et de préférence un seuil de perte de viabilité allant de 0,1 log UFC/g à 0,8 log UFC/g sur une période allant de 12 à 24 mois. Cela signifie par exemple que si la levure sèche active vivante est présente en une quantité de 1x10 ⁷ UFC/g de facteur d’appétence, immédiatement après l’avoir mélangé audit facteur d’appétence (appelé temps TO), alors à l’issue d’une période allant de 12 à 24 mois à compter du temps TO (TO étant le moment où la levure sèche active vivante est mélangée au facteur d’appétence), la quantité de levure sèche active vivante n’est pas inférieure à 1x10 ⁶ UFC/g de facteur d’appétence.

Cette durée de vie est extrêmement avantageuse puisque de cette manière la levure sèche active Sc50 conserve ses propriétés biologiques lorsqu’elle est utilisée en association avec un facteur d’appétence (à savoir améliorer la santé intestinale des animaux de compagnie). Selon encore un autre mode de réalisation de l’invention, le poids de la levure sèche active dans le facteur d’appétence solide varie de 1 à 40 %, et plus particulièrement de 2 à 35 % par rapport au poids total du facteur d’appétence.

[0030] La présente invention a également pour objet l’utilisation de la levure sèche active Sc50 telle que définie ci-dessus ou d’un facteur d’appétence solide tel que défini ci-dessus, dans un aliment pour animaux de compagnie, ledit aliment étant de préférence une croquette.

On entend par « aliment pour animaux de compagnie », un produit alimentaire ou une composition alimentaire destiné(e) à être ingéré(e) par un animal de compagnie, comme par exemple un chien ou un chat. A titre d’exemple d’un tel aliment on pourra citer une croquette pour les animaux de compagnie, et plus particulièrement une croquette pour chiens ou chats.

[0031] Selon un mode de réalisation de l’invention, la levure sèche active Sc50 ou le facteur d’appétence solide est intégré(e) au sein de l’aliment ou alors est déposé(e) par enrobage autour de l’aliment.

L’intégration de la levure sèche active ou du facteur d’appétence au sein de l’aliment signifie par exemple que la levure ou le facteur d’appétence peut être mélangé(e) directement au sein de l’aliment lors de sa fabrication de sorte que l’aliment comprenne ladite levure ou ledit facteur d’appétence dans sa composition même. Cependant cela peut aussi signifier que la levure ou le facteur d’appétence est mélangé(e) à l’aliment au moment de la prise de repas de l’animal.

Lorsque la levure est intégrée au sein de l’aliment au moment de la fabrication de l’aliment, alors il s’agira de préférence de la levure sèche active en tant que telle.

Lorsque la levure est mélangée à l’aliment au moment de la prise de repas de l’animal, alors ladite levure se trouve de préférence sous la forme d’un probiotique ou d’un complément alimentaire. Selon un mode de réalisation préféré, la levure sèche active ou le facteur d’appétence est déposé(e) par enrobage autour de l’aliment, ledit aliment étant par exemple une croquette pour chiens ou chats.

Les tests de viabilité de la levure sèche active, lorsque cette dernière est enrobée autour de la croquette, ont avantageusement montré que ladite levure présentait une durée de vie/stabilité allant de 12 à 24 mois. Ces résultats sont particulièrement intéressants et prometteurs car ils représentent une durée de vie extrêmement avantageuse. La stabilité de la levure sèche active de l’invention est directement reliée à son taux de viabilité à la fin de la période d’utilisation de la croquette.

La stabilité de la levure sèche active de l’invention, lorsqu’elle est utilisée dans un aliment, dans un facteur d’appétence, dans un probiotique ou dans un complément alimentaire, est définie au regard de son seuil de perte de viabilité dans ledit aliment, facteur d’appétence, probiotique ou complément alimentaire.

Plus particulièrement, la stabilité de la levure de l’invention, dans un aliment, un facteur d’appétence, un probiotique ou un complément alimentaire, sur une période allant de 12 à 24 mois, signifie qu’elle présente un seuil de perte de viabilité inférieur ou égal à 1 log UFC/g sur une période allant de 12 à 24 mois, et de préférence un seuil de perte de viabilité allant de 0,1 à 0,8 log UFC/g sur une période allant de 12 à 24 mois. Cela signifie par exemple que si la levure sèche active vivante est présente en une quantité de 1x10 ⁷ UFC/g d’aliment, de facteur d’appétence, de probiotique ou de complément alimentaire, immédiatement après que ladite levure ait été incorporée dans ledit aliment, facteur d’appétence, probiotique ou complément alimentaire (appelé temps TO), alors à l’issue d’une période allant de 12 à 24 mois à compter du temps TO (TO = moment où la levure sèche active est incorporée dans l’aliment, facteur d’appétence, probiotique ou complément alimentaire), la quantité de levure sèche active vivante n’est pas inférieure à 1x10 ⁶ UFC/g d’aliment, de facteur d’appétence, de probiotique ou de complément alimentaire.

