комплексный препарат-пробиотик в иммобилизованной и лиофилизированной форме и способ его получения

область техники изобретение относится к препаратам медицинского и ветеринарного назначения и способам их получения и может быть использовано в биотехнологии, медицине и сельском хозяйстве.

для профилактики и лечения многих патологических состояний, обусловленных нарушением эндоэкологии, широкое распространение получили энтеросорбенты. это различные типы активных углей, например, карбактин, карболонг, микросорб, полифепан и т.д. (сенов п.л. фармацевтическая химия. - M.: медицина, 1978, с. 132-133; патент рф N 2029546, мпк ⁶ а 61 к 9/16, опубл. 27.02.95 г.), природные материалы и их аналоги (кристаллическая микроцеллюлоза, цеолиты, хитозаны, пектины и т.д.), синтетические минеральные сорбенты и другие материалы, которые используются для очищения организма от шлаков, радионуклидов, тяжелых металлов и токсинов. энтеросорбенты снижают эффекты экзо- и эндотоксикозов .

однако энтеросорбенты не устраняют причин вызывающих эффекты экзо- и эндотоксикозов, как правило, они не селективны, работают в основном на избыток субстрата, могут оказывать негативное действие из-за сорбции нужных для организма метаболитов (витаминов, гормонов) и не обеспечивают активно нормализацию микробиоценоза.

функции нормальной микрофлоры в организме являются жизненно важными и очень обширными: синтезирующая, регуляторная, десенсибилизирующая, дезинтоксикационная, ферментативная, защитная и иммуностимулирующая.

предшествующий уровень техники

для нормализации микробиоценоза широкое распространение получили препараты живых бактериальных клеток: бифидобактерий (межд. заявка

(WO) N 85/03848), мки а 23 с 9/12, опубл. 12.09.85 г.), лактобактерий (заявка его N 0154614, мки а 23 с 9/123, опубл. 11.09.85 г.) и колибактерий и т.д.

недостатком этих препаратов является довольно короткие сроки их хранения, если они находятся в жидкой форме или высокая стоимость, если они изготовлены в сухой форме, а также слабая устойчивость к инактивирующим факторам внешней среды и желудочно-кишечного тракта организма при применении. известен комплексный препарат, включающий пористый неорганический носитель и иммобилизованные на нем клетки микроорганизмов (заявка фрг J\b3410650, мки с 12 N 11/14, опубл. 03.10.85 г.). в качестве носителей применяют сталактитовые подложки с двойной структурой пор. подложки имеют сквозные макропоры, которые делают возможным свободный обмен жидкости и газа из внутренней части носителя в окружающую среду. размер макропор лежит в пределах величины клеток микроорганизмов.

недостатком данного препарата является то, что он не предназначен для использования в качестве медицинского или ветеринарного препарата в связи с отсутствием данных о влиянии сталактитового носителя с нанесенными на нем микроорганизмами на микробиоценоз желудочно- кишечного тракта организма человека или животного.

известен комплексный фармацевтический препарат, включающий фармацевтически приемлемый носитель и иммобилизованные на нем микроорганизмы (межд. заявка (WO) JY_> 91/09608, мки а 61 к 35/74, опубл. 11.07.91 г.). носитель не нарушает жизнеспособности микроорганизмов. в качестве микроорганизмов используют штамм LIa Strерtососсus lасtis. препарат предназначен для борьбы с патогенной микрофлорой кишечника человека и животных, вызывающей диарею и другие желудочно-кишечные расстройства.

недостатком препарата является то, что используемый в нем штамм LIa Strерtососсus lасtis влияет в основном на патогенную микрофлору кишечника

человека и животных, т. е. проявляет антагонистические свойства, но слабо участвует в восстановлении микрофлоры желудочно-кишечного тракта. кроме того, отсутствуют данные об антацидных свойствах носителя, что свидетельствует о слабой защите носителем иммобилизованных клеток Strерtососсus lасtis при действии внутренней среды организма с низкими значениями рн.

известен комплексный бактериальный препарат, включающий носитель и иммобилизованные на нем микробные клетки в концентрации на 1 мм ² 2,IxIO ³ - 1,OxIO ⁵ (патент рф JVώо 17486, мпк ⁶ а 61 к 31/00, опубл. 15.08.94 г.). в качестве носителя используют активированный уголь в виде порошка с размером частиц менее 30 мкм, а в качестве микроорганизмов используют лактобактерии и кишечные палочки.

