以下に実施例、比較例及び試験例を示し� ��本発明について詳細に説明するが、これら� ��単に例示するのみであり、本発明はこれら� ��よって何ら限定されるものではない。

〔実施例1〕
 ホエータンパク10%水溶液1Lに、パパイン50U/g ・ホエータンパク及びプロレザー(Proleather:天 野エンザイム社製)150U/g・ホエータンパクを� �え、pH8に調整し、55℃において6時間ホエー� �ンパクを変性させながら酵素分解を行った� �反応液を100℃で15秒間以上加熱して酵素を失 活させ、遠心分離して上清を回収し、これを 乾燥してホエータンパク加水分解物(HW)を得� �。
 得られたホエータンパク加水分解物(HW)の分 子量分布は10kDa以下、メインピークは1.3kDa、A PLは7.2、すべての構成成分に対する遊離アミ� ��酸含量18.9%であった。
 Inhibition ELISA法によってβ-ラクトグロブリ� �に対する抗原性の低下を測定したところ1/10, 000以下で収率(酵素反応液を遠心分離し、仕� �み量の乾燥重量に対する上清の乾燥重量の� �率(%))80.3%、苦味度は2であった。
 このようにして得られたホエータンパク加� ��分解物は、そのまま本発明の美白剤として� ��用可能である。

〔実施例2〕
 ホエータンパク10%水溶液1Lに、パパイン50U/g ・ホエータンパク及びプロレザー(Proleather:天 野エンザイム社製)150U/g・ホエータンパクを� �え、pH8、50℃で3時間酵素分解を行った。こ� �を55℃に昇温させ、この温度で3時間維持し� �タンパクを変性させるとともに、タンパク� �酵素分解を行い、100℃で15秒間以上加熱して 酵素を失活させた。この反応液を分画分子量 10kDaのUF膜(STC社製)及び分画分子量300DaのMF膜(S TC社製)処理を行い、濃縮液画分を回収し、こ れを乾燥してホエータンパク加水分解物(HW)� �得た。
 得られたホエータンパク加水分解物(HW)の分 子量分布は10kDa以下、メインピークは500Da、AP Lは3.0、すべての構成成分に対する遊離アミ� �酸含量15.2%であった。
 Inhibition ELISA法によってβ-ラクトグロブリ� �に対する抗原性の低下を測定したところ1/10, 000以下で、収率65.4%、苦味度は2であった。
 このようにして得られたホエータンパク加� ��分解物は、そのまま本発明の美白剤として� ��用可能である。

 また、特開平4-69315号公報で報告されてい る、以下の乳タンパクの加水分解物を調製し 、比較試料とした。

〔比較例1〕
 ホエータンパク120gを精製水1,800mlに溶解し� �1Mカセイソーダ溶液でpHを7.0に調整した。次� ��で、60℃で10分間加熱して殺菌し、45℃に保� ��してアマノA(天野エンザイム社製)20gを添加� ��、2時間反応させた。80℃で10分間加熱して� �素を失活させ、凍結乾燥し、ホエータンパ� �加水分解物を得た。
 得られたホエータンパク加水分解物の分解� ��18%、収率80.6%であった。

〔比較例2〕
 ホエータンパク120gを精製水1,800mlに溶解し� �1Mカセイソーダ溶液でpHを7.0に調整した。次� ��で、60℃で10分間加熱して殺菌し、45℃に保� ��してアマノA(天野エンザイム社製)20gを添加� ��、8時間反応させた。80℃で10分間加熱して� �素を失活させ、凍結乾燥し、ホエータンパ� �加水分解物を得た。
 得られたホエータンパク加水分解物の分解� ��30%、収率80.6%であった。

〔比較例3〕
 カゼイン200gを精製水2,000mlに懸濁し、1Mカセ イソーダ溶液でpHを8.0に調整して完全に溶解� ��た。次いで、80℃で10分間加熱して殺菌し、 50℃に保持してパンクレアチンF(天野エンザ� �ム社製)20g及びアマノA(天野エンザイム社製)2 0gを添加し、10時間反応させた。80℃で10分間� ��熱して酵素を失活させ、凍結乾燥し、カゼ� ��ン加水分解物を得た。
 得られたカゼイン加水分解物の分解率38%、� ��率77.8%であった。

〔比較例4〕
 カゼイン200gを精製水2,000mlに懸濁し、1Mカセ イソーダ溶液でpHを8.0に調整して完全に溶解� ��た。次いで、80℃で10分間加熱して殺菌し、 40℃に保持してパンクレアチンF(天野エンザ� �ム社製)15gを添加し、5時間反応させた。80℃� ��10分間加熱して酵素を失活させ、凍結乾燥� �、カゼイン加水分解物を得た。
 得られたカゼイン加水分解物の分解率20%、� ��率79.1%であった。

〔試験例1〕
(透明性試験)
 実施例1、2及び比較例1~4の各タンパク加水� �解物の1%水溶液を調製し、650nmにおける吸光� ��を測定した。その結果を表2に示す。