Cette durée de vie est extrêmement avantageuse puisque de cette manière la levure sèche active Sc50 conserve ses propriétés biologiques lorsqu’elle est intégrée au sein d’un aliment, facteur d’appétence, probiotique ou complément alimentaire (à savoir améliorer la santé intestinale des animaux de compagnie).

Ces conditions de durée de vie de la levure sèche active sont observées lorsque l’aliment, le facteur d’appétence, le probiotique ou le complément alimentaire est conservé à une température allant de 15 à 25°C.

[0032] Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux, l’invention a pour objet un aliment pour animaux de compagnie, caractérisé en ce qu’il comprend une levure sèche active telle que définie ci-dessus ou un facteur d’appétence tel que défini ci-dessus, ladite levure présentant une durée de vie allant de 12 à 24 mois au sein dudit aliment.

Un autre objet de l’invention réside dans un probiotique ou complément alimentaire tel que ci-dessus défini, qui est encore caractérisé en ce qu’il comprend une levure sèche active telle que définie ci-dessus, présentant une durée de vie allant de 12 à 24 mois.

La durée de vie de la levure sèche active au sein dudit aliment, probiotique ou complément alimentaire est telle que définie précédemment (i.e. un seuil de perte de viabilité inférieur ou égal à 1 log UFC/g, et de préférence allant de 0,1 à 0,8 log UFC/g sur une période allant de 12 à 24 mois).

La variabilité de la durée de vie de la levure sèche active dans l’aliment pour animaux de compagnie dépend notamment de l’activité de l’eau dudit aliment.

Ainsi la levure sèche active Sc50 de l’invention présente une durée de vie :

- de 12 mois lorsqu’elle est présente dans un aliment présentant une activité de l’eau forte, à savoir supérieure à 0,5 ;

- de 24 mois lorsqu’elle est présente dans un aliment présentant une activité de l’eau faible, à savoir inférieure à 0,5, et de préférence inférieure à 0,4.

Selon encore un autre mode de réalisation de l’invention, la levure Sc50 est administrée en une quantité allant de 5x10 ⁵ à 5x10 ⁹ UFC/g d’aliment.

[0033] Selon encore un autre mode de réalisation avantageux, la composition de l’invention telle que définie ci-dessus est plus particulièrement caractérisée en ce la levure de l’invention est enrobée autour de ladite composition. A titre d’exemple la levure est plus particulièrement comprise dans une couche d’enrobage qui enrobe ladite composition.

Une telle composition pourra par exemple être un aliment telle qu’une croquette comprenant une couche d’enrobage, ladite couche d’enrobage comprenant la levure de l’invention ou le facteur d’appétence tel que défini ci-dessus.

Classiquement une croquette ou croquette enrobée pour animaux de compagnie est constituée d’un cœur ou noyau, ledit cœur ou noyau étant enrobé par au moins une couche d’enrobage. La croquette de l’invention désigne plus particulièrement une croquette enrobée. Les termes « croquette »/« croquette enrobée » ainsi que les termes « cœur »/ « noyau peuvent être employés indifféremment dans ce qui suit.

La couche d’enrobage peut couvrir toute la surface du noyau ou seulement une partie de la surface du noyau. Selon un mode de réalisation préféré de l’invention la couche d’enrobage couvre l’ensemble de la surface du noyau.

Selon un mode de réalisation avantageux de l’invention, les pourcentages en poids, par rapport au poids total de la croquette, varient de :

- 50 à 97% pour le noyau, de préférence de 80 à 95%,

- 3 à 50% pour la couche d’enrobage, de préférence de 5 à 20%. A cet égard la composition de l’invention telle que définie ci-dessus est plus particulièrement caractérisée en ce que la couche d’enrobage est présente en une quantité en poids allant de 3 à 50%, et de préférence de 5 à 20% par rapport au poids total de la composition. Ladite composition est par exemple une croquette.

Le noyau de la croquette présente une teneur en eau inférieure à 10%.