недостатком такого препарата является то, что активированный уголь, используемый в качестве носителя, является тонкопористым сорбентом с преобладанием микропор и высокой удельной поверхностью. вследствие этого микробные клетки расположены на поверхности частиц сорбента и недостаточно защищены при неблагоприятном воздействии окружающей среды. активированные угли активно поглощают низкомолекулярные биологически активные вещества, витамины и газы кишечника, что ухудшает работу перистальтики. они быстро забиваются и работают преимущественно в верхних отделах желудочно-кишечного тракта. кроме того угли не обладают антацидными свойствами, что не способствует выживаемости нанесенных на них клеток при действии сред с низкими значениями рн. препарат не предусматривает использование одновременно нескольких штаммов микроорганизмов разных видов, например, смеси бифидо- и лактобактерии, что значительно снижает эффективность действия препарата особенно при восстановлении микрофлоры желудочно-кишечного тракта.

известен препарат-пробиотик в иммобилизованной форме, включающий носитель, представляющий собой сорбент, и клетки эубиотиков, иммобилизованные на указанном носителе, причем клетки эубиотиков

используют совместно с питательной средой, а в качестве сорбента используют материал с антацидными свойствами, развитой мезо- и макропористой структурой и объемом макропор не менее 0,01 cм ³ /г в виде порошка с размером частиц не более од мм, или в виде гранул размером (0,1-5,0) мм, или в виде таблеток при следующем количественном соотношении компонентов препарата, мае. %: клетки эубиотиков с питательной средой и титром 10 ⁸ - 10 ⁸ кое/мл - 1,0-50,0; носитель-сорбент - остальное до 100%.

в качестве сорбента используют пористый материал на основе оксида алюминия с гидрофильно-гидрофобной топохимией поверхности, например, энтеросорбент типа CуMC-1, модифицированный углеродом, или энтеросорбент типа сиал, модифицированный кремнийорганическим полимером. в качестве эубиотиков используют бифидо- или лактобактерии или их смесь (патент рф JYг 2118535, мпк ⁶ а 61 к 35/74, опубл.10.09.98 г.). однако используемые в указанном препарате сорбенты обладают недостаточной эффективностью сорбции и десорбции бактерий-эубиотиков, а также имеет низкую колонизационную активность входящих в состав препарата бактерий-эубиотиков.

известен способ получения комплексного препарата бактерий- эубиотиков (патент рф 3422067114, мпк а 61 к 35/74, опубл. 27.09.96 г.) включающий выращивание в условиях глубинного культивирования кз^льтуры штаммов бифидобактерий и стрептококка, смешивание биомассы с защитной средой следующего состава (мac.%): сахароза 25- 30; желатин 2 -3; сухое молоко 3- 5; глутамат натрия 0,5 -1 и контактно-сорбционное обезвоживание целевого продукта, которое проводят охлажденным до минус 8-1O ⁰ C сорбентом, например окисью алюминия, с остаточной влажностью менее 1% при массовом соотношении 1 :10-12, соответственно, а досушивание осуществляют в течение 18-20 часов при температуре 0-5 ⁰ C в замкнутом объеме.

однако используемый в указанном способе сорбент обладает недостаточной эффективностью сорбции и десорбции бактерий-эубиотиков, а также имеет низкую колонизационную активность бактерий-эубиотиков.

