TRIAZOLOTRIAZINE UND TRIAZOLOPYRAZINE UND IHRE VERWENDUNG ALS GSK3BETA INHIBITOREN

Die Erfindung betrifft substituierte Triazolotriazine und Triazolopyrazine und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von hämatologischen Erkrankungen, vorzugsweise von Leukopenien und Neutropenien.

Glykogen Synthase Kinase 3 (GSK3) gehört zur Familie der Serine/Threonin-Kinasen. Spezifische Substrate sind unter anderem Zytoskelettproteine und Transkriptionsfaktoren. Zwei Isoformen, GSK3α und GSK3ß, wurden bisher identifiziert (Woodgett JR., Trends Biochem. Sei. (1991), 16(5), 177-81). Beide Isoformen sind in vornehmlich ruhenden, nicht proliferierenden Zellen konstitutiv aktiv.

GSK3ß kommt eine zentrale Bedeutung innerhalb des Wnt/Wingless-Signaltransduktionsweges zu. Dieser stellt einer der wichtigsten, evolutionärkonservierten Signalsysteme dar. Wnt-Signale kontrollieren sehr frühe musterbildende Prozesse während der Embryogenese, sie induzieren Mesodermbildung und viele Organe, und sie steuern die Proliferation und Differenzierung von Stammzellen (Wodarz A., Nüsse R., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. (1998), 14, 59-88; Kirstetter et al., Nat Immunol. (2006), 7(10), 1048-56). Der Wnt-Signalweg ist intrazellulär aufgegliedert, wodurch unterschiedlichste Prozesse gesteuert werden können. Innerhalb der Wnt-Kaskade ist die Glykogen Synthase Kinase 3 Bestandteil eines Multiproteinkomplexes, zu dem u.a. das Strukturmoleküle Axin, das Tumorsuppressor-Protein APC sowie der Transkriptionskofaktor ß-Catenin gehören, ß- Catenin ist dabei das wichtigste Substrat der GSK3ß. Die Konsequenz dieser GSK3ß-vermittelten Phophorylierung ist der proteasomale Abbau von ß-Catenin. Inhibition der GSK3 -Aktivität führt zu einer Akkumulation des ß-Catenins in der Zelle mit einer sich anschließenden Translokation in den Zellkern. Dort fungiert ß-Catenin als ein Kofaktor in Transkriptionskomplexe und damit für die Expression definierter Zielgene mit verantwortlich.

Strahlen- oder Chemotherapien gehören zu den Standardansätzen bei der Krebsbekämpfung. Beide Therapieformen sind im Bezug auf ihre Zielzellen unspezifisch, d.h. es werden nicht nur Tumorsondern auch nicht-transformierte, proliferierende Zellen getroffen. Zu diesen nicht- transformierten, proliferienden Zellen gehören auch hämatopoetische Vorläuferzellen, die sich u.a. zu neutrophilen Granulozyten entwickeln. Eine signifikante Verringerung der Anzahl an Neutrophilen wird als Neutropenie bezeichnet. Eine durch Chemo- oder Strahlentherapie induzierte Neutropenie resultiert klinisch in einer erhöhten Infektanfälligkeit. Bei ausgeprägter Neutropenie erhöht sich die Morbidität und unter Umständen auch die Mortalität einer Therapie (O'Brien et al., British Journal of Cancer (2006), 95, 1632 - 1636).

Inhibition der GSK3-Aktivität führt zu einer gesteigerten Proliferations- und Differenzierungsrate hämatopoetischer Stammzellen und kann dementsprechend zur therapeutischen Intervention hinsichtlich einer therapieinduzierten Neutropenie genutzt werden.

WO2006/044687 beschreibt unter anderem Triazolotriazine als Kinase Inhibitoren zur Behandlung von Krebs und Erkrankungen des zentralen Nervensystems. WO2007/138072 beschreibt die Verwendung von 6-Alkyl-substituierten Triazolopyrazinen zur Behandlung von degenerativen und inflammatorischen Erkrankungen.

Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist daher die Bereitstellung neuer Verbindungen als GSK3ß-Inhibitoren zur Behandlung von hämatologischen Erkrankungen, vorzugsweise von Neutropenie bei Menschen und Tieren.

Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der Formel

in welcher

entweder

U für N steht,

V für CR ¹² steht,

W für N steht,

A für CR ¹⁵ steht,

oder

U für N steht,

V für N steht,

W für CR ¹⁶ steht,

A für N steht,

wobei

R ¹² für Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl,

Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Cyano, Ci-C ₄ -Alkyl, C _r C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -

Alkylamino, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, Ci-C ₄ - Alkylaminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylcarbonylamino, Ci-C ₄ -Alkylsulfonylamino, 5- oder 6-gliedriges Heterocyclylcarbonyl, -CH ₂ R ¹³ oder -CH ₂ CH ₂ R ¹⁴ steht,

wobei Heterocyclylcarbonyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Oxo, Ci-C ₄ -Alkyl, C _r C ₄ -Alkoxy, C _r C ₄ -Alkylamino, Ci -Cj-Alkylcarbonyl, C i -C ₄ -Alkoxycarbonyl und C i -C ₄ -Alkylaminocarbonyl,

und

wobei Alkoxy, Alkylamino, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl, Alkylcarbonylamino und Alkylsulfonylamino substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C]-C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -

Alkylamino, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl, Ci-C ₄ - Alkylcarbonylamino, 5- oder 6-gliedriges Heterocyclyl und Phenyl,

worin Phenyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy,

Aminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkyl, C _r C ₄ -Alkoxy, Ci -C ₄ - Alkylamino, Ci-C ₄ - Alkylcarbonyl, Ci -C ₄ - Alkoxycarbonyl, Ci -C ₄ - Alkylaminocarbonyl und C] -C ₄ -Alkylcarbonylamino,

und

worin Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Oxo, C _r C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, Q-C ₄ - Alkylamino, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl und C]-C ₄ - Alkylaminocarbonyl,

und

wobei

R ¹³ für Hydroxy, Amino, Cyano, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C _r C ₄ - Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, CpC ₄ - Alkylaminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylcarbonylamino oder 5- oder 6-gliedriges Heterocyclyl steht,

worin Alkoxy, Alkylamino, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl und

Alkylcarbonylamino substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, C ₁ -C ₄ - Alkylamino, Ci -C ₄ - Alkoxycarbonyl, Ci -C ₄ - Alkylaminocarbonyl und C _r C ₄ -Alkylcarbonylamino,

und

worin Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Oxo, Ci-C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, C _r C ₄ - Alkylamino, C _r C ₄ -Alkylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl und Ci-C ₄ -

Alkylaminocarbonyl,

und

wobei

R ¹⁴ für Hydroxy, Amino, Cyano, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C _r C ₄ - Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino, C _r C ₄ -Alkoxycarbonyl, Q-C ₄ -

Alkylaminocarbonyl, Ci -C ₄ - Alkylcarbonylamino oder 5- oder 6-gliedriges Heterocyclyl steht,

worin Alkoxy, Alkylamino, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl und Alkylcarbonylamino substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus

Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Ci -C ₄ - Alkoxy, Ci -C ₄ - Alkylamino, Cj -C ₄ - Alkoxycarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl und C i -C ₄ -Alkylcarbonylamino,

und

worin Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der

Gruppe bestehend aus Halogen, Oxo, Ci-C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, Q-C ₄ - Alkylamino, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl und Ci-C ₄ - Alkylaminocarbonyl,

R ¹⁵ für Wasserstoff, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Ci-C ₃ -Alkyl, Methoxy, Methylthio oder Cyclopropyl steht,

R ¹⁶ für Wasserstoff oder Methyl steht,

für eine Gruppe der Formel

steht,

wobei

die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet,

n für die Zahl O oder 1 steht,

X für NR ¹⁰ , S oder O steht,

woπn

R' ^υ für Wasserstoff, CrC ₃ -Alkyl oder Cyclopropyl steht,

für NR ¹¹ oder S steht,

woπn

R ¹ ' für Wasserstoff, C _r C ₃ -Alkyl oder Cyclopropyl steht,

R ³ für Pyrid-2-yl, Pyrimid-2-yl, 2-Aminopyrimid-4-yl, 2-(Mono-Ci-C ₄ -Alkyl- amino)pyrimid-4-yl, 2-(Mono-C ₃ -C ₄ -Cycloalkylamino)pyrimid-4-yl, Pyridazin-

3(2H)-on-6-yl, l,3-Oxazol-2-yl, l,3-Oxazol-4-yl, l,2,4-Oxadiazol-3-yl, 1,2,3-

Oxadiazol-4-yl, l,3-Thiazol-2-yl, l,3-Thiazol-4-yl, lH-l,2,4-Triazol-5-yl, 2,4- Dihydro-3H- 1,2,4- triazol-3-on-5-yl oder l,2-Pyrazol-5-yl steht,

wobei Pyrid-2-yl, Pyrimid-2-yl, 1 ,3-Oxazol-2-yl, 1 ,3-Oxazol-4-yl, l,3-Thiazol-2-yl und l,3-Thiazol-4-yl substituiert sind mit 1 oder 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Nitro, Amino, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, Trifluormethylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkyl, C _r C ₄ -Alkoxy, C _r C ₄ -

Alkylamino, Cs-GrCycloalkylamino, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl und C ₃ -C ₆ -Cycloalkylcarbonyl,

worin Alkyl, Alkoxy, Alkylamino, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl und Cycloalkylcarbonyl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der

Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Hydroxy, Amino, Trifluormethyl und C ₃ -C ₆ -Cycloalkyl,

und

wobei 2-Aminopyrimid-4-yl, 2-(Mono-Ci-C ₄ -Alkylamino)pyrimid-4-yl, 2-(Mono- C ₃ -C ₄ -Cycloalkylamino)pyrimid-4-yl, Pyridazin-3(2H)-on-6-yl, l,2,4-Oxadiazol-3- yl, l,2,3-Oxadiazol-4-yl, lH-l,2,4-Triazol-5-yl, 2,4-Dihydro-3H-l,2,4-triazol-3-on-

5-yl und 1 ,2-Pyrazol-5-yl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano,

Nitro, Amino, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, Trifluormethylcarbonyl, C _r C ₄ -Alkyl, C _r C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino, C ₃ -C ₄ -

Cycloalkylamino, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, Ci -C ₄ - Alkylaminocarbonyl und C ₃ -C ₆ -

Cycloalkylcarbonyl,

R ⁴ für Wasserstoff, C _r C ₃ -Alkyl oder Cyclopropyl steht,

R ⁵ für Wasserstoff oder C _r C ₃ -Alkyl steht,

R ⁶ für Wasserstoff, C _r C ₃ -Alkyl oder Cyclopropyl steht,

R ⁷ für Wasserstoff oder C _r C ₃ -Alkyl steht,

R ⁸ für Wasserstoff, Ci-C ₃ -Alkyl oder Cyclopropyl steht,

R ⁹ für Wasserstoff oder C _r C ₃ -Alkyl steht,

R ² für Cβ-Cio-Aryl oder 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl steht,

wobei Aryl und Heteroaryl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus

Hydroxy, Hydroxymethyl, Amino, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy,

Aminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkyl, C _r C ₄ -Alkoxy, C _r C ₄ -Alkoxymethyl, Ci-C ₄ -Alkylamino,

Ci-C ₄ -Alkylaminomethyl, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, Ci-C ₄ -

Alkylaminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylcarbonylamino, C]-C ₄ -Alkylsulfonyl, Q-C ₄ - Alkylsulfonylamino, Ci-C ₄ -Alkylaminosulfonyl, Phenyl, Benzyloxy, 5- oder 6-gliedrigem

Heterocyclyl, 5- oder 6-gliedrigem Heterocyclylcarbonyl, 5- oder 6-gliedrigem

Heterocyclylmethyl und 5- oder 6-gliedrigem Heteroaryl,

worin Phenyl, Benzyloxy, Heterocyclyl, Heterocyclylcarbonyl, Heterocyclylmethyl und Heteroaryl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, C _r C ₄ -Alkyl, C _r C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino, C _r C ₄ -Alkylcarbonyl, C _r C ₄ - Alkoxycarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl und Ci-C ₄ -Alkylcarbonylamino,

oder

zwei der Substituenten am Aryl zusammen mit den Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, ein 1,3-Dioxolan oder 1,4-Dioxan bilden,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungs- beispiel(e) genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereoisomeren

Formen (Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung umfasst deshalb die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise

isolieren.

Sofern die erfϊndungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegenden Erfindung sämtliche tautomere Formen.

Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfin- dungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind aber auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind aber beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.

Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlor- wasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethan- sulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluor- essigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.

Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C- Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N-Methyl- morpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin, N-Methylpiperidin und Cholin.

Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt.

Außerdem umfasst die vorliegende Erfindung auch Prodrugs der erfϊndungsgemäßen Verbindungen. Der Begriff „Prodrugs" umfaßt Verbindungen, welche selbst biologisch aktiv oder inaktiv sein können, jedoch während ihrer Verweilzeit im Körper zu erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden (beispielsweise metabolisch oder hydrolytisch).

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:

Alkyl per se und "Alk" und "Alkyl" in Alkoxy, Alkylamino. Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonvl.

Alkylaminocarbonyl, Alkylcarbonylamino. Alkylsulfonyl, Alkylsulfonylamino und Alkylaminosulfonyl stehen für einen linearen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, n-Butyl und tert-Butyl.

Alkoxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, iso-Propoxy, n-Butoxy und tert-Butoxy.

Alkylamino steht für einen Alkylaminorest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylamino, Ethylamino, n- Propylamino, iso-Propylamino, tert-Butylamino, NN-Dimethylamino, NN-Diethylamino, N-Ethyl-N- methylamino, N-Methyl-N-n-propylamino, N-iso-Propyl-N-n-propylamino und N-tert-Butyl-N- methylamino. Ci -C ₄ - Alkylamino steht beispielsweise für einen Monoalkylaminorest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminorest mit jeweils 1 bis 4 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.

Mono-Alkylamino steht für einen Alkylaminorest mit einem linearen oder verzweigten Alkyl- substituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylamino, Ethylamino, n-Propylamino, iso- Propylamino und tert-Butylamino.

Mono-Cycloalkylamino steht für einen Cycloalkylaminorest mit einem Cycloalkyl-Substituenten und der weitere Substituent am Aminorest ist Wasserstoff, beispielhaft und vorzugsweise für Cyclopropylamino und Cyclobutylamino.

Alkylcarbonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonyl, Ethylcarbonyl, n- Propylcarbonyl, iso-Propylcarbonyl, n-Butylcarbonyl und tert-Butylcarbonyl.

Alkoxycarbonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, n- Propoxycarbonyl, iso-Propoxycarbonyl, n-Butoxycarbonyl und tert-Butoxycarbonyl.

Alkylaminocarbonyl steht für einen Alkylaminocarbonylrest mit einem oder zwei (unabhängig von- einander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylaminocarbonyl,

Ethylaminocarbonyl, n-Propylaminocarbonyl, iso-Propylaminocarbonyl, tert-Butylaminocarbonyl,

NN-Dimethylaminocarbonyl, NN-Diethylaminocarbonyl, N-Ethyl-N-methylaminocarbonyl, N-

Methyl-N-n-propylaminocarbonyl, N-iso-Propyl-N-n-propylaminocarbonyl und N-tert-Butyl-N- methylaminocarbonyl. Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl steht beispielsweise für einen Monoalkylaminocarbonylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylamino- carbonylrest mit jeweils 1 bis 4 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.

Alkylcarbonylamino steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonylamino, Ethyl- carbonylamino, n-Propylcarbonylamino, iso-Propylcarbonylamino, n-Butylcarbonylamino und tert- Butylcarbonylamino.

Alkylsulfonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylsulfonyl, Ethylsulfonyl, n- Propylsulfonyl, iso-Propylsulfonyl, n-Butylsulfonyl und tert-Butylsulfonyl.

Alkylaminosulfonyl steht für einen Alkylaminosulfonylrest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylaminosulfonyl, Ethylaminosulfonyl, n-Propylaminosulfonyl, iso-Propylaminosulfonyl, tert-Butylaminosulfonyl, NN- Dimethylaminosulfonyl, NN-Diethylaminosulfonyl, N-Ethyl-N-methylaminosulfonyl, N-Methyl-N-n- propylaminosulfonyl, N-iso-Propyl-N-n-propylaminosulfonyl und N-tert-Butyl-N-methyl- aminosulfonyl. Ci-C ₄ -Alkylaminosulfonyl steht beispielsweise für einen Monoalkylaminosulfonylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylamino-sulfonylrest mit jeweils 1 bis 4 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.

Alkylsulfonylamino steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylsulfonylamino, Ethyl- sulfonylamino, n-Propylsulfonylamino, iso-Propylsulfonylamino, n-Butylsulfonylamino und tert- Butylsulfonylamino .

Cycloalkyl steht für eine monocyclische Cycloalkylgruppe mit in der Regel 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Cycloalkyl seien genannt Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl.

Heterocyclyl steht für einen monocyclischen, heterocyclischen Rest mit 5 oder 6 Ringatomen und bis zu 3, vorzugsweise bis zu 2 Heteroatomen und/oder Heterogruppen aus der Reihe ν, O, S, SO, SO ₂ , wobei ein Stickstoffatom auch ein ν-Oxid bilden kann. Die Heterocyclyl-Reste können gesättigt oder teilweise ungesättigt sein. Bevorzugt sind 5- oder 6-gliedrige, monocyclische gesättigte Heterocyclylreste mit bis zu zwei Heteroatomen aus der Reihe O, ν und S, beispielhaft und vorzugsweise für Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Tetrahydrofuranyl, Tetrahydrothienyl, Pyranyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl, Thiopyranyl, Moφholin-1-yl, Morpholin-2-yl, Mθφholin-3-yl, Piperazin-1-yl, Piperazin-2-yl.

Heteroaryl steht für einen aromatischen, mono- oder bicyclischen Rest mit in der Regel 5 bis 10, vorzugsweise 5 oder 6 Ringatomen und bis zu 5, vorzugsweise bis zu 4 Heteroatomen aus der Reihe S, O und ν, wobei ein Stickstoffatom auch ein ν-Oxid bilden kann, beispielhaft und vorzugsweise für Thienyl, Furyl, Pyrrolyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Oxadiazolyl, Pyrazolyl, Imidazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl, Indolyl, Indazolyl, Benzofuranyl, Benzothiophenyl,

Chinolinyl, Isochinolinyl, Benzoxazolyl, Benzimidazolyl.

Halogen steht für Fluor, Chlor, Brom und Jod, vorzugsweise für Fluor und Chlor.

In den Formeln der Gruppe, die für R ¹ stehen kann, steht der Endpunkt der Linie, neben der jeweils ein * steht, nicht für ein Kohlenstoffatom beziehungsweise eine CH ₂ -Gruppe, sondern ist Be- standteil der Bindung zu dem Atom, an das R ¹ gebunden ist.

In den Formeln der Gruppe, die für R ³ stehen kann, steht der Endpunkt der Linie, neben der jeweils ein # steht, nicht für ein Kohlenstoffatom beziehungsweise eine CH ₂ -Gruppe, sondern ist Bestandteil der Bindung zu dem Atom, an das R ³ gebunden ist.

Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher

entweder

U für N steht,

V für CR ¹² steht,

W für N steht,

A für CR ¹⁵ steht,

oder

U für N steht,

V für N steht,

W für CR ¹⁶ steht,

A für N steht,

wobei

R ¹² für Wasserstoff, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino, C _r C ₄ -Alkylcarbonyl, C _r C ₄ -Alkoxycarbonyl, C _r C ₄ - Alkylaminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylcarbonylamino, 5- oder 6-gliedriges

Heterocyclylcarbonyl, -CH ₂ R ¹³ oder -CH ₂ CH ₂ R ¹⁴ steht,

wobei Heterocyclylcarbonyl substituiert sein kann mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe

bestehend aus Oxo, C _r C ₄ -Alkyl, Cj-C ₄ -AIkOXy, Ci-C ₄ -Alkylamino, CpC ₄ - Alkylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl und Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl,

und

wobei Alkoxy, Alkylamino, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl und Alkylcarbonylamino substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino und 5- oder 6-gliedriges Heterocyclyl,

worin Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der

Gruppe bestehend aus Oxo, Ci-C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ - Alkylamino, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl und Ci-C ₄ - Alkylaminocarbonyl,

und

wobei

R ¹³ für Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C _r C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl, C ₁ -C ₄ - Alkylcarbonylamino oder 5- oder 6-gliedriges Heterocyclyl steht,

worin Alkoxy, Alkylamino, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl und Alkylcarbonylamino substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C _r C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, Ci -C ₄ - Alkylaminocarbonyl und Ci-C ₄ -Alkylcarbonylamino,

und

worin Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Oxo, Ci-C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, C _r C ₄ - Alkylamino, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl und C]-C ₄ - Alkylaminocarbonyl,

und

wobei

R ¹⁴ für Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C _r C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylcarbonylamino oder 5- oder 6-gliedriges Heterocyclyl steht,

worin Alkoxy, Alkylamino, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl und Alkylcarbonylamino substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C _r C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino, Ci -C ₄ - Alkoxycarbonyl, Ci-Q-Alkylaminocarbonyl und C i -C ₄ -Alkylcarbonylamino,

und

worin Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Oxo, Ci-C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, Q-C ₄ - Alkylamino, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl, Ci -C ₄ - Alkoxycarbonyl und C ₁ -C ₄ - Alkylaminocarbonyl,

R 15 für Wasserstoff, Halogen, Cyano oder Trifluormethyl steht,

R 16 für Wasserstoff oder Methyl steht,

für eine Gruppe der Formel

steht,

wobei

* die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet,

n für die Zahl 0 oder 1 steht,

X für NR ¹⁰ , S oder O steht,

worin

R ¹⁰ für Wasserstoff oder Methyl steht,

Y für NR ¹¹ oder S steht,

worin

R ¹ ' für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ³ für Pyrid-2-yl, Pyrimid-2-yl, 2-Aminopyrimid-4-yl, l,3-Oxazol-2-yl, l,3-Oxazol-4- yl, l,2,4-Oxadiazol-3-yl, l,2,3-Oxadiazol-4-yl, l,3-Thiazol-2-yl oder 1,3-Thiazol- 4-yl steht,

wobei Pyrid-2-yl, Pyrimid-2-yl, l,3-Oxazol-2-yl, l,3-Oxazol-4-yl, l,3-Thiazol-2-yl und l,3-Thiazol-4-yl substituiert sind mit 1 oder 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Nitro, Amino, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, Trifluormethylcarbonyl Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy, C ₁ -C ₄ - Alkylamino, Methylcarbonyl, Ethylcarbonyl, Cyclopropylcarbonyl, Methoxycarbonyl und Ethoxycarbonyl,

und

wobei 2-Aminopyrimid-4-yl, l,2,4-Oxadiazol-3-yl und l,2,3-Oxadiazol-4-yl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Nitro, Amino, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, Trifluormethylcarbonyl, Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino, Methylcarbonyl,

Ethylcarbonyl, Cyclopropylcarbonyl, Methoxycarbonyl und Ethoxycarbonyl,

R ⁴ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ⁵ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ⁶ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ⁷ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ⁸ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ⁹ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ² für C ₆ -Cio-Aryl, Thienyl, Furyl, Pyrrolyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Oxadiazolyl, Pyrazolyl, Imidazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl, Indolyl, Indazolyl, Chinolinyl, Benzfuranyl oder Benzoxazolyl steht,

wobei Aryl, Thienyl, Furyl, Pyrrolyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Oxadiazolyl, Pyrazolyl, Imidazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl, Indolyl, Indazolyl, Chinolinyl, Benzfuranyl und Benzoxazolyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Hydroxymethyl, Amino, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkoxymethyl, Ci-C ₄ -Alkylamino, Ci-C ₄ -Alkylaminomethyl, Ci-C ₄ -Alkylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, CpC ₄ - Alkylaminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylcarbonylamino, Ci-C ₄ -Alkylsulfonyl, CpC ₄ -

Alkylsulfonylamino, CpC ₄ -Alkylaminosulfonyl, Phenyl, Benzyloxy, 5- oder 6-gliedrigem Heterocyclyl, 5- oder 6-gliedrigem Heterocyclylcarbonyl, 5- oder 6-gliedrigem Heterocyclylmethyl und 5- oder 6-gliedrigem Heteroaryl,

worin Phenyl, Benzyloxy, Heterocyclyl, Heterocyclylcarbonyl, Heterocyclylmethyl und Heteroaryl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, wobei die

Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, CpC ₄ -Alkyl, C,-C ₄ -Alkoxy, C _r C ₄ -Alkylamino, CpQ-Alkylcarbonyl, CpC ₄ - Alkoxycarbonyl, Ci -C ₄ - Alkylaminocarbonyl und CpC ₄ -Alkylcarbonylamino,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher

entweder

U für N steht,

V für CR ¹² steht,

W für N steht,

A für CR ¹⁵ steht,

oder

U für N steht,

V für N steht,

W für CR ¹⁶ steht,

A für N steht,

wobei

R ¹² für Wasserstoff, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Methyl, Ethyl, Ci-C ₄ - Alkylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl, Ci-C ₄ -

Alkylcarbonylamino, Pyrrolidinylcarbonyl, Piperidinylcarbonyl,

Piperazinylcarbonyl, Mopholinylcarbonyl oder -CH ₂ R ¹³ steht,

wobei Pyrrolidinylcarbonyl, Piperidinylcarbonyl, Piperazinylcarbonyl und Mopholinylcarbonyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Oxo, Methyl und Ethyl,

und

wobei Alkylcarbonyl, C ₂ -C ₄ -Alkoxycarbonyl und C ₂ -C ₄ -Alkylaminocarbonyl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substiruent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Ci-C ₄ -

Alkylamino, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl und Morphlinyl,

worin Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl und Morphlinyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Oxo, Methyl und Ethyl,

und

wobei

R 13 für Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, C _r C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl oder Morphlinyl steht,

worin Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl und Morphlinyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Oxo, Methyl und Ethyl,

R 15 für Wasserstoff steht,

R 16 für Wasserstoff steht,

für eine Gruppe der Formel

steht,

wobei

die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet,

für die Zahl 0 steht,

X für NR 1 ⁱ 0 ^υ steht,

woπn

R ^iυ für Wasserstoff steht,

für NR ¹¹ steht,

woπn

R ¹ ' für Wasserstoff steht,

R ³ für Pyrid-2-yl, Pyrimid-2-yl, 2-Aminopyrimid-4-yl, 1 ,3-Thiazol-2-yl oder 1,3- Thiazol-4-yl steht,

wobei Pyrid-2-yl, Pyrimid-2-yl, l,3-Thiazol-2-yl und l,3-Thiazol-4-yl substituiert sind mit 1 oder 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Chlor, Cyano, Nitro, Amino, Trifluormethyl und Trifluormethylcarbonyl,

und

wobei 2-Aminopyrimid-4-yl substituiert sein kann mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Chlor, Cyano, Nitro, Amino, Trifluormethyl und Trifluormethylcarbonyl,

R ⁴ für Wasserstoff steht,

R ⁵ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ⁶ für Wasserstoff steht,

R ⁷ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ⁸ für Wasserstoff steht,

R ⁹ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ² für Phenyl, Thienyl, Pyrazolyl oder Pyridyl steht,

wobei Phenyl, Thienyl, Pyrazolyl und Pyridyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Morpholinyl und Morpholinylcarbonyl,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Besonders bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher

entweder

U für N steht,

V für CR ¹² steht,

W für N steht,

A für CR ¹⁵ steht,

oder

U für N steht,

V für N steht,

W für CR ¹⁶ steht,

A für N steht,

wobei

R ¹² für Wasserstoff, Hydroxycarbonyl, Methyl, Ethyl, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl, Piperidinylcarbonyl oder Mopholinylcarbonyl steht,

wobei Piperidinylcarbonyl und Mopholinylcarbonyl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Methyl und Ethyl,

und

wobei C ₂ -C ₄ -Alkylaminocarbonyl substituiert sein kann mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Ci-C ₄ - Alkylamino, Piperazinyl und Morphlinyl,

worin Piperazinyl und Morphlinyl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Methyl und Ethyl,

R ¹⁵ für Wasserstoff steht,

R ¹⁶ für Wasserstoff steht,

R ¹ für eine Gruppe der Formel

steht, wobei

* die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet, n für die Zahl 0 steht,

X für NR ¹⁰ steht, worin

R ¹⁰ für Wasserstoff steht, für NR ¹¹ steht, worin

R ¹ ' für Wasserstoff steht, R ³ für eine Gruppe der Formel

steht, wobei

# die Anknüpfstelle an Y bedeutet,

L für Cyano, Nitro, Trifluormethyl oder Trifluormethylcarbonyl steht,

M für Wasserstoff oder Amino steht, R ⁴ für Wasserstoff steht,

R ⁵ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ⁶ für Wasserstoff steht,

R ⁷ für Wasserstoff oder Methyl steht,

R ⁸ für Wasserstoff steht,

R ⁹ für Wasserstoff steht,

R ² für Phenyl steht,

wobei Phenyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Chlor, Trifiuormethyl, Trifluormethoxy, Ci-C ₃ -Alkyl, Methoxy, Methoxycarbonyl und Ethoxycarbonyl,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Besonders bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher

entweder

U für N steht,

V für CR ¹² steht,

W für N steht,

A für CR ¹⁵ steht,

oder

U für N steht,

V für N steht,

W für CR ¹⁶ steht,

A für N steht,

wobei

R ¹² für Wasserstoff steht,

R ¹⁵ für Wasserstoff steht, R ¹⁶ für Wasserstoff steht, für eine Gruppe der Formel

steht, wobei die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet, n für die Zahl 0 steht,

X für NR 1'0 ^υ steht, worin

R ^iU für Wasserstoff steht, für NR ¹¹ steht, worin

R ¹ ' für Wasserstoff steht,

R für eine Gruppe der Formel

steht, wobei

# die Anknüpfstelle an Y bedeutet,

entweder

L für Cyano steht,

und

M für Wasserstoff steht,

oder

L für Cyano, Nitro oder Trifluormethylcarbonyl steht,

und

M für Amino steht,

R ⁴ für Wasserstoff steht,

R ⁵ für Wasserstoff steht,

R ⁶ für Wasserstoff steht,

R ⁷ für Wasserstoff steht,

R ⁸ für Wasserstoff steht,

R ⁹ für Wasserstoff steht,

R ² für Phenyl steht,

wobei Phenyl substituiert ist mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Chlor und Trifluormethyl,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher

entweder

U für N steht,

V für CR ¹² steht,

W für N steht,

A für CR ¹⁵ steht,

oder

U für N steht,

V für N steht,

W für CR ¹⁶ steht,

A für N steht,

wobei

R ¹² für Wasserstoff, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Methyl, Ethyl, Ci-C ₄ - Alkylcarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl, Ci-C ₄ -

Alkylcarbonylamino, Pyrrolidinylcarbonyl, Piperidinylcarbonyl,

Piperazinylcarbonyl, Mopholinylcarbonyl oder -CH ₂ R ¹³ steht,

wobei Pyrrolidinylcarbonyl, Piperidinylcarbonyl, Piperazinylcarbonyl und Mopholinylcarbonyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Oxo, Methyl und Ethyl,

und

wobei Alkylcarbonyl, C ₂ -C ₄ -Alkoxycarbonyl und C ₂ -C ₄ -Alkylaminocarbonyl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Ci-C ₄ -

Alkylamino, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl und Morphlinyl,

worin Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl und Morphlinyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Oxo, Methyl und Ethyl,

und

wobei

R ¹³ für Hydroxy, Amino, Hydroxycarbonyl, Aminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkylamino, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl oder Morphlinyl steht,

worin Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl und Morphlinyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Oxo, Methyl und Ethyl,

R ¹⁵ für Wasserstoff steht,

R ¹⁶ für Wasserstoff steht,

für eine Gruppe der Formel

steht,

wobei

* die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet,

R ³ für Pyrid-2-yl, Pyrimid-2-yl, 2-Arninopyrimid-4-yl, l,3-Thiazol-2-yl oder 1,3-

Thiazol-4-yl steht,

wobei Pyrid-2-yl, Pyrimid-2-yl, l,3-Thiazol-2-yl und 1 ,3-Thiazol-4-yl substituiert sind mit 1 oder 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Chlor, Cyano, Nitro, Amino, Trifluormethyl und Trifluormethylcarbonyl,

und

wobei 2-Aminopyrimid-4-yl substituiert sein kann mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Chlor, Cyano, Nitro, Amino, Trifluormethyl und Trifluormethylcarbonyl,

R ² für Phenyl, Thienyl, Pyrazolyl oder Pyridyl steht,

wobei Phenyl, Thienyl, Pyrazolyl und Pyridyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Aminocarbonyl, Ci-C ₄ -Alkyl, Ci-C ₄ -Alkoxy, Ci-C ₄ -Alkoxycarbonyl, C ₁ -C ₄ -Alkylaminocarbonyl,

Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Morpholinyl und Morpholinylcarbonyl,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Besonders bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher

entweder

U für N steht,

V für CR ¹² steht,

W für N steht,

A für CR ¹⁵ steht,

oder

U für N steht,

V für N steht,

W für CR ¹⁶ steht,

A für N steht,

wobei

R ¹² für Wasserstoff, Hydroxycarbonyl, Methyl, Ethyl, Methoxycarbonyl,

Ethoxycarbonyl, Piperidinylcarbonyl oder Mopholinylcarbonyl steht,

wobei Piperidinylcarbonyl und Mopholinylcarbonyl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Methyl und Ethyl,

und

wobei C ₂ -C ₄ -Alkylaminocarbonyl substituiert sein kann mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Q -C ₄ - Alkylamino, Piperazinyl und Morphlinyl,

worin Piperazinyl und Morphlinyl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Methyl und Ethyl,

R ¹⁵ für Wasserstoff steht,

R ¹⁶ für Wasserstoff steht,

für eine Gruppe der Formel

steht,

wobei

* die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet,

R ³ für eine Gruppe der Formel

steht,

wobei

# die Anknüpfstelle an NH bedeutet,

L für Cyano, Nitro, Trifluormethyl oder Trifluormethylcarbonyl steht,

M für Wasserstoff oder Amino steht,

R ² für Phenyl steht,

wobei Phenyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Chlor, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Ci-C ₃ -Alkyl, Methoxy, Methoxycarbonyl und Ethoxycarbonyl,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Besonders bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher

entweder

U für N steht,

V für CR ¹² steht,

W für N steht,

A für CR ¹⁵ steht,

oder

U für N steht,

V für N steht,

W für CR ¹⁶ steht,

A für N steht,

wobei

R ¹² für Wasserstoff steht,

R ¹⁵ für Wasserstoff steht,

R ¹⁶ für Wasserstoff steht,

R ¹ für eine Gruppe der Formel

steht, wobei die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet,

R ³ für eine Gruppe der Formel

steht, wobei

# die Anknüpfstelle an NH bedeutet, entweder

L für Cyano steht, und

M für Wasserstoff steht, oder L für Cyano, Nitro oder Trifluormethylcarbonyl steht, und

M für Amino steht, für Phenyl steht, wobei Phenyl substituiert ist mit 1 bis 2 Substituenten, wobei die Substituenten

unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Chlor und Trifluormethyl,

und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher U für N, V für CR ¹² , W für N und A für CR ¹⁵ steht,

wobei

R ¹² für Wasserstoff, Hydroxycarbonyl, Methyl, Ethyl, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, Ci-C ₄ -Alkylaminocarbonyl, Piperidinylcarbonyl oder Mopholinylcarbonyl steht,

wobei Piperidinylcarbonyl und Mopholinylcarbonyl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus

Methyl und Ethyl,

und

wobei C ₂ -C ₄ -Alkylaminocarbonyl substituiert sein kann mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Ci-C ₄ -Alkylamino, Piperazinyl und Morphlinyl,

worin Piperazinyl und Morphlinyl substituiert sein können mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Methyl und Ethyl,

und

R ¹⁵ für Wasserstoff steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher U für N, V für CR ¹² , W für N und A für CR ¹⁵ steht, wobei R ¹² und R ¹⁵ für Wasserstoff stehen.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher U für N, V für N, W für CR ¹⁶ und A für N steht, wobei R ¹⁶ für Wasserstoff steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ¹ für -NHCH ₂ CH ₂ NH-R ³ steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ¹ für eine Gruppe der Formel

steht, wobei * die Anknüpfstelle an den Heterocyclus bedeutet.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ¹ für -NHCH ₂ CH ₂ NH-R ³ steht, wobei R ³ für 5-Cyanopyrid-2-yl steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ¹ für -NHCH ₂ CH ₂ NH-R ³ steht, wobei R ³ für 5-Trifluormethylcarbonyl-6-amino-pyrid-2-yl steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher n für die Zahl 0 steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher X für NR ¹⁰ steht, worin R ¹⁰ für Wasserstoff steht und Y für NR ¹ ' steht, worin R ^{1 !} für Wasserstoff oder Methyl steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher X für NR ¹⁰ steht, wobei R ¹⁰ für Wasserstoff steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher Y für NR ¹¹ steht, wobei R ¹¹ für Wasserstoff steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher

R ³ für Pyrid-2-yl, Pyrimid-2-yl, 2-Aminopyrimid-4-yl, l,3-Thiazol-2-yl oder 1 ,3-Thiazol-4-yl steht,

wobei Pyrid-2-yl, Pyrimid-2-yl, l,3-Thiazol-2-yl und l,3-Thiazol-4-yl substituiert sind mit 1 oder 2 Substituenten, wobei die Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt werden aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Chlor, Cyano, Nitro, Amino und Trifluormethyl,

und

wobei 2-Aminopyrimid-4-yl substituiert sein kann mit einem Substituenten, wobei der Substituent ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Chlor, Cyano, Nitro, Amino und Trifluormethyl.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher

R ³ für eine Gruppe der Formel

steht,

wobei

# die Anknüpfstelle an Y oder NH bedeutet,

L für Cyano, Nitro oder Trifluormethyl steht,

M für Wasserstoff oder Amino steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ³ für 5-Cyanopyrid-2-yl steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ³ für 5-Trifluormethylcarbonyl-6- amino-pyrid-2-yl steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R ⁴ , R ⁵ , R ⁶ , R ⁷ , R ⁸ und R ⁹ für Wasserstoff stehen.

Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I), oder ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze, wobei

die Verbindungen der Formel

in welcher

A, U, V, W und R ² die oben angegebene Bedeutung haben,

und

X ¹ für Halogen, bevorzugt Chlor oder Fluor, steht,

mit Verbindungen der Formel

R ¹ — H (ffl),

in welcher

R ¹ die oben angegebene Bedeutung hat,

umgesetzt werden.

Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, gegebenenfalls in einer Mikrowelle, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 50 ⁰ C bis 200 ⁰ C bei Normaldruck bis 5 bar.

