以下、本発明を詳細に説明する。
 本発明を適用することによって、新規な毛� ��成長阻害剤及び脱毛剤を提供することがで� ��る。これら毛髪成長阻害剤及び脱毛剤は、� ��続的高濃度のFGF18が毛包(毛根と呼ばれる場� ��もある)の成長を抑制する作用を利用する点 で共通する。

 毛包とは、毛を作る器官である。毛包の� ��長周期は、成長期(anagen)、退行期(catagen)、� �行期に続く休止期(telogen)からなり、休止期� �後に成長期に入るというサイクルである。� �般に、マウスの実験系では、成長期は脱毛� �1~19日目の期間であり、退行期は20~21日目の� �間である。また、脱毛後、21~22日目に休止期 に入ることが知られている。成長期において は、新しい毛の成長(伸長)が活発化するとと� ��に、皮膚内では毛包の成長が活発化して、� ��の底部が皮膚の下部近傍に到達する。一方� ��休止期においては、毛包は皮膚の浅いとこ� ��に小さい状態で存在する。また、成長期と� ��止期とでは皮膚の厚さも全く異なる。さら� ��有色体毛を持つマウスでは、成長期の初期� ��はメラニン色素が合成され、皮膚が青くな� ��ているのを視認することができる。したが� ��て、皮膚の外側から青い色を見て毛包の成� ��周期の進行を評価することもできる。また� ��成長期に皮膚を切開して裏側から見ると、� ��ラニン色素を多量に含んだ毛包が高い密度� ��並ぶこととなるため、皮膚の裏側が黒なっ� ��いるのを視認することができる。これに対� ��て休止期においては、皮膚の裏側は白いま� ��であることを視認することができる。例え� ��、マウスの実験系では、生後7~8週齢のマウ� ��の背中の毛は全て休止期にあり、また、生� ��ている毛を抜くことにより、同調して成長� ��が開始する。

 1. FGF18
 FGF18は、ヒトとマウスでは産生細胞の細胞� �で207アミノ酸のポリペプチドとして合成さ� �、それが細胞外に分泌される際にN末端のシ� ��ナルペプチドが切断され、181アミノ酸より� ��る分泌体として生理作用を発揮する。そし� ��、7種類あるFGF受容体サブクラス(FGFR1c、FGFR1 b、FGFR2c、FGFR2b、FGFR3c、FGFR3b、FGFR4)のうち少� �くとも4つ、すなわちFGFR1c、FGFR2c、FGFR3c、FGFR 4と反応することが確認されている(非特許文� ��20)。
 本発明に係る新規な毛髪成長促進剤、発毛� ��進剤及び脱毛症治療剤に含まれるFGF18とし� �は、例えば配列番号2に示すアミノ酸配列か� ��なるヒト由来のFGF18を使用することができ� �。他の使用可能なFGF18としては、ヒト由来に 限定されず、例えば、他の哺乳動物由来のFGF 18を使用することができる。他の哺乳動物と� ��ては、マウス、ラット、ニワトリ、七面鳥� ��ウシ、ブタ、ヒツジ及びウサギ等を挙げる� ��とができるが、これらに限定されない。例� ��ば、配列番号1に示すヒト由来FGF18の塩基配� ��に基づいて作製したプローブを定法に従っ� ��用いれば、ヒトを除く他の哺乳動物からFGF1 8をコードする遺伝子を単離することができ� �。
 分泌シグナル配列を除去したヒト由来FGF18� �塩基配列及びアミノ酸配列をそれぞれ配列� �号1及び2に示す。分泌シグナル配列を除去し たマウス由来FGF18の塩基配列及びアミノ酸配� ��をそれぞれ配列番号3及び14に示す。これら� ��列番号2及び14に示すアミノ酸配列を比較す� ��と判るように、哺乳動物においてFGF18は非� �に高い相同性を有しており、哺乳動物にお� �るFGF18の機能はほぼ同様であると理解するこ とができる。

