Die Erfindung betrifft neue bifunktionelle chalkogen- atom-unterbrochene Chelatbildner, diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Mittel, ihre Verwendung in der Radiodiagnostik und Radiotherapie sowie Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen und Mittel.

Die Anwendungen von Komplexbildnern für radioaktive Isotope bzw. ihre omplexe mit radioaktiven Metallen in der Radiodiagnostik und Radiotherapie ist seit langem bekannt. Für die Radiodiagnostik wird am häufigsten das Radionuklid Technetium-99m verwendet, das auf Grund seiner günstigen physikalischen Eigenschaften (keine Korpuskularstrahlung, geringe Halbwertzeit von 6.02 h, gute Detektierbarkeit durch 140 KeVY-Strahlung) und geringen biologischen Halbwertzeit und einfacher Ver¬ fügbarkeit besonders gut für eine in vivo Anwendung ge¬ eignet ist. Zur Bildung von Technetium-99m-Kompleκen wird Pertechnetat zunächst aus einem Nuklidgenerator gewonnen und durch Verwendung geeigneter Reduktions-

2- ittel (z. B. SnCl-, , S-O, etc.) in eine niedrigere

Oxidationsstufe überführt, die anschließend durch einen geeigneten Chelator stabilisiert wird. Da Technetium in einer Reihe von Oxidationsstufen (+7 bis -1) vorliegen kann, die die phar akologischen Eigenschaften durch Veränderungen der Ladung eines Komplexes stark verän¬ dern können, ist es notwendig, Chelatoren bzw. Komplex¬ liganden für Technetium-99m bereitzustellen, die Tech¬ netium sicher, fest und stabil in einer definierten Oxidationsstufe binden können, um zu verhindern, daß durch in vivo ablaufende Redoxprozesse bzw. Techneti- umfreisetzungen aus dem entsprechenden Radiodiagnosti¬ ka eine unerwünschte Biodistribution stattfindet, die eine sichere Diagnostik entsprechender Erkrankungen erschwert.

Als geeignete Komplexbildner für Technetium und Rheni¬ umisotope gelten z. B. cyklische Amine (Troutner, D. E. et al.: J. Nucl. Med. 21, 443 (1980)), die aber den Nachteil haben, daß sie erst ab einem pH > 9 in der Lage sind,Technetium-99m in guten Ausbeuten zu binden. N_0 ₂ -Systeme ( Pillai, M. R. A. , Troutner, D. E. et al.; Inorg. Chem. 29, 1850 (1990)) befinden sich in der kli¬ nischen Anwendung. Nichtcyclische N. -Systeme,wie z. B. das HMPΛO haben als großen Nachteil ihre geringe Kom¬ plexstabilität. Tc-99m-HMPAO muß wegen seiner Instabi¬ lität (Ballinger, J. R. et al., Appl. Radiat. Isot. 42, 315 (1991)); Billinghurst M. W. et al., Appl. Radiat. Isot. 4_2, 607 (1991)) sofort nach seiner Markierung appliziert werden, damit der Anteil an Zerfallproduk¬ ten, die eine andere Pharmakokinetik und Ausscheidung besitzen, klein gehalten werden kann. Solche radioche¬ mischen Verunreinigungen erschweren die Erkennung von zu diagnostizierenden Erkrankungen. Eine Kopplung die¬ ser Chelate bzw. Chelatbildner an andere, sich selektiv in Krankheitsherden anreichernde Substanzen ist nicht mit einfachen Mitteln zu lösen, so daß sich diese im allgemeinen unspezifisch im Organismus verteilen.

N_S ₂ -Chelatoren (Bor ans, G. et al.; Nucl. Med. Biol. _17, 499 (1990)) wie z. B. Ethylendicystein (EC; Verbruggen, A. M. et. al.; J. Nucl. Med. 33, 551 (1992)) erfüllen zwar die Forderung nach hinreichender Stabilität des entsprechenden Technetium-99m-Komplexes, bilden aber erst ab einem pH-Wert des Komplexierungs- mediu s > 9 Radiodiagnostika mit einer Reinheit von größer 69 %. N_S-Systeme (Fritzburg, A. ; EPA 0 173 424 und EPA 0 250 013) bilden zwar stabile Technetium-99m- Komplexe, müssen aber zum Einbau des Radioisotops auf Temperaturen von ca. 100 °C erhitzt werden.

Ein weiterer Nachteil der N_S_- und N S-Systeme besteht darin, daß diese teilweise rasch und ohne spezifische Anreicherung vom Organismus ausgeschieden werden, so daß diese nur als Nierenfunktionsdiagnostika in der Klinik Anwendung finden und somit eine beschränkte Ver¬ wendbarkeit besitzen. In den letzten Jahren ist das Verlangen nach sich spezifisch in erkrankten Geweben anreichernden Radiodiagnostika gestiegen. Dies kann er¬ reicht werden, wenn Komplexbildner leicht an sich se¬ lektiv anreichernde Substanzen gekoppelt werden können und dabei ihre günstigen Komplexeigenschaften nicht verlieren. Da es aber sehr häufig dazu kommt, daß nach Kopplung eines Komplexbildners unter Nutzung einer sei¬ ner funktioneilen Gruppen an ein solches Molekül eine Abschwächung der Komplexstabilität beobachtet wird, er¬ scheinen die bisherigen Ansätze zur Kupplung von Che- latbildnern an sich selektiv anreichernde Substanzen wenig zufriedenstellend, da ein diagnostisch nicht to¬ lerierbarer Anteil des Isotops aus dem Konjugat in vivo freigesetzt wird (Brechbiel, M. W. et al. ; Inorg. Chem. 1986, 2_5, 2772). Es ist deswegen notwendig, bifunktio- nelle Komplexbildner darzustellen, die sowohl funktio¬ neile Gruppen zur Bindung des gewünschten Metallions als auch eine (andere, mehrere) funktionelle Gruppe zur Bindung des sich selektiv anreichernden Moleküls tra¬ gen. Solche bifunktionellen Liganden ermöglichen eine spezifische, chemisch definierte Bindung von Techneti¬ um- oder Rhenium-Isotopen an verschiedenste biologische Materialien, auch dann, wenn ein sogenanntes Prelabe- ling durchgeführt wird. Es wurden einige Chelatbildner, gekoppelt an onoklonale Antikörper (z. B. EP Appl. 0 247 866 und 0 188 256) oder Fettsäuren (EP Appl. 0 200 492), beschrieben. Als Chelatbildner werden je¬ doch die bereits erwähnten N_S_-Systeme verwendet, die auf Grund ihrer geringen Stabilität wenig geeignet

sind. Da sowohl die sich selektiv anreichernden Sub¬ stanzen in ihren Eigenschaften sowie auch die Mecha¬ nismen, nach denen sie angereichert werden, sehr un¬ terschiedlich sind, ist es weiterhin notwendig, den kopplungsfähigen Chelatbildner zu variieren und den physiologischen Anforderungen des Kopplungspartners hinsichtlich seiner Lipo- und Hydrophilie, Membran¬ permeabilität bzw. -i permeabilität etc. anpassen zu können.

Der Erfindung lag daher die Aufgabe zugrunde, stabile Komplexverbindungen, die gekoppelt oder fähig zur Kopp¬ lung an unterschiedliche sich selektiv anreichernde Verbindungen sind, zur Verfügung zu stellen, desweite¬ ren solche koppelbaren Chelatoren oder Komplexe bereit¬ zustellen, die über eine größere chemische Variations¬ breite der Substituenten verfügen, um diese den oben referierten Erfordernissen anpassen zu können. Weiter¬ hin liegt der Erfindung die Aufgabe zugrunde, derartige Verbindungen und sie enthaltende pharmazeutische Mittel zur Verfügung zu stellen, sowie Verfahren zu ihrer Her¬ stellung zu schaffen.