Le noyau de la croquette peut par exemple comprendre des protéines d’origine animale ou végétale, des carbohydrates, des matières grasses d’origine animale ou végétale, des minéraux, des vitamines etc.

Selon un mode de réalisation avantageux, la couche d’enrobage de la composition de l’invention comprend en outre , une matière grasse.

A titre d’exemple, une croquette de l’invention pourra être constituée d’un noyau, d’une première couche d’enrobage constituée d’une matière grasse et d’une deuxième couche d’enrobage comprenant un facteur d’appétence solide, ledit facteur d’appétence comprenant la levure sèche active de l’invention.

Toujours à titre d’exemple, la croquette pourra être constituée d’un noyau et d’une couche d’enrobage comprenant une matière grasse et la levure sèche active Sc50 ou un facteur d’appétence comprenant la levure sèche active.

[0034] L’invention a également pour objet une composition telle que ci-dessus définie, pour son utilisation :

- dans l’amélioration du système immunitaire intestinal chez les animaux de compagnie,

- dans le rétablissement d’un microbiote intestinal normal chez les animaux de compagnie,

- dans la diminution du pH fécal chez les animaux de compagnie, et/ou

- dans la diminution de la production de catabolites putréfactifs dans les fèces des animaux de compagnie.

Les effets de la levure sèche active Sc50 sur la santé intestinale des animaux de compagnie décrits ci-avant sont applicables intégralement aux compositions de l’invention qui comprennent la levure sèche active Sc50. Cela est notamment dû au fait que la levure sèche active de l’invention présente une excellente stabilité/durée de vie au sein de la composition de l’invention(allant de 12 à 24 mois), ce qui signifie que ladite levure sèche active ne présente aucune perte d’activité et qu’elle est donc apte à exercer ses bénéfices sur la santé intestinale des animaux de compagnie au même titre que si la levure Sc50 est utilisée seule (sans être incorporée dans une composition telle qu’un facteur d’appétence ou une croquette).

Exemple 1 : étude de l’efficacité de la levure sèche active Sc50 sur la santé intestinale

[0035] L'objectif de cet exemple, qui fait référence aux figures 1 à 6, est d'évaluer l'effet d'une supplémentation alimentaire quotidienne en levure sèche active Sc50 chez des chiens adultes en bonne santé sur leur santé intestinale après une transition alimentaire brutale. On entend par « transition alimentaire brutale » un changement brutal de régime alimentaire.

[0036] Protocole des études réalisées

L’étude a été menée sur quarante chiens de race Beagle adultes en bonne santé (vingt mâles et vingt femelles), de poids moyen corporel allant de 10 à 15 kg.

L’étude a été répétée deux fois et été approuvée par le Comité d'éthique de l'utilisation des animaux.

Deux groupes différents sont étudiés : avec ou sans supplémentation en levure sèche active Sc50. La levure sèche active Sc50 (comprenant 1x10 ¹⁰ UFC de cellules vivantes et métaboliquement actives par gramme de levure sèche active) est administrée à une dose de 150 mg par jour et par chien.

L’étude est effectuée en deux temps :

- une phase 1 qui dure 3 semaines (du jour 1 au jour 21 (J1 à J21 )) et,

- une phase 2 qui dure 4 semaines (du jour 22 au jour 49 (J22 à J49)).

Au jour 1 de la phase 2, à savoir au jour 22 (J22) les chiens subissent un changement brutal de régime alimentaire (appelé « transition alimentaire » dans ce qui suit et représenté par la flèche verticale dans les figures 1 à 6).

La phase 1 se déroule donc avant la transition alimentaire et la phase 2 démarre le premier jour de la transition alimentaire, à J22.

Phase 1 :

- groupe A : groupe contrôle recevant le régime alimentaire 1 (représenté par « Contrôle » dans les figures 1 à 6),

- groupe B : groupe recevant le régime alimentaire 1 supplémenté en levure sèche active Sc50 (représenté par « Sc50 » dans les figures 1 à 6).

Le régime alimentaire 1 consiste en un aliment standard et équilibré pour un chien, qui présente une teneur faible en fibres, à savoir de l’ordre de 1 à 3%.

Phase 2 :

- groupe A : groupe contrôle recevant le régime alimentaire 2 (représenté par « Contrôle » dans les figures 1 à 6),

- groupe B : groupe recevant le régime alimentaire 2 supplémenté en levure sèche active Sc50 (représenté par « Sc50 » dans les figures 1 à 6).