наиболее близким техническим решением (прототипом) является препарат-пробиотик в иммобилизованной и лиофилизованной форме (патент рф JVs 216480I ₅ мпк а 61 к 35/74, опубл. 10.04.01). препарат включает носитель, представляющий собой сорбент, и клетки пробиотиков, иммобилизованные на указанном носителе, причем клетки пробиотиков используют совместно с питательной средой, а в качестве сорбента используют материал с антацидными свойствами, развитой мезо- и макропористой структурой и объемом макропор не менее 0,01 cм ³ /г в виде порошка с размером частиц не более 0,1 мм, или в виде гранул размером (0,1-5,0) мм, или в виде таблеток, согласно изобретению, препарат дополнительно содержит защитную среду, а клетки пробиотиков с питательной средой представляют собой сухой концентрат бифидобактерий на молочной основе с титром 10 ⁸ -10 ¹⁰ кое/г и содержанием аминокислот (мг/100 г сухой биомассы): глутаминовая кислота - 15,0-68,0; глутамин - 8,0- 20,0; лейцин - 10,0-50,0; аргинин - 20,0-30,0; цистеин - 50,0-80,0 при следующем соотношении компонентов препарата в сухом виде мac.%: клетки эубиотиков с питательной средой и титром 10 ⁸ -10 ¹⁰ кое/г - 0,1-10,0; защитная среда - 0,1-10,0; носитель-сорбент - остальное - до 100% в качестве защитной среды используют желатин, сахарозу, аскорбиновую кислоту и хлористый натрий при следующем содержании компонентов, мac.%: желатин - 8,5-11,5; аскорбиновая кислота - 0,8-1,2; хлористый натрий - 1,7-3,0; сахароза - остальное до 100%. в качестве сорбента используют пористый материал на основе оксида алюминия с гидрофильно-гидрофобной топохимией поверхности, например, энтеросорбент типа CуMC-1, модифицированный углеродом. препарат в качестве бактерий-пробиотиков дополнительно содержит сухую закваску вязких штаммов ацидофильных бактерий Lасtоbасillus асidорhilus типа AB , соотношение которых с сухим

концентратом бифидобактерий составляет 1: (8-9) соответственно. в качестве бифидобактерий в сухом концентрате используют бактерии вifidum bifidum Na I ₅ или Ns 791, или JIB A-3, или вifidоbасtеrmm lопgum 379, или вifidоbасtеrium аdоlеsсепtis MC-42, или смесь бактериальных клеток указанных штаммов, взятых в равных весовых долях.

наиболее близким способом (прототипом) является способ получения комплексного препарата-пробиотика в иммобилизованной и лиофилизированной форме, приведенный в описании к патенту рф Ns 2164801, мпк а 61 к 35/74, опубл. 10.04.01, включающий отмывку и стерилизацию пористого энтеросорбента CуMC-1, модифицированного углеродом, и его охлаждение до комнатной температуры, смешивание энтеросорбента и бактерий-эубиотиков с питательной и защитной средами в соотношении не более 1 : 1 и выдерживание смеси в течение не менее 1 часа при перемешивании и температуре +4 ⁰ C до полной иммобилизации бактериальных клеток на энтеросорбент, отмывку полученного комплексного препарата в изотоническом солевом растворе с последующем его замораживанием и лиофильной сушкой

однако используемые в указанном препарате и способе его получения сорбенты также обладают недостаточной эффективностью сорбции и десорбции бактерий-эубиотиков. кроме того, наблюдается низкая колонизационная активность входящих в состав препарата бактерий- эубиотиков.

раскрытие изобретения техническим результатом заявляемых технических решений является создание такого комплексного препарата-пробиотика со способом его получения, который обеспечивал бы более высокую эффективность сорбции и десорбции клеток бактерий энтеросорбентом CуMC-1, определяющей его клиническую эффективность, и более высокую колонизационную активность бактерий-эубиотиков.

указанный технический результат достигается тем что в комплексном препарате-пробиотике в иммобилизованной и лиофилизированной форме, включающем носитель, представляющий собой пористый энтеросорбент CуMC-1 на основе оксида алюминия, модифицированный углеродом с гидрофильно-гидрофобной топохимией поверхности, и клетки бактерий- эубиотиков с питательной и защитной средами, иммобилизованные на указанном носителе-энтеросорбенте, согласно изобретения, клетки бактерий-эубиотиков с питательной средой представляют собой лиофилизированный концентрат консорциума бифидобактерий, или лактобактерий, или их смесь с титром 10 — 10 кое/г, а в качестве пористого модифицированного углеродом энтеросорбента CуMC-1 он содержит энтеросорбент CуMC-1, дополнительно обработанный раствором соли металла в соответствии со способом по п.п. 5 и 6 формулы изобретения при следующем соотношении компонентов препарата в лиофилизированном виде, мac.%: клетки с питательной средой консорциума бифидо-, или лактобактерий-эубиотиков, или их смесь с титром 10 ⁸ - 10 ¹⁰ кое/г 1,0 - 10,0 защитная среда 0,1 - 10,0 энтеросорбент CуMC-1, дополнительно обработанный раствором соли металла остальное до

100%.