Basen sind beispielsweise beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium-, Kalium- oder Caesiumcarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine, z.B. Triethylamin, N-Methyl- morpholin, N-Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin, oder andere Basen wie beispielsweise νatriumhydrid oder Kalium-tert.-butylat, bevorzugt ist Diisopropylethylamin oder νatriumhydrid.

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid oder Trichlormethan, Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol oder Isopropanol, oder Ether wie Dioxan oder Tetrahydrofuran, oder andere Lösungsmittel wie beispielsweise Dimethylsulfoxid, Dimethylformamid oder ν-Methylpyrrolidon, oder Gemische dieser Lösungsmittel, bevorzugt ist ν-Methylpyrrolidon oder Dimethylsulfoxid.

Die Verbindungen der Formel (E) sind bekannt, lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren oder können analog den im Beispielteil (Beispiel 3 A bis 10A und Beispiel 18A bis 20A) beschriebenen Verfahren oder analog zu J. Org. Chem. (2005), 70 (18), 7331-7337 und WO 03/000693 hergestellt werden.

Die Verbindungen der Formel (HI) sind bekannt, lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren oder können analog den im Beispielteil (Beispiel IA bis 2A, Beispiel I IA bis 17A und Beispiel 21 A bis 24A) beschriebenen Verfahren hergestellt werden.

Die Herstellung der Ausgangsverbindungen und der Verbindungen der Formel (I) kann durch die folgenden Syntheseschemata verdeutlicht werden.

Schema 1: Herstellung von Triazolo[3,4-f] [l,2,4]triazinen

Schema 2: Herstellung von Triazolofl ,5-aJpyrazinen

Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches und pharmakokinetisches Wirkspektrum.

Sie eigenen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, vorzugsweise hämatologischen Erkrankungen, insbesondere von Leukopenien und Neutropenie.

Die erfϊndungsgemäßen Verbindungen eignen sich daher zur Prophylaxe und/oder Behandlung von neurodegenerativen Erkrankungen wie z.B. Alzheimer, Parkinson, Schizophrenie, Degeneration, Dementia, Depressionen; Aggression, zerebrovaskulär Ischämie, Schlafstörungen, Huntington- Chorea, neurotraumatische Erkrankungen wie z.B. Schlaganfall; Typ 2 Diabetes Mellitus und assoziierte Erkrankungen wie z.B. das metabolische Syndrom oder Fettleibigkeit, Typ 1 Diabetes Mellitus, Diabetische Nephrophatie, Diabetische Neurophatie, Diabetische Retinophatie, Glomerulonephritis, Hyperkalzämie, Hyperglykämie, Hyperlipidimie, Glukose-Galaktose- Malabsorption, allgemeine endokrine Dysfunktionen wie z.B. Pankreatitis; hämatologische Erkrankungen, wie zum Beispiel erworbene und angeborene Neutropenie, medikamentös induzierte Neutropenie, parasitär induzierte Neutropenie, Chemotherapie-induzierte Neutropenie, Granulozytopenie, erworbene und angeborene Leukopenie, erworbene und angeborene Anämie, hämolytische Anämie, Sichelzellenanämie, erworbene und angeborenen Thrombozytopenie, Leukozytenfunktionssörungen, Störungen der Blutgerinnung, Graft-versus-host-Reaktion; Krebs, wie zum Beispiel Mammakarzinom, Kolontumor, gastrointestinale Tumore, Hodgkin-Lymphom, Non-Hodgkin-Lymphom, Kaposisarkom, Lebertumor, Pankreastumor, Hauttumor, Knochenmarkstumor, Leukämien wie z.B. akute lymphatische Leukämie, akute myeloische Leukämie, chronische myeloische Leukämie, chronische lymphatische Leukämie, MLL-Leukämie, Prostatatumore, Lungenkrebs, Nierentumore; Asthma, progrediente, nicht vollständig reversible Obstruktion der Atemwege, Lungenentzündung, Lungenfehlfunktion; Entzündungserkrankungen wie z.B. Autoimmunerkrankungen wie Multiple Sklerose, rheumatoide Arthritis; Infektionen durch gram-negative und gram-positive Bakterien, virale Infektionen, Pilzinfektionen wie z. B. durch Candida albicans, HTV- und HTV-assoziierte Infektionen, Hepatitis der Typen A, B und C, parasitäre Infektionen; Malaria; Haarausfall; verminderte Beweglichkeit von Spermien; Wundheilung; Glaukom; Osteoporose, Knochenmarkserkrankungen, Knochen- und Gelenkserkrankungen; Herzkreislauferkrankungen wie z.B. Herzfehler, Herzinsuffizienz, Herzfibrose, Herzrhythmusstörungen, Myokardinfarkt, Medikamenten- oder Substanzinduzierte Kardiotoxizität, Atherosklerose, Bluthochdruck; Sepsis; inflammatorische Erkrankungen.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich besonders zur Prophylaxe und/oder Behandlung von neurodegenerativen Erkrankungen wie z.B. Alzheimer und Schizophrenie, von Typ 2 Diabetes Mellitus und assoziierten Erkrankungen, von Krebs, von Leukopenien und/oder von Neutropenien.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich besonders zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Leukopenien und/oder von Neutropenien.

Die erfϊndungsgemäßen Verbindungen können darüber hinaus auch zur effizienten ex vivo Vermehrung von adulten hämatopoetischen Stammzellen aus dem Knochenmark und/oder aus

peripherem Blut und/oder zur ex vivo Vermehrung von embryonalen Stammstellen aus Nabelschnurblut eingesetzt werden.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können darüber hinaus auch zur ex vivo Vermehrung embryonaler und/oder adulter Stammzellen sowie zur ex vivo Differenzierung embryonaler und/oder adulter Stammzellen verwendet werden.

Diese so expandierten Zellen können dann zur Verkürzung der durch myeloablative Therapien induzierten Zytopenien oder im Rahmen von therapeutischen Transplantationsverfahren oder bei hämatologischen Systemerkrankungen, wie z.B. Leukämien, oder mit nach der Expansion gentechnisch veränderter Zellen für Gentherapien verwendet werden.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer erfϊndungsgemäßen Verbindung.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfindungs- gemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen. Als geeignete Kombinationswirkstoffe seien beispielhaft und vorzugsweise genannt:

Eine Kombination der erfindungsgemäßen Verbindungen mit in der Klinik verwendeten chemotherapeutischen Agenzien können bei unterschiedlichen Tumorerkrankungen zu einem signifikant verbesserten Behandlungserfolg fuhren. Bei den chemotherapeutischen Agenzien handelt es sich um Substanzen, welche entweder die Teilungsrate von Tumorzellen inhibieren und/oder die Neovaskularisierung von soliden Tumoren unterbindet. Dazu gehören u.a. Substanzen aus der Gruppe der Taxane wie z.B. Paclitaxel, oder Docetaxel, Substanzen, welche die Mitose von Tumorzellen inhibieren wie z.B. Vinblastin, Vincristin, Vindesin oder Vinorelbin. Substanzen aus der Klasse der Platinum-Derivate wie z.B. Cisplatin, Carboplatin, Oxaliplatin, Nedaplatin oder Lobaplatin. Weiterhin gehören zu den chemotherapeutischen Agentien Substanzen aus der Klasse der alkylierenden Agentien, wie z.B. Cyclophosphamid, Ifosfamid, Melphalan, Chlorambucil,

Pipobroman, Triethylen-Melamin, Busulfan, Carmustin, Lomustin, Streptozin, Dacarbazin oder Temozolomid. Zu den chemotherapeutischen Agenzien werden auch Anti-Metabolite wie z.B. Folsäure-Antagonisten, Pyrimidin-Analoga, Purin- Analoga oder Adenosin-Desaminase-Inhibitoren gezählt. In diese Substanzklasse gehören u.a. Methotrexat, 5 -Fluorouracil, Floxuridin, Cytarabin, Pentostatin und Gemcitabin. Als chemotherapeutische Agenzien werden auch Naturstoffe oder deren Derivate eingesetzt, zu denen u.a. Enzyme, Anti-Tumor-Antikörper und Lymphokine gezählt werden. Dazu gehören z.B. Bleomycin, Dactinomycin, Daunorubicin, Doxorubicin, Epirubicin, Idarubicin, ara-V, Paclitaxel, Mithramycin, Mitomycin-C, L-Asparaginase, Interferone (z.B. IFN- alhpa) und Etoposid. Andere chemotherapeutische Agentien mit anti-proliferativer und/oder anti- angiogenetischer Wirkung sind Sorafenib, Sunitinib, Bortezomib, DAST Inhibitor (BAY 73-4506), ZK-Epothilon u.a.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur ex vivo Vermehrung von adulten hämatopoetischen Stammzellen aus dem Knochenmark und/oder aus peripherem Blut und/oder zur ex vivo Vermehrung von embryonalen Stammstellen aus Nabelschnurblut, das dadurch gekennzeichnet ist, dass eine wirksame Menge der erfϊndungsgemäßen Verbindung zugegeben wird.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otisch oder als Implantat bzw. Stent.

Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.

Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende schnell und/oder modifiziert die erfindungsgemäßen Verbindungen abgebende Applikationsformen, die die erfϊndungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/ oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen überzügen, die die Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen.

Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer

Resoφtion (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.

Bevorzugt ist die orale Applikation.

Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen, -sprays; lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapsem, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen, Vaginalkapsem, wässrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (wie beispielsweise Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Laktose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige PoIy- ethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natrium- dodecylsulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und / oder Geruchskorrigentien.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfϊn- dungsgemäße Verbindung, vorzugsweise zusammen mit einem oder mehreren inerten nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.

Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 5 bis 1500 mg je 24 Stunden zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Menge etwa 5 bis 2000 mg je 24 Stunden.

Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt.

Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben,

Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen. Die Angabe "w/v" bedeutet "weight/volume" (Gewicht/Volumen). So bedeutet beispielsweise "10% w/v": 100 ml Lösung oder Suspension enthalten 10 g Substanz.

A) Beispiele

Abkürzungen:

abs. absolut

Boc tert-Butoxycarbonyl

CDCl ₃ Deuterochloroform d Tag

DIEA NN-Diisopropylethylamin

DMAP 4-N,N-Dimethylaminopyridin

DMF Dimethylformamid

DMSO Dimethylsulfoxid d. Th. der Theorie

EDC N'-(3-Dimethylaminopropyl)-N-ethylcarbodiimid x HCl eq. äquivalent

ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS) ges. gesättigt h Stunde

HOBt 1-Hydroxy-lH-benzotriazol x H ₂ O

HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie konz. konzentriert

LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektrometrie min. Minuten

MS Massenspektrometrie

MW Molekulargewicht [g/mol]

NMR Kernresonanzspektroskopie

OAc Acetat

OEt Ethoxy p.a. zur Analyse

PyBOP 1-Benzotriazolyloxy-tripyrrolidinophosphoniumhexafluorophosp hat

Rf Retentionsindex (bei DC)

RP-HPLC Reverse Phase HPLC

RT Raumtemperatur

R. Retentionszeit (bei HPLC)

TBTU (Benzotriazol- 1 -yloxy)bisdimethylaminomethyliumfluoroborat

TFA Trifluoressigsäure

THF Tetrahydrofuran

LC-MS Methoden:

Methode 1 : Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Synergi 2.5 μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A -> 0.1 min 90%A -> 3.0 min 5%A -> 4.0 min 5%A -» 4.1 min 90%A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 50 ⁰ C; UV-Detektion: 208- 400 nm.

Methode 2: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e 100 mm x 4.6 mm; Eluent A: Wasser + 500 μl 50%ige Ameisensäure / 1; Eluent B: Acetonitril + 500 μl 50%ige Ameisensäure / 1; Gradient: 0.0 min 10%B-> 7.0 min 95%B^ 9.0 min 95%B; Ofen: 35 ⁰ C; Fluss: 0.0 min 1.0 ml/min^ 7.0 min 2.0 ml/min-> 9.0 min 2.0 ml/min; UV-Detektion: 210 nm

Methode 3: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3.00 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A -^ 2.5 min 30%A -» 3.0 min 5%A -> 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min. 2 ml/min; Ofen: 50 ⁰ C; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 4: Instrument: Micromass Platform LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure , Eluent B: 11 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100%A -> 0.2 min 100%A -> 2.9 min 30%A -» 3.1 min 10%A ^5.5 min 10%A; Ofen: 50 ⁰ C; Fluss: 0.8 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 5: Gerätetyp MS: Waters ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Onyx Monolithic Cl 8, 100 mm x 3 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A -> 2 min 65%A -» 4.5 min 5%A ^ 6 min 5%A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 40 ⁰ C; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 6: Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Synergi 2.5 μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A -> 0.1 min 90%A -> 3.0 min 5%A -» 4.0 min 5%A -» 4.01 min 90%A; Fluss: 2 ml/min;; Ofen: 50 ⁰ C; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 7: Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100 mm x 3 mm. Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A -> 2 min 65%A -> 4.5 min 5%A -> 6 min 5%A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 40 ⁰ C; UV-Detektion: 208- 400 nm.

Methode 8: Instrument: Micromass QuattroPremier mit Waters UPLC Acquity; Säule: Thermo Hypersil GOLD 1.9μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100%A -> 0.1 min 100%A -> 1.5 min 10%A -» 2.2 min 10%A; Ofen: 50 ⁰ C; Fluss: 0.33 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 9: Instrument: Micromass Quattro Micro MS mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100%A -^ 3.0 min 10% A -> 4.0 min 10%A -» 4.01 min 100%A -> 5.00 min 100%A; Fluss: 0.0 min/3.0 min/4.0 min/4.01 min 2.5 ml/min, 5.00 min 2 ml/min; Ofen: 50 ⁰ C; UV-Detektion: 210 nm.

Methode 10: Präparative HPLC: Säule: Reprosil C18; Gradient: Acetonitril/Wasser mit 0.1% Salzsäure.

Methode 11 : Präparative HPLC: Säule: Reprosil C18; Gradient: Acetonitril/Wasser mit 0.1% Trifluoressigsäure.

Methode 12: Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ, 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A -» 1.2 min 5%A -» 2.0 min 5%A; Fluss: 0.40 ml/min; Ofen: 50 ⁰ C; UV-Detektion: 210 - 400 nm.

Methode 13: Präparative HPLC: Säule: Reprosil C18; Gradient: Acetonitril/Wasser.

Als Mikrowellenreaktor wurde ein "single mode" Gerät vom Typ Emrys Optimizer verwendet.

Ausgangsverbindungen

Beispiel IA

tert-Butyl-{2-[(5-cyanopyridin-2-yl)amino]ethyl}carbamat

5.5 g (39.7 mmol) 6-Chlornicotinsäurenitril wurden in 70 ml DMSO gelöst, und mit 10.2 g (63.5 mmol) N-Boc-Ethylendiamin und 11 g (79.4 mmol) Kaliumcarbonat versetzt. Es wurde 12 h bei 90 ⁰ C nachgerührt. Der Rückstand wurde in einem Gemisch von Wasser und Essigsäureethylester aufgenommen. Die organische Phase wurde mit gesättigter wässriger Natriumchloridlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand wurde an Kieselgel 60 chromatographiert (Laufmittel: Cyclohexan / Essigsäureethylester 10:1 bis 2: 1). Es wurden 7.9 g (77% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 6): R _t = 1.46 min. (m/z = 263 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 8.37 (d, IH), 7.66 (d, IH) 7.6 (s, IH), 6.87 (t, IH), 6.53 (d, IH), 3.32 (q, 2H), 3.09 (q, 2H), 1.37 (s, 9H).

Beispiel 2A

6-[(2-Aminoethyl)amino]nicotinnitril Dihydrochlorid

7.9 g (30 mmol) tert-Butyl-{2-[(5-cyanopyridin-2-yl)amino]ethyl}carbamat (Beispiel IA) wurden in 100 ml 4N Chlorwasserstoff in Dioxan gelöst und 30 min nachgerührt. Man engte das Reaktionsgemisch um die Hälfte ein und gab den gleichen Teil an Diethylether zu. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min nachgerührt und das Produkt abfiltriert und mit Diethylether nachgewaschen. Es wurden 7 g (94% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 4): R, = 0.51 min. (m/z = 162 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 8.44 (s, IH), 7.76 (d, IH), 6.67 (d, IH), 3.58 (t, 2H), 2.98 (q, 2H).

Beispiel 3A

2,4-Dichlor-N'-4H- 1 ,2,4-triazol-4-ylbenzolcarboximidamid

1.37 g (0.059 mol) Natrium wurden in 50 ml Ethanol gelöst und mit 5 g (0.059 mol) 4-Amino-4H- 1,2,4-triazol, sowie 10.23 g (0.059 mol) 2,6-Dichlorbenzonitril versetzt. Es wurde 5 h unter Rückfluß nachgerührt. Nach dem Abkühlen wurde der anfallende Feststoff abfiltriert und das Filtrat einrotiert. Der Feststoff wurde in 120 ml Wasser 15 min unter Rückfluß gerührt. Der Feststoff wurde heiß abgesaugt und getrocknet. Die Mutterlauge wurde verworfen. Das einrotierte Filtrat wurde in 150 ml Wasser aufgenommen im Ultraschallbad suspendiert und 15 min unter Rückfluß nachgerührt. Der Feststoff wurde heiß abgesaugt und getrocknet. Die Mutterlauge wurde verworfen. Beide Feststoffe wurden vereinigt und es wurden 12.99 g (74% d. Th.) des Produktes erhalten.

LCMS (Methode 3): R, = 1.34 min. (m/z = 256 (M+H) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-de): δ = 8.44 (s, 2H), 7.76 (s, IH), 7.59 (d, IH), 7.55 (d, IH).

Beispiel 4A

N'-4H-l,2,4-Triazol-4-yl-4-(trifluormethyl)benzolcarboxim idamid

Die Verbindimg wurde analog zu Beispiel 3A hergestellt. Als Edukt wurde 4- (Trifluormethyl)benzonitril anstatt 2,6-Dichlorbenzonitril verwendet.

LCMS (Methode 3): R, = 1.55 min. (m/z = 256 (MH-H) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 8.5 (s, 2H), 8.11 (d, 2H), 7.87 (d, 2H), 7.56 (br, s, 2H).

Beispiel 5A

Butyl-[(Z)-(2,4-dichlθφhenyl)(4H-l,2,4-triazol-4-ylimin o)methyl]carbamat

808 mg (35.1 mmol) Natrium wurden in 50 ml 1-Butanol gelöst und mit 6 g (23.4 mmol) 2,4- Dichlor-N'-4H-l,2,4-triazol-4-ylbenzolcarboximidamid (Beispiel 3A), sowie 6.2 ml (51.5 mmol)

Diethylcarbonat versetzt. Es wurde 2 h unter Rückfluß nachgerührt. Nach Abkühlung wurde

Essigsäureethylester und Wasser zugegeben, und mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH-Wert 5 eingestellt. Die Phasen wurden getrennt, und die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Man chromatographierte das Reaktionsgemisch an Kieselgel (Laufmittel Dichlormethan/Methanol 100: 1 -> 50:1). Es wurden

4.8 g (56% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 8): R, = 1.08 min. (m/z = 356 (M+H) ⁴ ).

Beispiel 6A

Butyl-{(Z)-(4H-l,2,4-triazol-4-ylimino)[4-(trifluormethyl )phenyl]methyl}carbamat

Die Verbindung wurde analog zu Beispiel 5 A aus N'-4H-l,2,4-Triazol-4-yl-4-(trifluor- methyl)benzolcarboximidamid (Beispiel 4A) hergestellt.