Le régime alimentaire 2 consiste en un aliment présentant une teneur élevée en fibres, à savoir de l’ordre de 12 à 13%.

La transition brutale d’un régime bas en fibres à un régime haut en fibres est effectuée pour créer une dysbiose intestinale. [0037] Paramètres évalués

1/ Des échantillons de fèces ont été collectés pour l'analyse du pH fécal (figure 1 , A) et de la concentration en ammoniaque fécal (figure 1 , B).

Le pH fécal a été mesuré directement sur des échantillons de matières fécales fraîches à l’aide d’un pH mètre digital. La concentration en ammoniaque fécale ([N]) (gr/kg) a été déterminée selon la méthode décrite par Brito et al., 2010 et a plus particulièrement été calculée en appliquant le facteur de correction 0,9875 selon la formule ci-dessous :

[Math. 1]

2J La population bactérienne présente dans le microbiote intestinal (figure 2, A, B, C, D, figure 3 et figure 4, B) ainsi que l’indice de dysbiose (figure 4, A) ont également été analysés suivant une méthodologie de PCR (polymerase-chain-reaction) quantitative publiée dans le journal FEMS Microbiology Ecology (AlShawaqfeh et al., 2017).

La population bactérienne est exprimée en logarithme de l’ADN.

L’indice de dysbiose permet d’analyser le microbiote fécal, et plus particulièrement de quantifier les bactéries suivantes : Faecalibacterium, Fusobacterium, Clostridium hiranonis, Blautia, Streptocoque, Escherichia coli et Turicibacter. Ces bactéries ont en effet été identifiées dans la littérature comme étant altérées dans certaines pathologies digestives (par exemple les entéropathies chroniques) et/ou en réponse à un traitement antibiotique. L’indice de dysbiose permet d’évaluer des intervalles de référence de ces bactéries ainsi que des valeurs exprimant l’étendue de la dysbiose intestinale. Ainsi, on parle de dysbiose du microbiote fécal lorsque l’indice de dysbiose est supérieur à 2. Un indice de dysbiose allant de 0 à 2 indique une altération modérée dans le microbiote fécale. On parle de microbiote normal quand l’indice de dysbiose est négatif.

[0038] Résultats obtenus

La levure sèche active de l’invention Sc50 a été bien acceptée et tolérée par les chiens dans les deux études. Aucun épisode de refus de nourriture, de vomissement, de diarrhée et aucune perte de poids n'ont été observés tout au long de l'étude, même pendant la transition alimentaire. Des résultats encourageants et comparables ont été rapportés et sont résumés ci-après.

[0039] Effets de la levure sèche active Sc50 sur la production fermentaire (figure 1)

Une diminution significative du pH fécal (figure 1 , A) à J35 et J49 et de l'ammoniaque fécal (figure 1 , B) à J23, J35 et J49 a été observée après la transition alimentaire. [0040] Effet de la levure sèche active Sc50 sur le microbiote intestinal (figure 2, figure 3, figure 4, B) et l'indice de dvsbiose (figure 4, A)

Une augmentation significative de la teneur en Blautia (J49) (figure 2, A), Bifidobacterium (J21 et J49) (figure 2, B), Lactobacillus (J21 et J49) (figure 2, C) et Faecalibacterium (J49) (figure 2, D) a été observée après la transition alimentaire dans les fèces des chiens.

Une diminution significative du contenu fécal en streptocoques -(J35) (figure 4, B) a été observée après la transition alimentaire. Une diminution significative du contenu fécal en Escherichia Coli après la transition alimentaire (J49) ainsi qu’une tendance à la diminution avant la transition alimentaire (J21) (figure 3) a également été observée.

De même, une amélioration de l'indice de dysbiose avant et après la transition alimentaire a été observée dans le microbiote intestinal des chiens (J21 , J23 et J35). En effet il ressort de la figure 4, A une diminution statistiquement significative de l’indice de dysbiose. L’indice de dysbiose permet en effet d’évaluer comment le microbiote intestinal se normalise en réponse à un changement de traitement, en l’occurrence la transition alimentaire rapide d’un régime 1 à un régime 2.

[0041 ] Effet de la levure sèche active Sc50 sur la production d’immunoglobuline A fécale

Il ressort de la figure 5 que l’administration de la levure sèche active Sc50 entraîne une augmentation significative de la production d’IgA dans les fèces des chiens avant (J21) et après (J35) la transition alimentaire.