 実施例1、2のホエータンパク加水分解物(H W)は、吸光度が低いことからわかるように、� ��明性が高い。一方、比較試料においては、� ��施例1、2のホエータンパク加水分解物に比� �、吸光度が高く透明性が低いことがわかっ� �。また、膜処理をした実施例2のホエータン� ��ク加水分解物(HW)の吸光度は、実施例1のホ� �ータンパク加水分解物(HW)より低く、透明性� ��優れていた。

〔試験例2〕
(チロシナーゼ活性阻害作用)
 チロシナーゼはチロシンからメラニンを合� ��する酵素で、合成経路中、チロシンをドー� ��に、さらにドーパをドーパキノンへ変換す� ��。チロシナーゼ(Sigma-Aldrich社製、マッシュ� �ーム由来)を用い、実施例1、2で得られたホ� �ータンパク加水分解物(HW)及び比較試料(比較 例1~4)をそれぞれ加え37℃で15分間前処理を行� ��た。基質としてドーパ(Sigma-Aldrich社製)を添� ��し、さらに37℃で5分間反応させた後、476nm� �おける吸光度を測定した。無添加の値を100%� ��して阻害率を算出した。
 その結果を表3に示す。

 表3の結果からわかるように、実施例1及び2� ��ホエータンパク加水分解物(HW)は、0.01%~1.0%� �濃度で濃度依存的に酵素活性を抑制した。� �た、比較試料においても抑制効果が認めら� �た。
 しかし、実施例1、2のホエータンパク加水� �解物(HW)には、比較試料と比較して顕著な抑� ��効果が認められた。さらに、膜処理を行う� ��とによって、より抑制効果が向上すること� ��わかった。

〔試験例3〕
(メラニン生成阻害試験)
 マウス悪性黒色腫B16-F0細胞(大日本住友製薬 社より購入)を使用した。牛胎児血清を10%含� �Eagle’s MEM培地(Sigma-Aldrich社製)を使用し、CO ₂ インキュベーター(5%CO ₂ 、37℃)内で培養した。B16細胞を細胞濃度3×10 ⁵ 個/mlの懸濁液とし、この1mlを培地が9ml入って いる100mmディッシュに分注した。翌日、0.01~1% の実施例1、2で得られたホエータンパク加水� ��解物(HW)、比較試料(比較例1~4)それぞれを含� ��培地に交換し、4日間培養した。培養終了後 、細胞をはがし、各群の細胞数を5×10 ⁶ 個にそろえ遠心した。
 1mol/L NaOHを500ml添加して溶解した後、その� �解液の405nmにおける吸光度を測定した。
 無添加群を100%として各群のメラニン生成阻 害率を算出した結果を表4に示す。

 表4からわかるように、実施例1、2のホエー� ��ンパク加水分解物(HW)には、0.01%~1.0%の濃度� �濃度依存的にメラニン生成阻害効果が認め� �れた。
 また、比較試料においても同様に阻害効果� ��見られたが、本発明のホエータンパク加水� ��解物(HW)の方が比較試料に比べ優れた阻害効 果を示した。さらに、膜処理を行うことによ って、より阻害効果が向上することが明らか となった。

〔試験例4〕
(動物実験)
 A-1系雌モルモット、体重約400gの背部を除毛 し、背部に紫外線(UVA(max.360nm)30.3kJ/m ² 、UVB(max.312nm)4.8kJ/m ² )照射を1回/日、4日行った。その後、生理食� �水をモルモット体重1kgあたり5ml投与する群(A 群)、実施例2のホエータンパク加水分解物(HW) をモルモット体重1kgあたり2mg/5ml投与する群(B 群)、HWをモルモット体重1kgあたり5mg/5ml投与� �る群(C群)、HWをモルモット体重1kgあたり10mg/5 ml投与する群(D群)の4試験群(各群10匹ずつ)に� �け、それぞれを毎日1回ゾンデで経口投与し� ��4週間飼育した。試料投与開始時と試料投与 終了時にモルモット背部皮膚の色素沈着への 影響をMINOLTA社製の色素計 (CHROMA METER CR-200)� ��測定した。紫外線照射前の明度と照射後の� ��度の差から照射前の明度を100%として回復率 を算出した。
 その結果を表5に示す。

 表5からわかるように、B~D群は、顕著な明 度の改善効果を示した。この結果から、本発 明のホエータンパク加水分解物(HW)には色素� �着予防・改善効果が認められた。