Überraschender Weise wird diese Aufgabe erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß sich die neuen ungewöhnlichen, bi- funktionellen, chalkogendatom-unterbrochenen Chelat¬ bildner und deren Kopplungsprodukte mit sich spezifisch anreichernden Verbindungen hervorragend zur Herstellung von Radiodiagnostika bzw. Radiotherapeutika eignen.

Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der allge¬ meinen Formel I

M-L (I)

ERSATZBLATT

worin M für ein Radioisotop von Tc oder Re steht und L einen Liganden der allgemeinen Formel (II) bedeutet

B-CO-CR ¹ R ² -A-C ³ R ⁴ -CO-D (II)

worin A für ein Chalkogenatom 0, S oder Se steht;

R 1 ,R2,R3 und R4 gleich oder unterschiedlich sind und jeweils für ein Wasserstoffatom und/oder für einen ver¬ zweigten oder unverzweigten C. -C _ß -Alkylrest stehen, B und D gleich oder verschieden sind und einen Rest

-NH-CR ⁵ R ⁶ -(CR ⁷ R ⁸ ) 'n=l,,2_-S-R ⁹ darstellen,

worin

R und R gleich oder unterschiedlich sind und jeweils ein Wasserstoffatom oder einen unverzweigten, verzweig¬ ten, cyclischen oder polycyclischen C. -C _fin -Alkyl-, Al- kenyl-, Polyalkenyl-, Alkinyl-, Polyalkinyl-, Aryl-, Alkylaryl-, Arylalkylrest darstellen, welcher gegebe¬ nenfalls mit Hydroxy-, Carboxy-, Aminocarbonyl-, Alk- oxycarbonyl-, Amino-, Aldehyd-, Oxo-, Oxy- oder Alkoxy- Gruppen mit bis zu 20 Kohlenstoffatomen substituiert ist und/oder gegebenenfalls durch ein oder mehrere He- teroatome aus der Reihe O, N, S, P, As, Se unterbrochen und/oder substituiert ist,

7 8 R und R gleich oder unterschiedlich sind und jeweils für ein Wasserstoffatom und/oder für einen verzweigten oder unverzweigten C. -C,-Alkylrest stehen,

9 R für ein Wasserstoffatom, für einen verzweigten oder unverzweigten C. -C,-Alkylreεt oder für eine Schwefel¬ schutzgruppe steht

und R 9 und R5 gegebenenfalls zusammen mit den sie ver¬ bindenden Gruppen einen gegebenenfalls mit Hydroxy- , Oxo- , Oxy- oder Alkoxy-Gruppen mit bis zu 6 Kohlen¬ stoffatomen substituierten 4- bis 8-gliedrigen Ring bilden.

Bevorzugte Verbindungen der allgemeinen Formel ( I ) zeichnen sich dadurch aus 1 2 3 4 5 zeichnen sich dadurch aus, R , R , R , R und R Was- serstoffatome darstellen.

Besonders bevorzugte Verbindungen der allgemeinen For- mel (I) zeichnen sich dadurch aus, daß R 1 ,R2, R3, R4 ,

R , R und R Wasserstoffatome sind.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung betrifft die neuen, bifunktionellen chalkogenatom-unterbrochenen Liganden der allgemeinen Form ( II )

B-CO-CR ¹ R ² -A-CR ³ R ⁴ -CO-D (II)

worin

1 2 3 4 R , R , R , R , A, B und D die voranstehend angegebene

Bedeutung haben.

Bevorzugt sind erfindungsgemäße Liganden der allgemei¬

1 2 3 4 5 nneenn FFoorrmmeell ((IIII)),, iinn denen R , R , R , R und R Wasser- stoffatome bedeuten,

Besonders bevorzugt sind erfindungsgemäße Liganden, bei

1 2 3 4 ddeenneenn RR ,, RR ,, RR ,, RR ,, RR , R R und R jeweils für ein

Wasserstoffatom stehen.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung sind Konjugate, enthaltend Verbindungen der allgemeinen Formel ( I und/ oder II) und sich selektiv in erkrankten Geweben anrei¬ chernde Substanzen, wobei zwischen diesen eine kova- lente Bindung besteht und diese im Falle von Carboxy- oder Aminogruppen enthaltenden Substanzen wie Peptiden, Proteinen, Antikörpern oder deren Fragmenten, amidisch oder im Falle von Hydroxylgruppen enthaltenden Substan¬ zen wie Fettalkoholen esterartig oder im Falle von Al¬ dehydgruppen enthaltenden Substanzen imidisch vorliegt.

Besonders bevorzugte Konjugate zeichnen sich dadurch aus, daß die sich im erkrankten Gewebe anreichernden Substanzen Peptide wie Endotheline, Teilsequenzen von Endothelinen, Endothelin-Analoga, Endothelin-Derivate oder Endothelin-Antagonisten bedeuten.

In weiteren bevorzugten erfindungsgemäßen Konjugaten weisen die Peptide die folgenden Sequenzen oder Teile davon

. .

Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-

Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,

Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Trp-Leu-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-

Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,

Cvs-Thr-Cys-Phe-Thr-Tyr-Lys-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr- Tyr-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,

Cys-Ser-Ala-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr- Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,

Cyt_s-Se.r-Cys-Asn-Ser-Trp-Leu-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-

Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,

Cys-Ser-Cys-Lys-Asp-Met-Thr-Asp-Lys-Glu-Cys-Leu-Asn-

Phe-Cys-His-Gln-Asp-Val-Ile-Trp,

ι 1

Ala-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-

Phe-Ala-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,

Ala-Ser-Ala-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr- Phe-Ala-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,

Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Trp-Leu-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr- Phe-Ala-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,

/ i

Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,

N-Acetyl-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Ala-Val-Tyr-Phe-Ala-His- Leu-Asp-Ile-Ile-Trp,

die Teilsequenz

His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp

oder die cyclischen Aminosäuresequenzen

Cyclo-(DTrp-DAsp-Pro-DVal-Leu) ,

Cyclo-(DGlu-Ala-alloDIle-Leu-DTrp)

auf.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen der allgmeinen Formel (I) erfolgt dadurch, daß man Techne¬ tium-99m oder Re in Form von Pertechnetat oder Perrhe- nat in Gegenwart eines Reduktionsmittels und gegebenen¬ falls eines Hilfsliganden mit Verbindung der allgemeinen Formel (II)

ERSATZBLATT

B-CO-CR ¹ R ² -A-CR ³ R ⁴ -CO-D (II)

worin R 1 , R2 , R3, R4 , A, B und D die vorstehend angegebene

Bedeutung haben, umsetzt.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Liganden der all¬ gemeinen Formel (II) erfolgt dadurch, daß man Verbin¬ dungen der allgemeinen Formel (III)

X-CO-CR ¹ R ² -A-CR ³ R ⁴ -CO-X ^l (III)

worin R 1 , R2, R3 , R4 und A die voranstehend angegebene

I

Bedeutung haben und X, X für eine Abgangsgruppe ste¬ hen, mit Verbindungen der allgemeinen Formel (IV)

H-B (IV)

und/oder der allgemeinen Formel (V)

H-D (V)

umsetzt, wobei B und D die voranstehend angegebene Bedeutung haben.

