本発明で使用されるHGF蛋白質は公知物質� ��あり、医薬として使用できる程度に精製さ� ��たものであれば、種々の方法で調製された� ��のを用いることができる。HGF蛋白質の製造� ��法としては、例えばHGF蛋白質を産生する初� ��培養細胞や株化細胞を培養し、培養上清等� ��ら分離、精製して該HGF蛋白質を得ることが� ��きる。あるいは遺伝子工学的手法によりHGF� ��白質をコードする遺伝子を適切なベクター� ��組み込み、これを適当な宿主細胞に挿入し� ��形質転換し、この形質転換体の培養上清か� ��目的とする組換えHGF蛋白質を得ることもで� ��る。(例えば、特開平5-111382号公報、Biochem.Bi ophys.Res.Commun.1989年、第163巻,p.967等を参照)。� �記の宿主細胞は特に限定されず、従来から� �伝子工学的手法で用いられている各種の宿� �細胞、例えば大腸菌、酵母又は動物細胞等� �用いることができる。このようにして得ら� �たHGF蛋白質は、天然型HGF蛋白質と実質的に� �じ作用を有する限り、そのアミノ酸配列中� �1若しくは複数個〔例えば、数個(例えば1~8個 ;以下同様である。)〕のアミノ酸が置換、欠� ��若しくは付加されていてもよく、また同様� ��糖鎖が置換、欠失若しくは付加されていて� ��よい。そのようなHGF蛋白質として、下記す� ��5アミノ酸欠損型HGF蛋白質を挙げることがで きる。ここで、アミノ酸配列について、「1� �しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換若し� �は付加」とは、遺伝子工学的手法、部位特� �的突然変異誘発法等の周知の技術的方法に� �り、又は天然に生じうる程度の数(1~数個)が� ��欠失、置換若しくは付加等されていること� ��意味する。糖鎖が置換、欠失若しくは付加� ��たHGF蛋白質とは、例えば天然のHGF蛋白質に� ��加している糖鎖を酵素等で処理し糖鎖を欠� ��させたHGF蛋白質、また糖鎖が付加しない様� ��糖鎖付加部位のアミノ酸配列に変異が施さ� ��たもの、あるいは天然の糖鎖付加部位とは� ��なる部位に糖鎖が付加するようアミノ酸配� ��に変異が施されたもの等をいう。

 更に、HGF蛋白質のアミノ酸配列と少なく� ��も約80%以上の相同性を有する蛋白質、好ま� ��くは約90%以上の相同性を有する蛋白質、よ� ��好ましくは約95%以上の相同性を有する蛋白� ��であって、かつHGFとして作用する蛋白質も� ��まれる。上記アミノ酸配列について「相同� ��とは、蛋白質の一次構造を比較し、配列間� ��おいて各々の配列を構成するアミノ酸残基� ��一致の程度の意味である。

 上記HGF蛋白質としては、例えば配列番号1又 は2で表されるアミノ酸配列等が挙げられる� �配列番号2で表されるHGF蛋白質は、配列番号1 で表されるアミノ酸配列の161~165番目の5個の� ��ミノ酸残基が欠失している5アミノ酸欠損型 HGF蛋白質である。配列番号1又は2で表される� ��ミノ酸配列を有する蛋白質は、両者ともヒ� ��由来の天然HGF蛋白質であって、HGFとしての� ��イトゲン(mitogen)活性、モートゲン(motogen)活� ��等を有する。
 配列番号1又は2で表されるアミノ酸配列と� �質的に同一であるアミノ酸配列を含む蛋白� �としては、配列番号1又は2で表されるアミノ 酸配列と少なくとも約80%以上、好ましくは約 90%以上、より好ましくは約95%以上の同一性を 有するアミノ酸配列を含む蛋白質、例えば配 列番号1又は2で表されるアミノ酸配列から、1 ~数個のアミノ酸残基を挿入又は欠失させた� �ミノ酸配列、1~数個のアミノ酸残基を別のア ミノ酸残基と置換させたアミノ酸配列又は1~� ��個のアミノ酸残基が修飾されたアミノ酸配� ��等を含む蛋白質であってHGFとして作用する� ��白質であることが好ましい。挿入されるア� ��ノ酸又は置換されるアミノ酸は、遺伝子に� ��りコードされる20種類のアミノ酸以外の非� �然アミノ酸であってもよい。非天然アミノ� �は、アミノ基とカルボキシル基を有する限� �どのような化合物でもよいが、例えばγ-ア� �ノ酪酸等が挙げられる。これらの蛋白質は� �単独であっても、これらの混合蛋白質であ� �てもよい。配列番号1又は2で表されるアミノ 酸配列と実質的に同一であるアミノ酸配列を 含む蛋白質としては、例えばNCBIのデータベ� �ス(NCBI-GenBank Flat File Release 164.0)に登録さ� �ているAccession No.BAA14348又はAAC71655等のヒト� �来HGFが挙げられるが、これらに限定されな� �。