[0042] Effet de la levure sèche active Sc50 sur la production d’amines biogènes (figure 6) Une diminution significative de la production d'amines biogènes totales avant (J21) et après la transition alimentaire (J49) a été observée chez les chiens. Plus particulièrement une diminution significative de la spermidine a été observée après la transition alimentaire (J49) ainsi qu’une diminution significative de la putrescine avant la transition alimentaire (J21) et une tendance à la diminution après la transition alimentaire (J49) chez les chiens.

[0043] Conclusions

La supplémentation en levure sèche active Sc50 dans le régime alimentaire de chiens en bonne santé soumis à une transition alimentaire brutale contribue à : a) L'amélioration des caractéristiques fécales des chiens testés grâce à la diminution du pH fécal et de la production de catabolites putréfactifs. En effet, la diminution de la concentration en ammoniaque fécal a été signalée comme limitant la réplication de microorganismes pathogènes dans l'intestin. De plus, la diminution des amines biogènes contribue à une réduction de l'odeur fécale, ce qui est une caractéristique commerciale importante compte tenu de la relation étroite entre les chiens et leurs propriétaires. b) L’amélioration de l'immunité locale par une augmentation de la production d'IgA fécale qui contribue à une plus grande résistance locale à l'invasion d'antigènes et peut limiter l'absorption d'antigènes protéiques et la neutralisation des virus. c) La modulation de la composition et de l'activité du microbiote intestinal, par exemple par une diminution des bactéries comme les streptocoques et Escherichia Coli, qui sont décrits dans la littérature comme étant associés à des processus inflammatoires dans certaines pathologies digestives et augmentation des bactéries bénéfiques du microbiote intestinal. De plus, la supplémentation en levure sèche active Sc50 a permis d’améliorer l'indice de dysbiose.

Exemple 2 : étude de la stabilité de la levure sèche active Sc50 dans des aliments pour chiens et chats

[0044] L'objectif de cet exemple, qui fait référence aux figures 7 à 10, est d'évaluer la stabilité de la levure sèche active Sc50 :

- au sein de deux facteurs d’appétence solides pour chien ou pour chat,

- au sein d’une croquette pour chien ou pour chat, à savoir en enrobage autour du noyau de la croquette.

[0045] Mélange de la levure sèche active Sc50 de l’invention avec des facteurs d’appétence sous forme de poudre pour chien ou pour chat

La levure sèche active Sc50 est incorporée à 5% respectivement dans des facteurs d’appétence sous forme de poudre pour chien ou pour chat, lesdits facteurs d’appétence étant composés de co-produits de porc et volaille, protéines d’origine végétale, carbohydrates et minéraux. Les facteurs d’appétence poudre se distinguent par des activités à l’eau différente, à savoir :

- une activité à l’eau de 0,32 ou de 0,38 pour les 2 facteurs d’appétence pour chiens,

- une activité à l’eau de 0,30 ou de 0,35 pour les 2 facteurs d’appétence pour chats.

Le mélange « facteur d’appétence + levure sèche active Sc50 » est effectué dans un mélangeur commercialisé sous la dénomination Forberg (mélangeur à double arbre à pâles) en introduisant d’abord la totalité du facteur d’appétence poudre dans le mélangeur, puis la levure sèche active Sc50. Le mélange est ensuite lancé pendant 5 min à une vitesse de 50Hz.

[0046] Etude de la stabilité de la levure sèche active Sc50 au sein du facteur d’appétence Le facteur d’appétence additionné de la levure sèche active Sc50 est ensuite conditionné dans des sachets plastiques (pour les facteurs d’appétence pour chiens) ou dans des sachets aluminium (pour des facteurs d’appétence pour chats) et est stocké à température ambiante (20°C +/- 5°C).

La mesure de la viabilité de la levure sèche active Sc50 est réalisée à différentes échéances (au moins 4) sur la totalité de la durée de l’étude, à savoir de 0 à 12 mois. Le marqueur de stabilité suivi pendant le stockage de la levure sèche active Sc50 est le taux de cellules de levures revivifiables, ledit taux étant mesuré selon la méthode normalisée NF EN 15789. Les résultats de viabilité de la levure sèche active Sc50 au sein des divers facteurs d’appétence sont représentés à la figure 7.

Plus particulièrement, la figure 7 A illustre la stabilité de la levure sèche active Sc50 dans deux facteurs d’appétence pour chiens, le trait continu représentant la stabilité dans le facteur d’appétence ayant une activité à l’eau de 0,32 et le trait discontinu représentant la stabilité dans le facteur d’appétence ayant une activité à l’eau de 0,38.