Diese Umsetzungen werden in polaren und unpolaren, aprotischen Lösungsmitteln wie beispielsweise Di- chlormethan, Tetrahydrofuran, Chloroform, 1,4-Dioxan, DMF oder DMSO bei Temperaturen zwischen -30 und +100 °C unter Zugabe einer Hilfsbase zum Abfangen der freiwer¬ denden Säuren durchgeführt. Solche können beispiels¬ weise sein: tertiäre Amine, Alkali- und Erdalkalihydro- xide , Alkali- und Erdalkalicarbonate.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung sind Kits, die zur Herstellung von Radiopharmaka dienen, bestehend aus einer Verbindung der allgemeinen Formel (II) oder einem erfindungsgemäßen Konjugat enthaltend Verbindun¬ gen der allgemeinen Formel (I und/oder II) und sich se¬ lektiv in Geweben anreichernden Substanzen, einem Re¬ duktionsmittel und gegebenenfalls einem Hilfsliganden, die in trockenem Zustand oder in Lösung vorliegen, ei¬ ner Gebrauchsanweisung mit einer Reaktionsvorschrift zur Umsetzung der beschriebenen Verbindungen mit Tech- netium-99m oder Re in Form einer Pertechnetatlösung oder Perrhenatlösung.

Gegenstand der Erfindung ist auch eine radiopharma¬ zeutische Zusammensetzung zur nicht invasiven in vivo Darstellung von Rezeptoren und rezeptorhaltigem Gewebe und/oder von atherosklerotischen Plaques, die eine Ver¬ bindung der allgemeinen Formel (I) oder ein erfindungs¬ gemäßes Konjugat enthaltend Verbindungen der allgemei¬ nen Formel (I und/oder II) und sich selektiv in Geweben anreichernden Substanzen, gegebenenfalls mit den in der Galenik üblichen Zusätzen, enthält, wobei die Verbin¬ dung in einem Kit mit Technetium-99m oder Re in Form einer Pertechnetatlösung oder Perrhenatlösung zuberei¬ tet wird.

In einer Methode zur Durchführung einer radiodiagnosti¬ schen Untersuchung wird die radiopharmazeutische Zusam¬ mensetzung in einer Menge von 0,1 bis 30 Ci, bevorzugt von 0,5 bis 10 mCi pro 70 Kg Körpergewicht einem Pati¬ enten verabreicht und die vom Patienten abgegebene Strahlung aufgezeichnet.

Überraschenderweise zeigen viele der synthetisierten und mit Tc-99m oder Re markierten Chelate eine höhere Stabilität als vergleichbare N-S,.- und N_S-Systeme, die in der Literatur beschrieben sind. So konnten z. B. bei einer erfindungsgemäßen Substanz (Beispiel 3 a), die an einen Fettalkohol gekoppelt wurde, keine Zersetzungs¬ produkte nach 24 h beobachtet werden. Auch konnte durch Kompetitionsversuche festgestellt werden, daß die in dieser Erfindung beschriebene Tc-99m oder Re-Chelatoren besser als die vergleichbaren N-S-, N..S und Propylen- a inoxium-Systeme komplexieren. Die in der vorliegenden Erfindung beschriebenen Chelate und Chelatbildner sind damit eindeutig besser für diagnostische und therapeu¬ tische Zwecke geeignet als die bisher bekannten Sy¬ steme. Ein besonderer Vorteil der erfindungsgemäßen Chelatoren besteht darin, daß deren Synthesen ohne Verwendung von Schwefelschutzgruppen geführt werden können. Dies macht deren Synthese sehr einfach und zu¬ sätzlich bieten speziell solche erfindungsgemäß be¬ schriebenen Verbindungen den Vorteil, daß nach radio¬ chemischer Markierung keine weiteren Fremdmoleküle in den zur Radiodiagnostik bzw. Radiotherapie, z. B. in¬ travenös zu applizierenden Lösungen, enthalten sind, die häufig die Biodistribution des Radiophar akons stören und damit den diagnostischen Informationsgehalt nachteilig beeinflußen können. Außerdem können die Mar¬ kierungen an solchen Liganden bzw. deren Kopplungspro¬ dukte an sich selektiv in erkrankten Geweben anreichen¬ den Substanzen unter sehr milden Bedingungen vorgenom¬ men werden. So gelingt die Markierung der erfindungs¬ gemäßen Liganden bzw. der Kopplungsprodukte an sich se¬ lektiv in erkrankten Geweben anreichernden Substanzen bei Raumtemperatur und bei physologischem pH-Wert, ohne daß vorher unter Einwirkung von Basen, Säuren oder an-

deren dem Fachmann bekannten Hilfsstoffen, die Schutz¬ gruppen abzuspalten wären. Dies bietet die Gewähr, daß durch solche Hilfsstoffe die häufig sehr empfindlichen, sich selektiv in erkrankten Geweben anreichernden Sub¬ stanzen nicht chemisch verändert werden, was häufig de¬ ren selektive Anreicherung in erkranktem Gewebe herab¬ setzt und somit den Informationsgehalt bei der Radio¬ diagnostik nachteilig beeinflussen würde.

Dennoch können natürlich auch hier Schwefelschutzgrup¬ pen Verwendung finden, wenn die eben geschilderten Nachteile in Kauf genommen werden können. Deren Eta¬ blierung an Schwefelatomen bzw. deren Abspaltung ge¬ schieht dann nach Methoden, die dem Fachmann bekannt sind. Die Kopplung an sich selektiv in erkrankten Ge¬ weben anreichernden Substanzen erfolgt ebenfalls nach an sich dem Fachmann bekannten Methoden (z. B. Fritz¬ berg et al.; J. Nucl. Med. 26 _^ , 7 (1987)), beispiels¬ weise durch Reaktion von elektrophilen Gruppen des Komplexliganden mit nukleophilen Zentren der sich se¬ lektiv in erkranten Geweben anreichernden Substanzen. Ansonsten werden nukleophile Gruppen des Chelators mit elektrophilen Gruppen der sich selektiv in erkrankten Geweben anreichernden Substanzen gekoppelt.

Als Kopplungspartner sind u. a. verschiedene Biomole¬ küle vorgesehen. Liganden, die an spezifische Rezep¬ toren binden und so ein in ihrer Rezeptordichte ver¬ ändertes Gewebe erkennen können, hierzu gehören u. a. Peptide und Steroidhormone, Wachstumsfaktoren und Neu- rotransmitter. Mit Liganden für Steroidhormonrezeptoren wurde die Möglichkeit einer verbesserten Diagnostik von Brust und Prostatacarcino en aufgezeigt (S. J. Brandes and J. A. Katzenellenbogen, Nucl. Med. Biol.

ER _S ATZBLATT

15, 53, 1988). Verschiedentlich weisen Tumorzellen eine veränderte Dichte von Rezeptoren für Peptidhor- mone oder Wachstumsfaktoren, wie z. B. den "epidermal growth factor" (EgF) auf. Die Konzentrationsunterschie- de konnten zur selektiven Anreicherung von Cytostatika in Tumorzellen genutzt werden (E. Aboud-Pirak et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 86: 3778, 1989). Vielfach konnten mit Positronen-emittierenden Isotopen markierte Liganden für Neurorezeptoren zur Diagnostik verschiede¬ ner Hirnerkrankungen herangezogen werden (J. J. Forst, Trends in Pharmacol. Sei. 7: 490, 1989). Weitere Biomo¬ leküle sind in den Metabolismus der Zellen einschleus¬ bare Metabolite, die einen veränderten Stoffwechsel er¬ kennbar machen; hierzu gehören beispielsweise Fettsäu¬ ren, Saccharide, Peptide und Aminosäuren. Fettsäuren gekoppelt an die instabileren N_S_-Chelatbildner wurden in der EPA 0 200 492 beschrieben. Andere Stoffwechsel¬ produkte wie Saccharide, (Desoxyglukose) , Lactat, Pyru- vat und Aminosäuren (Leucin, Methylmethionin, Glycin ) wurden mit Hilfe der PET-Technik zur bildlichen Dar¬ stellung von veränderten Stoffwechselvorgängen herange¬ zogen (R. Weinreich, Swiss Med. 8 _^ , 10, 1986). Auch nicht biologische Substanzen wie Misonidazol und seine Derivate, die sich in Geweben bzw. Gewebeteilen mit re¬ duzierter Sauerstoffkonzentration irreversibel an Zell¬ bestandteile binden, können zur spezifischen Anreiche¬ rung von radioaktiven Isotopen und somit zur bildlichen Darstellung von Tumoren oder ischämischen Regionen her¬ angezogen werden. (M. E. Shelton, J. Nucl. Med. 30; 351, 1989). Schließlich ist auch die Kopplung der bi- funktionellen Chelatbildner an monoklonale Antikörper bzw. deren Fragmente möglich. Besonders günstig erwie¬ sen sich Kopplungsprodukte der erfindungsgemäßen Chela- toren bzw. deren Komplexe mit Technetium-99m oder Re