LCMS (Methode 6): R, = 1.73 min. (m/z = 356 (M+H) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 10.75 (s, IH), 8.8 (s, 2H), 7.91 (d, 2H), 7.87 (d, 2H), 3.97 (t, 2H), 1.45 (q, 2H), 1.2 (m, 2H), 0.83 (t, 3H).

Beispiel 7A

6-(2,4-Dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[3,4-f][ 1 ,2,4]triazin-8(7H)-on

4.7 g (13.4 mmol) Butyl-[(Z)-(2,4-dichlorphenyl)(4H-l,2,4-triazol-4-ylimino)me thyl]carbamat (Beispiel 5A) wurden in 25 ml Phenol 5 h unter Rückfluß gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Dichlormethan verdünnt. Man chromatographierte das Reaktionsgemisch an Kieselgel (Laufmittel Dichlormethan/Methanol 100% -» 50:1). Es wurden 3.1 g (78% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 3): R, = 1.62 min. (m/z = 282 (M+H)^.

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-O ₆ ): δ = 13.0 (s, IH), 9.5 (s, IH), 7.99 (ss, IH), 7.71 (d, IH), 7.65 (dd, H).

Beispiel 8A

6-[4-(Trifluoπnethyl)phenyl][l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4 ]triazin-8(7H)-on

Die Verbindung wurde analog zu Beispiel 7A aus Butyl-{(Z)-(4H-l,2,4-triazol-4-ylimino)[4- (trifluormethyl)phenyl]methyl}carbamat (Beispiel 6A) hergestellt.

LCMS (Methode 9): R, = 0.87 min. (m/z = 282 (M+H) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-dβ): δ = 13.05 (br, s, IH), 9.52 (s, IH), 8.16 (d, 2H), 7.97 (d, 2H).

Beispiel 9A

8-Chlor-6-(2,4-dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[3,4-f][ 1 ,2,4]triazin

4.7 g (13.4 mmol) 6-(2,4-Dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4]triazin-8( 7H)-on (Beispiel 7A) wurden in 20 ml Phosphorylchlorid vorgelegt und mit 4.8 g (21.7 mmol) Benzyltriethyl- ammoniumchlorid versetzt. Es wurde 2 h bei 120 ⁰ C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf 150 ml gesättigte Natriumhydrogencarbonat-Lösung gegossen und so lange mit festem Natriumhydrogencarbonat versetzt, bis der pH- Wert 7 erreicht wurde. Der ausfallende Feststoff wurde abgesaugt und getrocknet. Es wurden 1.3 g (75% d. Th.) des Produktes als Feststoff

erhalten.

LCMS (Methode 3): R, = 2.23 min. (m/z = 300 (TVH-H) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-dβ): δ = 9.51 (s, IH), 7.9 (ss, IH), 7,71 (d, IH), 7.66 (dd, IH).

Beispiel 10A

8-Chlor-6-[4-(trifluormethyl)phenyl] [ 1 ,2,4]triazolo[3,4-f] [ 1 ,2,4]triazin

Die Verbindung wurde analog zu Beispiel 9A aus 6-[4-(Trifluormethyl)phenyl][l,2,4]triazolo[3,4- f][l,2,4]triazin-8(7H)-on (Beispiel 8A) hergestellt.

LCMS (Methode 3): R, = 2.3 min. (m/z = 300 (M+H) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Ci ₆ ): δ = 9.52 (s, IH), 8.16 (d, IH), 7.97 (d, IH).

Beispiel IIA

tert-Butyl-(6-chlorpyridin-2-yl)carbamat

23.4 g (181.8 mmol) 2-Chlor-5-aminopyridin wurden unter Argon mit 150 ml THF versetzt und auf 0 ⁰ C gekühlt. Es wurden 73.3 g (400 mmol) Bis-(trimethylsilyl)-natriumamid und 43.65 g (200 mmol) Di-tert-butyldicarbonat, gelöst in 150 ml THF, zugetropft. Nach 15 min wurde das Kühlbad entfernt und weitere 15 min bei RT nachgerührt. Das THF wurde abrotiert und der Rückstand mit Essigsäureethylester und 0.5 N Salzsäure versetzt und extrahiert. Die organische Phase wurde abgetrennt, über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Man

chromatographierte das Reaktionsgemisch an Kieselgel (Laufmittel Dichlormethan/Methanol 100% -» 100:3). Es wurden 36.54 g (88% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 3): R _t = 2.41 min. (m/z = 175 (M+H) ⁴ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 10.11 (s, IH), 7.78 (d, 2H), 7.1 (t, IH), 1.47 (s, 9H).

Beispiel 12A

tert-Butyl-(6-chlor-3-formylpyridin-2-yl)carbamat

Die Reaktionsapparatur wurde ausgeheizt, und die Reaktion erfolgte unter Argon und wurde gerührt. 15 g (65.6 mmol) tert-Butyl-(6-chlθφyridin-2-yl)carbamat (Beispiel I IA) und 19 g (164 mmol) 1 ,2-Bis(dimethylamino)ethan wurden in 270 ml THF vorgelegt und auf -78°C abgekühlt. Es wurden 102.5 ml (164 mmol) Butyllithium (1.6N) zugetropft. Nach Beendigung des Zutropfens wurde die Reaktion langsam auf -10 ⁰ C erwärmt und bei -10 ⁰ C für 2 h gehalten. Dann wieder auf -78°C abgekühlt, und es wurden 10 ml (131 mmol) DMF dazugegeben. Die Reaktion wurde langsam auf RT erwärmt und das Reaktionsgemisch wurde auf 1 1 Essigsäureethylester und 350 ml IN Salzsäure gegeben, 15 min nachgerührt und die organische Phase wurde abgetrennt. Es wurde mit Wasser und gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand wurde mit Diethylether versetzt und der Feststoff wurde abgesaugt und nachgetrocknet. Es wurden 12.3 g (73% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 3): R, = 2.19 min. (m/z = 255 (M+H) ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 10.37 (s, IH), 9.83 (s, IH), 8.2 (d, IH), 7.42 (d, IH), 1.46 (s, 9H).

Beispiel 13A

tert-Butyl- {6-chlor-3-[(hydroxyimino)methyl]pyridin-2-yl} carbamat

15.45 g (60.2 mmol) tert-Butyl-(6-chlor-3-formylpyridin-2-yl)carbamat (Beispiel 12A) wurde in

750 ml Ethanol vorgelegt und mit einer Lösung aus 225 ml Wasser und 9.38 g (120.4 mmol)

Natriumacetat versetzt und 5 min gerührt. Eine Lösung aus 225 ml Wasser und 8.36 g ( 114.4 mmol) Hydroxylamin Hydrochlorid wurde zugegeben und 4 h bei RT gerührt. Bei 20 ⁰ C wurde das

Reaktionsgemisch am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand wurde in

Essigsäureethylester aufgenommen, zweimal mit gesättigter Natriumhydrogencarbonat-Lösung und einmal mit gesättiger Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde abgetrennt, über Magnesiumsulfat getrocknet und bei 20 ⁰ C am Rotationsverdampfer eingeengt. Es wurden 15.5 g (80% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 3): R, = 2.08 min. (m/z = 270 (M+H) ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 11.71 (s, IH), 9.91 (s, IH), 8.14 (s, IH), 8.02 (d, IH), 7.3 (d, IH), 1.49 (s, 9H).

Beispiel 14A

2-Amino-6-chlθφyridin-3-carbaldehydoxim Hydrochlorid

x HCl

15.5 g (57 mmol) tert-Butyl-{6-chlor-3-[(hydroxyimino)methyl]pyridin-2-yl}car bamat (Beispiel 13A) wurden in 285 ml 4N Chlorwasserstoff in Dioxan gelöst und 30 min nachgerührt. Man engte das Reaktionsgemisch um die Hälfte ein und gab den gleichen Teil an Diethylether zu. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min nachgerührt und das Produkt abfiltriert und mit Diethylether nachgewaschen. Es wurden 11 g (94% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 6): R, = 1.09 min. (m/z = 172 (M+H) ^* )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 8.27 (s, IH), 7.61 (d, IH), 6.65 (d, IH).

Beispiel 15A

2- Amino-6-chlorpyridin-3 -carbonitril

11.15 g ( 53.6 mmol) 2-Amino-6-chloφyridin-3-carbaldehydoxim Hydrochlorid (Beispiel 14A) wurden in Dioxan vorgelegt, mit 13 ml (161 mmol) Pyridin versetzt und auf 0 ⁰ C abgekühlt. Es wurden 8.3 ml (58.95 mmol) Trifluoressigsäureanhydrid zugegeben, man erwärmte die Reaktion auf RT und rührte anschließend 2 h bei 60 ⁰ C. Das Reaktionsgemisch wurde in einem Gemisch von Essigsäureethylester und Natriumhydrogencarbonat-Lösung aufgenommen. Die organische Phase wurde mit gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand wurde in Dichlormethan:Diethylether 3:1 suspendiert, und der Feststoff wurde abgesaugt und getrocknet. Es wurden 5.56 g (66% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 6): R, = 1.0 min. (m/z = 154 (M+H) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-dβ): δ = 7.91 (d, IH), 7.38 (s, 2H), 6.69 (d, IH).

Beispiel 16A

tert-Butyl-{2-[(6-amino-5-cyanopyridin-2-yl)amino]ethyl}c arbamat

2 g (13 mmol) 2-Amino-6-chlθφyridin-3-carbonitril (Beispiel 15A) wurden in 15 ml DMSO vorgelegt und mit 2.71 g (16.93 mmol) N-Boc-Ethylenamin und 3.4 ml (19.54 mmol) N ₅ N- Diisopropylethylamin versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 1.5 h bei 115°C in dem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde in einem Gemisch von

Essigsäureethylester und Wasser aufgenommen. Die organische Phase wurde mit gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Es wurden 23.38 g (88% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 3): R, = 1.7 min. (m/z = 278 OVRH) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 7.3 (s, IH), 7.0 (br, s, IH), 6.83 (s, IH), 6.25 (s, 2H), 5.78 (d, IH), 3.25 (q, 2H), 3.06 (q, 2H), 1.36 (s, 9H).

Beispiel 17A

2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril Dihydrochlorid

6.76 g (24.38 mmol) tert-Butyl-{2-[(6-amino-5-cyanopyridin-2-yl)amino]ethyl}carb amat (Beispiel 16A) wurden in 122 ml 4N Chlorwasserstofflösung in Dioxan gelöst und 30 min nachgerührt. Man engte das Reaktionsgemisch um die Hälfte ein und gab den gleichen Teil an Diethylether zu. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min nachgerührt und das Produkt abfiltriert und mit Diethylether nachgewaschen. Es wurden 5.43 g (89% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 6): R, = 0.92 min. (m/z = 177 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 8.1 (s, 2H), 7.5 (d, IH), 5.96 (d, IH), 3.53 (q, 2H), 3.0 (q, 2H).

Beispiel 18A

Methyl- l-[2-(2,4-dichlorphenyl)-2-oxoethyl]-l H- 1 ,2,4-triazol-5-carboxylat

4.3 g (33.8 mmol) Methyl-lH-l,2,4-triazol-3-carboxylat wurden in 58 ml Aceton vorgelegt und mit

7.9 g (35.4 mmol) 2'-Chlor-2,4-dichloracetophenon und 5.3 g (38.9 mmol) Kaliumcarbonat versetzt. Bei RT wurde 20 h nachgerührt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch bei 20 ⁰ C am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand wurde in Dichlormethan aufgenommen, zweimal mit Wasser und einmal mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde abgetrennt, über Magnesiumsulfat getrocknet und bei 20 ⁰ C am Rotationsverdampfer eingeengt. Man chromatographierte das Reaktionsgemisch an Kieselgel (Laufmittel Dichlormethan/Ethanol 100:1). Es wurden 1.47 g (10% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 8): R, = 1.08 min. (m/z = 314 (M+H)^

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 8.27 (s, IH), 8.00 (d, IH), 7.85 (ss, IH), 7.68 (dd,lH), 6.12 (s, 2H), 3.85 (s, 3H).

Beispiel 19A

6-(2,4-Dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8(7H)-on

1.44 g (3.5 mmol) Methyl-l-[2-(2,4-dichlorphenyl)-2-oxoethyl]-lH-l,2,4-triazol -5-carboxylat (Beispiel 18A) und 2.7 g (35 mmol) Ammoniumacetat wurden in Eisessig 24 h unter Rückfluß gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde abgekühlt und in Eiswasser gegeben. Mit Natriumhydrogencarbonat wurde der pH- Wert auf 4 eingestellt und der ausfallende Feststoff wurde abgesaugt und getrocknet. Es wurden 460 mg (47% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 6): R, = 1.32 min. (m/z = 281 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-d _ö ): δ = 12.23 (s, IH), 8.53 (s, IH), 8.09 (s, IH), 7.84 (ss,lH), 7.64 (d, IH), 7.59 (dd, IH).

Beispiel 2OA

8-Chlor-6-(2,4-dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin

460 mg (1.6 mmol) 6-(2,4-Dichlorphenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin-8(7H)-on (Beispiel 19A) wurden in 18 ml Phosphorylchlorid vorgelegt und mit 1.1 g (4.9 mmol) Ben2yltriethylammoniumchlorid versetzt. Es wurde 2 h bei 120 ⁰ C nachgerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf 150 ml gesättigte Natriumhydrogencarbonat-Lösung gegossen und so lange mit festem Natriumhydrogencarbonat versetzt bis der pH-Wert 7 erreicht wurde. Der ausfallende Feststoff wurde abgesaugt und getrocknet. Es wurden 360 mg (73% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 6): R, = 1.97 min. (m/z = 299 (M+H) ⁴ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 8.5 (s, IH), 8.89 (s, IH), 7.85 (ss,lH), 7.72 (d, IH), 7.63 (dd, IH).

Beispiel 21A

4-(Trifluoracetyl)morpholin

15 g (172 mmol) Morpholin wurden in 750 ml Dichlormethan vorgelegt, und es wurden bei 0 ⁰ C 29 ml (206 mmol) Trifluoressigsäureanhydrid und 119 ml (688 mmol) N,N-Diisopropylethylamin zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde auf RT erwärmt und 3 h bei RT nachgerührt. Das Reaktionsgemisch wurde eingeengt und der Rückstand in Essigsäureethylester aufgenommen und nacheinander mit wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung, IN Salzsäure und wieder mit wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Es wurden 28 g (88% d. Th.) des Produktes als öl erhalten.

LCMS (Methode 9): R, = 1.22 min. (m/z = 184 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 3.65 (m, 2H), 3.56 (m, 2H).

Beispiel 22A

tert-Butyl-[6-chlor-3-(trifluoracetyl)pyridin-2-yl]carbam at

8 g (35 mmol) tert-Butyl-(6-chlorpyridin-2-yl)carbamat (Beispiel I IA) wurden in 100 ml THF vorgelegt und auf -50 ⁰ C gekühlt. Es wurden 55 ml (87 mmol) Butyllithium (1.6N) zugetropft. Nach Beendigung des Zutropfens wurde die Reaktion langsam auf -10 ⁰ C erwärmt und bei 0 ⁰ C für 2 h gerührt. Anschließend wurde wieder auf -40 ⁰ C abgekühlt, und es wurden 12.8 g (70 mmol) 4- (Trifluoracetyl)morpholin (Beispiel 21A), gelöst in 4 ml THF, zugegeben. Die Reaktionslösung wurde 1 h bei -40 ⁰ C nachgerührt, danach bei -^40 ⁰ C auf 1 1 Essigsäureethylester und 350 ml Ammoniumchloridlösung gegossen und extrahiert. Die organische Phase wurde abgetrennt, über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Man chromatographierte das Reaktionsgemisch an Kieselgel (Laufmittel Cyclohexan/ Essigsäureethylester 10:1). Es wurden 9 g (79% d. Th.) des Produktes als öl erhalten.

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 10.96 (s, IH), 7.99 (d, IH), 7.4 (d, IH), 1.43 (s, 9H).

Beispiel 23A

tert-Butyl-[6-({2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]ethyl}amino )-3-(trifluoracetyl)pyridin-2- yl]carbamat

5 g (15.4 mmol) tert-Butyl-[6-chlor-3-(trifluoracetyl)pyridin-2-yl]carbamat (Beispiel 22A) wurden in 37.5 ml DMSO vorgelegt und mit 3.2 g (20 mmol) N-Boc-Ethylendiamin und 4 ml (23 mmol)

N,N-Diisopropylethylamin versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 0.5 h bei 90 ⁰ C in dem Mirkrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde in einem Gemisch von

Essigsäureethylester und Wasser aufgenommen. Die organische Phase wurde mit gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und am

Rotationsverdampfer eingeengt. Man chromatographierte das Reaktionsgemisch an Kieselgel

(Laufmittel Cyclohexan/Essigsäureethylester 5:1 -> 1:1). Es wurden 2.5 g (34% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 6): R, = 2.44 min. (m/z = 449 (M+H) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 10.75 (s, IH), 8.44 (s, IH), 7.70 (d, IH), 6.77 (s, IH), 6.28 (d, IH), 3.48 (br, s, 2H), 3.17 (br, s, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.30 (s, 9H).

Beispiel 24A

1 - {2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3 -yl } -2,2,2-trifluorethanon Hydrochlorid

2.5 g (5.57 mmol) tert-Butyl-[6-({2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]ethyl}amino)-3 -(trifluoracetyl)- pyridin-2-yl]carbamat (Beispiel 23A) wurden in 15 ml 4N Chlorwasserstofflösung in Dioxan gelöst und 20 h nachgerührt. Man engte das Reaktionsgemisch um die Hälfte ein und gab den gleichen Teil an Diethylether zu. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min nachgerührt und das Produkt abfiltriert und mit Diethylether nachgewaschen. Es wurden 1.4 g (89% d. Th.) des

Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 6): R, = 0.73 min. (m/z = 249 (MH-H) ⁺ ).

Beispiel 25A

4-Amino-2-(methylsulfonyl)-l,3-thiazol-5-carbonitril

In 200 ml Dichlormethan wurden 2.7 g (15.77 mmol) 4-Amino-2-(methylthio)-l,3-thiazol-5- carbonitril gelöst und 11.97 g (34.7 mmol) 3-Chlorperbenzoesäure zugegeben. Man ließ für 30 min bei RT rühren, gabdann 6 ml DMSO zu und dann gesättigte wässrige Natriumhydrogencarbonat- Lösung und extrahierte dreimal mit Dichlormethan. Nach Trocknen der organischen Phase über Magnesiumsulfat erhielt man nach Entfernen des Lösungsmittels 2.22 g (46% d. Th.) des Produktes als öl, das ohne weitere Aufreinigung eingesetzt wurde.

LCMS (Methode 3): R, = 1.19 min. (m/z = 204 (M+H) ⁺ ).

Beispiel 26A

tert-Butyl-{2-[(4-amino-5-cyano-l,3-thiazol-2-yl)amino]et hyl}carbamat

In 24 ml DMSO wurden 2.2 g (7.22 mmol) 4-Amino-2-(methylsulfonyl)-l,3-thiazol-5-carbonitril (Beispiel 18A) gelöst und 1.74 g (10.84 mmol) N-Boc-ethylendiamin und 933 mg (7.22 mmol) DIEA zugegeben. Man ließ für 16 h bei 120 ⁰ C rühren und gab nach beendeter Reaktion Wasser und Essigsäureethylester zu. Man extrahierte die wässrige Phase dreimal mit Essigsäureethylester. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet und mittels Kieselgelchromatographie gereinigt. Man erhielt 633 mg (31% d. Th.) des Produktes.