препарат с содержанием микробной биомассы менее O ₅ I мac.% имеет низкий биотитр с преобладанием прочно связанных с сорбентом клеток, т.е. действует преимущественно как энтеросорбент. количество микробных клеток, вводимых в препарат, не превышает 15 мac.% вследствие чего вся биомасса бактерий препарата находится в защищенном состоянии. при этом энтеросорбент CуMC-1 в препарате сохраняет основные свои свойства, обеспечивающие связывание и выведение из кишечника токсинов, продуктов незавершенного метаболизма и патогенных микроорганизмов.

в качестве консорциума бифидобактерий он содержит штаммы бифидобактерий: вifϊdоbасtеrium ъifidum 8-3, вifidоbасtеrium lопgum два- 13 и вifϊdоbасtеrium аdоlеsсепtis го- 13 в соотношении 8:1:1.

в качестве консорциума лактобактерий он содержит штаммы лактобактерий Lасtоbасшus асidорhilus 57S, Lасtоbасillus рlапtаrum п-75, Lасtоbасillus саsеi сб в соотношении 4 : 1,0 : 1,0.

смесь консорциумов бифидо- и лактобактерий имеет соотношение от 1 :1 дo з:l .

указанный технический результат достигается также тем, что в способе получения комплексного препарата-пробиотика в иммобилизованной и лиофилизированной форме, включающем отмывку и стерилизацию пористого энтеросорбента CуMC-1, модифицированного углеродом, и его охлаждение до комнатной температуры, смешивание энтеросорбента и бактерий-эубиотиков с питательной и защитной средами в соотношении не более 1 :1 и выдерживание смеси в течение не менее 1 часа при перемешивании и температуре не выше +4 ⁰ C до полной иммобилизации бактериальных клеток на энтеросорбент, отмывку полученного комплексного препарата в изотоническом солевом растворе с последующем его замораживанием и лиофильной сушкой, согласно изобретения, перед стерилизацией энтеросорбент CуMC-1 обрабатывают раствором соли металла в объемном соотношении не более 1:1 и отмывают от реагента 2-3 кратным объемом дистиллированной воды, а в качестве бактерий-

^• эубиотиков используют концентрат консорциума бифидобактерий, или лактобактерий, или их смесь с титром 10 ^s — 10 ¹⁰ кое/г. в качестве раствора соли металла используют 3%-ный раствор сульфата магния.

в качестве консорциума бифидобактерий используют штаммы бифидобактерий: вifidоbасtеrium bifidum 8-3, вifidоbасtеrium lопgum два- 13,

вifidоbасtеrium аdоlеsсепtis го- 13 в соотношении 8:1 :1, а в качестве консорциума лактобактерий используют штаммы лактобактерий

Lасtоbасillus асidорhilus 57S, Lасtоbасillus рlапtагаm п-75 и Lасtоbасillus саsеi сб в соотношении 4 : 1,0 : I ₅ O. смесь консорциумов бифидо- и лактобактерий имеет соотношение от 1:1 до 3:1.

штамм бифидобактерий: вifidоbасtеrшm bifidum 8-3 депонирован во вниигенетика в вкпм под JYaB 5799. штамм вifidоbасtеrium lопgum два-

13 депонирован во вниигенетика в вкпм под NsB 5894. штамм

вifidоbасtеrium аdоlеsсепtis го- 13 депонирован во вниигенетика в вкпм под N° B-2944.

штамм лактобактерий Lасtоbасillus асidорhilus 57S депонирован во вниигенетика в вкпм под JMa в 5863. штамм Lасtоbасillus рlапtагаm п-75 депонирован во вниигенетика в вкпм под Ns в 3962. штамм

Lасtоbасillus саsеi сб депонирован во вниигенетика в вкпм под Ns в

5724.

введение в препарат сухой микробной биомассы с биотитром 10 -10 кое/г обеспечивает ему оптимальную биологическую активность. если исходная микробная биомасса имеет титр меньше 10 ⁸ кое/г, то препарат обладает недостаточной биологической активностью и при введении в желудочно-кишечный тракт проявляет слабый лечебно-профилактический эффект. титр сухой микробной биомассы более 10 ¹⁰ кое/мл значительно увеличивает стоимость препарата без значительного увеличения лечебно- профилактического эффекта.