ERSATZBLATT

mit Fettalkoholen, Fettalkoholderivaten oder mit Fett- aminen bzw. deren Derivate oder mit Endothelinen, Teil¬ sequenzen von Endothelinen, Endothelin-Analoga, Endo- thelin-Derivaten oder Endothelin-Antagonisten zur De- tektion von atherosklerotischen Gefäßerkrankungen. Die Derivate wurden WHHL-Kaninchen appliziert, die durch einen genetischen Defekt des LDL-Rezeptors hohe LDL- Konzentrationen im Blut aufweisen und somit atheroskle- rotische Läsionen aufweisen. Etwa 4 bis 5 h nach i. V. Applikation der Derivate in WHHL-Kaninchen konnten An¬ reicherungsquotienten im Vergleich zu nicht geschädig¬ tem Gewebe von 3 bis 40 in den atheromatösen Plaques nachgewiesen werden. Dadurch können atherosklerotische Gefäßbereiche mit den in der Radiodiagnostik üblichen Methoden (z. B. Gamma-Szintillationskamera) nachgewie¬ sen werden. Bisher konnten nur sehr späte Stadien der Atherogenese mit invasiveren Verfahren (z. B. Arterio- graphie) diagnostiziert werden. Die erfindungsgemäßen Substanzen bieten deshalb den entscheidenen Vorteil, viel frühere Stadien der Atherosklerose mit nicht inva- siven Verfahren zu diagnostizieren.

Es ist unerheblich, ob eine Markierung der Chelatbild¬ ner mit Tc-99m oder Rhenium-Isotopen vor oder nach der Kopplung an das sich selektiv anreichernde Molekül durchgeführt wird. Für eine Kopplung an das sich selek¬ tiv anreichernde Molekül nach einer Komplexierung ist jedoch Voraussetzung, daß die Umsetzung des radioakti¬ ven Komplexes mit der sich anreichernden Verbindung schnell, unter schonenden Bedingungen und nahezu quan¬ titativ abläuft, so daß keine anschließende Aufreini¬ gung erforderlich ist.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Mittel erfolgt in an sich bekannter Weise, in dem man die erfindungsgemäßen Komplexbildner unter Zusatz eines Reduktionsmittels, vorzugsweise Zinn-( II )-salzen wie -chlorid oder -tartrat - und gegebenenfalls unter Zu¬ gabe der in der Galenik üblichen Zusätze - in wäßrigem Medium löst und anschließend sterilfiltriert. Geeignete Zusätze sind beispielsweise physiologisch unbedenkliche Puffer (z. B. Tromethamin) , geringe Zusätze von Elek¬ trolyten (z. B. Natriumchlorid), Stabilisatoren (z. B. Gluconat, Phosphate oder Phosphonate) . Das erfindungs¬ gemäße pharmazeutische Mittel liegt in Form einer Lösung oder in lyophilisierter Form vor und wird kurz vor der Applikation mit einer Lösung Tc-99m-Pertechne¬ tat, eluiert aus kommerziell erhältlichen Generatoren, oder einer Perrhenatlösung versetzt.

Bei der nuklearmedizinischen in-vivo-Anwendung werden

_5 die erfindungsgemäßen Mittel in Mengen von 1.10 bis

4 5.10 nmol/kg Körpergewicht, vorzugsweise in Mengen zwischen 1.10 -3 bis 5.102 nmol/kg Körpergewicht do¬ siert. Ausgehend von einem mittleren Körpergewicht von 70 kg beträgt die Radioaktivitätsmenge für diagnosti¬ sche Anwendungen zwischen 0,05 und 50 mCi, vorzugsweise 5 bis 30 mCi pro Applikation. Für therapeutische Anwen¬ dungen werden zwischen 5 und 500 mCi, vorzugsweise 10 bis 350 mCi appliziert. Die Applikation erfolgt nor¬ malerweise durch intravenöse, intraarterielle, perito- neale oder intertumorale Injektion von 0,1 bis 2 ml einer Lösung der erfindungsgemäßen Mittel. Bevorzugt ist die intravenöse Applikation.

Die nachfolgenden Beispiele dienen der näheren Erläu¬ terung des Erfindungsgegenstandes.

Beispiel 1 a

N,N -Bis-(2-Mercapto-l-(methoxycarbonyl)-ethyl)-thio- diglycolsäurediamid

Zu einer Lösung aus 17,16 g (0,1 mol) Cysteinmethyl- esterhydrochlorid und 20,24 g (0,2 mol) Triethyla in in einem Liter wasserfreiem Dichlormethan wird bei 0 °C und unter Argonatmosphäre eine Lösung von 9,35 g (0,05 mol) Thiodiglycolsäuredichlorid, gelöst in 250 ml wasserfreiem Dichlormethan, getropft. Anschließend wird 1 h bei 0 °C und abschließend 16 h bei Raumtemperatur nachgerührt. Zur Aufarbeitung wäscht man die Dichlor e- thanlösung jeweils dreimal mit 2 liger Citronensäure, gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung und mit Was¬ ser. Nach Trocknung über Natriumsulfat wird das Produkt durch Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck gewonnen. Zur Reinigung wird aus Diethylether kristallisiert.

Ausbeute: 15,32 g (79,7 % ) , weißes Pulver

Analyse:

Ber.: C 37,49 H 5,24 N 7,29 0 24,97 S 25,02 Gef.: C 37,28 H 5,41 N 7,17 S 24,89

ERSATZBLATT

Beispiel 1 b

N, '-Bis-(2-Mercapto-1-(methoxycarbonyl)-ethyl)-thio- diglycolsäurediamid-Technetium-99m-Komplex

10 mg des unter Beispiel 1 a hergestellten Liganden werden in 1 , 0 ml 25 % EtOH gelöst. 50 M l dieser Li- gand-Lösung werden mit 250/^1 Phosphat-Puffer pH 9,5, 50 .1/1 einer desoxygenierten wäßrigen Citratlösung (50 mg/ml), 2,5 M einer desoxygenierten wässrigen Zinn( II)chlorid-Lösung (5 mg/ml 0,05 einer Pertechnetat-Lösung (400 - 900 /^Ci) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird nach einer Inkubationszeit von 10 min mittels HPLC auf die Reinheit des gebilde¬ ten Tc-Komplexes untersucht: Hamilton PRP-1 Säule, 5 U ^m , 1 5 x 4,6 mm; Gradientenelution von 100 % A nach 100 % B innerhalb von 7,5 min (Eluent A: Natriumhy- drogenphosphat 0,005 M, pH 7,4; Eluent B: Acetonitril/ Natriumhydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4 (75/25); 2,0 ml/min. Die radiochemische Reinheit ist ,> 98 % .