〔試験例5〕
(動物実験)
 A-1系雌モルモット、体重約400gの背部を除毛 し、背部に紫外線(UVA(max.360nm)30.3kJ/m ² 、UVB(max.312nm)4.8kJ/m ² )照射を1回/日、4日行った。その後、1日2回、 4週間被験部位に試料を連続塗布した。被験� �料は、水、エタノール、プロピレングリコ� �ルを2:2:1の比率で混和したものに溶解して、 これを塗布した。
 コントロール群(A群)、実施例2のホエータン パク加水分解物(HW)0.01%(B群)、0.1%(C群)、1%(D群) の4試験群(各群10匹ずつ)にわけた。試料塗布� ��始時と試料塗布終了時にモルモット背部皮� ��の色素沈着への影響をそれぞれMINOLTA社製の 色差計(CHROMA METER CR-200)で測定した。紫外線� ��射前の明度と照射後の明度の差から、照射� ��の明度を100%として回復率を算出した。その 結果を表6に示す。

 上記表6の結果からわかるように、B~D群で は顕著な明度の改善効果を示した。この結果 から、本発明のホエータンパク加水分解物は 塗布することによっても色素沈着予防・改善 効果が認められた。

 本発明において得られる、(A)分子量分布は1 0kDa以下でメインピーク200Da~3kDa、(B)APL(平均ペ プチド鎖長)は2~8、(C)遊離アミノ酸含量20%以� �、(4)抗原性は、β-ラクトグロブリンの抗原� �の1/10,000以下の成分組成を有するホエータン パク加水分解物を有効成分として含有する美 白剤は、Inhibition ELISA法〔日本小児アレルギ� ��学会誌、1,36(1987)〕で測定して抗原性がβ-ラ クトグロブリンに比べて1/10,000以下になるこ� ��が確認されているため、極めて安全である� ��
 また、その水溶液は、透明で、苦味度も2程 度であることから、製品に使用する際に制限 がない。チロシナーゼ活性阻害作用、メラニ ン生成阻害効果及び色素沈着予防・改善効果 が顕著である。

〔実施例3〕
(美白用化粧品(クリーム)の調製)
 表6に示す配合で原材料を混合し、本発明の 美白用化粧品(クリーム)を調製した。

〔実施例4〕
(美白用化粧品(ローション)の調製)
 表7に示す配合で原材料を混合し、本発明の 美白用化粧品(ローション)を調製した。

〔実施例5〕
(美白用錠剤の調製)
 表8に示す配合で原材料を混合後、常法によ り1gに成型、打錠して本発明の美白用錠剤を� ��造した。

 なお、この錠剤1g中には、HWが100mg含まれて� ��た。

〔実施例6〕
(美白用液状栄養組成物の調製)
 実施例2で得られたHW50gを4,950gの脱イオン水� ��溶解し、50℃まで加熱後、TKホモミクサー(TK  ROBO MICS;特殊機化工業社製)にて、6,000rpmで30 分間撹拌混合してHW含量50g/5kgのHW溶液を得た� ��このHW溶液5.0kgに、カゼイン5.0kg、大豆タン� ��ク質5.0kg、魚油1.0kg、シソ油3.0kg、デキスト� ��ン18.0kg、ミネラル混合物6.0kg、ビタミン混� �物1.95kg、乳化剤2.0kg、安定剤4.0kg、香料0.05kg� ��配合し、200mlのレトルトパウチに充填し、� �トルト殺菌機 (第1種圧力容器、TYPE: RCS-4CRTG N、日阪製作所製)で121℃、20分間殺菌して、� �発明の美白用液状栄養組成物50kgを製造した� ��
 なお、この美白用液状栄養組成物には、100g あたり、HWが100mg含まれていた。

〔実施例7〕
(美白用飲料の調製)
 脱脂粉乳 300gを409gの脱イオン水に溶解した 後、実施例1で得られたHW 1gを溶解し、50℃ま で加熱後、ウルトラディスパーサー(ULTRA-TURRA X T-25;IKAジャパン社製)にて、9,500rpmで30分間� �拌混合した。マルチトール100g、酸味料 2g、 還元水飴20g、香料2g、脱イオン水166gを添加し た後、100mlのガラス瓶に充填し、90℃、15分間 殺菌後、密栓し、本発明の美白用飲料10本(100 ml入り)を調製した。
 なお、この美白用飲料には、100mlあたりHWが 100mg含まれていた。

〔実施例8〕
(イヌ用美白飼料の調製)
 実施例2で得られたHW200gを99.8kgの脱イオン水 に溶解し、50℃まで加熱後、TKホモミクサー(M ARK II 160型;特殊機化工業社製)にて、3,600rpm� �40分間撹拌混合してHW含量2g/100gのHW溶液を得� ��。このHW溶液10kgに大豆粕12kg、脱脂粉乳14kg� �大豆油4kg、コーン油2kg、パーム油23.2kg、ト� �モロコシ澱粉14kg、小麦粉9kg、ふすま2kg、ビ� ��ミン混合物5kg、セルロース2.8kg、ミネラル� �合物2kgを配合し、120℃、4分間殺菌して、本� ��明のイヌ用美肌用飼料100kgを製造した。
 なお、このイヌ用美白飼料には、100gあたり HWが20mg含まれていた。