 本願発明において、N末端の欠失アミノ酸の 数をいうときは、組み換えタンパク質生産に おける翻訳開始のために導入されたメチオニ ン残基を除いた欠失アミノ酸の数を意味する 。配列番号2及び14に示すアミノ酸配列のうち 、1又は数個のアミノ酸が欠失、置換及び付� �されたアミノ酸配列からなり、毛包の成長� �制作用があるタンパク質であれば、本願に� �けるFGF18に含まれる。ここで、数個のアミノ 酸とは、例えば2~37個、好ましくは2~22個、よ� ��好ましくは2~18個、さらに好ましくは2~12個� �最も好ましくは2~4個を意味する。
 そして、配列番号14に示すアミノ酸配列に� �ける32~151番目の領域は、様々なFGFに共通す� �コア部分であると考えられており、受容体� �ヘパリンに結合することが観察されている(� ��特許文献1)。したがって、配列番号14に示す アミノ酸配列における32~151番目を含む部分ペ プチド、もしくは、当該32~151番目の領域以外 の領域に1又は数個のアミノ酸が欠失、置換� �び付加された変異ペプチドであっても、FGF18 の有する毛包の成長抑制作用を発揮する限り において、本願におけるFGF18として使用する� ��とができる。
 実際に、配列番号14に示すN末端からメチオ� ��ン残基を除いた4~95個のアミノ酸を除去した 場合(d4~d95)のFGF18活性への影響を測定した実� �結果によれば(図3)、d95の場合でもFGF18様のFGF R3c刺激活性を弱いながらも有している。
 したがって、配列番号14に示すN末側からメ� ��オニン残基を除いた1~95番目のアミノ酸につ いては、すべて欠失しても本発明におけるFGF 18として用いることができる。好ましくはN末 側から1~77番目のアミノ酸を欠失した部分ペ� �チドが用いられ、好ましくは1~37番目、より� ��ましくは1~22番目、さらに好ましくは1~12番� �、最も好ましくは1~4番目のアミノ酸を欠失� �た部分ペプチドが用いられる。また、N末側� ��ミノ酸配列の1~95番目のアミノ酸の1部を置� �してもよく、好ましくは、24~182番目のアミ� �酸配列を含む部分ペプチドであり、より好� �しくは、6~182番目のアミノ酸配列を含む部分 ペプチドが用いられる。
 また、C末側に関しては、実際に、配列番号 14に示すC末端から8~25番目のアミノ酸を除去� �た場合(dc8~dc25)のFGF18活性への影響を測定し� �実験結果によれば、dc25の場合でもFGF18様のFG FR2c, FGFR3c, FGFR4刺激活性を強く有している(� �4)。したがって、配列番号14に示すC末側から 1~25番目のアミノ酸については、すべて欠失� �ても本発明におけるFGF18として用いることが できる。
 以上のとおり、本願発明においてFGF18とい� �ときは、ヒト、マウスをはじめとする哺乳� �物由来FGF18の全長ポリペプチドのみならず、 FGF18様活性を有するFGF18部分ペプチド及びFGF18 変異ペプチドも包含する。
 