Beispiel 2 a

N,N*-Bis-(2-Mercapto-1-(hydroxycarbonyl)-ethyl)-thio- diglycolsäurediamid

3,84 g (10 mol) des unter Beispiel 1 a hergestellten Liganden werden in 200 ml 2N Natriumhydroxidlösung un¬ ter Argonatmosphäre gelöst. Man rührt 1,5 h bei Raum¬ temperatur, stellt mit argongesättigter, konzentrierter Salzsäure pH = 2 ein und extrahiert das ausgeschiedene Öl mit argongesättigtem Essigsäureethylester. Nach Trocknung über Natriumsulfat wird das Lösungmittel

ER ^S ATZBLATT

unter vermindertem Druck verdampft, und das ölige Rohprodukt durch verreiben mit Diethylether kristal¬ lisiert.

Ausbeute: 932 mg (26,15 %), weißes Pulver

Analyse:

Ber.: C 33,70 H 4,52 N 7,86 O 26,93 S 26,98 Gef.: C 33,49 H 4,73 N 7,71 S 26,73

Beispiel 2 b

N,N'-Bis-(2-Mercapto-1-(hydroxycarbony1)-ethyl)-thio- diglycolsäurediamid Technetium-99m-Komplex

10 mg des unter Beispiel 2 a hergestellten Liganden werden in 1,0 ml 0,5 M Phosphat-Puffer pH 7,5 gelöst. 50 _/ ^Zl dieser Ligand-Lösung werden mit 250/(1 Phosphat- Puffer pH 7,5, 50/i-ll einer desoxygenierten wäßrigen Ci- tratlösung (50 mg/ml), 2,5 l einer desoxygenierten wäßrigen Zinn( II)chlorid-Lösung (5 mg/ml 0,05 N HC1) und 100^1 einer Pertechnetat-Lösung (400 - 900/ Ci) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird nach einer Inkuba¬ tionszeit von 10 min mittels HPLC auf die Reinheit des gebildeten Tc-Komplexes untersucht: Hamilton PRP-1 Säule, 5 m, 125 x 4,6 mm; Gradienteneluation von 100 % A nach 100 % B innerhalb von 7,5 min (Eluent A: Natri- umhydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4; Eluent B: Acetoni- tril/Natriumhydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4 (75/25); 2,0 ml/min. Die radiochemische Reinheit ist> 98 %.

Beispiel 3 a

N, N ^• -Bis-(2-Mercapto-l-(decyloxycarbonyl)-ethyl)-thio- diglycolsäurediamid

Zu einer Lösung von 2,98 g (10 mmol) Cysteindecylester- hydrochlorid (CA 5_7, 15235d) und 2,02 g (20 mmol) Tri- ethylamin in 250 ml wasserfreiem Dichlormethan wird bei

0 °C und unter Argonatmosphäre eine Lösung von 0,935 g (5 mmol) Thiodiglycolsäuredichlorid, gelöst in 50 ml wasserfreiem Dichlormethan, getropft. Anschließend wird

1 h bei 0 °C und abschließend 16 h bei Raumtemperatur nachgerührt. Zur Aufarbeitung wäscht man die Dichlorme- thanlösung jeweils dreimal mit 2 %iger wäßriger Citro- nensäure, gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung und mit Wasser. Nach Trocknung über Natriumsulfat wird das Produkt durch Verdampfen des Lösungsmittels unter ver¬ mindertem Druck gewonnen. Zur Reinigung wird aus Di- ethylether kristallisiert.

Ausbeute: 2,57 g (80,7 %), weißes Pulver

Analyse:

Ber.: C 56,57 H 8,86 N 4,40 O 15,07 S 15,10 Gef.: C 56,43 H 8,92 N 4,41 S 14,92

Eine alternative Darstellungsmethode für N,N'-Bis-(2- Mercapto-(decyloxycarbonyl)-ethyl)-thiodiglycolsäure- diamid besteht darin, daß man 3,84 g (10 mmol) des un¬ ter Beispiel 1 a beschriebenen Liganden in 200 ml 1-Decanol unter Zugabe von 190 mg (1 mmol) Toluolsul- fonsäurehydrat unter Argonatmosphäre 5 h auf 100 °C er¬ hitzt, und dabei das gebildete Methanol abdestiliert. Nach beendeter Reaktion wird der Überschuß an 1-Decanol im Feinvakuum soweit wie möglich abdestilliert und der

ERSATZBLATT

Rückstand in Dichlormethan aufgenommen. Die Dichlorme- thanlösung wird jeweils dreimal mit 2 %iger wäßriger Citronensäure, gesättigter Natriumhydrogencarbonatlö- sung und mit Wasser gewaschen. Nach Trocknung über Natriumsulfat wird unter vermindertem Druck das Lö¬ sungsmittel verdampft und der Rückstand an Kieselgel (Eluens:' Dichlormethan/Methanol 99 : 1 ) chromatogra- phiert. Abschließend kristallisiert man aus Diethyl- ether.

Ausbeute: 843 mg (13,23 %), weißes Pulver

Beispiel 3 b

N, '-Bis-(2-Mercapto-1-(decyloxycarbonyl)-ethyl)-thio- diglycolsäurediamid, Technetium-99m-Komplex

10 mg des unter Beispiel 3 a hergestellten Liganden werden in 1,0 ml Ethanol gelöst. 50 _/ ^ dieser Ligand- Lösung werden mit 250^1 Phosphat-Puffer pH 8,5, 50 ,/tl einer desoxygenierten wäßrigen Citratlösung (50 mg/ml), 2,5/ . einer desoxygenierten wäßrigen Zinn(II)chlorid- Lösung (5 mg/ml 0,05 N HC1) und einer Pertechne- tat-Lösung (400 - 900/ ₍ ^/ Ci) versetzt. Das Reaktionsge¬ misch wird nach einer Inkubationszeit von 10 min mit¬ tels HPLC auf die Reinheit des gebildeten Tc-Komplexes untersucht: Hamilton PRP-1 Säule, 5 //m , 125 x 4,6 mm; Gradientenelution von 100 % A nach 100 % B innerhalb von 7,5 min (Eluent A: Natriumhydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4; Eluent B: Acetonitril/Natriumhydrogen-phosphat 0,005 M, pH 7,4 (75/25); 2,0 ml/min. Die radiochemische Reinheit ist> 95 % .

ERSATZBLATT

Beispiel 4 a

N,N'-Bis-(2-Mercapto-l-(butylamino-carbonyl)-ethyl)- thiodiglycolsäurediamid

3,84 g (10 mmol) des unter Beispiel 1 a beschriebenen Liganden werden in 30 ml Ethanol und 70 ml n-Butylamin 6 h unter Argonatmosphäre zum Sieden erhitzt. Anschlie¬ ßend wird im Vakuum eingedämpft, der Rückstand mit 200 ml 2 %iger Citronensäure und 200 ml Dichlormethan unter Argonatmosphäre versetzt. Die Mischung wird 15 min heftig verrührt, die Dichlormethanphase abge¬ trennt und jeweils dreimal mit 2 %iger wäßriger Citro¬ nensäure, gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung und mit Wasser gewaschen. Nach Trocknung über Natriumsulfat verdampft man das Lösungsmittel unter vermindertem Druck und chromatographiert den Rückstand an Kieselgel (Eluens:' Dichlormethan/Methanol 95 : 5). Abschließend wird das Reaktionsgemisch aus Diethylether umkristalli¬ siert.