LCMS (Methode 6): R, = 1.45 min. (m/z = 284 (M+H) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 8.35 (s, br, IH), 6.90 (t, IH), 6.68 (s, 2H), 3.22 (s, br, 2H), 3.07 (dd, 2H), 1.37 (s, 9H).

Beispiel 27A

4-Amino-2-[(2-aminoethyl)amino]-l,3-thiazol-5-carbonitril -trifluoracetat

Analog der Herstellung des Cyanopyridins (Beispiel 2A) wurden aus 130 mg (0.46 mmol) des Boc-geschützten Amin (Beispiel 19A) und 1.05 g (9.18 mmol) Trifluoessigsäure nach Entfernen aller flüchtigen Bestandteile 130 mg (96% d. Th.) des Produktes erhalten.

LCMS (Methode 4): R, = 0.61 min. (m/z = 184 (M+H) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 8.45 (t, IH), 7.84 (s, br, 2H), 6.80 (s, br, IH), 3.93 (s, IH), 3.43 (dd, 2H), 3.01 (dd, 2H).

Beispiel 28A

tert-Butyl-3-[(5-cyanopyridin-2-yl)amino]piperidin- 1 -carboxylat

1.0 g (4.99 mmol) tert-Butyl-3-aminopiperidin-l -carboxylat und 1.383 g (9.99 mmol) 6- Chlorpyridin-3-carbonitril und 1.29 g (9.99 mmol) Diisopropylethylamin wurden in 40 ml DMSO suspendiert und für 45 min in einem Mikrowellenreaktor auf 140 ⁰ C erhitzt. Der Ansatz wurde durch Kugelrohrdestillation weitgehend vom DMSO befreit, mit Wasser versetzt und der ausfallende Niederschlag abfiltriert. Nach Trocknen im Hochvakuum erhielt man 2.24 g (46% d. Th.) des Produktes.

LCMS (Methode 3): R, = 2.23 min. (m/z = 303 (M+H) ⁺ ).

Beispiel 29A

tert-Butyl-3-[(6-amino-5-cyanopyridin-2-yl)amino]piperidi n-l-carboxylat

2.15 g (10.7 mmol) tert-Butyl-3-aminopiperidin-l-carboxylat, 1.50 g (9.77 mmol) 2-Amino-6- chlorpyridin-3-carbonitril (Beispiel 15A) und 1.89 g (14.7 mmol) Diisopropylethylamin wurden in 6 ml DMSO suspendiert und für 8 h in einem Mikrowellenreaktor auf 130°C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Essigsäureethylester (100 ml) und Wasser (40 ml) verdünnt, die organische Phase wurde getrennt und mit gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung (50 ml) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographiert auf Kieselgel (Laufmittel: Cyclohexan-Essigsäureethylester 4:1 bis 1:1). Es wurden 2.04 g (60% d. Th.) des Produktes als Feststoff isoliert.

LCMS (Methode 6): R, = 1.69 min. (m/z = 318 (M+H) ⁺ )

Beispiel 3OA

6-(Piperidin-3-ylamino)pyridin-3-carbonitril Hydrochlorid

In 4.3 ml einer Salzsäurelösung in Dioxan (4 M) wurden 2.24 g (7.4 mmol) tert-Butyl-3-[(5- cyanopyridin-2-yl)amino]piperidin-l-carboxylat (Beispiel 28A) gelöst und 3 h bei RT gerührt. Nach vollständiger Reaktion wurde das Lösungsmittel komplett entfernt. Es wurden 1.74 g (90% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 8): R, = 0.27 min. (m/z = 203 (TVB-H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-O ₆ ): δ = 9.13 (m, IH), 9.0 (m, IH), 8.44 (d, IH), 7.89 (m, IH), 7.74 (dd, IH), 6.63 (d, IH), 5.58 (s, br), 4.19 (s, br, IH), 3.57 (s, IH), 3.34 (d, IH), 3.14 (d, IH), 2.88 (m, IH), 2.7-2.81 (m, IH), 1.82-2.0 (m, 2H), 1.63-1.79 (m, IH), 1.48-1.59 (m, IH).

Beispiel 31A

2-Amino-6-(piperidin-3-ylamino)pyridin-3-carbonitril Hydrochlorid

In 40 ml einer Salzsäurelösung in Dioxan (4 M) wurden 2.00 g (6.3 mmol) tert-Butyl-3-[(6-amino- 5-cyanopyridin-2-yl)amino]piperidin-l-carboxylat (Beispiel 29A) gelöst und 2 h bei RT gerührt. Nach vollständiger Reaktion wurde das Lösungsmittel zur Hälfte eingeengt, und 20 ml Diethylether wurden zugegeben. Der Niederschlag wurde abfiltriert und getrocknet. Es wurden 1.80 g (100% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 8): R, = 0.25 min. (m/z = 218 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 9.38 (br m, IH), 8.97 (br m, IH), 8.25 (br m, IH), 7.53 (m, IH), 7.40 (br s, 2H), 6.01 (d, IH), 4.16 (br m, IH), 3.34 (br m, IH), 3.10 (m, IH), 2.89 (m, 2H), 2.00-1.84 (m, 2H), 1.73 (m, IH), 1.55 (m, IH).

Beispiel 32A

tert-Butyl-3-({6-[(tert-butoxycarbonyl)amino]-5-(trifluor acetyl)pyridin-2-yl}amino)piperidm-l- carboxylat

561 mg (2.8 mmol) tert-Butyl-3-aminopiperidin-l-carboxylat, 700 mg (2.16 mmol) tert-Butyl-[6- chlor-3-(trifluoracetyl)pyridin-2-yl]carbamat (Beispiel 22A) und 0.56 ml (3.23 mmol) Diisopropylethylamin wurden in 14 ml DMSO suspendiert und für 45 min in einem Mikrowellenreaktor auf 90 ⁰ C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Essigsäureethylester (100 ml) verdünnt und mit gesättigter wässriger Ammoniumchloridlösung (3 x 40 ml) und dann mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung (40 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde getrocknet über Magnesiumsulfat und eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographiert auf Kieselgel (Laufmittel: Cyclohexan-Essigsäureethylester 5:1 bis 1 :1). Es wurden 670 mg (63% d. Th.) des Produktes isoliert.

LCMS (Methode 6): R, = 2.70 min. (m/z = 489 (M+H) ⁺ )

Beispiel 33A

l-[2-Amino-6-(piperidin-3-ylamino)pyridin-3-yl]-2,2,2-tri fluorethanon Hydrochlorid

In 25 ml einer Salzsäurelösung in Dioxan (4 M) wurden 670 mg (1.37 mmol) tert-Butyl-3-({6- [(tert-butoxycarbonyl)amino]-5-(trifluoracetyl)pyridin-2-yl} arnino)piperidin-l-carboxylat (Beispiel 32A) gelöst und 20 h bei RT gerührt. Nach vollständiger Reaktion wurde das Reaktionsmischung mit Diethylether (100 ml) verdünnt, und der Niederschlag wurde abfiltriert und mit Diethylether (100 ml) gewaschen und getrocknet. Es wurden 286 mg (64% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 6): R, = 0.81 min. (m/z = 289 (M+H) ^* )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Ci ₆ ): δ = 9.26 (br s, IH), 9.07 (br s, IH), 8.8.34 (br s, IH), 7.59 (d, IH), 6.22 (br, 2H), 6.03 (d, IH), 4.25 (br m, IH), 3.36 (m, IH), 3.13 (m, IH), 2.93 (m, 2H), 2.00-1.85 (m, 2H), 1.73 (m, IH), 1.56 (m, IH).

Beispiel 34A

tert-Butyl-(6-chlor-3-propanoylpyridin-2-yl)carbamat

7.00 g (30.6 mmol) tert-Butyl-(6-chlorpyridin-2-yl)carbamat (Beispiel I IA) wurden in 90 ml THF unter Argon vorgelegt und auf -50 ⁰ C gekühlt. Es wurden 47.8 ml (76.5 mmol) Butyllithium (1.6 M in Hexan) zugetropft. Nach Beendigung des Zutropfens wurde die Reaktion langsam auf 0 ⁰ C erwärmt und bei 0 ⁰ C für 1 h gehalten. Anschließend wurde wieder auf -40 ⁰ C abgekühlt, und 9.85 g (61.2 mmol) N-Propionylmorpholin gelöst in 10 ml THF zugegeben. Die Reaktionslösung wurde 1 h bei -40 ⁰ C nachgerührt, danach bei -40 ⁰ C auf 1 1 Essigsäureethylester und 350 ml Ammoniumchloridlösung gegossen, die organische Phase wurde abgetrennt und mit Wasser und gesättigter wässriger Natriumhydrogecarbonatlösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet und am Roationsverdampfer eingeengt. Man chromatographierte das Rohprodukt auf Kieselgel (Laufmittel Cyclohexan/Essigsäureethylester 10:1 bis 1 :1). Es wurden 2800 mg (32% d. Th.) des Produktes erhalten.

LCMS (Methode 6): R, = 2.13 min. (m/z = 283 (M-H) ^" )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-ds): δ = 10.53 (br s, IH), 8.19 (d, IH), 7.31 (d, IH), 2.94 (q, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.06 (t, 3H).

Beispiel 35A

tert-Butyl-[6-({2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]ethyl}amino )-3-propanoylpyridin-2-yl]carbamat

730 mg (2.4 mmol) tert-Butyl-(6-chlor-3-propanoylpyridin-2-yl)carbamat (Beispiel 34A) wurden in 7 ml DMSO vorgelegt und mit 512 mg (3.2 mmol) N-Boc-Ethylendiamin und 640 μl (3.7 mmol) N,N-Diisopropylethylamin versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 45 min bei 90 ⁰ C in dem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde in einem Gemisch von Essigsäureethylester und Wasser aufgenommen. Die organische Phase wurde mit gesättigter wässriger Ammoniumchlorid-Lösung und nachfolgend mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Man chromatographierte das Reaktionsgemisch an Kieselgel (Laufmittel Cyclohexan/Essigsäureethylester 5:1 -^ 1:1). Es wurden 530 mg (53% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 6): R, = 2.19 min. (m/z = 409 (M+H) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 11.47 (s, IH), 7.93 (br m, IH), 7.64 (br m, IH), 6.82 (br s, IH), 6.15 (d, IH), 3.43 (br m, 2H), 3.14 (m, 2H), 2.83 (q, 2H), 2.56 (br s, 4H), 1.47 (s, 9H), 1.32 (s, 9H), 1.03 (t, 3H).

Beispiel 36A

1 - {2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-yl}propan-l -on Hydrochlorid

hi 15 ml einer Salzsäurelösung in Dioxan (4 M) wurden 530 mg (1.30 mmol) tert-Butyl-[6-({2- [(tert-Butoxycarbonyl)amino]ethyl}amino)-3-propanoylpyridin- 2-yl]carbamat (Beispiel 35A) gelöst und 20 h bei RT gerührt. Nach vollständiger Reaktion wurde das Reaktionsmischung mit

Diethylether (100 ml) verdünnt, und der Niederschlag wurde abfiltriert und mit Diethylether (100

ml) nachgewaschen und getrocknet. Es wurden 290 mg (91% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 6): R, = 1.15 min. (m/z = 309 (M+H) ^* )

Beispiel 37A

tert-Buryl-3-({6-[(tert-butoxycarbonyl)ammo]-5-propanoylp yridm-2-yl}arnino)piperidin-l- carboxylat

610 mg (3.0 mmol) tert-Butyl-3-aminopiperidin-l -carboxylat, 700 mg (2.3 mmol) tert-Butyl-(6- chlor-3-propanoylpyridin-2-yl)carbamat (Beispiel 34A) und 610 μl (3.5 mmol) Diisopropylethylamin wurden in 7 ml DMSO suspendiert und für 45 min in einem Mikrowellenreaktor auf 90 ⁰ C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Essigsäureethylester (100 mL) verdünnt und mit gesättigter wässriger Ammoniumchloridlösung (3 x 40 ml), dann mit gesättigter wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung (40 ml) gewaschen, und die organische Phase wurde getrocknet über Magnesiumsulfat verdünnt und eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographiert auf Kieselgel (Laufmittel: Cyclohexan-Essigsäureethylester 5:1 bis 1:1). Es wurden 380 mg (35% d. Th.) des Produktes isoliert.

LCMS (Methode 6): R, = 2.42 min. (m/z = 449 (M+H) ⁺ )

Beispiel 38A

1 -[2-Amino-6-(piperidin-3 -ylamino)pyridin-3 -yljpropan- 1 -on Hydrochlorid

In 10 ml einer Salzsäurelösung in Dioxan (4 M) wurden 380 mg (0.85 mmol) tert-Butyl-3-({6- [(tert-Butoxycarbonyl)amino]-5-propanoylpyridin-2-yl}arnino) piperidin-l-carboxylat (Beispiel 37A) gelöst und 20 h bei RT gerührt. Nach vollständiger Reaktion wurde das Reaktionsmischung mit Diethylether (100 ml) verdünnt, und der Niederschlag wurde abfiltriert und mit Diethylether (100 ml) gewaschen und getrocknet. Es wurden 170 mg (70% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 9): R _t = 0.95 min. (m/z = 249 (M+H) ⁺ )

Beispiel 39A

tert-Butyl-3-[(6-amino-5-nitropyridin-2-yl)amino]piperidi n-l -carboxylat

500 mg (2.11 mmol) tert-Butyl-3-aminopiperidin-l -carboxylat, 772 mg (4.22 mmol) 2-Amino-6- chlor-3-nitropyridin und 1.05 ml (6.34 mmol) Diisopropylethylamin wurden in 18 ml DMSO suspendiert und für 45 min in einem Mikrowellenreaktor auf 120 ⁰ C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer reverse-phase HPLC aufgereinigt (Methode 13). Es wurden 600 mg (81% d. Th.) des Produktes als Feststoff isoliert.

LCMS (Methode 6): R, = 1.77 min. (m/z = 338 (M+H) ⁺ )

Beispiel 4OA

3-Nitro-N ⁶ -(piperidin-3-yl)pyridin-2,6-diamin Hydrochlorid

In 40 ml einer Salzsäurelösung in Dioxan (4 M) wurden 610 mg (1.62 mmol) tert-Butyl-3-[(6- amino-5-nitropyridin-2-yl)amino]piperidin-l-carboxylat (Beispiel 39A) gelöst und 30 min bei RT gerührt. Nach vollständiger Reaktion wurde das Lösungsmittel komplett entfernt. Es wurden 662 mg des Rohproduktes erhalten.

LCMS (Methode 4): R, = 0.86 min. (m/z = 238 (M^-H) ⁺ )

Beispiel 41A

Methyl-l-[2-(2,4-difluoφhenyl)-2-oxoethyl]-lH-l,2,4-tria zol-5-carboxylat

5.0 g (39.34 mmol) Methyl-lH-l,2,4-triazol-3-carboxylat wurden in 96 ml Aceton vorgelegt und mit 7.87 g (41.3 mmol) 2-Chlor-l-(2,4-difluoφhenyl)ethanon und 6.25 g (45.2 mmol) Kaliumcarbonat versetzt. Bei RT wurde 20 h gerührt und dann das Reaktionsgemisch bei 30 ⁰ C am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand wurde in 600 ml Dichlormethan und 400 ml Wasser aufgenommen, zweimal mit Wasser und einmal mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde abgetrennt, über Magnesiumsulfat getrocknet und vom Lösungsmittel befreit. Man chromatographierte das Rohprodukt an einer reversed phase Phase, Säulenttyp: Daisco C 18, lOμm Bio (DAN 300*100nm). Das Laufmittel war ein Gradient von Acetonitril und Wasser. Es wurden 0.97 g (9% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 8): R, = 0.81 min. (m/z = 282 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 8.26 (s, IH), 8.04 (q, IH), 7.57 (m, IH), 7.33 (dt, IH), 6.05 (s, 2H), 3.82 (s, 3H).

Beispiel 42A

6-(2,4-Difluorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8(7H)-on

965 mg (3.43 mmol) MethyM-[2-(2,4-difluorphenyl)-2-oxoethyl]-lH-l,2,4-triazol-5 -carboxylat (Beispiel 41A) und 2.65 g (34.3 mmol) Ammoniumacetat wurden in 25 ml Eisessig 13 h unter Rückfluß gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde abgekühlt und in Eiswasser gegeben. Mit Natriumhydrogencarbonat wurde der pH- Wert auf 4 eingestellt und der ausfallende Feststoff wurde abgesaugt und getrocknet. Es wurden 620 mg (73% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 9): R, = 1.35 min. (m/z = 249 (M+H) ^* )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 12.23 (s, IH), 8.52 (s, IH), 8.13 (s, IH), 7.70 (q, IH), 7.48 (dt, IH), 7.26 (dt, IH).

Beispiel 43A

8-Chlor-6-(2,4-difluorphenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazi n

620 mg (2.5 mmol) 6-(2,4-Difluorphenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin-8(7H)-on (Beispiel 42A) wurden in 20 ml Phosphorylchlorid vorgelegt und mit 1.7 g (7.5 mmol) Benzyltriethylammoniumchlorid versetzt. Es wurde 3 h bei 120 ⁰ C nachgerührt. Das Reaktionsgemisch wurde weitestgehend vom Phosphorylchlorid im Vakuum befreit und dann auf Eiswasser gegossen. Der ausfallende Feststoff wurde abgesaugt mit Wasser nachgewaschen und getrocknet. Es wurden 637 mg (96% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 6): R, = 1.81 min. (m/z = 267 OVH-H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-O ₆ ): δ = 9.42 (s, IH), 8.86 (s, IH), 8.02 (m, IH), 7.51 (m, IH), 7.32 (dt, IH).

Beispiel 44A

tert-Butyl-3-[(4-amino-5-cyano- 1 ,3-thiazol-2-yl)amino]piperidin- 1 -carboxylat

Analog der Herstellung von Beispiel 26A wurden ausgehend von 559 mg (2.36 mmol) tert-Butyl- 3 -aminopiperidin-1 -carboxylat durch Umsetzung mit 500 mg (2.36 mmol) 4-Amino-2- (methylsulfonyl)-l,3-thiazol-5-carbonitril 212 mg (27% d. Th.) des Produktes als Feststoff isoliert.

LCMS (Methode 3): R, = 1.92 min. (m/z = 324 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 8.35 (d, IH), 6.68 (s, 2H), 3.56 (br s, 2H), 3.2-3.5 (m, 2H), 1.87 (m, IH), 1.69 (m, IH), 1.50 (m, IH), 1.4 (m, IH), 1.35 (s, 9H).

Beispiel 45A

4-Amino-2-(piperidin-3 -ylamino)- 1 ,3 -thiazol-5 -carbonitril Dihydrochlorid

Analog der Herstellung von Beispiel 30A wurden ausgehend von 212 mg (0.65 mmol) tert-Butyl 3- [(4-amino-5-cyano-l,3-thiazol-2-yl)amino]piperidin-l-carboxy lat durch Umsetzung mit 2 ml Chlorwasserstoff in Dioxan (4 M) 190 mg (99% d. Th.) des Produktes als Feststoff isoliert.