 2. FGF18様活性物質、FGF18活性化物質及びそ� �スクリーニング方法について
 〔1〕FGF18様活性物質
 FGF18様活性物質という表現は、FGF18と同様の 受容体に結合して同様の細胞内情報伝達系を 作動させる物質を意味するが、FGF18は、上述� ��ように、7種類あるFGF受容体サブクラスのう ちの少なくともFGFR1c、FGFR2c、FGFR3c、FGFR4と反� ��するので、本発明における「FGF18様活性物� �」とは、細胞表面のFGFR1c、FGFR2c、FGFR3c、FGFR4 のいずれかの受容体に結合して、その細胞に FGF18と同様に細胞内情報伝達系を作動させる� ��質をいう。(ただし、FGF18様活性物質のうち� ��FGF18の部分ペプチド及び変異ペプチドの場� �は、本発明においては「FGF18」に含める。)FG F受容体を表面に有する細胞での細胞内情報� �達系を作動させるか否かを具体的に確認す� �ためには、細胞内のセカンドメッセンジャ� �(Caイオン,cAMPなど)の量を測定してもよいが� �典型的にはこれらFGF受容体発現細胞に投与� �た場合、又は遺伝子導入して発現させた場� �に、当該細胞の増殖性が観察されることを� �う。
 特に、FGF18はこれら受容体の中でもとりわ� �FGFR3c発現細胞と FGFR4発現細胞に細胞内情報� ��達系を作動させる活性が強いので、FGF18様� �性物質とは、FGFR3c発現細胞またはFGFR4発現細 胞に対する活性が強い物質として選択するこ ともできる。さらにFGF18様活性物質とは、同� ��度においてFGFR3c発現細胞と FGFR4発現細胞に 対する細胞増殖促進活性がFGFR1c発現細胞とFGF R2c発現細胞に対する細胞増殖促進活性よりも 格段に(2倍以上、好ましくは3倍以上)強い細� �増殖促進活性を有するものとして選択する� �ともできる。

〔2〕FGF18様活性物質のスクリーニング方法
 被検物質が、このようなFGF18類似の活性が� �る物質かどうかを検索することにより、毛� �成長抑制或いは脱毛といった機能を有する� �能性のある物質をスクリーニングすること� �できる。
 具体的には、下記の(a)~(c)の工程を含む方法 、
(a)FGFR1c、FGFR2c、FGFR3c及びFGFR4から選ばれた少� ��くとも1つのFGF受容体遺伝子を用いて遺伝子 操作により細胞表面に強制的に発現させ、当 該細胞を培養する工程、
(b)(a)工程で得られた、細胞表面にFGF受容体を 有する細胞系に披検物質を接触させる工程、
(c)(b)工程において、FGF18と同様の細胞増殖促� ��活性を観察した披検物質を選択する工程。
 又は下記の(a’)~(c’)の工程を含む方法であ る。
(a’)FGFR1c、FGFR2c、FGFR3c及びFGFR4の4種のFGF受容 体遺伝子を用いて遺伝子操作によりそれぞれ を細胞表面に強制的に発現させ、4種の当該� �胞を培養する工程、
(b’)(a’)工程で得られた、細胞表面にFGF受容 体を有する4種の細胞系に披検物質を接触さ� �る工程、
(c’)(b’)工程において、FGF18と同様に、同濃� ��においてFGFR3c発現細胞と FGFR4発現細胞に対 する細胞増殖促進活性がFGFR1c発現細胞とFGFR2c 発現細胞に対する細胞増殖促進活性よりも格 段に強い細胞増殖促進活性を観察した披検物 質を選択する工程。
 
 ここで、FGF受容体遺伝子としては、FGF18が� �合し、かつ細胞表面に受容体を有する細胞� �対するFGF18の細胞増殖作用が確認されている FGFR1c、FGFR2c、FGFR3c及びFGFR4の受容体遺伝子の� ��なくとも1つを用いる。好ましくは、FGFR3cま たはFGFR4遺伝子を用いる。被検物質を細胞に� ��触させる場合に、典型的には、細胞培養液� ��被検物質を直接投与するが、特に被検物質� ��タンパク質の場合などは、当該被検物質を� ��ードする遺伝子をFGF受容体発現細胞中に導� ��することも可能である。
 また、FGF受容体を細胞表面に強制的に発現� ��せるための細胞は、培養可能な細胞であれ� ��どのような細胞でもよいが、好ましくはマ� ��スIL-3依存性Ba/F3細胞株である。
 そして、FGF受容体遺伝子を導入していない� ��細胞は対照試験に用いることができ、披検� ��質を用いて(b)工程と同様の操作を行い、披� ��物質がこれら親細胞に対しては細胞増殖促� ��活性を起こさないことを確認する工程を設� ��ることが好ましい。