Ausbeute: 1,03 g (22,1 %), weißes Pulver

Analyse:

Ber . : C 46 , 53 H 6 , 94 N 12 , 06 0 13 , 77 S 20 , Q7 Gef . : C 46 , 37 H 6 , 82 N 11 , 89 S 19 , 78

ERSATZBLATT

Beispiel 4 b

N,N'-Bis-( 2-Mercapto-l-(butyla ino-carbonyl)-ethyl)- thiodiglycolsäurediamid, Technetium-99-Komplex

10 mg des unter Beispiel 4 a hergestellten Liganden werden in 1,0 ml Ethanol gelöst, 50/^1 dieser Ligand- Lösung werden mit 250^1 Phosphat-Puffer pH 8,5, 50^1 einer desoxygenierten wäßrigen Citratlösung (50 mg/ml), 2,5^1 einer desoxygenierten wäßrigen Zinn( II )chlorid- Lösung (5mg/ml 0,05 N HC1) und 100 _/ ^1 einer Pertechne- tat-Lösung (400 - 900/CfCi ) versetzt. Das Reaktionsge¬ misch wird nach einer Inkubationszeit von 10 min mit¬ tels HPLC auf die Reinheit des gebildeten Tc-Ko plexes untersucht: Hamilton PRP-1 Säule, 5 /m, 125 x 4,6 mm; Gradientenelution von 100 % A nach 100 % B innerhalb von 7,5 min (Eluent A: Natriumhydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4; Eluent B: Acetonitril/Natriumhydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4 (75/25); 2,0 ml/min. Die radiochemische Reinheit ist > 95 %.

Beispiel 5 a

N,N'-Bis-(2-Mercapto-l-(2-methoxyethoxy-carbonyl)- ethyl)-thiodiglycolsäurediamid

3,84 g (10 mmol) des unter Beispiel 1 a beschriebenen Liganden werden in Gegenwart von 190 mg (1 mmol) Tolu- olsulfonsäurehydrat unter Argonatmosphäre in 250 ml absolutem Ethylenglycolmonomethylether 6 h unter Rück¬ fluß erhitzt. Anschließend verdampft man das Lösungs¬ mittel unter vermindertem Druck und nimmt den öligen Rückstand in Dichlormethan auf. Die Dichlormethanlösung

ERSATZBLATT

wird jeweils dreimal mit 2 %iger wäßriger Citronensäu- re, gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung und mit Wasser gewaschen. Nach Trocknung über Natriumsulfat verdampft man das Lösungsmittel unter vermindertem Druck und chromatographiert den öligen Rückstand an Kieselgel (Eluens: Dichlormethan/Methanol 8 : 2). Ab¬ schließend wird aus Diethylether kristallisiert.

Ausbeute: 753 mg (15,9 %), weißes Pulver

Analyse:

Ber . : C 40 , 66 H 5 , 97 N 5 , 93 O 27 . 08 S 20 , 35 Gef . : C 40 , 37 H 6 , 08 N 5 , 71 S 20 , 08

Beispiel 5 b

N, N'-Bis-(2-Mercapto-l-(2-methoxyethoxy-carbonyl)- ethly)-thiodiglycolsäurediamid, Technetium-99m-Komplex

10 mg des unter Beispiel 5 a hergestellten Liganden werden in 1,0 ml Ethanol gelöst. 50^1 dieser Ligand- Lösung werden mit 250^1 Phosphat-Puffer pH 8,5, 50^1 einer desoxygenierten wäßrigen Citratlösung (50 mg/ml), 2,5 _/ ^1 einer desoxygenierten wäßrigen Zinn(II )chlorid- Lösung (5 mg/ml 0,05 N HCl) und lOO^l einer Pertechne- tat-Lösung (400 - versetzt. Das Reaktionsge¬ misch wird nach einer Inkubationszeit von 10 min mit¬ tels HPLC auf die Reinheit des gebildeten Tc-Komplexes untersucht: Hamilton PRP-1 Säule, b/ό/m . 125 x 4,6 mm; Gradientenelution von 100 % A nach 100 % B innerhalb von 7,5 min (Eluent A: Natriumhydrogenphosphat 0,005 M,

ERSATZBLATT

pH 7,4; Eluent B: Acetonitril/Natriu hydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4 (75/25); 2,0 ml/min. Die radiochemische Reinheit ist > 95 %

Beispiel' 6 a

N.N'-Bis-(2-Mercapto-l-(2,3-dihydroxypropylamino-car- bonyl)-ethyl)-thiodiglycolsäurediamid

3,84 g (10 mmol) des unter Beispiel 1 a beschriebenen Liganden werden in 30 ml Ethanol und 30 ml Aminopropan- diol 7 h unter Argonatmosphäre zum Sieden erhitzt. An¬ schließend wird unter vermindertem Druck das Ethanol abdestilliert, der Rückstand mit argongesättigtem Was¬ ser versetzt und mit argongesättigter konzentrierter Salzsäure ein pH-Wert von 7 eingestellt. Die gelbliche Lösung wird gefriergetrocknet und der Rückstand an Kieselgel RP-18 (Eluens: Wasser/Tetrahydrofuran, Tetra- hydrofuran 0 - 50 %) chromatographiert. Nach Verdampfen des Lösungsmittels erhält man ein farbloses Glas .

Ausbeute: 513 mg (10,2 %), farbloses Glas

Analyse: bezogen auf die wasserfreie Substanz

Ber.: C 38,23 H 6,02 N 11,15 0 25,47 S 19,14 Gef.: C 38,11 H 6,28 N 10,88 S 18,95

ERS _A TZBLATT

Beispiel 6 b

N,N'-Bis-(2-Mercapto-l-(2,3-dihydroxypropylamino-car- bonyl)-ethyl)-thiodiglycolsäurediamid, Technetium-99m-

Komplex

10 mg des unter Beispiel 6 a hergestellten Liganden werden in 1,0 ml 50 % Ethanol gelöst. 50 _/ ^1 dieser Li- gand-Lösung werden mit 250y l Phosphat-Puffer pH 8,5, 50 _/ . l einer desoxygenierten wäßrigen Citratlösung 50 mg/ml), einer desoxygenierten wäßrigen Zinn(II)chorid-Lösung (5 mg/ml 0,05 N HCl) und 100^1 einer Pertechnetat-Lösung (400 - 900^Ci) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird nach einer Inkubationszeit von 10 min mittels HPLC auf die Reinheit des gebildeten Tc-Komplexes untersucht: Hamilton PRP-1 Säule, 5^ m, 125 x 4,6 mm; Gradienteneluation von 100 % A nach 100 % B innerhalb von 7,5 min (Eluent A: Natriumhydrogenphos¬ phat 0,005 M, pH 7,4; Eluent B: Acetonitril/Natriumhy- drogenphosphat 0,005 M, pH 7,4 (75/25); 2,0 ml/min. Die radiochemische Reinheit ist> 95 %.

Beispiel 7 a

N-(4-Thia-l-(ethoxy-carbonyl)-pentyl)-thiodiglycol- säuremonoamid

Zu einer Lösung aus 21,37 g (0,1 mol) Methioninethyl- esterhydrochlorid und 20,24 g (0,2 mol) Triethylamin in 1 1 wasserfreiem Dichlormethan tropft man unter Argon¬ atmosphäre bei 0 °C 13,21 g (0,1 mol) Thiodiglycol- säureanhydrid, gelöst in 500 ml wasserfreiem Dichlorme¬ than. Anschließend wird 1 h bei 0 °C und abschließend

ERSATZBLATT

16 h bei Raumtemperatur nachgerührt. Zur Aufarbeitung versetzt man mit 2 %iger wäßriger Citronensäure, rührt gut durch und stellt durch tropfenweise Zugabe von kon¬ zentrierter Salzsäure pH = 2 ein. Die organische Phase wird abgetrennt und über Natriumsulfat getrocknet. Nach Verdampfen des Lösungsmittels erhält man ein gelbliches Öl, das ohne weitere Reinigung für weitere Umsetzungen benutzt werden kann.