LCMS (Methode 9): R, = 0.71 min. (m/z = 224 (M+H) ^* )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 8.97-9.17 (m, 2H), 8.58 (d, IH), 6.67 (br s, IH), 3.88 (m, IH), 3.32 (d, IH), 3.10 (d, IH), 2.77-2.93 (m, 2H), 1.97 (m, IH), 1.85 (m, IH), 1.67 (m, IH), 1.49 (m, IH).

Beispiel 46A

tert-Butyl-{3-[(6-amino-5-nitropyridin-2-yl)amino]propyl} carbamat

150.6 mg (0.864 mmol) tert-Butyl-(3-aminopropyl)carbamat, 300 mg (1.73 mmol) 6-Chlor-3- nitropyridin-2-amin und 173 mg (1.73 mmol) Kaliumhydrogencarbonat wurden in 10 ml DMF suspendiert und auf 90 ⁰ C für 16 h erhitzt. Der Ansatz wurde mit Wasser versetzt und dreimal mit Essigsäureethylester extrahiert. Nach Reinigung des Rohproduktes durch präparative HPLC wurden nach Trocknen im Hochvakuum 195 mg (65% d. Th.) Produkt gewonnen.

LCMS (Methode 7): R, = 2.85 min. (m/z = 312 (M+H) ⁺ ).

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-dβ): δ = 8.12 (br s, IH), 7.91 (d, IH), 7.73 (br s, IH), 6.84 (t, IH), 5.93 (d, IH), 4.09 (dd, IH), 3.32 (m, 2H), 2.97 (q, 2H), 1.64 (m, 2H), 1.37 (s, 9H).

Beispiel 47A

N ⁶ -(3-Aminopropyl)-3-nitropyridin-2,6-diamin Dihydrochlorid

15.4 g (51.8 mmol) tert-Butyl-{3-[(6-amino-5-nitropyridin-2-yl)amino]propyl}car bamat (Beispiel 46A) wurden in 45 ml Dichlormethan gelöst und auf 0 ⁰ C abgekühlt. Dann wurden 148 ml (400 mmol) einer Lösung von 4M Chlorwasserstoff in Dioxan zugegeben und für 6 h bei RT gerührt. Der Niederschlag wurde abgesaugt, mit Diethylether nachgewaschen und im Hochvakuum getrocknet. Es wurden 12.49 g (89% d. Th.) des Produktes als Feststoff erhalten.

LCMS (Methode 9): R, = 0.53 min. (m/z = 198 (M+H) ⁺ ).

H-NMR (400MHz, DMSO-dβ): δ = 8.39 (br s, IH), 8.13 (br s, 4H), 7.99 (d, IH), 6.01 (d, IH),

3.56 (m, 2H), 3.03 (m, 2H).

Beispiel 48A

Methyl- 1 -[2-(2-chlor-4-fluorphenyl)-2-oxoethyl]- 1 H- 1 ,2,4-triazol-5-carboxylat

Analog der Herstellung von Beispiel 18A wurden ausgehend von 1.72 g (13.6 mmol) Methyl-1H- l,2,4-triazol-3-carboxylat durch Umsetzung mit 3.98 g (14.24 mmol) 2-Brom-l-(2-chlor-4- fluorphenyl)ethanon 1.1 g (21% d. Th.) des Produktes als Feststoff isoliert.

LCMS (Methode 8): R, = 1.01 min. (m/z = 298 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 8.27 (s, IH), 8.09 (dd, IH), 7.67 (dd, IH), 7.48 (dt, IH), 6.13 (s, 2H), 3.85 (s, 3H).

Beispiel 49A

6-(2-Chlor-4-fiuorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8(7H)-on

Analog der Herstellung von Beispiel 19A wurden ausgehend von 1.11 g (2.7 mmol) Methyl-l-[2- (2-chlor-4-fluoφhenyl)-2-oxoethyl]-lH-l,2,4-triazol-5-carbo xylat durch Umsetzung mit 2.07 g (26.8 mmol) Ammoniumacetat 655 mg (78% d. Th.) des Produktes als Feststoff isoliert.

LCMS (Methode 12): R, = 0.72 min. (m/z = 265 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 12.18 (br s, IH), 8.49 (s, IH), 8.03 (s, IH), 7.62-7.71 (m, 2H), 7.38 (dt, IH).

Beispiel 5OA

8-Chlor-6-(2-chlor-4-fluorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin

Analog der Herstellung von Beispiel 2OA wurden ausgehend von 635 mg (2.4 mmol) 6-(2-Chlor-4- fluorphenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin-8(7H)-on durch Umsetzung mit 16.45 g (107.3 mmol) Phosphorylchlorid 550 mg (82% d. Th.) des Produktes als Feststoff isoliert.

LCMS (Methode 8): R, = 1.16 min. (m/z = 283 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 9.48 (s, IH), 8.89 (s, IH), 7.75 (dd, IH), 7.68 (dd, IH), 7.43 (dt, IH).

Ausführungsbeispiele

Beispiel 1

6-[(2-{[6-(2,4-Dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4 ]triazin-8-yl]amino}ethyl)amino]pyridin- 3-carbonitril

100 mg (0.33 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4]tr iazin (Beispiel 7A), 70 mg (0.43 mmol) 6-[(2-Aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril Dihydrochlorid (Beispiel 2A) und 0.08 ml (0.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 2 ml DMSO vorgelegt. Es wurde bei 80 ⁰ C 16 h nachgerührt. Man gab zu dem Reaktionsgemisch Essigsäureethylester und 10%ige Zitronensäure und extrahierte. Die organische Phase wurde mit Natriumchloridlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Man erhielt nach Reinigung mittels präparativer HPLC (Methode 13) 16 mg (12% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LCMS (Methode 3): R, = 1.16 min. (m/z = 426 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-de): δ = 9.76 (t, IH), 9.56 (s, IH), 8.34 (ss, IH), 7.74 (br, s IH), 7.62 (d, IH), 7.57-7.50 (m, 2H), 6.52-6.41 (br, s, IH), 3.76 (q, 2H), 3.62 (q, 2H).

Beispiel 2

2-Amino-6-[(2-{[6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[3,4- f][l,2,4]triazin-8-yl]amino}ethyl)- amino]pyridin-3 -carbonitril

300 mg (0.99 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichlorphenyl)[l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4]tr iazin (Beispiel 7A), 274.65 mg (1.09 mmol) 2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril Dihydrochlorid (Beispiel 17A) und 1.4 ml (8 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 5 ml DMSO vorgelegt. Es wurde bei 80 ⁰ C 16 h nachgerührt. Man gab zu dem Reaktionsgemisch Essigsäureethylester und 10%ige Zitronensäure und extrahierte. Die organische Phase wurde mit Natriumchloridlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 120 mg (27% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LCMS (Methode 3): R, = 2.24 min. (m/z = 440 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 9.8 (t, IH), 9.57 (s, IH), 7.73 (ss, IH), 7.66 (d, IH), 7.53 (dd, IH), 7.37 (br, s, IH), 5.81 (br, s, IH), 3.77 (s, 2H), 3.65 (s, 2H).

Beispiel 3

2-Amino-6- { [2-( {6-[4-(trifluormethyl)phenyl] [ 1 ,2,4]triazolo[3 ,4-f] [ 1 ,2,4]triazin-8-yl} amino)- ethyl]amino}pyridin-3-carbonitril

65 mg (0.22 mmol) 8-Chlor-6-[4-(trifluormethyl)phenyl][l,2,4]triazolo[3,4-f][l ,2,4]triazin

(Beispiel 10A), 60 mg (0.24 mmol) 2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril Dihydrochlorid (Beispiel 17A) und 0.3 ml (1.75 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 2 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 140 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Es wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 17 mg ( 18% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LCMS (Methode 3): R, = 2.33 min. (m/z = 441 (M+H) ^* )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 9.77 (t, IH), 9.57 (s, IH), 8.27 (d, 2H), 7.82 (d, 2H), 7.63 (br, s, IH), 7.24 (br, s, IH), 5.73 (br, s, IH), 3.92 (d, 2H), 3.63 (d, 2H).

Beispiel 4

6- {[2-( {6-[4-(Trifluormethyl)phenyl] [ 1 ,2,4]triazolo[3,4-f] [ 1 ,2,4]triazm-8-yl} amino)ethyl]- amino } pyridin-3 -carbonitril

60 mg (0.2 mmol) 8-Chlor-6-[4-(trifluormethyl)phenyl][l,2,4]triazolo[3,4-f][l ,2,4]triazm (Beispiel 10A), 39 mg (0.24 mmol) 6-[(2-Aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril Dihydrochlorid (Beispiel 2A) und 0.1 ml (0.6 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 2 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 140 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Man erhielt nach Reinigung mittels präparativer HPLC (Methode 13) 40 mg (47% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LCMS (Methode 3): R, = 2.33 min. (m/z = 426 (M+H)^

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 9.71 (t, IH), 9.56 (s, IH), 8.47 (s, IH), 8.21 (d, 2H), 7.81 (d, 3H), 7.50 (br, s, IH), 6.41 (br, s, IH), 3.92 (q, 2H), 3.68 (q, 2H).

Beispiel 5

6-[(2- {[6-(2,4-Dichloφhenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8-yl]amino} ethyl)amino]pyridin-3- carbonitril

45 mg (0.15 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 20A), 35 mg (0.18 mmol) 6-[(2-Aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril Dihydrochlorid (Beispiel 2A) und 0.2 ml (1.2 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 0.8 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 140 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Man erhielt nach Reinigung mittels präparativer HPLC (Methode 13) 30 mg (47% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LCMS (Methode 6): R, = 2.05 min. (m/z = 425 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-d ₆ ): δ = 8.56 (s, IH), 8.41 (s, IH), 8.35 (ss, IH), 8.22 (br, s IH), 7.74 (ss, IH), 7.71 (br, s, IH), 6.62 (d, IH), 7.56 (dd, IH), 7.51 (dd, IH), 6.50 (br, s, IH), 3.72-3.56 (m, 4H).

Beispiel 6

1 - {2-Amino-6-[(2- {[6-(2,4-dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8-yl]amino} ethyl)amino]- pyridin-3-yl} -2,2,2-trifluorethanon

160 mg (0.53 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 20A), 182 mg (0.64 mmol) l-{2-Ammo-6-[(2-arninoethyl)amino]pyridin-3-yl}-2,2,2-triflu orethanon Hydrochlorid (Beispiel 24A) und 0.74 ml (4.2 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 3 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 140 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Man erhielt nach Reinigung mittels präparativer HPLC (Methode 13) 186 mg (68% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LCMS (Methode 6): R, = 2.39 min. (m/z = 511 (M+H) ^* )

'H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 8.58 (s, IH), 8.54 (br s, IH), 8.43 (s, IH), 8.33 (t, IH), 8.08 (t, IH), 7.72 (d, IH), 7.64 (d, 2H), 7.47 (t, 2H), 5.9 (d, IH), 3.72 (m, 2H), 3.66 (m, 2H).

¹ H-NMR (500MHz, TFA-d): δ = 8.82 (s, IH), 8.35 (s, 2H), 7.68 (s, IH), 7.55 (dd, 2H), 6.47 (br s, IH), 4.43 (m, 2H), 4.20 (m, 2H).

Beispiel 7

1 -(2-Amino-6- {[2-( {6-[4-(trifluormethyl)phenyl][ 1 ,2,4]triazolo[3,4-fJ[ 1 ,2,4]triazin-8-yl} amino)- ethyl]amino}pyridin-3-yl)-2,2,2-trifluorethanon

200 mg (0.67 mmol) 8-Chlor-6-[4-(trifluormethyl)phenyl][l,2,4]triazolo[3,4-f][l ,2,4]triazin (Beispiel 10A), 210 mg (0.73 mmol) l-{2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-yl} -2,2,2- trifluorethanon Hydrochlorid (Beispiel 24A) und 0.7 ml (4.0 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 5 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 45 min bei 130 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Man erhielt nach Reinigung mittels präparativer HPLC (Methode 13) 28 mg (8% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LCMS (Methode 3): R, = 2.56 min. (m/z = 512 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-O ₆ ): δ = 9.76 (t, IH), 9.58 (s, IH), 8.65 (br s, IH), 8.19 (d, 2H), 7.80 (br s, IH), 7.65 (d, 2H), 7.23 (m, IH), 5.71 (d, IH), 4.04 (m, 2H), 3.68 (m, 2H).

Beispiel 8

1 - {2-Amino-6-[(2- { [6-(2,4-dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[3,4-f] [ 1 ,2,4]triazin-8-yl]amino} ethyl)- amino]pyridin-3-yl} -2,2,2 -trifluorethanon

80 mg (0.27 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4]tr iazin (Beispiel 9A), 94 mg (0.29 mmol) l-{2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-yl}-2,2,2-triflu orethanon Hydrochlorid (Beispiel 24A) und 280 μl (1.6 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 1 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 30 mg (22% d. Th.) des Produktes.

LCMS (Methode 3): R, = 2.52 min. (m/z = 512 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-d _ö ): δ = 9.84 (m, IH), 9.56 (s, IH), 8.54 (br m, IH), 8.11 (t, IH), 7.70 (d, IH), 7.67 (d, IH), 7.64 (br m, IH), 7.45 (dd, 2H), 5.88 (d, IH), 3.82 (m, 2H), 3.67 (m, 2H).

¹ H-NMR (500MHz, pyridine-d ₅ ): δ = 11.27 (br s, IH), 9.65 (s, IH), 9.39 (s, IH), 9.18 (t, IH), 8.61 (br s, IH), 7.91 (d, IH), 7.68 (s, IH), 7.67 (d, IH), 7.45 (d, IH), 6.01 (d, IH), 4.12 (m, 2H), 4.05 (m, 2H).

Beispiel 9

1 -[2-Amino-6-( { 1 -[6-(2,4-dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[3,4-f] [ 1 ,2,4]triazin-8-yl]piperidin-3- yl}amino)pyridin-3-yl]-2,2,2-trifluorethanon

30 mg (0.09 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4]tr iazin (Beispiel 9A), 35 mg (0.11 mmol) l-[2-Amino-6-(piperidin-3-ylamino)pyridin-3-yl]-2,2,2-triflu orethanon Hydrochlorid (Beispiel 33A) und 95 μl (0.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 1 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 41 mg (83% d. Th.) des Produktes.

LCMS (Methode 6): R, = 2.36 min. (m/z = 552 (M+H) ⁺ )

Die Enantiomerentrennung von l-[2-Amino-6-({l-[6-(2,4-dichlorphenyl)[l,2,4]triazolo[3,4- f][l,2,4]triazin-8-yl]piperidin-3-yl}amino)pyridin-3-yl]-2,2 ,2-trifluorethanon (Beispiel 9) wurde unter den folgenden Bedingungen durchgeführt:

Eine Probe von Beispiel 9 (40 mg) wurde in 2 ml Ethanol aufgenommen und über eine Daicel Chiralpak AS-H, 5μm, 250 mm x 20 mm Säule chromatographiert (Fluß: 15 ml/min; Detektion bei 220 nm; Injektionsvolumen: 700 μl; Eluent: iso-Hexan/(Ethanol mit 0.2% Diethylamin) (50/50), Temperatur: 40 ⁰ C). Es wurden zwei Fraktionen isoliert:

Beispiel Ent-A-9: Es wurden 10 mg Produkt in > 99% ee isoliert.

Retentionszeit 4.67 min

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 9.61 (s, IH), 8.48 (s, br, 2H), 7.89 (d, IH), 7.79 (dd, IH), 7.5- 7.61 (m, IH), 7.44 (d, IH), 7.34 (dd, IH), 5.89 (d, IH), 5.02 (d, IH), 4.5-4.6 (m, IH). 4.3-4.46 (m, 2H), 4.02 (d, IH), 2.02-2.14 (m, 2H), 1.6-1.82 (m, 2H).

Beispiel Ent-B-9: Es wurden 14 mg Produkt in > 99% ee isoliert.

Retentionszeit 6.39 min

Beispiel 10

1 - {2-Amino-6-[(2- {[6-(2,4-dichloφhenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[3,4-f][l ,2,4]triazin-8-yl]amino} ethyl)- amino]pyridin-3 -yl } propan- 1 -on

30 mg (0.09 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4]tr iazin (Beispiel 9A), 26 mg (0.11 mmol) l-{2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-yl}propan-l-on Hydrochlorid (Beispiel 36A) und 95 μl (0.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 1 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 13 mg (31 % d. Th.) des Produktes.

LCMS (Methode 6): R, = 1.44 min. (m/z = 472 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 9.84 (m, IH), 9.59 (s, IH), 7.82 (br m, IH), 7.68 (m, IH), 7.64 (d, IH), 7.46 (dd, IH), 5.75 (br m, IH), 3.84 (m, 2H), 3.70 (m, 2H), 2.74 (m, 2H), 1.04 (t, 3H).

Beispiel 11

1 -[2-Amino-6-( { 1 -[6-(2,4-dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[3,4-f][ 1 ,2,4]triazin-8-yl]piperidin-3-yl} - amino)pyridin-3 -yl]propan- 1 -on

30 mg (0.09 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichlorphenyl)[l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4]tr iazin (Beispiel 9A),

31 mg (0.11 mmol) l-[2-Amino-6-(piperidin-3-ylamino)pyridin-3-yl]propan-l-on Hydrochlorid (Beispiel 38A) und 95 μl (0.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 1 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 14 mg (30% d. Th.) des Produktes.

LCMS (Methode 6): R, = 1.72 min. (m/z = 512 (M+H) ^* )

Beispiel 12

N ⁶ - { 1 -[6-(2,4-Dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[3,4-f][ 1 ,2,4]triazin-8-yl]piperidin-3-yl} -3-nitro- pyridin-2,6-diamin Hydrochlorid

30 mg (0.09 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4]tr iazin (Beispiel 9A), 36 mg (0.12 mmol) S-Nitro-N^φiperidm-S-ytypyridin^ό-diamin Hydrochlorid (Beispiel 40A) und 63 μl (0.36 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 0.7 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 10) gereinigt. Man erhielt 26 mg (54% d. Th.) des Produktes.

LC/MS (Methode 3): R, = 2.39 min, (m/z = 501 (M+H) ⁺ )

Die Enantiomerentrennung von N ⁶ -{l-[6-(2,4-Dichlorphenyl)[l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4]triaz in-8- yl]piperidin-3-yl}-3-nitropyridin-2,6-diamin Hydrochlorid (Beispiel 12) wurde unter den folgenden Bedingungen durchgeführt:

Eine Probe von Beispiel 12 (18 mg) wurde in 2.4 ml Ethanol aufgenommen und über eine Daicel Chiralpak AD-H, 5μm, 250 mm x 20 mm Säule chromatographiert (Fluß: 15 ml/min; Detektion bei 220 nm; Injektionsvolumen: 800 μl; Eluent: iso-Hexan/(Ethanol mit 0.2% Diethylamin) (40/60), Temperatur: 40 ⁰ C). Es wurden zwei Fraktionen isoliert:

Beispiel Ent-A-12: Es wurden 9 mg Produkt in > 96% ee isoliert.

Retentionszeit 7.27 min

¹ H-NMR (400MHz, TFA-d): δ = 10.29 (s, IH), 8.43 (d, IH), 7.66 (d, IH), 7.59 (s, IH), 7.44 (d, IH), 6.46 (d, IH), 5.04-5.14 (m, IH), 4.8-4.95 (m, IH), 4.45-4.6 (m, IH), 4.2-4.35 (m, 2H), 2.36- 2.5 (m, IH), 2.18-2.32 (m, 2H), 2.06-2.17 (m, IH).

Beispiel Ent-B-12: Es wurden 7 mg Produkt in > 99% ee isoliert.