 なお、本発明で用いられるHGF蛋白質は、� ��トに適用する場合は前記したヒト由来のも� ��が好適に用いられるが、ヒト以外の哺乳動� ��(例えばサル、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、 イヌ、ネコ、ラット、マウス、ウサギ、ハム スター、モルモット、チンパンジー等)に由� �するHGF蛋白質であってもよい。このようなHG Fとしては、例えばNCBIのデータベース等に登� ��されている例えば、マウス由来HGF(例えばAcc ession No.AAB31855、NP_034557、BAA01065,BAA01064等)、� �ット由来HGF[例えばAccession No.NP_58713(配列番� �3で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質)等 ]、ウシ由来HGF(例えばAccession No.NP_001026921、BA D02475等)、ネコ由来HGF(例えばAccession No.NP_00100 9830、BAC10545,BAB21499等)、イヌ由来HGF(例えばAcce ssion No.NP_001002964、BAC57560等)又はチンパンジ� �由来HGF(例えばAccession No.XP_519174等)などが挙� ��られるが、これらに限定されない。

 本発明に用いられるHGF蛋白質は、C末端がカ ルボキシル基(-COOH)、カルボキシレート(-COO ^- )、アミド(-CONH ₂ )又はエステル(-COOR)のいずれであってもよい� ��ここでエステルにおけるRとしては、例えば 、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピ� ��もしくはn-ブチル等のC _1-6 アルキル基、例えば、シクロペンチル、シク ロヘキシル等のC _3-8 シクロアルキル基、例えば、フェニル、α-ナ フチル等のC _6-12 アリール基、例えば、ベンジル、フェネチル 等のフェニル-C _1-2 アルキル基もしくはα-ナフチルメチル等のα- ナフチル-C _1-2 アルキル基等のC _7-14 アラルキル基のほか、ピバロイルオキシメチ ル基等が用いられる。本発明で用いられるHGF 蛋白質が、C末端以外にカルボキシル基(又は� ��ルボキシレート)を有している場合、カルボ キシル基がアミド化又はエステル化されてい るものも本発明におけるHGF蛋白質に含まれる 。この場合のエステルとしては、例えば上記 したC末端のエステル等が用いられる。更に� �本発明に用いられるHGF蛋白質には、上記し� �蛋白質において、N末端のメチオニン残基の� ��ミノ基が保護基(例えば、ホルミル基、アセ チル等のC _2-6 アルカノイル基等のC _1-6 アシル基等)で保護されているもの、N末端側� ��生体内で切断され生成したグルタミル基が� ��ログルタミン酸化したもの、分子内のアミ� ��酸の側鎖上の官能基(例えば、-OH、-SH、アミ ノ基、イミダゾール基、インドール基、グア ニジノ基等)が適当な保護基(例えば、ホルミ� ��基、アセチル等のC _2-6 アルカノイル基等のC _1-6 アシル基等)で保護されているもの、あるい� �糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質等の複合� �白質等も含まれる。