Ausbeute: 25,74 g (83,2 %), gelbliches Öl

Analyse:

Ber . : C 42 , 70 H 6 , 19 N 4 , 53 0 25 , 86 S 20 , 72 Gef . : C 42 , 37 H 6 , 62 N 4 , 15 S 20 , 31

Beispiel 7 b

N-(4-Thia-1-(ethoxy-carbonyl)-pentyl-N'-(2-oxo-tetrahy- drothiophen-3-yl)-thiodiglycolsäurediamid

Zu einer Lösung aus 3,09 g (10 mmol) des unter Beispiel 7 a hergestellten Thiodiglycolsäuremonamid-Derivates und 2,02 g (20 mmol) Triethylamin in 100 ml wasser¬ freiem Dichlormethan tropft man bei - 15 °C eine Lösung aus 1,09 g (10 mmol) Chlorameisensäureethylester in 25 ml wasserfreiem Dichlormethan. Nach beendeter Akti¬ vierung (45 min) wird eine Lösung aus 1,54 g (10 mmol) Homocysteinthiolactonhydrochlorid und 2,02 g (10 mmol) Triethylamin in 25 ml wasserfreiem Dichlormethan zuge¬ tropft. Man rührt 1 h bei - 15 °C und läßt über Nacht auf Raumtemperatur kommen. Zur Aufarbeitung wäscht man die Dichlormethanlösung jeweils dreimal mit 2 %iger

ERSATZBLATT

wäßriger ,Citronensäure, gesättigter Natriumhydrogen¬ carbonatlösung und mit Wasser. Nach Trocknung über Natriumsulfat wird unter vermindertem Druck vom Lö¬ sungsmittel entfernt und der verbleibende Rückstand aus Diethylether kristallisiert.

Ausbeute: 3,75 g (91,8 %), weißes Pulver

Analyse:

Ber . : C 44 , 10 H 5 , 92 N 6 , 86 0 19 , 58 S 23 , 54 Gef . : C 43 , 97 H 5 , 98 N 6 , 72 S 23 , 31

Beispiel 7 c

N-(4-Thia-1-(ethoxy-carbonyl)-pentyl)-N'-(3-mercapto-

1-(butyla inocarbonyl)-propyl)-thiodiglycolsäurediamid

Zu einer Lösung aus 2,04 g (5 mmol) des unter Beispiel 7 b hergestellten Thiolacton-Derivates des Thiodigly- colsäurediamids in 20 ml wasserfreiem Dichlormethan gibt man unter Argonatmosphäre 0,731 g (10 mmol) Bu- tylamin. Man läßt über Nacht bei Raumtemperatur rühren und dampft das Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck ein. Anschließend versetzt man mit 2 %iger wäßriger Citronensäure und Dichlormethan und rührt gut durch. Nach Abtrennung der organischen Phase wird diese jeweils dreimal mit 2 %iger wäßriger Citronensäure, ge¬ sättigter Natriumhydrogencarbonatlösung und mit Wasser gewaschen. Nach Trocknung über Natriumsulfat wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck verdampft. Der

ERSATZBLATT

Rückstand kann zur Reinigung an Kieselgel (Eluens: Di- chlormethan/Methanol 95:5) chro atographiert werden.

Ausbeute: 1,51 g (62,7 %), weißes Pulver

Analyse:

Ber.: C 47,38 H 7,32 N 8,72 0 16,61 S 19,97 Gef.: C 47,23 H 7,41 N 8,62 S 19,79

Beispiel 7 d

N-(4-Thia-1-(ethoxy-carbonyl)-pentyl)-N*-(3-mercapto-

1-(butylaminocarbonyl)-propyl)-thiodiglycolsäurediamid,

Technetium-99m-Komplex

10 mg des unter Beispiel 7 c hergestellten Liganden werden in 1,0 ml Ethanol gelöst. 50 ^1 dieser Ligand- Lösung werden mit einer desoxygenierten wäßrigen Citratlösung (50 mg/ml), einer desoxygenierten wäßrigen Zinn( II )chlorid- Lösung (5 mg/ml 0,05 N HCl) und 100^1 einer Pertechne- tat-Lösung (400 - 900 ^Ci) versetzt. Das Reaktionsge¬ misch wird nach einer Inkubationszeit von 10 min mit¬ tels HPLC auf die Reinheit des gebildeten Tc-Komplexes untersucht: Hamilton PRP-1 Säule, 5 Vm, 125 x 4,6 mm; Gradientenelution von 100 % A nach 100 % B innerhalb von 7,5 min (Eluent A: Natriumhydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4; Eluent B: Acetonitril/Natriumhydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4 (75/25); 2,0 ml/min. Die radiochemische Reinheit ist> 95 %.

ERSATZBLATT

Beispiel 8 a

N-(4-Thia-l-(hydroxy-carbonyl)-pentyl)- ^• -(3-mercapto-

1-(hydroxy-carbonyl)-propyl)-thiodiglycolsäurediamid

Unter Argonatmosphäre werden 2,04 g (5 mmol) des unter Beispiel 7 b hergestellten Thiolacton-Derivates des Thiodiglycolsäurediamids in 500 ml 2 N wäßriger Natri¬ umhydroxidlösung mit 50 ml Ethanol in Lösung gebracht. Man rührt 1 h bei Raumtemperatur, stellt mit argonge¬ sättigter, konzentrierter Salzsäure pH = 2 ein und ex¬ trahiert das ausgeschiedene Öl mit argongesättigtem Essigsäureethylester. Nach Trocknung der organischen Phase über Natriumsulfat wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck verdampft und das ölige Rohprodukt durch Verreiben mit Diethylether kristallisiert.

Ausbeute: 666 mg (33,4 %), weißes Pulver

Analyse: bezogen auf die wasserfreie Substanz

Ber.: C 39,18 H 5,56 N 7,03 O 24,09 S 24,13 Gef.: C 39,02 H 5,79 N 6,84 S 23,83

Beispiel 8 b

N-(4-Thia-l-(hydroxy-carbonyl)-pentyl)-N'-(3-mercapto- 1-(hydroxy-carbonyl)-propyl)-thiodiglycolsäurediamid, Technetium-99m-Komplex

10 mg des unter Beispiel 8 a hergestellten Liganden werden in 1,0 ml 0,5 M Phosphat-Puffer pH 7,5 gelöst. 50 {l dieser Ligand-Lösung werden mit 250^ 1 Phosphat- Püffer pH 8,5, 50 Ml einer desoxygenierten wäßrigen Ci-

E _RSA TZBLATT

tratlösung (50 mg/ml), 2 , 5 einer desoxygenierten wäßrigen Zinn(II)chlorid-Lösung (5 mg/ml 0,05 N HCl) und 100/ l einer Pertechnetat-Lösung (400 - 900 Ci) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird nach einer Inkuba¬ tionszeit von 10 min mittels HPLC auf die Reinheit des gebildeten Tc-Komplexes untersucht: Hamilton PRP-1-Säu¬ le, 5^ m, 125 x 4,6 mm; Gradientenelution von 100 % A nach 100 % B innerhalb von 7,5 min (Eluent A: Natrium¬ hydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4; Eluent B: Acetoni- nitril/Natriumhydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4 (75/25); 2,0 ml/min. Die radiochemische Reinheit ist _> 95 %.