La figure 7 B illustre la stabilité de la levure sèche active Sc50 dans deux facteurs d’appétence pour chats, le trait continu représentant la stabilité dans le facteur d’appétence ayant une activité à l’eau de 0,30 et le trait discontinu représentant la stabilité dans le facteur d’appétence ayant une activité à l’eau de 0,35.

Remarques et conclusion

Il ressort des figures 7A et 7B que la levure sèche active Sc50 de l’invention présente d’excellentes performances de stabilité lorsqu’elle est incorporée à des facteurs d’appétence.

Les résultats montrent que sur la période des 12 mois dans les conditions de stockage testées (20 +/-5°C), la viabilité de la levure sèche active Sc50 est stable dans les 4 facteurs d’appétence chiens et chats testés ayant des activités à l’eau allant de 0,30 à 0,38. Ainsi, l’écart de viabilité dans ces 4 facteurs d’appétence après 12 mois de contact est inférieur à 1 log UFC/g par rapport à T0 (moment où la levure active sèche de l’invention est incorporée dans le facteur d’appétence).

[0047] Enrobage du noyau d’une croquette avec le facteur d’appétence comprenant la levure sèche active Sc50

Les différents mélanges « facteur d’appétence + levure sèche active Sc50 » préparés à l’étape précédente sont ensuite appliqués sur des croquettes pour chiens ou chats, selon différentes séquences d'enrobage. Ces mélanges sont appliqués sur les croquettes sitôt préparés. Les études de stabilité de la levure sèche active Sc50 ont été lancées sur une période de 24 mois.

La figure 8 illustre trois modes de réalisation possible pour l’enrobage du noyau d’une croquette. Cette figure est seulement donnée à titre d’exemple, car il existe d’autres modes d’enrobage du noyau d’une croquette.

A titre d’exemple, les principaux composants des croquettes pour chats et chiens peuvent être résumés ainsi :

- pour les chiens : orge, blé et dérivés, maïs, farine de volaille, soja entier, graisse de volaille ;

- pour les chats : farine de volaille, orge, maïs et dérivés, graisse de volaille, blé, soja et dérivés.

Dans la croquette, le taux d'incorporation de la levure sèche active Sc50 est de 0,05%.

La levure sèche active Sc50, préalablement incorporée aux facteurs d’appétence poudre, est appliquée sur les croquettes pour chiens ou pour chats selon les différentes modes d’enrobage illustrés dans le tableau 1 ci-dessous. Les abréviations utilisées dans le tableau 1 ont les significations suivantes :

- MG : matière grasse d’enrobage ;

- FAP : facteur d’appétence poudre ;

- FAP + Sc50 : facteur d’appétence poudre additionné de levure sèche active Sc50 ;

- FAL : facteur d’appétence liquide.

MG sous-vide signifie que la matière grasse d’enrobage a été déposée sur la croquette alors que le vide a été appliqué dans l’équipement (cela permet de favoriser la pénétration de la matière grasse dans le corps de la croquette).

[0048] [Tableau 1]

[0049] Les croquettes ainsi enrobées de la levure sèche active Sc50 sont conditionnées dans des sachets en aluminium, puis stockées à température ambiante (20°C +/- 5°C).

[0050] Etude de la stabilité de la levure sèche active Sc50 enrobée autour des croquettes Le marqueur de stabilité suivi pendant le stockage des croquettes enrobées est le taux de cellules de levures revivifiables (méthode normalisée NF EN 15789).

La figure 9 illustre les résultats de la stabilité de la levure sèche active Sc50 autour des croquettes pour chiens selon les codes d’enrobage 1 à 4.

Plus particulièrement, la figure 9 A illustre la stabilité de la levure sèche active Sc50 dans des croquettes qui présentent une activité à l’eau allant de 0,45 à 0,49. Le trait continu représentant la stabilité de la levure dans la croquette enrobée selon le code d’enrobage 2 tandis que le trait discontinu représente la stabilité de la levure dans la croquette enrobée selon le code d’enrobage 1 .

La figure 9 B illustre la stabilité de la levure sèche active Sc50 dans des croquettes qui présentent une activité à l’eau allant de 0,53 à 0,58. Le trait continu représentant la stabilité de la levure dans la croquette enrobée selon le code d’enrobage 4 tandis que le trait discontinu représente la stabilité de la levure dans la croquette enrobée selon le code d’enrobage 3.