〔3〕FGF18の活性を促進する物質
 上記(1)のFGF18様活性物質とまではいえなく� �も、FGF18の受容体結合を促進もしくは増強す ることなどにより、FGF18による毛包の成長抑� ��作用を助長する物質であれば、毛髪の成長� ��害作用又は脱毛作用を有するので、これら� ��物質を本発明では「FGF18の活性を促進する� �質」という。これらのFGF18の活性を促進する 物質は、単独で、もしくはFGF18などと共に、� ��髪成長阻害剤又は脱毛剤として用いること� ��できる。

〔4〕FGF18の活性を促進する物質のスクリーニ ング方法
 FGF18の活性を促進する物質は、披検物質をFG F18と共に細胞表面のFGF受容体に接触させ、FGF 受容体に対するFGF18自身の活性を促進するか� ��かをモニターすることでスクリーニングで� ��る。
 具体的には、以下の(a)~(c)の工程を含むスク リーニング方法により得ることができる。
 以下の(a)~(c)の工程を含むスクリーニング方 法により得ることができる。
(a)FGFR1c、FGFR2c、FGFR3c及びFGFR4から選ばれた少� ��くとも1つのFGF受容体遺伝子を用いて遺伝子 操作により細胞表面に強制的に発現させ、当 該細胞を培養する工程、
(b)(a)工程で得られた、細胞表面にFGF受容体を 有する細胞系にFGF18と共に披検物質を接触さ� ��る工程、
(c)(b)工程において、FGF18を単独で作用させた� ��合と比較して高い細胞増殖促進活性を観察� ��た系を選択する工程。
 当該スクリーニング方法において、FGFR3c又� ��FGFR4などのFGF受容体発現細胞に対するFGF18の 細胞増殖促進活性を増大させた被検物質は、 毛包細胞におけるFGF18の活性を促進する物質� ��あると考えられるから、毛髪成長抑制或い� ��脱毛といった機能を有する可能性があると� ��断できる。
 したがって、このような工程を経てスクリ� ��ニングされたFGF18の活性促進物質は毛髪成� �阻害剤及び脱毛剤の有力な候補となる。そ� �際の目安として、FGF18を単独で作用させた場 合に比べて、FGF受容体発現細胞の増殖能を5%� ��上、好ましくは10%以上、より好ましくは20%� ��上増大させる物質を選択すればよい。

 3. FGF18の発現促進物質及びそのスクリーニ� ��グ方法
 FGF18は毛包内に存在する内在因子であるの� �、毛包細胞内でのFGF18遺伝子の転写及び翻訳 を促進する物質、すなわちFGF18遺伝子の発現� ��活性化する物質も毛包細胞中のFGF18濃度を� �加させて、FGF18による毛髪成長の阻害活性を 引き起こすことができるから、毛髪成長阻害 又は脱毛作用を有する。
 このようなFGF18遺伝子の発現を活性化する� �質は、皮膚由来細胞などの動物培養細胞又� �実験動物を用いてFGF18遺伝子の発現を促進す るか否かをモニターすることでスクリーニン グすることができる。
 具体的には、先ず、実験動物に被検物質を� ��触もしくは投与するか、動物培養細胞に被� ��物質を接触させる。なお、実験動物とは、� ��トを除く、例えば、マウス、ラット、ニワ� ��リ、七面鳥、ウシ、ブタ、ヒツジ及びウサ� ��等を意味する。被検物質としては、何ら限� ��されないが、例えば、植物抽出液、ペプチ� ��、タンパク質、非ペプチド性化合物、低分� ��化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽� ��液、動物組織抽出液等が挙げられる。これ� ��の物質は新規な物質であってもよいし、公� ��の物質であってもよい。被検物質を細胞も� ��くは動物に接触させる場合に、典型的には� ��被検物質を細胞培養液に添加するか又は実� ��動物に投与するが、特に被検物質がタンパ� ��質の場合などは、当該被検物質をコードす� ��遺伝子をFGF受容体発現細胞中に導入するこ� ��も可能である。
 次に、当該動物培養細胞又は実験動物にお� ��るFGF18遺伝子の発現をモニターする。動物� �養細胞又は実験動物におけるFGF18遺伝子の発 現は、例えば、FGF18抗体を用いたELISA等の常� �を用いて解析するか、あるいは該細胞内又� �実験動物内におけるFGF18遺伝子のmRNA量を定� �的逆転写PCR法やノーザンブロット法等によ� �解析するといった方法によりモニターする� �とができる。
 これらいずれかの解析により、被検物質の� ��存在下で培養された動物培養細胞内におけ� ��FGF18遺伝子の発現量と比べて、被検物質の� �在下で培養された動物培養細胞内又は実験� �物内におけるFGF18遺伝子の発現量が増加すれ ば、当該被検物質は毛髪成長抑制或いは脱毛 といった機能を有する可能性があると判断で きる。具体的には、被検物質を作用させない 場合と比較して、mRNA量が20%以上、好ましく� �50%以上、より好ましくは80%以上、さらに好� �しくは100%以上増加すれば、確実にFGF18の発� �促進物質であるといえる。培養角化細胞や� �養真皮細胞、培養毛乳頭細胞でのFGF18のmRNA� �現量は、培養条件や細胞の種類により様々� �あるので、上記の方法などにより個別に測� �し、その数値が1.2倍以上に上昇することを� �安にスクリーニングすればよい。
 このような工程を経てスクリーニングされ� ��FGF18の発現促進物質は、単独で、もしくはFG F18などと共に、毛髪成長阻害剤又は脱毛剤と して用いることができる。