Retentionszeit 8.46 min

Beispiel 13

6-( { 1 -[6-(2,4-Dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[3,4-f] [ 1 ,2,4]triazin-8-yl]piperidin-3-yl} amino)pyridin- 3-carbonitril

30 mg (0.09 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4]tr iazin (Beispiel 9A), 26 mg (0.11 mmol) 6-(Piperidin-3-ylamino)pyridin-3-carbonitril Hydrochlorid (Beispiel 30A) und 95 μl (0.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 1 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 30 mg (72% d. Th.) des Produktes.

LCMS (Methode 6): R, = 2.06 min. (m/z = 466 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, TFA-d): δ = 10.39 (s, IH), 8.46 (s, IH), 8.08 (s, IH), 7.73 (m, 2H), 7.58 (s, IH), 7.47 (s, IH), 5.22 (m, IH), 5.02 (m, IH), 4.61 (m, IH), 4.32-4.5 (m, 2H), 2.48-2.61 (m, 2H), 2.1-2.47 (m, 2H).

Beispiel 14

2-Amino-6-( { 1 -[6-(2,4-dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[3,4-f][ 1 ,2,4]triazin-8-yl]piperidin-3-yl} - amino)pyridin-3-carbonitril

30 mg (0.09 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichlorphenyl)[l,2,4]triazolo[3,4-f][l,2,4]tr iazm (Beispiel 9A), 27 mg (0.11 mmol) 2-Amino-6-(piperidin-3-ylamino)pyridin-3-carbonitril Hydrochlorid (Beispiel 31A) und 95 μl (0.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 1 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 30 mg (83% d. Th.) des Produktes.

LCMS (Methode 6): R, = 1.97 min. (m/z = 481 (M+H) ⁺ )

Beispiel 15

4-Amino-2-[(2-{[6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5- a]pyrazin-8-yl]amino}ethyl)amino]-l,3- thiazol-5 -carbonitril

40 mg (0.13 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 20A), 35 mg (0.16 mmol) 4-Amino-2-[(2-aminoethyl)amino]-l,3-thiazol-5-carbomtril-tri fluoracetat (Beispiel 27A) und 0.14 ml (0.8 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 1 ml DMSO

vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Man erhielt nach Reinigung mittels präparativer HPLC (Methode 13) 29 mg (48% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LCMS (Methode 6): R, = 1.88 min. (m/z = 446 (M+H) ^* )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 8.58 (s, IH), 8.47 (m, IH), 8.44 (s, IH), 8.23 (m, IH), 7.74 (d, IH), 7.65 (d, IH), 7.53 (dd, IH), 3.67 (m, 2H), 3.53 (m, 2H).

Beispiel 16

2-Ammo-6-({l-[6-(2,4-dicUoφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]p yrazm-8-yl]piperidin-3-yl}amino)- pyridin-3-carbonitril

30 mg (0.10 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 20A), 30 mg (0.12 mmol) 2-Ammo-6-(piperidin-3-ylamino)pyridin-3-carbonitril Hydrochlorid (Beispiel 31A) und 78 mg (0.6 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 1 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 43 mg (88% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LCMS (Methode 6): R, = 2.29 min. (m/z = 480 (M+H)*)

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-d ₆ ): δ = 8.58 (s, IH), 8.55 (s, IH), 7.74 (d, IH), 7.67 (d, IH), 7.54 (dd, IH), 7.26 (d, IH), 7.22 (br m, IH), 6.32 (br m, IH), 5.83 (br m, IH), 4.34 (br m, IH), 4.07 (br m, IH), 2.01 (m, IH), 1.90 (m, IH), 1.62 (m, 2H). Einige Signale sind mit dem Wassersignal überlagert.

Beispiel 17

2-Amino-6-[(2- {[6-(2,4-dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8-yl]amino} ethyl)amino]- pyridin-3 -carbonitril

30 mg (0.10 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 20A), 26 mg (0.12 mmol) 2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril Dihydrochlorid (Beispiel 17A) und 78 mg (0.6 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 1 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120°C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 30 mg (68% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LCMS (Methode 6): R, = 2.03 min. (m/z = 440 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-ds): δ = 8.57 (s, IH), 8.44 (s, IH), 8.46 (m, IH), 7.76 (d, IH), 7.65 (d, IH), 7.53 (dd, IH), 7.30 (d, IH), 6.56 (br s, IH), 5.83 (br m, IH), 3.74 (br m, 4H).

Beispiel 18

6-( { 1 -[6-(2,4-Dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8-yl]piperidin-3-yl}amino)pyridin-3- carbonitril Hydrochlorid

30 mg (0.10 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 20A), 38 mg (0.13 mmol) ) 6-(Piperidin-3-ylamino)pyridin-3-carbonitril Hydrochlorid (Beispiel 30A) und 130 μl (0.75 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 2 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 10) gereinigt. Man erhielt 34 mg (54% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LC/MS (Methode 6): R, = 2.46 min, (m/z = 465 (M+H) ^* )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 8.56 (s, IH), 8.54 (s, IH), 8.34 (d, IH), 7.74 (d, IH), 7.61-7.7 (m, 2H), 7.58 (d, IH), 7.52 (dd, IH), 6.55 (d, IH), 4.09 (br s, IH), 4.65-4.95 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.59-1.72 (m, 4H).

Beispiel 19

1 -[2-Amino-6-( { 1 -[6-(2,4-dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8-yl]piperidin-3-yl} amino)- pyridin-3-yl]-2,2,2-trifluorethanon Hydrochlorid

38 mg (0.13 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 20A), 45 mg (0.14 mmol), l-[2-Amino-6-(piperidin-3-ylamino)pyridin-3-yl]-2,2,2-triflu orethanon Hydrochlorid (Beispiel 33A) und 130 μl (0.75 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 2 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 10) gereinigt. Man erhielt 52 mg (71% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LC/MS (Methode 6): R, = 2.68 min, (m/z = 551 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 8.57 (s, IH), 8.56 (s, IH), 8.50 (br s, IH), 8.0 (d, IH), 7.71 (d, IH), 7.66 (d, IH), 7.56 (br s, IH), 7.41-7.51 (m, 2H), 5.93 (d, IH), 4.68 (br s, 2H), 4.22-4.31 (m, 2H), 3.80 (dd, IH), 2.05 (m, IH), 1.95 (m, IH), 1.65 (m, 2H).

Die Enantiomerentrennung von l-[2-Amino-6-({l-[6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5- a]pyrazin-8-yl]piperidin-3-yl}amino)pyridin-3-yl]-2,2,2-trif luorethanon Hydrochlorid (Beispiel 19) wurde unter den folgenden Bedingungen durchgerührt:

Eine Probe von Beispiel 19 (40 mg) wurde in 27 ml Ethanol und 3 ml Acetonitril warm aufgenommen und über eine Daicel Chiralpak AD-H, 5μm, 250 mm x 20 mm Säule chromatographiert (Fluß: 15 ml/min; Detektion bei 220 nm; Injektionsvolumen: 500 μl; Eluent: iso-Hexan/2-Propanol (75/25), Temperatur: 40 ⁰ C). Es wurden zwei Fraktionen isoliert:

Beispiel Ent-A-19: Es wurden 14 mg Produkt in > 99% ee isoliert.

Retentionszeit 7.38 min

Beispiel Ent-B-19: Es wurden 17 mg Produkt in > 98% ee isoliert.

Retentionszeit 9.02 min

Beispiel 20

1 - {2-Amino-6-[(2- {[6-(2,4-dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[l ,5-a]pyrazin-8-yl]amino} ethyl)amino]- pyridin-3 -yl } propan- 1 -on

30 mg (0.10 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 20A), 26 mg (0.12 mmol) l-{2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-yl}propan-l-on Hydrochlorid (Beispiel 36A) und 78 mg (0.6 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 1 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 30 mg (68% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LCMS (Methode 6): R, = 1.66 min. (m/z = 471 (M+H) ⁴ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 8.60 (s, IH), 8.45 (s, IH), 8.40 (br s, IH), 7.78 (m, IH), 7.71 (m, IH), 7.62 (m, IH), 7.48 (m, IH), 6.25 (br, IH), 5.80 (br m, IH), 3.74 (m, 2H), 3.63 (m, 2H), 2.73 (m, 2H), 1.05 (t, 3H).

Beispiel 21

1 -[2-Amino-6-( { 1 -[6-(2,4-difluorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8-yl]piperidin-3-yl} amino)- pyridin-3-yl]-2,2,2-trifluorethanon

100 mg (0.38 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-difluoφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 43A), 146 mg (0.45 mmol) l-[2-Amino-6-(piperidin-3-ylamino)pyridin-3-yl]-2,2,2-triflu orethanon Hydrochlorid (Beispiel 33A) und 523 μl (3 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 4 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 175 mg (90% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LC/MS (Methode 8): R, = 1.49 min, (m/z = 519 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-O ₆ ): δ = 8.55 (s, IH), 8.53 (s, 2H), 7.9-8.05 (m, 2H), 7.59 (s, IH), 7.4- 7.48 (d, IH), 7.37 (t, IH), 7.05 (t, IH), 5.90 (d, IH), 4.45-4.56 (m, 2H), 4.24-4.36 (m, 2H), 4.07- 4.17 (m, IH), 1.98-2.11 (m, 2H), 1.6-1.76 (m, 2H).

Die Enantiomerentrennung von l-[2-Amino-6-({l-[6-(2,4-difluorphenyl)[l,2,4]triazolo[l,5- a]pyrazin-8-yl]piperidin-3-yl}arnino)pyridin-3-yl]-2,2,2-tri fluorethanon (Beispiel 21) wurde unter den folgenden Bedingungen durchgeführt:

Eine Probe von Beispiel 21 (160 mg) wurde in 3 ml Ethanol gelöst und über eine Daicel Chiralpak AS-H, 5μm, 250 mm x 20 mm Säule chromatographiert (Fluß: 15 ml/min; Detektion bei 220 nm; Injektionsvolumen: 650 μl; Eluent: iso-Hexan/Ethanol (70/30), Temperatur: 40 ⁰ C). Es wurden zwei Fraktionen isoliert:

Beispiel Ent-A-21: Es wurden 53 mg Produkt in > 99% ee isoliert.

Retentionszeit 5.01 min

Beispiel Ent-B-21: Es wurden 82 mg Produkt in > 99% ee isoliert.

Retentionszeit 8.19 min

Beispiel 22

1 - {2-Amino-6-[(2- {[6-(2,4-difluorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8-yl]amino} ethyl)amino]- pyridin-3-yl} -2,2,2-trifluorethanon Hydrochlorid

50 mg (0.19 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-difluorphenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 43A), 64 mg (0.23 mmol) l-{2-Arnino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-yl}-2,2,2-trifl uoretlianon Hydrochlorid (Beispiel 24A) und 0.26 ml (1.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 2 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 140 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Man erhielt nach Reinigung mittels präparativer HPLC (Methode 10) 64 mg (63% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LCMS (Methode 6): R _t = 2.29 min. (m/z = 479 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Ci ₆ ): δ = 8.56 (br s, 2H), 8.44 (s, IH), 8.33 (t, IH), 8.11 (t, IH), 8.0 (dd, IH), 7.72 (m, IH), 7.32-7.45 (m, 2H), 7.04 (dt, IH), 5.85 (d, IH), 3.79-3.87 (m, 2H), 3.62-3.72 (m, 2H).

Beispiel 23

4-Amino-2-( { 1 -[6-(2,4-dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8-yl]piperidin-3-yl} amino)- 1 ,3- thiazol-5 -carbonitril

80 mg (0.27 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichloφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 20A), 98.9 mg (0.29 mmol) 4-Amino-2-(piperidin-3-ylamino)-l,3-thiazol-5-carbonitril Dihydrochlorid (Beispiel 45A) und 279 μl (1.6 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 2.2 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 69 mg (52% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LC/MS (Methode 3): R, = 2.57 min, (m/z = 486 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 8.58 (s, IH), 8.56 (s, IH), 8.47 (d, IH), 7.73 (d, IH), 7.65 (d, IH), 7.52 (dd, IH), 6.67 (s, br, IH), 4.4-4.6 (m, 2H), 4.05-4.2 (m, IH), 3.9-4.04 (m, IH), 3.77-3.90 (m, IH), 1.98-2.07 (m, IH), 1.84-1.95 (m, IH), 1.55-1.74 (m, 2H).

Beispiel 24

N ⁶ -(2- {[6-(2,4-Dichlorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8-yl]amino} ethyl)-3-nitropyridin-2,6- diamin Trifluoracetat

50 mg (0.17 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-dichlorphenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 20A), 58.2 mg (0.2 mmol) N ⁶ -(2-Aminoethyl)-3-nitropyridin-2,6-diamin Dihydrochlorid (Beispiel 47A)

und 233 μl (1.34 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 3.1 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 140 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 11) gereinigt. Man erhielt 40.7 mg (42% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LC/MS (Methode 3): R, = 2.51 min, (m/z = 460 (M+H) ⁺ )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 8.58 (s, IH), 8.43 (s, IH), 8.31 (t, IH), 8.15 (br s, IH), 8.07 (t, IH), 7.88 (d, IH), 7.72 (s, IH), 7.68-7.80 (br s, IH), 7.63 (d, IH), 7.46 (d, IH), 5.88 (d, IH), 3.72 (m, 2H), 3.64 (m, 2H).

Beispiel 25

1 - {2-Amino-6-[(2- { [6-(2-chlor-4-fluorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8-yl]amino} ethyl)- amino]pyridin-3-yl} -2,2,2-trifluorethanon Hydrochlorid

80 mg (0.28 mmol) 8-Chlor-6-(2-chlor-4-fluoφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyraz in (Beispiel 50A), 97 mg (0.34 mmol) l-{2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-yl} -2,2,2 -trifluorethanon Hydrochlorid (Beispiel 24A) und 394 μl (2.26 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 2 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 120 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 10) gereinigt. Man erhielt 47 mg (31% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LC/MS (Methode 8): R _t = 1.40 min, (m/z = 495 (M+H) ^* )

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-(I ₆ ): δ = 8.58 (s, IH), 8.40 (s, IH), 8.32 (t, IH), 8.22 (br s, IH), 7.72 (m, IH), 7.68 (dd, IH), 7.54 (dd, IH), 7.48 (m, IH), 7.26 (dt, IH), 5.91 (d, IH), 3.73 (m, 2H), 3.67 (m, 2H).

Beispiel 26

^^-{[ό^^-Difluoφheny^tl^^ltriazolofl^-alpyrazin-S-y^ami nolethyO-S-nitropyridin^^-

diamin

50 mg (0.19 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-difluoφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 43A), 65.4 mg (0.23 mmol) N ⁶ -(2-Aminoethyl)-3-nitropyridin-2,6-diamin Diliydrochlorid (Beispiel 47A) und 261 μl (1.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 3.6 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 140 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 13) gereinigt. Man erhielt 2.3 mg (3% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LC/MS (Methode 3): R, = 2.34 min, (m/z = 428 (M+H)*)

¹ H-NMR (400MHz, DMSOd ₆ ): δ = 8.56 (s, IH), 8.44 (s, IH), 8.28 (m, 2H), 7.98 (m, 3H), 7.84 (d, IH), 7.36 (dt, IH), 7.08 (t, IH), 5.86 (d, IH), 3.83 (m, 2H), 3.68 (m, 2H).

Beispiel 27

2-Amino-6-[(2- { [6-(2,4-difluorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8-yl]amino} ethyl)amino]- pyridin-3-carbonitril Hydrochlorid

50 mg (0.19 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-difluorphenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 43A), 66.2

mg (0.23 mmol) 2-Amino-6-[(2-aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril Dihydrochlorid (Beispiel 17A) und 261 μl (1.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 3.6 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 140 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 10) gereinigt. Man erhielt 23 mg (26% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LC/MS (Methode 6): R ₁ = 1.88 min, (m/z = 408 (M+H)*)

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 8.56 (s, IH), 8.44 (s, IH), 8.29 (m, IH), 7.98 (dd, IH), 7.38 (m, 2H), 7.18 (dt, IH), 5.83 (br s, IH), 4.08 (br s, 3H), 3.79 (m, 2H), 3.65 (m, 2H).

Beispiel 28

6-[(2- {[6-(2,4-Difluorphenyl)[ 1 ,2,4]triazolo[ 1 ,5-a]pyrazin-8-yl]amino} ethyl)amino]pyridin-3- carbonitril Hydrochlorid

50 mg (0.19 mmol) 8-Chlor-6-(2,4-difluoφhenyl)[l,2,4]triazolo[l,5-a]pyrazin (Beispiel 43A), 62.2 mg (0.23 mmol) 6-[(2-Aminoethyl)amino]pyridin-3-carbonitril Dihydrochlorid (Beispiel 2A) und 261 μl (1.5 mmol) N,N-Diisopropylethylamin wurden in 3.6 ml DMSO vorgelegt. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min bei 140 ⁰ C in einem Mikrowellenreaktor bestrahlt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels präparativer HPLC (Methode 10) gereinigt. Man erhielt 59 mg (72% d. Th.) des Produktes als Feststoff.

LC/MS (Methode 8): R ₄ = 1.19 min, (m/z = 393 (M+Hf)

¹ H-NMR (400MHz, DMSO-Cl ₆ ): δ = 8.56 (s, IH), 8.44 (s, 2H), 8.24 (m, IH), 8.06 (br s, IH), 7.98 (dd, IH), 7.62 (br s, IH), 7.39 (t, IH), 7.19 (t, IH), 6.55 (br s, IH), 3.78 (m, 2H), 3.66 (m, 2H).

B) Bewertung der physiologischen Wirksamkeit

Die Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von hämatologischen Erkrankungen kann in folgenden Assaysystemen gezeigt werden:

In vitro Assav

Die inhibitorische Aktivität von Wirksubstanzen wird in einem biochemischen Assay bestimmt. Die dazu benötigten Bestandteile werden in einer schwarzen 384-Loch-Mikrotitterplatte mit transparentem Boden (Firma Greiner, Katalognummer 781092) gemischt. Benötigt werden dabei pro Loch der 384-Loch-Mikrotitterplatte 5 nM GSK3ß (Firma Upstate, Katalognummer 14-306), 40 μM GSK3ß-Substrat GSM (Sequenz H-RRRPASVPPSPSLSRHS-(pS)-HQRR, Firma Upstate, Katalognummer 2-533), 30 μM Nicotinsäureamid-Adenin-Dinucleotid NADH (Roche Diagnostics, Katalognummer 10107735), 50 μM Adenosin-triphoshat ATP (Firma Sigma, Katalognummer A7966), 2 mM Phosphoenolpyruvat (Firma Roche, Katalognummer 128112), sowie ca. 1 U/ml Pyruvatkinase und ca. 1 U/ml Lactatdehydrogenase, die zusammen in einer Stammformulierung vorliegen (Firma Roche, Katalognummer 10737291001, Suspension mit ca. 450 U/ml Pyruvatkinase- Aktivität, ca. 450 U/ml Lactatdehydrogenase- Aktivität in 3.2 mM Ammoniumsulfat-Lösung pH 6). Wobei 1 Unit Pyruvatkinase 1 μmol Phosphoenolpyruvat zu Pyruvat pro Minute bei pH 7.6 und 37°C umsetzt und wobei 1 Unit Laktatdehydrogenase 1 μmol Pyruvat zu Lactat pro Minute bei pH 7.5 und 37°C reduziert. Der benötigte Reaktionspuffer, in dem die biochemische Reaktion abläuft, besteht aus 50 mM Trizma Hydrochlorid Tris-HCl pH: 7.5 (Firma Sigma, Katalognummer T3253), 5 mM Magnesiumchlorid MgCl ₂ (Firma Sigma, Katalognummer M8266), 0.2 mM DL-Dithiothreitol DTT (Firma Sigma, Katalognummer D9779), 2 mM Ethylendiaminethertetrasäure EDTA (Firma Sigma, Katalognummer E6758), 0.01% Triton X-100 (Firma Sigma, Katalognummer T8787) und 0.05% Bovines Semmalbumin BSA (Firma Sigma, Katalognummer B4287).