La figure 10 illustre les résultats de la stabilité de la levure sèche active Sc50 autour des croquettes pour chats qui présentent une activité à l’eau allant de 0,32 à 0,35. La série représentée à la figure 10 correspond à la moyenne des viabilités obtenues à chaque échéance pour les 4 modes d’enrobage selon les codes d’enrobage 1-2 et 5-6.

Remarques et conclusions

Il ressort des figures 9 et 10 que la levure sèche active Sc50 de l’invention présente d’excellentes performances de stabilité une fois enrobée autour de la croquette, pouvant aller jusqu’à :

- 15 mois dans des croquettes pour chiens lorsque la couche d’enrobage ne comprend que des facteurs d’appétence poudre (codes d’enrobage 1 et 2, figure 9 A),

- 12 mois lorsque la couche d’enrobage comprend un facteur d’appétence liquide, spécificité de certaines croquettes pour chiens (codes d’enrobage 3 et 4, figure 9 B),

- 24 mois dans des croquettes pour chats quels que soient les modes d’enrobage testés (codes 1-2, 5-6, figure 10).

Exemple 3 : étude comparative à l’exemple 2

[0051] L’objectif de cette étude est de montrer que les caractéristiques physico-chimiques des levures sèches actives sont essentielles quant à :

- leur durée de vie au sein d’une croquette, et/ou

- à leur adhésion au sein d’une croquette.

[0052] Durée de vie de levures sèches actives au sein d’une croquette pour chien.

Les levures sèche actives testées dans cet exemple présentent les caractéristiques physico-chimiques décrites ci-après.

Levure « 1 » :

- granulométrie : diamètre des sphérules allant de 0,3 à 0,7 mm ;

- teneur en matières sèches : 93% en poids.

Levure « 2 » :

- granulométrie : diamètre des sphérules allant de 0,05 à 0,2 mm ;

- teneur en matières sèches : 94,5% en poids.

Ces levures sèches actives ne présentent donc pas l’ensemble des caractéristiques physico-chimiques de la levure sèche active de l’invention.

Ces levures sont intégrées dans des facteurs d’appétence pour chiens présentant une activité à l’eau de 0,32 selon les modalités décrites dans l’exemple 2. De même ces levures sont enrobées autour d’une croquette pour chien selon les modalités décrites à l’exemple 2.

Plus particulièrement la levure 1 est enrobée selon les codes d’enrobage 1 et 3, à savoir :

- MG puis « FAP + Levure 1 » (code d’enrobage 1 ) ;

- MG puis « FAP + Levure 1 » puis FAL (code d’enrobage 3).

De la même façon la levure 2 est enrobée selon les codes d’enrobage 1 et 3 :

- MG puis « FAP + Levure 2 » ;

- MG puis « FAP + Levure 2 » puis FAL.

Les facteurs d’appétence solide (FAP) et liquide FAL sont ceux décrit à l’exemple 2.

Les croquettes pour chien ainsi enrobées sont conservées dans les mêmes conditions que celles décrites à l’exemple 2.

La mesure de la viabilité est évaluée chaque mois selon le protocole décrit à l’exemple 2. Les résultats obtenus sont illustrés à la figure 11. 11 ressort de cette figure que la levure 1 ne dépasse pas 5 mois de viabilité et la levure 2 ne dépasse pas 8 mois de viabilité.

[0053] Adhésion des levures au sein d’une croquette

Les levures sèche actives testées dans cet exemple présentent les caractéristiques physico-chimiques décrites ci-après.

Levure « 3 » :

- granulométrie : diamètre des sphérules allant de 0,1 à 0,2 mm ;

- teneur en matières sèches : 94% en poids.

Levure « 4 » :

- granulométrie : diamètre des sphérules allant de 0,01 à 0,1 mm ;

- teneur en matières sèches : 94% en poids.

Ces levures sèches actives ne présentent donc pas l’ensemble des caractéristiques physico-chimiques de la levure sèche active de l’invention.

Ces levures sont intégrées dans des facteurs d’appétence pour chiens présentant une activité à l’eau de 0,32 selon les modalités décrites dans l’exemple 2. De même ces levures sont enrobées autour d’une croquette pour chien selon les modalités décrites à l’exemple 2. Plus particulièrement les levures 3 et 4 sont enrobées chacune selon le code d’enrobage 1 , à savoir :

- MG puis « FAP + Levure 3 » ;

- MG puis « FAP + Levure 4 ».