 4. 毛髪成長阻害剤及び脱毛剤
 本発明において、上記したFGF18、FGF18様活性 物質、FGF18活性化物質及びFGF18発現促進物質(� ��下、「FGF18など」という。)は、毛包部に持� ��的に存在させるように投与させる必要があ� ��。ここで、「持続的に存在させる」とは、� ��期濃度の1%以上、好ましくは5%以上、より好 ましくは10%以上のFGF18などが、少なくとも1日 間、好ましくは4日間、より好ましくは8日間� ��包部にとどまっている状態を意味する。そ� ��ためには、インプラント剤又は貼付剤など� ��皮膚から徐々に吸収させる方法も採用でき� ��が、1~3日ごとに、もしくは1日に2回以上、� �要に応じて繰り返し投与すればよい。
 具体的な投与形態としては、単独もしくは� ��用して、例えば、皮膚適用向けに適合化さ� ��た溶液、クリーム、軟膏、ゲル、ローシヨ� ��、シャンプー、エアゾール又は貼付剤とい� ��た形態で製剤化され、毛髪成長阻害剤又は� ��毛剤として提供される。
 特に、毛髪成長阻害剤又は脱毛剤は、局所� ��与用に適合化された薬理学上許容されるキ� ��リアと共にFGF18などを含んだ医薬組成物の� �で投与される。FGF18などを含有する毛髪成長 阻害剤又は脱毛剤は、薬学上許容されるキャ リア中に通常約0.01~約100μg/日/cm ² 、好ましくは約0.1~約10μg/日/cm ² の活性化合物を含有している。言い換えると 、FGF18などの濃度は薬学上許容されるキャリ� ��中で通常約0.01~約100μg/日/cm ² 、好ましくは約0.1~約10μg/日/cm ² の活性化合物である。