Wirksubstanzen werden in Dimethylsulfoxid DMSO (Firma Sigma, Katalognummer D8418) in einer Konzentration von 10 mM gelöst. Wirksubstanzen werden in Konzentrationsreihen von 10 μM, 1 μM, 0.1 μM, 0.01 μM, 0.001 μM, 0.0001 μM, 0.00001 μM, 0.000001 μM zu den Ansätzen der biochemischen Reaktion zugegeben. Als Kontrolle wird statt Substanz Dimethylsulfoxid in einer Endkonzentration von 0.1% zugesetzt.

Die Reaktion wird für 2 Stunden bei 30 ⁰ C inkubiert und anschließend die entstandene Fluoreszenz in einem Tecan Safϊre-XFLUOR4-Gerät, Version V4.50 (Serienummer 12901300283) unter den Spezifikationen: Messmodus - Fluoreszenz, von unten gemessen, Extinktionswellenlänge 340 nm, Emissionswellenlänge 465 nm, Spaltbreite Extinktion 5 nm, Spaltbreite Emission 5 nm,

Verstärkermodus 120, Verzögerung 0 μs, Anzahl Lichtblitze pro Messung 3, und einer Integrationszeit von 40 μs gemessen.

Die Aktivität der GSK3ß wird in Fluoreszenz-Einheiten ermittelt, wobei die Werte von nicht- inhibierter Kinase gleich 100% und vollständig inhibierter Kinase gleich 0% gesetzt werden. Die Aktivität der Wirksubstanzen wird auf diese 0% und 100% verrechnet.

Tabelle A zeigt IC ₅₀ - Werte, die in dem oben beschriebenen Assay ermittelt wurden:

Tabelle A

CD34+-Proliefrationsassays zur Testung von GSK3ß-Inhibitoren

Adulte hämatopoetische Stammzellen sind durch die spezifische Ausprägung von membranständigen Proteinen gekennzeichnet. Entsprechend ihrem Molekulargewicht sind diese Oberflächenmarker mit einer entsprechenden Nummer versehen. Zu dieser Klasse gehört auch das als CD34 bezeichnete Molekül, welches zur Identifizierung, Charakterisierung und Isolierung von adulten hämtopoetischen Stammzellen dient. Diese Stammzellen können dabei aus dem Knochenmark, dem peripheren Blut oder aus Nabelschnurblut isoliert werden. In in vitro-Kulturen sind diese Zellen begrenzt lebensfähig, können aber durch unterschiedlichste Zusätze zum Kulutrmedium zu Proliferation und Differenzierung angeregt werden. CD34-positive Zellen werden hier verwendet, um den Einfluss von Substanzen auf die Aktivität der Glykogen Synthase Kinase 3 zu testen. Zu diesem Zweck werden in einem ersten Schritt über differentielle Zentrifugationsschritte mononukleare Zellen aus Nabelschnurblut isoliert.

Dazu wird Nabelschnurblut 1 :4 mit Phosphat-gepufferter Salzlösung verdünnt. 50 Milliliter Zentrifugationgefäße werden mit 17 Milliliter Ficoll (Dichte 1.077, Ficoll Paque Plus; Pharmacia, Katalognummer 17-1440-02) beschickt. Darauf werden 30 Milliliter des 1:4 verdünnten

Nabelschnurblutes aufgeschichtet und anschließend für 30 Minuten bei 400 x g bei Raumtemperatur zentrifuigert. Die Bremsen der Zentrifuge sind dabei ausgeschaltet. Die mononukleären Zellen sammeln sich durch die Zentrifugation in der Interphase. Diese wird mit Hilfe einer 30 Milliliter-Pipette abgenommen und in ein neues 50 Milliliter Zentrifugationsgefäß überfuhrt und das Volumen anschließend mit der Phosphat-gepufferten Salzlösung auf 30 ml aufgefüllt. Diese Zellen werden für 10 Minuten bei Raumtemperatur mit eingeschalteter Bremse bei 300 x g zentrifuigert. Der überstand wird verworfen und das entstandene Zellpellet in 30 Milliliter Phosphat-gepufferter Salzlösung resuspendiert. Diese Zellen werden erneut für 15 Minuten bei 20 ⁰ C bei 200 x g und eingeschalteter Bremse zentrifugiert.

Zur Isolierung der CD34-positiven Zellen aus die angereicherten mononukleären Zellen in einer Konzentration von 1 X 10 ⁸ Zellen pro 300 Mikroliter MACS-Puffer (0.5% Endotoxin-freies bovines Serumalbumin in Phosphat-gepufferter Salzlösung) resuspendiert. Es erfolgt die Zugabe von 100 Mikrolitern FCR Blocking Reagenz (Miltenyi Biotec, Katalognummer 130-046-702) sowie 100 Mikrolitern an CD34 Micro Beads (Miltenyi Biotec, Katalognummer 130-046-702). Diese Suspension wird für 30 Minuten bei 4°C inkubiert. Anschließend werden die Zellen mit dem 20-fachem Volumen MACS Puffer verdünnen und 10 Minuten bei 300 x g zentrifugiert. Der überstand wird verworfen und die Zellen in 500 Mikrolitern MACS Puffer resuspendiert. Die so behandelten Zellen werden auf einer LS-Säule (Miltenyi Biotec, katalognummer 130-042-401) aufgetragen und unter Verwendung eines Midi MACS Magneten (Miltenyi Biotec, Katalognummer 130-042-303) aufgereinigt.

Die Anzahl an CD34-positiven Zellen wird über das auszählen der Zellen unter Verwendung einer Neubauer-Kammer durchgeführt. Die Bestimmung der Reinheit der Zellen erfolgt nach Standardprotokollen unter Verwendung der Fluorescent Activated Cell Sorting -Methode (Becton Dickinson, BD FACS™ Sample Prep Assistant SPäH Upgrade Kit, Katalognummer 337642).

Zur Bestimmung des Einflusses einer Modulation der GSK3-Aktivität werden CD34-positive Zellen über 7 Tage in einer 96-Loch-Mikrotitterplatte bei 37°C und 5% Kohlendioxid inkubiert und anschließend die Proliferationsraten anhand der Zellzahlen bestimmt.

Zu diesem Zweck werden 5000 CD34-positive Zellen pro Loch einer 96-U-Boden-Loch- Mikrotitterplatte (Greiner Bio-One, Katalognummer 650 180) in 100 Mikroliter IMDM-Medium (Life Technology, Katalognummer 12440-046), 10% fetales Kälberserum (Life Technology, Katalognummer 10082-139) und 20 Nanogramm pro Milliliter Stern Cell Factor (RScD, Katalognummer 255-SC-010) aufgenommen. Zusätzlich werden die Zellen noch unterschiedlichen Konzentrationen an mit Dimethylsulfoxid (Sigma Aldrich, Katalognummer D5879-1L) gelösten Substanzen versetzt. Dabei werden jeweils 4 Löcher mit der angegebenen Zellzahl von 5000

CD34-positiven Zellen pro Loch mit 10 Mikromol, 4 Löcher mit 5 Mikromol, 4 Löcher mit 2.5 Mikromol, 4 Löcher mit 1.25 Mikromol, 4 Löcher mit 0.625 Mikromol, 4 Löcher mit 0.3125 Mikromol, 4 Löcher mit 0.156 Mikromol, 4 Löcher mit 0.078 Mikromol und als Kontrolle 4 Löcher mit 0.1% Dimethylsulfoxid als Endkonzentration versehen.

Diese so behandelten Zellen werden für 7 Tage in einem Zellkultur-Brutschrank bei 37°C und 5% Kohlendioxid inkubiert. Durch erneutes zählen der Zellen unter Verwendung einer Neubauer- Zählkammer wird die Proliferationsrate bestimmt, wobei die nur mit dem Stem Cell Factor versehenen Zellen als 100%-Wert gesetzt und alle anderen Werte auf diesen Wert bezogen sind.

In-vivo Assay

Die Untersuchungen der in vivo- Wirkung der erfϊndungsmäßigen Verbindungen erfolgt unter Verwendung von 6 Wochen alten, 18 - 22 g schweren, männlichen C57BL/6-Mäusen (Charles River, Sulzfeld, Deutschland). Diese Tiere werden artgerecht mit 12-stündigen Licht- und Dunkelzyklen unter konstanten klimatischen Bedingungen gehalten und mit Wasser und Mausfutter ad libitum ernährt. Die Konzentrationen an verwendeten Chemotherapeutika werden den Tieren gemäß den Angaben der Hersteller mittels intra-peritonealen (i.p.) Injektionen im kaudalen Drittel des Bauches verabreicht. Gleichermaßen wird mit den erfmdungsrelevanten Substanzen verfahren. Blutabnahmen erfolgen mit Hilfe von Pasteur-Pipetten aus dem retrobulbären Venenplexus. Die Bestimmung der Anzahl neutrophiler Granulozyten erfolgt vollautomatisch unter Verwendung von Durchflußzytometriesystemen.

CYP-Inhibitionstest

Die Fähigkeit von Substanzen, CYP1A2, CYP 2C8, CYP2C9, CYP2D6 und CYP3A4 im Menschen inhibieren zu können, wird untersucht mit gepoolten Human-Lebermikrosomen als Enzymquelle in Gegenwart von Standardsubstraten (s.u.), die CYP-Isoform-spezifische Metaboliten bilden. Die Inhibitionseffekte werden bei sechs verschiedenen Konzentrationen der Testverbindungen untersucht (1.5, 3.1, 6.3, 12.5, 25 sowie 50 μM), mit dem Ausmaß der CYP- Isoform-spezifischen Metabolitenbildung der Standardsubstrate in Abwesenheit der Testverbindungen verglichen und die entsprechenden IC ₅₀ - Werte berechnet. Ein Standard-Inhibitor, der eine einzelne CYP-Isoform spezifisch inhibiert, dient als Kontrolle der erhaltenen Ergebnisse.

Durchführung:

Die Inkubation von Phenacetin, Amodiaquin, Diclofenac, Dextromethorphan oder Midazolam mit Human-Lebermikrosomen in Gegenwart von jeweils sechs verschiedenen Konzentrationen einer Testverbindung (als potentiellem Inhibitor) wird auf einer Workstation durchgeführt (Tecan,

Genesis, Crailsheim, Deutschland). Standard-Inkubationsgemische enthalten 1.3 mM NADP, 3.3 mM MgCl ₂ x 6 H ₂ O, 3.3 mM Glukose-6-phosphat, Glukose-6-phosphat-Dehydrogenase (0.4 U/ml) und 100 mM Phosphat-Puffer (pH 7.4) in einem Gesamtvolumen von 200 μl. Testverbindungen werden bevorzugt in Acetonitril gelöst. 96-Lochplatten werden eine definierte Zeit bei 37°C mit gepoolten Human-Lebermikrosomen inkubiert. Die Reaktionen werden durch Zugabe von 100 μl Acetonitril, worin sich ein geeigneter interner Standard befindet, abgestoppt. Gefällte Proteine werden durch Zentrifugation abgetrennt, die überstände werden vereinigt und mittels LC- MS/MS analysiert.

Bestimmung der Löslichkeit

Benötigte Reagenzien:

• PBS-Puffer pH 6.5: 61.86 g Natriumchlorid p.a. (z.B. Fa. Merck, Art.-Nr. 1.06404.1000), 39.54 g Natriumdihydrogenphosphat p.a. (z.B. Fa. Merck, Art.-Nr. 1.06346.1000) und 83.35 g 1 N Natriumhydroxid-Lösung (z.B. Fa. Bernd Kraft GmbH, Art.-Nr. 01030.4000) in einen 1 Liter-Messkolben einwiegen, mit Wasser auffüllen und ca. 1 Stunde rühren. Von dieser Lösung 500 ml in einen 5 Liter-Messkolben geben und mit Wasser auffüllen. Mit 1 N

Natriumhydroxid-Lösung auf pH 6.5 einstellen.

• Dimethylsulfoxid (z.B. Fa. Baker, Art.-Nr. 7157.2500)

• destilliertes Wasser

• Acetonitril Chromasolv (z.B. Riedel-de Haen Art. Nr. 34851)

• 50%ige Ameisensäure p.a. (z.B. Fluka Art. Nr. 09676)

Herstellung der Ausgangslösung:

Mindestens 1.5 mg der Testsubstanz werden in ein Wide Mouth 10mm Screw V-Vial (Fa. Glastechnik Gräfenroda GmbH, Art.-Nr. 8004-WM-H/V15μ) mit passender Schraubkappe und Septum genau eingewogen, mit Dimethylsulfoxid zu einer Konzentration von 50 mg/ml versetzt und 30 Minuten mittels eines Vortexers geschüttelt.

Herstellung der Kalibrierlösungen:

Die notwendigen Pipettierschritte erfolgen in 1.2 ml 96er Deep Well Plate (DWP) (z.B. HJ- Bioanalytik GmbH Art.-Nr. 850289) mittels eines Liquid-Handling-Roboters. Als Lösemittel wird ein Gemisch aus Acetonitril Chromasolv / destilliertem Wasser 8:2 verwendet.

Herstellung der Ausgangslösung fiir Kalibrierlösungen (Stammlösung): 10 μl der Ausgangslösung werden mit 833 μl des Lösemittelgemisch versetzt (Konzentration = 600 μg/ml) und homogenisiert. Es werden von jeder Testsubstanz zwei 1 :100 Verdünnungen in separaten DWP's hergestellt und wiederum homogenisiert. Eine der 1:100 Verdünnungen wird für die Herstellung der Kalibrierlösungen verwendet, die zweite Verdünnung wird für die Optimierung der MS/MS- Parameter verwendet.

Kalibrierlösung 5 (600 ng/ml): 30 μl der Stammlösung werden mit 270 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.

Kalibrierlösung 4 (60 ng/ml): 30 μl der Kalibrierlösung 5 werden mit 270 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.

Kalibrierlösung 3 (12 ng/ml): 100 μl der Kalibrierlösung 4 werden mit 400 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.

Kalibrierlösung 2 (1.2 ng/ml): 30 μl der Kalibrierlösung 3 werden mit 270 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.

Kalibrierlösung 1 (0.6 ng/ml): 150 μl der Kalibrierlösung 2 werden mit 150 μl Lösemittelgemisch versetzt und homogenisiert.

Herstellung der Probenlösungen:

Die notwendigen Pipettierschritte erfolgen in 1.2 ml 96er DWP (z.B. HJ-Bioanalytik GmbH Art.- Nr. 850289) mittels eines Liquid-Handling-Roboters.

10.1 μl der Stammlösung werden mit 1000 μl PBS-Puffer pH 6.5 versetzt.

Durchführung:

Die notwendigen Pipettierschritte erfolgen in 1.2 ml 96er DWP (z.B. HJ-Bioanalytik GmbH Art.- Nr. 850289) mittels eines Liquid-Handling-Roboters.

Die so hergestellten Probenlösungen werden 24 Stunden bei 1400 rpm mittels eines temperier- baren Schüttlers (z.B. Fa. Eppendorf Thermomixer comfort Art.-Nr. 5355 000.011) bei 20 ⁰ C geschüttelt. Von diesen Lösungen werden jeweils 180 μl abgenommen und in Beckman Polyallomer Centrifuge Tubes (Art.-Nr. 343621) überführt. Diese Lösungen werden 1 Stunde mit ca. 223.000 x g zentrifugiert (z.B. Fa. Beckman Optima L-90K Ultracentrifuge mit Type 42.2 Ti Rotor bei 42.000 rpm). Von jeder Probenlösung werden 100 μl des überstandes abgenommen und

1 : 10 und 1 : 1000 mit PBS-Puffer 6.5 verdünnt.

Analytik:

Die Proben werden mittels HPLC/MS-MS analysiert. Quantifiziert wird über eine Fünf-Punkt- Kalibrationskurve der Testverbindung. Die Löslichkeit wird in mg/1 ausgedrückt. Analysensequenz: 1) Blank (Lösemittelgemisch); 2) Kalibrierlösung 0.6 ng/ml; 3) Kalibrierlösung 1.2 ng/ml; 4) Kalibrierlösung 12 ng/ml; 5) Kalibrierlösung 60 ng/ml; 6) Kalibrierlösung 600 ng/ml; 7) Blank (Lösemittelgemisch); 8) Probenlösung 1 :1000; 7) Probenlösung 1 :10.

HPLC/MS-MS Methode

HPLC: Agilent 1100 , quat. Pumpe (G1311A), Autosampier CTC HTS PAL, Degaser (G1322A) und Säulenthermostat (G1316A); Säule: Oasis HLB 20 mm x 2.1 mm, 25 μ; Temperatur: 40 ⁰ C; Eluent A: Wasser + 0.5 ml Ameisensäure/l; Eluent B: Acetonitril + 0.5 ml Ameisensäure/l; Flussrate: 2.5 ml/min; Stoptime 1.5 min; Gradient: 0 min 95% A, 5% B; Rampe: 0-0.5 min 5% A, 95% B; 0.5-0.84 min 5% A, 95% B; Rampe: 0.84-0.85 min 95% A, 5% B; 0.85-1.5 min 95% A, 5% B.

MS/MS:WATERS Quattro Micro Tandem MS/MS; Z-Spray API-Interface; HPLC-MS- Eingangssplitter 1 :20; Messung im ESI-Mode

Die Geräteparameter werden für jede Testsubstanz durch Injektion der weiter oben beschriebenen Stammlösung (zweite 1: 100 Verdünnung) mittels der MassLynx/QuanOptimize-Software automatisch optimiert.

C) Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zusammensetzungen

Die erfindungsgemäßen Substanzen können folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überfuhrt werden:

Tablette:

Zusammensetzung:

100 mg der Verbindung des Beispiels 1, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke, 10 mg Polyvinylpyrolidon (PVP 25) (Fa. BASF, Deutschland) und 2 mg Magnesiumstearat.

Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.

Herstellung:

Die Mischung aus der Verbindung des Beispiels 1, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat für 5 min. gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben).

Orale Suspension:

Zusammensetzung:

1000 mg der Verbindung des Beispiels 1, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel (Xanthan gum) (Fa. FMC, USA) und 99 g Wasser.

Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension.

Herstellung:

Das Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, die Verbindung des Beispiels 1 wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluss der Quellung des Rhodigels wird ca. 6h gerührt.

Intravenös applizierbare Lösung:

Zusammensetzung:

1 mg der Verbindung von Beispiel 1, 15 g Polyethylenglykol 400 und 250 g Wasser für Inj ektionszwecke.

Herstellung:

Die Verbindung von Beispiel 1 wird zusammen mit Polyethylenglykol 400 in dem Wasser unter Rühren gelöst. Die Lösung wird sterilfiltriert (Porendurchmesser 0.22 μm) und unter aseptischen Bedingungen in hitzesterilisierte Infusionsflaschen abgefüllt. Diese werden mit Infusionsstopfen und Bördelkappen verschlossen.