Le facteur d’appétence solide (FAP) est celui décrit à l’exemple 2. Les croquettes pour chiens ainsi enrobées sont soumises à un test de friabilité/durabilité. La durabilité des croquettes enrobée est analysée à l’aide d’un testeur de durabilité commercialisé sous la dénomination « Holmen NHP 100 ». Cent grammes de croquettes sont placés dans le testeur de durabilité et chaque analyse a été effectuée en double. Le testeur a été équipé d’une grille de 1 mm et le test a une durée de 120 secondes.

Lors du test de durabilité les croquettes sont soumises à des contraintes mécaniques standardisées. A la fin du test mécanique un tamisage des croquettes est réalisé avec un tamis ayant une maille d’une taille correspondant à 80% du diamètre de la croquette. La proportion de matière provenant des croquettes et dont la taille est inférieure à la maille du tamis correspond aux « fines ».

Plus le taux de fines est important, moins l’adhésion de la levure à la croquette est bonne. Les résultats obtenus montrent que les croquettes enrobées avec le levure 3 et soumises au test de durabilité ont généré un taux moyen de fines de 1 ,79% tandis que les croquettes enrobées avec le levure 4 et soumises au test de durabilité ont généré un taux moyen de fines de 1 ,55%.

Les différences observées après test de durabilité s’expliquent notamment par les caractéristiques physico-chimiques des levures, en particulier leur granulométrie. Des levures de taille plus grande vont générer un pourcentage de fines plus important que des levures de taille plus petite.

La forme sphérule de la levure est importante car elle a une porosité de surface très faible. Ainsi des sphérules de petites tailles ont une surface développée plus importante et donc offrent une surface à l’humidité de l’environnement plus importante. L’humidité est cependant critique pour la stabilité dans le temps des levures. Ainsi, il existe un compromis à trouver entre des sphérules de taille suffisamment petites pour bien adhérer à la surface des croquettes mais pas trop petites pour être plus stables dans le temps en résistant mieux à l’humidité, tout en étant industriellement faisables.

[0054] La présente divulgation ne se limite pas aux exemples décrits ci-avant, seulement à titre d’exemple, mais elle englobe toutes les variantes que pourra envisager l’homme de l’art dans le cadre de la protection recherchée.

Référence à du matériel biologique déposé

[0055] Dans la présente demande, il est fait référence au matériel biologique suivant et aux souches variantes ou mutantes dérivées :

- référence d’identification « Sc50 » et numéro d’enregistrement « I-5660 » déposée à la Collection Nationale de Cultures de Micro-organismes (CNCM) (25, rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15), en France, le 03 mars 2021 par Lesaffre et Compagnie dont l’adresse est 41 rue Etienne Marcel, 75009 Paris. Liste des documents cités

Documents brevets

[0056] À toute fin utile, les documents brevets suivants sont cités :

- patcitl : JP2008013534 ; et

- patcit2 : PCT/US2009/056292.

Littérature non-brevet

[0057] À toute fin utile, l’élément non-brevet suivant est cité :

- nplcitl : Bruna M. Rodrigues et al., Hindawi, Int. J. of Microbiology, Vol 2020, ID 1293481 , 10 pages ;

- nplcit2 : Yeast Technology, 2ème édition, 1991 , G. Reed et T.W. Nagodawithana, publié par Van Nostrand Reinhold, ISBN 0-442-31892-8 ;

- nplcit3 : Journal FEMS Microbiology Ecology, « A dysbiosis index to assess microbial changes in fecal samples of dogs with chronic inflammatory enteropathy. AlShawaqfeh et al., 2017.

- nplcit4 : Large intestinal pH and ammonia in rats: dietary fat and protein interactions 1-2. Hsi-Chiang Lin and Villard J. Visek. American Institute of Nutrition. 1991 , 832-843 ;

- nplcit5 : Cell, P; Verlhac, V; Calvo, EP; Schmeisser, J; Kluenter, AM. Biomarkers of gastrointestinal functionality in animal nutrition and health. Anim. Feed. Sci. Technol. 2019, 250, 9-31 ;

- nplcit6: Brito, C.B.M., Félix, A.P., Jesus, R.M., França, M.I., Oliveira, S.G., Krabbe, E.L., Maiorka, A., 2010. Digestibility and palatability of dog foods containing different moisture levels, and the inclusion of a mould inhibitor. Anim. Feed Sci. Technol. 159, 150-155.