 また、毛髪成長阻害剤又は脱毛剤は、当業� ��で周知の他の毛髪成長阻害剤又は脱毛剤を� ��有していても良い、FGF18などによる毛髪成� �阻害又は脱毛効果を増加もしくは増強させ� �物質としては特に限定されない。
 さらに、毛髪成長阻害剤又は脱毛剤は、当� ��界で周知の毛髪成長阻害活性又は脱毛活性� ��示す化合物もしくは薬剤を含んでいても良� ��。他の毛髪成長阻害剤又は脱毛剤としては� ��特に限定されない。
 さらにまた、局所投与用に適合化された薬� ��学上許容されるキャリアとしては、特に限� ��されないが、親水ワセリン又はポリエチレ� ��グリコール軟膏のような軟膏、キサンゴム� ��ようなゴム等のペースト、アルコール、水� ��又は緩衝液のような溶液、水酸化アルミニ� ��ム又はアルギン酸ナトリウムゲルのような� ��ル、ヒト又は動物アルブミンのようなアル� ��ミン、ヒト又は動物コラーゲンのようなコ� ��ーゲン、アルキルセルロース、ヒドロキシ� ��ルキルセルロース及びアルキルヒドロキシ� ��ルキルセルロースのようなセルロース、メ� ��ルセルロース、ヒドロキシエチルセルロー� ��、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキ� ��プロピルメチルセルロース及びヒドロキシ� ��ロピルセルロース、プルロニックF-127で例� �されるプルロニック(Pluronic(商標))ポリオ-ル� ��ようなポリマ-;テトロニック1508のようなテ� ��ロニック(tetronic)、アルギン酸ナトリウムの ようなアルギン酸塩を挙げることができる。

 また、本発明に係る毛髪成長阻害剤又は脱� ��剤は、上記「1.FGF18」で説明したFGF18をコー� ��するDNA(すなわち、ヒトなどの哺乳動物由来 FGF18の全長ポリペプチド又はFGF18様活性を有� �るその部分ペプチドもしくはその変異ペプ� �ドをコードするDNA)を有する発現ベクターを� ��効成分として含有するものであってもよい� ��すなわち、本発明に係る毛髪成長阻害剤又� ��脱毛剤は、上記発現ベクターを用いた遺伝� ��治療に使用することができる。発現ベクタ� ��としては、動物細胞において発現を実現す� ��ためのプロモーターなどの配列を備えるが� ��特に限定されるものではない。発現ベクタ� ��としては、例えば、プラスミドベクター、� ��イルスベクターなどが利用可能であるが、� ��れらに限定されない。
 より具体的には、遺伝子治療においては、� ��記「1.FGF18」で説明したFGF18をコードするDNA� ��、例えばウイルスベクターに組み込んで、� ��組換えウイルスベクターを有するウイルス( 無毒化されたもの)を患者に感染させる。患� �体内ではFGF18が産生され、毛包の成長を阻害 することができる。
 遺伝子治療用の毛髪成長阻害剤又は脱毛剤� ��細胞内に導入する方法としては、ウイルス� ��クターを利用した遺伝子導入方法、非ウイ� ��ス性の遺伝子導入方法(日経サイエンス,1994� ��4月号,20-45頁、実験医学増刊,12(15)(1994)、実� �医学別冊「遺伝子治療 の基礎技術」,羊土� �(1996))のいずれの方法も適用することができ� ��。
 ウイルスベクターによる遺伝子導入方法と� ��ては、例えばレトロウイルス、アデノウイ� ��ス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイル� ��、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス� ��ポリオウイルス、シンビスウイルス等のDNA� ��イルス又はRNAウイルスに、TR4あるいは変異T R4をコードするDNAを組み込んで導入する方法� ��挙げられる。このうち、レトロウイルス、� ��デノウイルス、アデノ関連ウイルス、ワク� ��ニアウイルスを用いた方法が、特に好まし� ��。非ウイルス性の遺伝子導入方法としては� ��発現プラスミドを直接筋肉内に投与する方� ��(DNAワクチン法)、リポソーム法、リポフェ� �ション法、マイクロインジェクション法、� �ン酸カルシウム法、エレクトロポレーショ� �法等が挙げられ、特にDNAワクチン法、リポ� �ーム法が好ましい。
 また遺伝子治療用の毛髪成長阻害剤又は脱� ��剤を実際に医薬として作用させるには、DNA� ��直接体内に導入するインビボ法及びヒトか� ��ある種の細胞を取り出し体外でDNAを該細胞� ��導入し、その細胞を体内に戻すエクスビボ� ��ある(日経サイエンス,1994年4月号,20-45頁、月 刊薬事,36(1),23-48(1994)、実験医学増刊,12(15)(1994 ))。
 例えば、該遺伝子治療 剤がインビボ法に� �り投与される場合は、疾患、症状等に応じ� �静脈、動脈、皮下、皮内、筋肉内等、適当� �投与経路により投与される。またインビボ� �により投与する場合は、該遺伝子治療剤は� �般的には注射剤等とされるが、必要に応じ� �慣用の担体を加えてもよい。また、リポソ� �ム又は膜融合リポソーム(センダイウイルス- リポソーム等)の形態にした場合は、懸濁剤� �凍結剤、遠心分離濃縮凍結剤等のリポソー� �製剤とすることができる。
 