основу жидкой бактериальной суспензии для сушки составляют клетки- эубиотики в молочной питательной среде с повышенным титром клеток (10 ⁹ - 10 ¹⁰ кое/мл) - жидкий концентрат бифидобактерий. молочная питательная среда с клетками-эубиотиками содержит повышенное количество белка (не менее 12% сом - сухого остатка молока). это позволяет увеличить антибиотические свойства бактерий-пробиотиков в препарате. кроме того, повышенное количество белка увеличивает антацидные свойства препарата.

высокая концентрация клеток в жидкой бактериальной суспензии позволяет их использовать в препарате в сухом виде в концентрации 1,0 - 10,0 % с титром 10 ⁸ -10 ¹⁰ кое/мл.

носитель-сорбент представляет собой механически прочные частицы порошка или гранулы или таблетки, выполненные из оксида алюминия, поверхность которых модифицирована углеродом при получении сорбента типа CуMC-1 черного цвета. сорбенты имеют удельную поверхность до 300 м ² /г и развитую структуру мезо- и макропор. размеры макропор сорбента соизмеримы с размерами микробных клеток, что позволяет заполнять макропоры указанными клетками. регулированием процентного содержания углерода в сорбенте с последующими окислительно-восстановительным� � его обработками обеспечивается получение носителя с заданными гидрофильно- гидрофобными и другими тоцохимическими характеристиками. сорбенты типа CуMC-1 в меньшей степени, чем другие аналогичные материалы, извлекают витамины и гормоны из организма и не нарушают перистальтику, что делает возможным их применение длительными курсами. наличие в сорбенте оксида алюминия придает его поверхности определенные буферные антацидные свойства, что способствует лучшему сохранению активности и выживанию иммобилизованных на нем микробных клеток, например, при прохождении препарата через желудок (устраняет отрицательное влияние желудочного сока на микробные клетки) или при других неблагоприятных условиях (низких рн).

макропористая структура носителя-сорбента, ячейки которого заполнены микробными клетками, также способствует защите этих иммобилизованных клеток от инактивирующих факторов внешней среды. причем, микробные клетки, находящиеся в порах, и клетки, находящиеся близко к внешней поверхности носителя-сорбента, отличаются по своим десорбционным способностям, и такая неоднородность свойств клеток, обеспечивает пролонгированное действие препарата и способствует колонизации не только верхних, но и нижних отделов кишечника. пористый носитель, являясь

энтеросорбентом, снимает эффекты местного (а через него и общего) токсикоза, что способствует выживаемости бактерий препарата и микрофлоры кишечника, а также снижает нагрузку на органы детоксикации человека или животного. кроме того при использовании в препарате в качестве микробных клеток консорциума бифидобактерий, или консорциума лактобактерий, или смеси консорциумов бифидо- и лактобактерий обеспечивается не только вытеснение из желудочно-кишечного тракта патогенных микроорганизмов

(за счет антагонистических свойств указанных бактерий), но и восстановление сильно сокращенной микрофлоры кишечника при дисбактериозе и других заболеваниях.

ниже приведены примеры составов предлагаемого комплексного препарата бактерий-эубиотиков в иммобилизованной и лиофилизированной форме. пример 1. препарат-пробиотик "экофлор" в виде порошка с размером частиц (40-100) мкм (мac.%): клетки с питательной средой консорциума лактобактерий с титром 10 ¹⁰ кое/г 1,0 защитная среда, в том числе: желатин 0,085

аскорбиновая кислота 0,008

хлористый натрий 0,017

сахароза 0,89 энтеросорбент CуMC-1, дополнительно обработанный 3%-ным раствором сульфата магния остальное до 100%.

пример 2. препарат-пробиотик "экофлор" в виде порошка с размером частиц (40-100) мкм (мac.%): клетки с питательной средой консорциума бифидобактерий с титром 10 ⁹ кое/г 7,0

защитная среда, в том числе:

желатин 0,85

аскорбиновая кислота 0,08

хлористый натрий 0,17 сахароза 8,9 энтеросорбент CуMC-1, дополнительно обработанный

3%-ным раствором сульфата магния остальное до 100%.