 本発明で用いるHGF蛋白質は、その部分ペプ� ��ド(以下、部分ペプチドと略記する場合があ る。)の形態であってもよく、そのような部� �ペプチドとしては、上記したHGF蛋白質の部� �ペプチドであってHGFと実質的に同質の活性� �有するものであればいずれのものであって� �よい。本発明において、部分ペプチドのア� �ノ酸の数は、上記したHGF蛋白質の構成アミ� �酸配列のうち少なくとも約20個以上、好まし くは約50個以上、より好ましくは約100個以上� ��アミノ酸配列を含有するペプチド等が好ま� ��い。具体的には、例えば、配列番号1で表さ れるヒトHGFアミノ酸配列のN末端側から32番目 のアミノ酸から210番目のアミノ酸までのアミ ノ酸配列(HGFのN末端ヘアピンループから第1ク リングルドメインまでの配列)で示されるペ� �チドや、配列番号1で表されるヒトHGFアミノ� ��配列のN末端側から32番目のアミノ酸から288� ��目のアミノ酸までのアミノ酸配列(HGFのN末� �ヘアピンループから第2クリングルドメイン� ��での配列)で示されるペプチド等が好ましく 挙げられる。本発明の部分ペプチドにおいて は、C末端がカルボキシル基(-COOH)、カルボキ� ��レート(-COO ^- )、アミド(-CONH ₂ )又はエステル(-COOR)のいずれであってもよい� ��更に、部分ペプチドには、上記したHGF蛋白� ��と同様に、N末端のメチオニン残基のアミノ 基が保護基で保護されているもの、N端側が� �体内で切断され生成したGlnがピログルタミ� �酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上� �官能基が適当な保護基で保護されているも� �、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプ� �ド等の複合ペプチド等も含まれる。

 本発明に用いられるHGF蛋白質(部分ペプチ ドの形態を含む)の塩としては、酸又は塩基� �の生理学的に許容される塩が挙げられ、と� �わけ生理学的に許容される酸付加塩が好ま� �い。この様な塩としては、例えば、無機酸(� ��えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸)と の塩、あるいは有機酸(例えば、酢酸、ギ酸� �プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コ� �ク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸� �安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンス� �ホン酸)との塩等が挙げられる。

 本発明に用いられるHGF蛋白質が部分ペプ� ��ドの形態である場合、該部分ペプチドは、� ��知のペプチドの合成法に従って、あるいはH GF蛋白質を適当なペプチダーゼで切断するこ� ��によって製造することができる。ペプチド� ��合成法としては、例えば、固相合成法、液� ��合成法のいずれでも良い。すなわち、HGF蛋� ��質を構成し得る部分ペプチドもしくはアミ� ��酸と残余部分とを縮合させ、生成物が保護� ��を有する場合は、保護基を脱離することに� ��り目的のペプチドを製造することができる� ��公知の縮合方法や保護基の脱離としては、� ��えば、M.Bodanszky及びM.A.Ondetti、ペプチド・シ ンセシス(Peptide Synthesis),Interscience Publishers,Ne w York(1966年)、Schroeder及びLuebke、ザ・ペプチ� �(The Peptide), Academic Press,NewYork(1965年)等に記� ��された方法が挙げられる。反応後は通常の� ��製方法、例えば、溶媒抽出・蒸留・カラム� ��ロマトグラフィー・液体クロマトグラフィ� ��・再結晶等を組み合わせてHGF蛋白質の部分� ��プチドを精製単離することができる。上記� ��法で得られる部分ペプチドが遊離体である� ��合は、公知の方法によって適当な塩に変換� ��ることができるし、逆に塩で得られた場合� ��、公知の方法によって遊離体に変換するこ� ��ができる。

 なお、本発明で用いられるHGF蛋白質は、� ��トに適用する場合は前記したヒト由来のも� ��が好適に用いられるが、ヒト以外の哺乳動� ��に由来するHGF蛋白質であってもよい。例え� ��、ラット由来のHGF蛋白質は配列番号3で表さ れる。

 本発明の治療剤、すなわち脊髄損傷治療� ��及び脱髄性疾患治療剤は、脊髄損傷及び脱� ��を伴う神経疾患全般に用いることができる� ��具体的には、多発性硬化症(MS)、デビック(De vic)病、バロー同心性硬化症、急性散在性脳� �髄炎(ADEM)、シルダー(Schilder)病、亜急性硬化� ��汎脳炎(SSPE)、進行性多巣性白質脳症(PML)、� �ンスワンガー(Binswanger)病、低酸素脳症、橋� �心髄鞘破壊症、ギラン・バレー(Guillain-Barre)� ��候群、フィッシャー(Fisher)症候群、慢性炎� �性脱髄性多発根神経炎(CIDP)等が挙げられ、� �髄を伴う脊髄損傷も包含される。