 5. 海人草抽出物
 本発明の前記2.〔2〕のスクリーニング方法� ��より得られたFGF18様活性物質の1つは海人草� ��出物であり、その発毛抑制効果も確認され� ��。
 原料となる海人草は、紅藻類のイギス目フ� ��マツモ科に属し、学名はDigenea simplexであり 、マクリとも呼ばれている。
 海人草からその抽出物を得るに当たっては� ��植物体の全部位が使用可能であり、各部位� ��単独に、或いは適宜混合して抽出原料に用� ��ることができる。また、原料となる植物体� ��性状は、乾燥状態のもの、非乾燥状態のも� ��、いずれも用いることができる。

 海人草から、本発明に用いる抽出物を得� ��には、これらの原料を必要により細切ない� ��粉砕し、適当な溶媒を用いて、一般に用い� ��れる抽出法で抽出すれば良い。抽出に用い� ��れる溶媒は、特に限定されないが、例えば� ��、無水或いは含水有機溶媒を例示すること� ��できる。無水或いは含水有機溶媒としては� ��1価アルコール、多価アルコールまたはその 誘導体、ケトン、エステル、エーテル、石油 エーテル、脂肪族炭化水素、またはハロゲン 化合物、芳香族炭化水素より選択された一種 または二種以上を例示することができる。具 体的な溶媒としては、水、メタノール、エタ ノール、ブタノール、アセトン、酢酸エチル エステルが例示され、これらは一種または二 種以上を組み合わせて用いることができる。 このうち、特に水、或いはメタノールやエタ ノール等の1価アルコールを用いることが好� �しい。抽出に当たって、上記溶媒の使用量� �特に限定されないが、抽出原料である海人� �に対して、0.1-1000重量倍、好ましくは1-100重� ��倍、更に好ましくは2-50重量倍である。

 上記溶媒による抽出法は、常法に従って� ��なうことができる。例えば抽出温度につい� ��は、室温程度の温度で抽出しても良く、ま� ��用いられる溶媒の沸点付近の温度で抽出し� ��も良い。また、抽出操作についても、海人� ��の乾燥粉砕物もしくは粉砕物を室温下で1-30 日間浸漬することにより抽出する方法や、抽 出溶媒の沸点程度の温度において還流抽出す る方法等を用いることができる。

 当該海人草抽出物は、下記の実施例4におい て示されるように、本発明のFGF18様活性物質� ��スクリーニング方法である、FGFレセプター� ��1つであるFGFR4を遺伝子発現操作により細胞� ��面に強制的に発現させた細胞を用いて、FGF1 8様の細胞増殖促進活性を有する物質の1つと� ��て検索された。この海人草抽出物は、FGFR4� �現細胞に対してはFGF18と同様の細胞増殖促進 活性を示し、FGFR4を発現していない親株に対� ��る細胞増殖促進活性は無いことから、FGF18� �活性物質であるということができる。
 そして、当該FGF18様活性物質は、推定どお� �発毛抑制作用があることが、実施例6により� ��証された。
 また、FGFR4発現細胞に対する細胞増殖促進� �用について、FGF18単独で作用させた場合との 比較実験を行った結果、低濃度の海人草抽出 物には、FGF18活性を促進する作用が確認され� ��海人草抽出物はFGF18活性の促進物質である� �いうこともできる。このことから、当該比� �実験の手法は、FGF18活性の促進物質をスクリ ーニング法として用いることができることを 示すものであり、この手法が発毛抑制剤の候 補を選択するための有力な手段であることは 明らかである。