Beispiel 9 a

N-(3-Mercapto-l-(carbonyl-Gly-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp)- propyl)-N'-(4-thia-l-(ethoxycarbonyl)-pentyl)-thiodi¬ glycolsäurediamid

Zu einer Lösung von 853 mg (1 mmol) NH -Gly-His-Leu- Asp-Ile-Ile-Trp (hergestellt in Analogie zu Barany und Merrifield, The Peptides: Analysis, Biology, Academic Press, New York, 1980; Stewart und Young, Solid Phase Peptides Syntheses, 2 ed., Pierce Chemical W. , Rock¬ ford, II, 1984) und 304 mg (3 mmol) Triethylamin in 100 ml wasserfreiem Dimethylformamid unter Argonatmo¬ sphäre gibt man 408,5 mg (1 mmol) des unter 7 b herge¬ stellten N-(4-Thia-l-(ethoxy-carbonyl)-pentyl)-N'-(2- oxo-tetrahydrothiophen-3-yl)-thiodigylcolsäurediamid und rührt das resultierende Reaktionsgemiisch 14 h bei Raumtemperatur. Nach beendeter Reaktion wird filtriert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezo-

ERSATZBLATT

gen. Das verbleibende Öl wird dreimal mit 50 ml Dime- thylformamid versetzt und jeweils eingedampft. Man ver¬ rührt den Rückstand mit 200 ml wasserfreiem Diethyl- ether, worauf sich ein weißer Feststoff abscheidet, der abfiltriert wird. Zur Reinigung wird aus Dimethylforma- mid/Diethylethergemischen umkristallisiert.

Ausbeute: 345 mg (27,3 %), weißes Pulver

Analyse: bezogen auf die wasserfreie Substanz

Ber.: C 53,32 H 6,71 N 13,32 0 19,02 S 7,62 Gef.: C 53,17 H 6,83 N 13,19 S 7,42

Beispiel 9 b

N-(3-Mercapto-l-(carbonyl-Gly-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp)- propyl)-N'-(4-thia-l-(ethoxycarbonyl)-pentyl)-thiodi¬ glycolsäurediamid, Technetium-99m-Kompex

10 mg des unter Beispiel 9 a hergestellten Liganden werden in 1,0 ml 0,5 M Phosphat-Puffer pH 7,5 gelöst. dieser Ligand-Lösung werden mit 2 0/ l Phosphat- Puffer pH 8,5, 50 C(l einer desoxygenierten wässrigen Citratlösung (50 mg/ml), 2,5 _^ 1 einer desoxygenierten wässrigen Zinn( II)chlorid-Lösung (5 mg/ml 0,05 N HCl) und lOO ύfl einer Pertechnetat-Lösung (400 - 900 _/ Ci) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird nach einer Inkuba¬ tionszeit von 10 min mittels HPLC auf die Reinheit des gebildeten Tc-Komplexes untersucht: Hamilton PRP-1 Säu¬ le, 5 _/ ^m, 125 x 4,6 mm; Gradientenelution von 100 % A nach 100 % B innerhalb von 7,5 min (Eluent A: Natrium-

ERSATZBLATT

hydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4; Eluent B: Acetoni- tril/Natriu hydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4 (75/25); 2,0 ml/min. Die radiochemische Reinheit ist ^96 %.

Beispiel 10 a

N-(3-Mercapto-l-(carbonyl-Gly-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp)- propyl)-N'-(4-thia-1-(hydroxy-carbonyl)-pentyl)-thiodi¬ glycolsäurediamid

126 mg (0,1 mmol) des unter Beispiel 9 a hergestellten N-(3-Mercapto-l-( carbonyl-Gly-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp)- propyl)-N' -(4-thia-1-(ethoxycarbonyl)-pentyl)-thiodi¬ glycolsäurediamid werden unter Argon in 50 ml 0,1 N wässriger Natriumhydroxidlösung gelöst. Man rührt 1 h bei Raumtemperatur, stellt mit 1 N wässriger Salzsäure einen pH-Wert von 7 ein und isoliert das Rohprodukt durch Gefriertrocknung. Zur Reinigung wird an Kieselgel RP-18 (Eluens: Wasser/Tetrahydrofuran; Tetrahydrofuran: 0 - 30 ) chromatographiert. Die die Zielverbindung enthaltenden Fraktionen werden nach Abdestilieren des Tetrahydrofurans gefriergetrocknet. Man löst den Rück¬ stand in wenig Wasser, stellt durch Zugabe von wässri¬ ger Salzsäure eine pH-Wert von 2 ein und filtriert das Produkt ab.

Ausbeute: 23 mg (18,6 %), weißes Pulver

Analyse: bezogen auf die wasserfreie Substanz

Ber.: C 52,58 H 6,54 N 13,63 O 19,46 S 8,00 Gef.: C 52,37 H 6,79 N 13,41 S 7,77

ERSAT^QLATT

Beispiel 10 b

N-(3-Mercapto-l-(carbonyl-Gly-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp)- propyl)-N'-(4-thia-1-(hydroxy-carbonyl)-pentyl)-thiodi¬ glycolsäurediamid, Technetium-99m-Komplex

10 mg des unter Beispiel 10 a hergestellten Liganden werden in 1,0 ml 0,5 M Phosphat-Puffer pH 7,5 gelöst. 50 C{l dieser Ligand-Lösung werden mit Phosphat- Puffer pH 8,5, 50 _/ ^ 1 einer desoxygenierten wässrigen Ci-tratlösung (50 mg/ml), 2 , 5 X 1 einer desoxygenierten wässrigen Zinn( II )chlorid-Lösung (5 mg/ml 0,05 N HCl) und 100/ 1 einer Pertechnetat-Lösung (400 - 900 fCi) versetzt. Das Reaktionsgemisch wird nach einer Inkuba¬ tionszeit von 10 min mittels HPLC auf die Reinheit des gebildeten Tc-Komplexes untersucht: Hamilton PRP-1 Säu¬ le, 5//m, 125 x 4,6 mm; Gradientenelution von 100 % A nach 100 % B innerhalb von 7,5 min (Eluent A: Natrium¬ hydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4; Eluent B: Acetoni- tril/Natriumhydrogenphosphat 0,005 M, pH 7,4 (75/25); 2,0 ml/min. Die radiochemische Reinheit ist > 95 %.

Beispiel 11

Anreicherung von N,N'-Bis-(2-Mercapto-l-(decyloxycarbo¬ nyl)-ethyl)-thiodiglycolsäurediamid, Technetium-99m- Komplex in atherosklerotischen Gefäßläsionen von WHHL- Kaninchen

Die Markierung des N,N' -Bis-( 2-Mercapto-l-(decyloxycar¬ bonyl)-ethyl)-thiodiglycolsäurediamids (hergestellt nach Beispiel 3 a) erfolgt wie in Beispiel 3 b be¬ schrieben.

99,9 GBq (2,7 mCi) der nach Beispiel 3 b markierten Substanz wurde mit phosphatgepufferter Saline auf 1 ml verdünnt und einem narkotisierten WHHL-Kaninchen Rom- pun/Ketavet (1:2) über eine Ohrvene appliziert. 5 h nach Applikation wurde das Kaninchen getötet und sowohl eine Autoradiographie der Aorta als auch eine Sudan- III-Färbung zur Darstellung der atherosklerotischen Plaques durchgeführt (Abbildung 1). Der Anreicherungs¬ faktor zwischen normalen und atherosklerotischen Wand¬ bereichen betrug je nach Ausbildung der Plaques (Sudan III-Färbung) zwischen 3 und 8.

ERSATZBLATT