 本発明の治療剤(脊髄損傷治療剤及び脱髄 性疾患治療剤)は、ヒトのほか、ヒト以外の� �乳動物(例えば、サル、ウシ、ウマ、ブタ、� ��ツジ、イヌ、ネコ等)にも適用できる。

 本発明の治療剤(脊髄損傷治療剤又は脱髄 性疾患治療剤)を患者又は患畜に投与する場� �、種々の製剤形態、例えば液剤、固形剤等� �とりうるが、一般的にはHGF蛋白質のみ又は� �れと慣用の担体と共に注射剤、噴射剤、徐� �性製剤(例えば、デポ剤)等とされる。上記注 射剤は、水性注射剤又は油性注射剤のいずれ でもよい。水性注射剤とする場合、公知の方 法に従って、例えば、水性溶媒(注射用水、� �製水等)に、医薬上許容される添加剤、例え� ��等張化剤(塩化ナトリウム、塩化カリウム、 グリセリン、マンニトール、ソルビトール、 ホウ酸、ホウ砂、ブドウ糖、プロピレングリ コール等)、緩衝剤(リン酸緩衝液、酢酸緩衝� ��、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩� ��液、トリス緩衝液、グルタミン酸緩衝液、� ��プシロンアミノカプロン酸緩衝液等)、保存 剤(パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ� �息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピ� �、パラオキシ安息香酸ブチル、クロロブタ� �ール、ベンジルアルコール、塩化ベンザル� �ニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、エデト� �ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂等)、増粘剤(ヒ ドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロ ピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポ リエチレングリコール等)、安定化剤(亜硫酸� ��素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデ� ��酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アス� ��ルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン等) 又はpH調整剤(塩酸、水酸化ナトリウム、リン 酸、酢酸等)などを適宜添加した溶液に、HGF� �白質を溶解した後、フィルター等で濾過し� �滅菌し、次いで無菌的な容器に充填するこ� �により調製することができる。また適当な� �解補助剤、例えばアルコール(エタノール等) 、ポリアルコール(プロピレングリコール、� �リエチレングリコール等)又は非イオン界面� ��性剤(ポリソルベート80、ポリオキシエチレ� ��硬化ヒマシ油50等)などを使用してもよい。� ��性注射剤とする場合、油性溶媒としては、� ��えば、ゴマ油又は大豆油等が用いられ、溶� ��補助剤として安息香酸ベンジル又はベンジ� ��アルコール等を使用してもよい。調製され� ��注射液は、通常、適当なアンプル又はバイ� ��ルに充填される。注射剤中のHGF蛋白質含量� ��、通常約0.0002~2.0w/v%程度、好ましくは約0.001 ~1.0w/v%程度、さらに好ましくは約0.01~0.5w/v%程� ��に調整される。なお、注射剤等の液状製剤� ��、凍結保存又は凍結乾燥等により水分を除� ��して保存するのが望ましい。凍結乾燥製剤� ��、用時に注射用蒸留水等を加え、再溶解し� ��使用される。

 噴霧剤も製剤上の常套手段によって調製� ��ることができる。噴霧剤として製造する場� ��、その添加剤としては、一般に吸入用製剤� ��使用される添加剤であればいずれのもので� ��ってもよく、例えば、噴射剤の他、上記し� ��溶剤、保存剤、安定化剤、等張化剤、pH調� �剤等が用いられる。噴射剤としては、液化� �ス噴射剤又は圧縮ガス等が用いられる。液� �ガス噴射剤としては、例えば、フッ化炭化� �素(HCFC22、HCFC-123、HCFC-134a、HCFC142等の代替フ� ��ン類等)、液化石油、ジメチルエーテル等が 挙げられる。圧縮ガスとしては、例えば、可 溶性ガス(炭酸ガス、亜酸化窒素ガス等)又は� ��溶性ガス(窒素ガス等)などが挙げられる。