пример 3. препарат-пробиотик "экофлор" в виде гранул размером (0,5-5,0) мм (мac.%): клетки с питательной средой и титром 10 ⁸ кое/г смеси консорциумов бифидо- и лактобактерий в соотношении 1:1 10,0 защитная среда, в том числе:

желатин 0,575 аскорбиновая кислота 0,06

хлористый натрий 0,15

сахароза 4,215 энтеросорбент CуMC-1, дополнительно обработанный

3%-ным раствором сульфата магния остальное до 100%. пример 4. препарат-пробиотик "экофлор" в виде гранул размером (0,5-5,0) мм (мac.%): клетки с питательной средой и титром 10 ⁹ кое/г смеси консорциумов бифидо- и лактобактерий в соотношении 3:1 5,0 защитная среда, в том числе:

желатин 0,85

аскорбиновая кислота 0,08

хлористый натрий 0,17

сахароза 8,9 энтеросорбент CуMC-1, дополнительно обработанный

3%-ным раствором сульфата магния остальное до 100%. пример 5. технология получения готовых форм препарата "экофлор" по специальной технологии готовят исходные сорбенты типа CуMC-1 (патент рф Na 2026733), в котором оксид алюминия модифицирован углеродом, с требуемой пористой структурой, химической природой поверхности и размером частиц или гранул. далее мерное количество энтеросорбента CуMC-1 засыпают в цилиндрическую ёмкость, заливают дистиллированной водой в объемном соотношении 1 :1 и тщательно перемешивают. отмывают не менее 3-х раз дистиллированной водой до полного исчезновения угольной пленки и взвеси. далее энтеросорбент CуMC-1 обрабатывают раствором соли металла, а именно 3%-ным раствором сульфата магния в объемном соотношении 1 :1. отмывают от сульфат-ионов 2-3 кратным объемом дистиллированной воды. после обработки энтеросорбента CуMC-1 3%-ным раствором сульфата магния эффективность его биосорбции увеличивается в 1,4 раза, а эффективность биодесорбции, определяющая клинический эффект от действия препарата .равна 1.

стерилизацию CуMC-1 ведут сухим жаром в сушильном шкафу россыпью слоем не более 1,5-2,0 см при температуре (160±2)° с в течение 2 часов. контроль стерильности CуMC-1 определяют микробиологически. контроль процесса стерилизации CуMC-1 осуществляют с помощью химических тестов.

процесс иммобилизации CуMC-1 проводят в асептических условиях. для иммобилизации берут равные по объему (1:1) количества энтеросорбента CуMC-1 и культуры консорциумов микроорганизмов. для иммобилизации используют консорциум бифидобактерий (с титром не менее 10 ¹⁰ кое/мл) или консорциум лактобактерий (с титром не менее 10 ⁸ кое/мл), или их смесь в объемном соотношении 9:1 соответственно в соответствии с примерами 1-3. биомассу бактерий приготавливают на молочной

питательной среде, содержащей повышенное количество белка (не менее 12% сом - сухого остатка молока) по стандартной технологии.

смесь энтеросорбента CуMC-1 с клетками бактерий-эубиотиков тщательно перемешивают в течение 5 мин и помещают на шейкер на 1 час при интенсивности 100 колебаний в минуту при температуре 6±2 ⁰ C. процесс иммобилизации возможно вести в стеклянной посуде на роллерной установке. для определения качества иммобилизации из исходного титра бифидобактерий и лактобактерий в концентрате бифидо- и лактобактерий вычитают полученный результат биотитрования. процесс считается завершенным, если в растворе осталось не более 50% от исходного количества бифидо- и лактобактерий.

далее продукт однократно промывают в изотоническом растворе NaCl. мутный раствор стерильно сливают, отбирают пробы и проводят контроль полноты процесса иммобилизации по мук 4.2.577-96 (методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов", п.7.1 и п.7.10). процесс считается завершенным, если в растворе осталось не более 50% от исходного количества бифидо- и лактобактерий.

отмытый продукт замораживают в низкотемпературном холодильнике типа "кельвинатор" при температуре минус (40-45)°C в течение (24-48) часов. кассеты с предварительно замороженным препаратом перегружают в сушильную камеру при достижении температуры плит минус (20-3O) ⁰ C и камеру вакуумируют. готовый препарат "экофлор" в сухой иммобилизованной форме фасуют во флаконы и герметично закрывают пробками. массовая доля влаги составляет не более 3,0 мac.%.

в таблице 1 приведены адсорбционные емкости CуMC-1 после модификации поверхности (измерялась по адсорбции метиленового синего согласно фс 42-3283-96).