 また、本発明で用いられるHGF蛋白質は、� ��体分解性高分子と共に、徐放性製剤(例えば デポ剤)とすることもできる。HGF蛋白質は特� �デポ剤とすることにより、投薬回数の低減� �作用の持続性及び副作用の軽減等の効果が� �待できる。該徐放性製剤は公知の方法に従� �て製造することができる。本徐放性製剤に� �用される生体内分解性高分子は、公知の生� �内分解性高分子のなかから適宜選択できる� �、例えばデンプン、デキストラン、ヒアル� �ナン(ヒアルロン酸)もしくはその塩又はキト サン等の多糖類、アテロコラーゲン、コラー ゲン又はゼラチン等の蛋白質、ポリグルタミ ン酸、ポリリジン、ポリロイシン、ポリアラ ニン又はポリメチオニン等のポリアミノ酸、 ポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸・グリコ ール酸共重合体、ポリカプロラクトン、ポリ -β-ヒドロキシ酪酸、ポリリンゴ酸、ポリ酸� �水物又はフマル酸・ポリエチレングリコー� �・ビニルピロリドン共重合体等のポリエス� �ル、ポリオルソエステル又はポリメチル-α-� ��アノアクリル酸等のポリアルキルシアノア� ��リル酸、ポリエチレンカーボネート又はポ� ��プロピレンカーボネート等のポリカーボネ� ��ト等である。好ましくはポリエステル、更� ��好ましくは乳酸・グリコール酸共重合体で� ��る。乳酸-グリコール酸共重合体を使用する 場合、その組成比(乳酸/グリコール酸)(モル%) は徐放期間によって異なるが、例えば徐放期 間が約2週間ないし3カ月、好ましくは約2週間 ないし1カ月の場合には、約100/0ないし50/50で� ��る。該乳酸-グリコール酸共重合体の重量平 均分子量は、一般的には約5,000ないし20,000で� ��る。乳酸-グリコール酸共重合体は、公知の 製造法、例えば特開昭61-28521号公報に記載の� ��造法に従って製造できる。生体分解性高分� ��とHGF蛋白質の配合比率は特に限定はないが� ��例えば生体分解性高分子に対して、HGF蛋白� ��が約0.01~30w/w%程度である。

 投与方法としては、注射剤もしくは噴霧� ��を直接脊髄損傷あるいは脱髄性疾患のある� ��織に直接注射(例えば、髄腔内(intrathecal)投� �、徐放性ポンプによる髄腔内持続投与等)も� ��くは噴霧するか、あるいは徐放性製剤(デポ 剤)を脊髄損傷あるいは脱髄性疾患のある組� �に近い部位に埋め込むのが好ましい。また� �投与量は、剤形、疾患の程度又は年齢等に� �じて適宜選択されるが、通常、1回当たり1μg ~500mg、好ましくは10μg~50mgである。また、投� �方法も剤形、疾患の程度又は年齢等に応じ� �適宜選択され、1回単回投与とするか、1回30� ��~数週間程度(好ましくは1回24時間~2週間程度 )の持続投与とするか、あるいは前記単回投� �または持続投与を、間隔をおいて連続投与� �することもできる。連続投与の場合、投与� �隔は1日1回から数ヶ月に1回でよく、例えば� �徐放性製剤(デポ剤)による投与や徐放性ポン プ(例えば、浸透圧ポンプ)による局所(例えば 髄腔内)持続投与の場合は、数週間~数ヶ月に1 回でもよい。この様な持続投与は、HGF蛋白質 が長期にわたり徐々に脊髄損傷又は脱髄性疾 患の部位に放出されるため、HGF作用が長期に わたり発揮されて、より良好な治療効果が得 られるという利点がある他、投与回数が少な いため、患者への負担が軽減されるという利 点もある。また、必要に応じて1度設置した� �下の浸透圧ポンプにHGF蛋白質を追加投与可� �な点も利点といえる。なお、投与方法は、� �記のとおり局所投与が望ましいが、筋肉内� �与、皮下投与、点滴投与等でも可能である� �また、投与時期も、剤形、疾患の程度又は� �齢等に応じて適宜選択され、例えば、脊髄� �傷の場合では、好ましくは受傷直後から14日 以内、更に好ましくは受傷直後から7日以内� �特に好ましくは受傷直後から4日以内である� ��特に、脊髄損傷の患者では、受傷後72時間� �度は容体が安定し難いことを考慮すると、� �傷後約72時間から4日以内に投与されること� �とりわけ好ましい。上記投与時期は、持続� �与または連続投与の場合の投与開始時また� �初回投与時も含まれる。