таблица 1 данные по адсорбционной емкости энтеросорбента CуMC-1 после обработки солями металлов

обработанная поверхность CуMC-1 оценивалась в биологических тестах по:

1) эффективности биосорбции (отношение количества сорбированных клеток к общему количеству бактерий в исходной суспензии),

2) эффектности биодесорбции (отношение количества бактерий, десорбированных с поверхности CуMC-1, к количеству сорбированных бактерий). эффективность био десорбции является важным показателем, во многом определяющем клиническую эффективность икэ. результаты биологических тестов приведены в табл. 2.

таким образом, по результатам исследований обработанной поверхности CуMC-1 солями металлов вариант JYаб (табл.l) обработки MgSO ₄ 6H ₂ O (3%) является наиболее оптимальным. после обработки энтеросорбента CуMC-1 3%-ным раствором сульфата магния эффективность его биосорбции увеличивается в 1,4 раза (отношение сорбированных клеток к общему количеству бактерий в исходной суспензии), а эффективность биодесорбции, определяющая клинический эффект от действия комплексного препарата (отношение количества бактерий, десорбированных с поверхности су MC-I

к количеству сорбированных на нем бaктepий).paвнa 1, что показывает о том, что практически все бактерии могут десорбироваться в желудочно-кишечном тракте.

таблица 2

данные биологического тестирования энтеросорбента сумс после обработки солями металлов

примечание:

Tl (кое/мл) -исходный титр биомассы бактерий; T2 (кое/мл) - титр биомассы бактерий, оставшейся после иммобилизации на энтеросорбент;

Tз=T1~T2 ~ титр (кое/мл) бактериальных клеток, иммобилизованных на сорбенте;

T4 - титр (кое/мл) бактериальных клеток после десорбции, определяющий клинический эффект от действия препарата

результаты доклинических исследований

проведенные исследования подтвердили, что комплексный препарат «экoфлop» нетоксичен для лабораторных животных, восстанавливает нормобиоценоз кишечника, элиминирует условно-патогенную и патогенную микрофлору, не вызывает побочных и непредвиденных нежелательных реакций, стимулирует процессы адаптации организма к неблагоприятным факторам внешней среды. основные результаты исследования: 1) морфометрические показатели животных в экспериментальных группах нарастали в соответствии с популяционным стандартом.

2) лабораторные анализы крови оставались в пределах физиологической нормы.

3) гистологические исследования органов показали отсутствие токсического воздействия.

4) подтверждено отсутствие повреждающего действия на структуру кишечного эпителия со стороны препарата.

5) патолого-анатомическое вскрытие подтвердило состояние органов в норме. полученные результаты свидетельствуют о том, что комплексный препарат «экoфлop» успешно прошел доклинические испытания.

результаты клинических исследований комплексного препарата «эKOфлOP»

все пациенты (45 человек - экспериментальная группа и 25 человек - группа сравнения) имели хроническую патологию: атопический дерматит - в

44,4% случаев; острый аллергоз - в 11,1% случаев; вторичный хронический пиелонефрит - в 22,2% случаев; сахарный диабет - в 11,1% случаев; бронхиальная астма - в 11,1% случаев.

после проведенного экспериментального курса лечения комплексным препаратом «экoфлop» были получены следующие результаты:

1) препарат «экoфлop» способствует уменьшению абдоминального болевого синдрома, проявлений диспепсического синдрома, нормализации моторной функции кишечника, регрессу кожных высыпаний;

2) применение «экoфлopa» способствует уменьшению субъективных клинических (недомогание, слабость нарушение аппетита) и объективных лабораторных критериев (нормализация лейкоцитарного индекса интоксикации и гематологического показателя интоксикации, купирование синдрома цитолиза и нормализация общего белка сыворотки крови, а также уменьшение выраженности мочевого синдрома), отражающих синдром эндогенной интоксикации;

3) при использовании препарата «экoфлop» в 62,2% наблюдается полное восстановление функций переваривания и всасывания в кишечнике, у остальных больных - тенденция к нормализации показателей;

4) препарат «эклoфлop» способствует восстановлению кишечной микрофлоры: кишечной палочки, бифидофлоры; снижению кокковых форм, кишечной палочки со слабо выраженными ферментными свойствами, лактозонегативных энтеробактерий;

5) при приеме препарата не выявлены побочные эффекты и осложнения. промышленная применимость. препарат успешно прошел клинические испытания, является безвредным и высокоэффективным средством, в отношении восстановления нормобиоценоза кишечника и купирования синдрома эндогенной интоксикации и может быть использован в медицине и ветеринарии.